葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2表达的影响

目的 探讨葡萄糖对HepG2细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(acyl-CoA:cholesterol acyltransferase2,ACAT2)表达的调节作用及可能机制.方法 用不同浓度的葡萄糖(5.5、12.5、25.0 mmol/L)作用HepG2细胞12 h,RTPCR检测ACAT2和人肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α) mRNA的表达水平.将HNF1α的真核表达质粒瞬时转染HepG2,利用RT-PCR和Western blot检测高表达HNF1α对ACAT2表达的影响.利用凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察葡萄糖对HNF1α结合于ACAT2上游调控序列活性的影响.结果 25.0 mmol/L葡萄糖可上调HepG2细胞HNF1α和ACAT2的转录水平;HepG2细胞内过表达HNF1α可增强ACAT2的表达;高糖组HNF1α与ACAT2上游调控序列的结合活性明显增高.结论 高糖可上调ACAT2的表达,其机制可能与高糖增强了HNF1α与ACAT2上游调控区域的结合活性有关.     

ACAT是否为治疗早老性痴呆的一个新的药理学靶标？

早老性痴呆(AD)为造成痴呆的一个最常见的病因，其病理改变为脑中出现淀粉样蛋白斑(Ap)，而后者主要成分为β淀粉样蛋白(Aβ)肽，是由淀粉样前体蛋白(APP)通过β裂解形成的。酰基辅酶A—胆固醇酰基转移酶(ACAT)则严格地调控着Aβ的产生。近年来的一些流行病学研究、体外细胞及实验动物资料都有力地提示，体内胆固醇(C)水平可能是AD发病的一个独立风险因子，同时也打破了认为血浆C水平不影响脑中C代谢这一陈旧的观念。不仅如此，降脂药(包括他汀类)能逆转C代谢和脑中Aβ形成所造成的影响。由于ACAT为AD与C之间的分子联系物，故可能成为预防及治疗AD的一个新靶标。     

格列本脲对泡沫细胞形成的影响

目的:研究格列本脲(glibenclamide)对THP-1单核巨噬细胞形成泡沫细胞的影响及机制。方法:体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)进行脂质负荷转变为泡沫细胞。不同质量浓度的格列本脲单独或与Ac-LDL共同作用于上述巨噬细胞,以放射性同位素标记底物法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)活性的变化,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,酶比色法检测细胞中的总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量。结果:格列本脲使脂质负荷的巨噬细胞转变为泡沫细胞的数目减少,并明显抑制脂质负荷前后巨噬细胞中ACAT酶活性;随着格列本脲剂量增加,脂质负荷前后的巨噬细胞中胆固醇酯含量逐渐降低,呈剂量依赖性趋势。结论:格列本脲抑制泡沫细胞形成,其作用机制可能与其抑制ACAT酶活性和细胞中胆固醇酯含量有关。     

京尼平苷对高糖高脂诱导的胰岛β细胞胰岛素分泌的影响

目的研究京尼平苷对高糖高脂诱导的胰岛β细胞胰岛素分泌的影响。方法用高糖高脂孵育大鼠胰岛β细胞(INS-1)及原代大鼠胰岛,同时用京尼平苷干预,用放射免疫法检测胰岛素分泌量。结果京尼平苷增加高糖高脂孵育后INS-1细胞的数量;京尼平苷促进高糖高脂孵育后INS-1细胞的胰岛素分泌;京尼平苷改善高糖高脂孵育后原代大鼠胰岛的胰岛素分泌,且通过胰高糖素样肽-1(GLP-1)受体发挥作用。结论京尼平苷通过GLP-1受体调节高糖高脂诱导后胰岛β细胞的胰岛素分泌。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的　利用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的肥大心肌细胞的影响 ,进一步推测吡格列酮对糖尿病并发心肌肥大的可能作用及作用机制。方法　以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后 ,用Lowrys法测心肌细胞的蛋白质含量 ;用 [3 H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成 ;利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积 ;用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率。结果　 10 μmol·L-1浓度的吡格列酮在对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比维拉帕米更为明显 ;同时观察到吡格列酮同维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论　吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

