姜黄素Ⅲ抑制A549裸小鼠移植瘤生长及其血管生成的实验研究

目的初步探讨中药姜黄的主要活性单体成分双脱甲氧基姜黄素(姜黄素Ⅲ)对人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤的生长及其血管生成的影响.方法选用人肺腺癌细胞株A549建立裸小鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射姜黄素Ⅲ,测量移植瘤的重量、体积,同时应用CD34免疫组化染色,观测瘤组织内的微血管密度.结果姜黄素Ⅲ具有较好的抗人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤生长作用,移植瘤重量及体积显著低于阴性对照组(P＜0.01);瘤组织内可见微血管形态不规则,并可见无明显管腔形成的新生血管,姜黄素Ⅲ组微血管密度明显低于阴性对照组(P＜0.01).结论姜黄素Ⅲ能明显抑制人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤的生长,其机制之一可能与其抑制瘤组织内血管生成有关.     

昆明小鼠肺癌模型建立的初步研究

建立皮下异种肿瘤移植的昆明小鼠肺癌模型,为临床和基础研究提供理想的动物模型。方法采用培养细胞移植法,将人肺腺癌细胞系A549接种于昆明小鼠皮下,观察肿瘤移植成功率,并测瘤重,固定标本作石蜡切片、HE染色、组织学观察。结果昆明小鼠小腿皮下异种肺癌移植成功率为37.5%。结论利用人肺腺癌细胞系A549可以建立皮下异种肿瘤移植的昆明小鼠肺癌模型,但其成功率较低,仍需进一步完善。     

不同剂量环孢菌素A制备免疫缺陷小鼠模型的研究

目的 研究不同剂量环孢菌素A(CsA)对小鼠免疫功能的影响,为细胞免疫缺陷型动物模型的建立奠定基础.方法 实验设CsA高、中、低剂量组,溶液对照组和正常对照组.CsA高、中、低剂量组分别经腹腔注射CsA 40、25、10 mg/(kg·d),溶液对照组给予等容积的稀释液,正常对照组给予等容积生理盐水,隔天1次,共注射3次.观察以下指标:(1)CD4+T和CD8+T细胞亚群百分率;(2)小鼠脾脏、胸腺质量指数和病理变化;(3)小鼠肺组织的病理变化及小鼠死亡率.结果 与正常对照组和溶液对照组比较:(1)高、中剂量CsA组CD4+T细胞亚群百分率明显下降(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组CD8+T细胞亚群百分率明显升高(P＜0.05);(2)CsA高、中剂量组胸腺指数明显下降(P＜0.01),胸腺萎缩、脂肪变性、中间有淋巴小结样结构,脾脏指数各组间前后均无明显改变;高、中、低剂量组脾脏均有代偿性的白髓增大、脾小体增大、巨噬细胞增多;(3)高、中、低剂量CsA肺脏有局灶性炎症改变、间质增生、肺泡纤维度增生;高剂量组的小鼠死亡率显著升高,达60％.结论 腹腔注射高、中剂量的CsA均可成功建立免疫缺陷型动物模型,但从效率和经济性考虑,中剂量CsA更适合用于模型的建立.     