高糖、高胰岛素对乳腺癌MCF-7细胞脂肪酸合成酶表达的影响及二甲双胍的干预探讨

目的分析高糖、高胰岛素对乳腺癌MCF-7细胞脂肪酸合成酶表达的影响及二甲双胍的干预效果。方法选择2009年5月~2015年5月在我院接受治疗的乳腺癌合并糖尿病患者78例,经病理活检、培育、检测后,分析检测结果。结果在高糖及高胰岛素状态下,MCF细胞脂肪酸合成酶在观察组体内的表达情况明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经不同浓度培养观察组患者癌性病灶组织后,当浸入浓度20mmol/L的乳腺癌组织至少72h时,MCF-7的G1时期表达情况升高,而S及G2期表达情况则下降。结论在高糖及高胰岛素状态下,乳腺癌患者MCF-7细胞中存在的AMPK减少表达,G1期细胞减少,而二甲双胍可促使此状态下的AMPK增加表达,而且细胞成长过程暂停于G1期。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察噻唑烷二酮(TZD)类药物吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响,进一步推测TZD类药物对糖尿病并发心肌肥厚的可能作用机制。方法以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后。利用结晶紫染色法测定细胞的数量;利用[3H]thym id ine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果吡格列酮可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞数量、DNA合成及S+G2+M期细胞的百分比增加,并呈一定的剂量依赖性。结论吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞的增殖,这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

阿卡波糖对2型糖尿病病人胰岛素抵抗的影响

目的 :探讨阿卡波糖对 2型糖尿病病人胰岛素抵抗的影响。方法 :16 0例 2型糖尿病病人随机分为 2组 ,治疗组 80例口服阿卡波糖治疗 ,前 2wk ,5 0mg ,po ,tid ,2wk后 ,10 0mg ,po ,tid ;安慰剂组 80例口服安慰剂 ,方法同治疗组 ,疗程为 2 4wk。同时观察空腹及餐后 2h血糖、血清胰岛素水平、体重指数、糖化血红蛋白、空腹时的红细胞胰岛素受体和红细胞膜流动性治疗前后变化。结果 :(1)wk 4时 ,阿卡波糖明显降低病人的空腹血糖、餐后 2h血糖、糖化血红蛋白 ,下降值分别为 :(2 .9±s 0 .8)mmol·L- 1,(4.0± 1.8)mmol·L- 1,(1.2± 2 .1) % ,P<0 .0 1;(2 ) 2 4wk后 ,阿卡波糖降低病人的体重、空腹血清胰岛素、餐后 2h血清胰岛素 ,下降值分别为 :(6± 4 )kg·m- 2 ,(10± 6 )MIU·L- 1,(14± 10 )MIU·L- 1,增加红细胞胰岛素受体 ,升高值为 :(80± 71)sites·RBC- 1,降低膜流动性 ,下降值为 :(1.5± 1.3) ,P <0 .0 1。结论 :阿卡波糖能改善 2型糖尿病病人的胰岛素抵抗     

蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素信号转导蛋白表达的影响

目的 探讨蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞磷脂酰肌醇3激酶(P13K)与葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)蛋白表达的影响.方法 胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立后,培养液中加入蜕皮甾酮共同孵育,观察蜕皮甾酮及吡格列酮对模型细胞葡萄糖掺入率的影响;应用免疫细胞化学染色法及Western blot等方法观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG2细胞P13K与GLUT-4蛋白表达的影响.结果 与模型细胞组比较,1×10-5M蜕皮甾酮可使胰岛素抵抗HepG2细胞P13K、GLUT-4蛋白的表达增加(P＜0.05).结论 蜕皮甾酮的胰岛素增敏作用可能与胰岛素信号转导分子P13K、GLUT-4蛋白的表达增强有关.     

高糖、高脂诱导大鼠肝脏胰岛素抵抗评价

目的:比较高糖、高脂等不同饮食诱导大鼠肝脏胰岛素抵抗模型的差异.方法:SD大鼠分成4组,分别给予普通、高糖、高脂、高糖高脂饲料,12周后检测各组空腹血糖水平、葡萄糖耐量、空腹血清胰岛素水平(FI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肝糖原含量及肝脏葡萄糖转运体2(GLUT2)、葡萄糖转运体4(GLUT4)表达水平.结果:口服糖耐量试验中,高脂组、高糖高脂组血糖曲线下面积分别为(91.6±5.5)和(106.1±4.6)mmol·min·L-1,较对照组明显增大(P<0.05或0.001).高脂组的FI与HOMA-IR分别为(20.2±0.9) μIU·L-1和(5.1±0.3),高糖高脂组则分别为(31.4±2.0) μIU·L-1 和(8.2±0.7),均较对照组显著升高(P<0.05或0.001).高糖高脂组的肝糖原含量为(1.3±0.0) mg·g-1,也较对照组显著增多(P<0.01).高脂组和高糖高脂组的GLUT2表达分别为(75.8±4.0)%和(60.0±4.5)%,均比对照组明显降低(P<0.05或0.001);高糖、高脂、高糖高脂组的GLUT4表达分别为(60.6±5.2)%,(72.3±3.8)%,(57.1±2.9)%,同样较对照组显著降低(P<0.001).结论:高糖结合高脂饮食更适合胰岛素抵抗模型的制备.     

α-硫辛酸对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢紊乱的改善作用

目的:研究α-硫辛酸对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢紊乱的改善作用.方法:采用MTT法测定25～1000μmol/Lα-硫辛酸对人肝癌细胞HepG2存活率的影响,以确定α-硫辛酸给药浓度.实验设阴性对照组、胰岛素抵抗组(1×10-7 mol/L胰岛素)、联合抵抗组(30μmol/L亚砷酸钠+1×10-8 mol/L胰岛...     

一氧化氮参与非诺贝特抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxi-some proliferator-activated receptor-α,PPAR-α)特异性激动剂非诺贝特(fenofibrate,FF)在高糖高胰岛素(high glucose and insulin,HGI)所致心肌细胞肥大中的作用及其与一氧化氮(nitric oxide,NO)途径的关系。方法乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大反映指标,观察FF对HGI致肥大作用的影响。利用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白水平的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养液中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活性和NO的浓度。结果FF浓度依赖性地抑制HGI诱导的心肌细胞肥大(P<0.01);FF0.3μmol·L-1明显上调HGI导致的PPAR-α以及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)mRNA和蛋白表达的降低(P<0.05);并增加HGI降低的NOS活性和NO浓度(P<0.01)。PPAR-α阻断剂MK886可完全取消FF的上述作用(P<0.05)。L-精氨酸的作用与FF相似(P<0.01)。结论FF可能通过激活PPAR-α,从而促进eNOS的表达及NO的释放,产生抗HGI诱导心肌肥大的作用。     

水飞蓟宾对高糖诱导人足细胞中VEGF表达的影响

目的 探讨水飞蓟宾对高糖诱导的体外培养人足细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养的人足细胞分为7组:正常糖(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)组、甘露醇对照(MN,甘露醇24.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L)组、高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组、HG+低浓度水飞蓟宾(HG+LS,水飞蓟宾5 μg/ml)组、HG+中浓度水飞蓟宾(HG+MS,水飞蓟宾10μg/ml)组、HG+高浓度水飞蓟宾(HG+HS,水飞蓟宾20μg/ml)组、HG+二甲亚砜(HG+D,DMSO 1 mg/ml)组.各作用48 h后,RT-PCR半定量法及Western印迹法检测足细胞VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 体外培养人足细胞表达基础水平的VEGF,HG刺激48 h后足细胞VEGF基冈和蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与HG组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾均可抑制HG所诱导的VEGF基因和蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 HG可使足细胞表达VEGF增加,水飞蓟宾可通过抑制HG诱导足细胞产生过多VEGF而具有潜在保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

海胆黄多糖SEP抑制高糖高胰岛素诱导的大鼠乳鼠心肌细胞肥大

目的观察海胆黄多糖SEP对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响,并初步探索其作用机制。方法利用高糖高胰岛素模拟糖尿病机体微环境诱导乳鼠心肌细胞肥大模型,选择不同剂量海胆黄多糖SEP分组给药处理后,采用Lowrys法检测心肌细胞蛋白质含量;利用计算机图像分析系统检测心肌细胞表面积变化;采用RT-PCR法检测给药前后心肌细胞ANF和PPAR-αm RNA表达变化。结果与正常对照组相比,高糖高胰岛素组蛋白含量、细胞表面积、ANF和PPAR-αm RNA表达均明显增加;与高糖高胰岛素组相比,低、中、高给药组剂量依赖性降低了高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、细胞表面积、以及ANF和PPAR-αm RNA表达。结论 SEP对高糖高胰岛素诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有一定的抑制作用,PPAR-α信号通路可能参与了这一过程。     

NS-398对高糖诱导的系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

［摘要］目的研究选择性环氧化酶 2抑制药NS 398对高糖诱导的系膜细胞刺激结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。 方法20 μmol&#8226;L-1 NS 398加入30 mmol&#8226;L-1高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中，分别培养0，12，24，48，72 h，应用逆转录聚合酶链反应的方法评价CTGF mRNA的表达改变，应用免疫细胞化学方法评价CTGF蛋白的表达水平。结果未加高糖刺激的肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平较低，高糖刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平增加，6 h活性已渐增高，12 h达高峰，18 h开始下降，24 h降至较低水平。用NS 398干预30 min后再用30 mmol&#8226;L-1高糖刺激，未见 CTGF mRNA和蛋白表达水平增加（P＞0.05）。 结论高糖能上调肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白的表达，NS 398能抑制高糖诱导系膜细胞CTGF的表达。     

PPAR—α信号通路参与高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大

目的：研究过氧化物酶体增值物激活受体-α（Peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-α）信号转导通路在高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大中的作用。方法：利用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子（atrial natriuretic factor,ANF）mRNA表达为心肌肥大反应指标,观察PPAR-α激动剂非诺贝特及其相应阻断剂MK886对高糖高胰岛素致心肌肥大作用的影响。利用Realtime—PCR方法和westemblot方法分别检测PPAR—α及其下游因子环氧化酶-2（Cyclooxygenase2,Cox-2）mRNA及蛋白的表达。结果：在高糖高胰岛素模型组（25．5mmol／L葡萄糖与0．1gmol／L胰岛素）,心肌细胞表面积、总蛋白含量和ANFmRNA表达明显增加（P〈0．01）;但PPAR-αmRNA和蛋白的表达明显降低（P〈0．05）;同时,Cox-2mRNA和蛋白的表达增加,明显高于对照组（P〈0．05）。然而PPAR-α的选择性激动剂非诺贝特（10^-6、3&#215;10^-6和10^-5mol／L）呈浓度依赖性地抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大（P〈0．01）。非诺贝特3&#215;10^-6mol／L明显上调高糖高胰岛素模型组PPAR-αmRNA和蛋白的表达（P〈0．05）,并阻遏其下游损伤性炎性因子Cox-2mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）。同时,MK886可完全阻断非诺贝特对高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大模型组的上述改善作用（P〈0．05）。结论：PPAR-α及其下游炎症因子Cox-2参与了高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。     

高糖和胰岛素对内皮细胞产生一氧化氮的影响

目的：探讨高胰岛素和（或）高糖对培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生一氧化氮（NO）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和超氧阴离子（O2-）的影响。方法：不同浓度的葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞，24h后取细胞培养液分别测定NO、AngⅡ和O2-的浓度。结果：5.5mmol／L葡萄糖对内皮细胞NO、O2-产生无明显影响，25mmol／L葡萄糖使NO、O2-产生增加；10、100、1000mu／L的胰岛素使NO产生增加，但对O2-产生无影响。而在25mmol／L葡萄糖存在的情况下加入不同浓度（10、100、1000mu／L）的胰岛素，可使内皮细胞NO产生减少，使O2-产生明显增加。5．5、25mmol／L葡萄糖及各浓度的胰岛素均可使AngⅡ升高。25mmol／L葡萄糖与10、100、1000mu／L胰岛素合用组AngⅡ浓度升高。加入19．5mmol／L甘露醇对N0、AngⅡ和O2-无明显影响，除外高渗对结果的影响。结论：NO、AngⅡ和O2-平衡失调在胰岛素抵抗引起心血管疾病的发生、发展过程中具有重要的病理意义。     

川芎嗪对巨噬源性泡沫细胞形成的抑制作用研究

目的:研究川芎嗪对巨噬源性泡沫细胞形成的抑制作用及其可能的作用机制。方法:将人急性单核细胞白血病细胞株1(THP-1)与160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育24 h,使之分化为巨噬细胞;再将巨噬细胞与80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养液孵育24 h,使之向泡沫细胞转化;再将上述细胞随机分为空白对照(ox-LDL)组、模型(AngⅡ)组、阳性对照(缬沙坦)组和川芎嗪低、中、高浓度(质量浓度分别为0.025、0.05、0.1 g/L)组,各组细胞分别与80 mg/L ox-LDL培养液孵育48 h后,采用油红O染色观察巨噬源性泡沫细胞转化率,酶化学法测定细胞内胆固醇含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法分别检测酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)m RNA、蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组巨噬源性泡沫细胞转化率升高,细胞内胆固醇含量增加,ACAT-1 m RNA、蛋白的表达均增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,阳性对照组与川芎嗪低、中、高浓度组泡沫细胞转化率降低,细胞内胆固醇含量减少,ACAT-1 m RNA、蛋白的表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:川芎嗪可抑制巨噬细胞分化为泡沫细胞。其可能的作用机制为通过抑制ACAT-1的表达、降低细胞内胆固醇含量,从而减少巨噬源性泡沫细胞形成。     

雷诺嗪对高脂高糖诱导的胰岛β细胞NIT-1功能损伤的保护作用

目的 观察雷诺嗪对高糖高脂诱导的胰岛β细胞NIT-1三酰甘油(TG)含量及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)表达的增加和胰岛素分泌功能损伤的保护作用. 方法 用放免法检测高糖高脂及5 μmol.L^-1雷诺嗪共同作用后细胞基础胰岛素分泌(BIS)和葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)水平的变化,酶法检测胞内TG含量,Western blot检测细胞FAT/CD36蛋白的表达. 结果正常组、高糖高脂组和雷诺嗪组的胞内TG含量分别为(2.31±0.05),(5.17±0.03)和(3.63±0.01) mmol.L^-1;BIS分别为(0.67±0.03),(0.32±0.07),(0.51±0.03)ng.mL^-1,GSIS分别为(1.68±0.17),(1.35±0.08),(1.47±0.11)ng.mL-1;FAT/CD36的相对表达量比值A1分别为(0.53±0.08),(1.78±0.05)和(1.07±0.06). 与正常组比较,高糖高脂组GSIS降低,细胞内TG含量增多. FAT/CD36蛋白表达显著增加(P<0.05). 而雷诺嗪与高糖高脂的共同作用24 h后可以显著升高GSIS,同时降低胞内TG含量,减少FAT/CD36蛋白. 结论 雷诺嗪对高糖高脂导致的胰岛细胞NIT-1分泌功能损伤有保护作用,同时可以减少胞内脂质沉积,其分子机制可能是通过脂肪酸转位酶FAT/CD36蛋白表达的改变.