肺积方调节CD4+CD25+Treg 细胞及T 淋巴细胞增殖与抗Lewis 肺癌移植鼠肿瘤生长作用研究

目的:观察肺积方联合化疗对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长情况及脾脏CD4+CD25+Treg细胞、胸腺T淋巴细胞增殖变化的影响,探讨肺积方联合化疗抗肺癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用随机对照研究方法,将64只Lewis肺癌移植小鼠随机分为对照组、肺积方组、综合组(肺积方联合顺铂)、顺铂(DDP)组,每组16只,并分别以生理盐水、肺积方、肺积方联合DDP、DDP药物干预,观察小鼠瘤体变化,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量,MTT法检测小鼠胸腺和脾脏T淋巴细胞增殖情况。结果:DDP组、肺积方组、综合组小鼠瘤体、瘤重均小于对照组(P<0.05),综合组瘤体、瘤重均小于DDP组和肺积方组(P<0.01);第10、21天DDP组、肺积方组、综合组小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞增殖指数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中肺积方组、综合组T淋巴细胞增殖指数增高,而DDP组T淋巴细胞增殖指数降低;DDP组干预后T淋巴细胞增殖指数明显低于干预前(P<0.05);而肺积方组、综合组第21天与第10天T淋巴细胞增殖指数组内比较无明显变化(P>0.05)。第10、21天DDP组、肺积方组、综合组荷瘤小鼠胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例均较对照组降低(P<0.05);DDP组第21天胸腺CD4+CD25+Treg细胞比例较第10天明显升高(P<0.05);综合组脾脏CD4+CD25+Treg细胞比例较低,与肺积方组、DDP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺积方联合化疗具有抗Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,该作用可能与其下调CD4+CD25+Treg细胞含量相关。     

肺岩宁方对肺癌小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞比例及Foxp3表达的影响

目的：研究肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞（T regulatory cell,Treg）比例及转录因子Foxp3表达的影响。方法：建立小鼠Lewis肺癌细胞移植瘤模型后,将32只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组和综合治疗组。给予相应药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量、肺脏指数、脾脏指数和胸腺指数,并检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤CD4＋CD25＋Treg细胞的比例及Foxp3mRNA的表达。结果：肺岩宁方可降低肺癌小鼠脾脏和胸腺指数,增加去瘤体质量,减少移植瘤质量,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。肺岩宁方可显著降低Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中的CD4＋CD25＋Treg细胞比例,并抑制Foxp3mRNA的表达,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：肺岩宁方通过降低CD4＋CD25＋Treg细胞比例、下调Foxp3 mRNA表达而增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。     

黄芪在同种移植排斥中对CD4+ CD25+ T细胞及Foxp3的影响

探讨黄芪(AST)在同种移植排斥中对CD4+CD25+T细胞动态变化及Foxp3表达的影响。方法：C57BL/6和BALB/c小鼠分别为供体和受体，建立皮肤移植模型。对照组：术后注射生理盐水；AST组：术后给予黄芪注射液；AST+脾细胞(SP)组：术前输注供体鼠脾细胞，术后给予黄芪注射液，CsA+SP组：术前输注供体鼠脾细胞，术后给予环孢素A（CsA）。术后逐日观察移植皮肤存活情况及小鼠一般状况；免疫荧光染色流式细胞术检测脾组织中CD4+CD25+T细胞动态变化；RT PCR检测Foxp3mRNA表达情况。结果：与对照组相比，AST组、AST+SP组、CsA+SP组移植皮片存活时间明显延长（P＜0.05），移植后14?d，CD4+CD25+T细胞数量及Foxp3的相对表达量显著增多（P＜0.05）。结论：黄芪体内用药可延长同种移植物的存活时间，上调CD4+CD25+T细胞及Foxp3的活性。     

肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的测定

目的通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例。方法采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133+、CD133-细胞的克隆形成能力,测定Hoechst33342染色对非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力的影响。结果45%以上的A549细胞能够形成大于100个细胞的大克隆,其传代后又能形成新的克隆,来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10?d左右能形成肉眼可见的肿瘤;CD133+、CD133-细胞克隆形成能力相同;Hoechst33342染色能够明显干预细胞的克隆形成及增殖能力。结论45%以上的A549细胞是肿瘤始发细胞。     

裸小鼠肺癌模型的建立

目的：建立皮下异种肿瘤移植的裸小鼠肺癌模型。方法：采用培养细胞移植法,将人肺腺癌细胞系Ａ５４９ 接种于ＢａｌＢ／ＣＡｎｕ 品系裸小鼠背部皮下,观察肿瘤移植成功率,测量瘤体大小,并进行病理形态学检查。结果：裸小鼠皮下异种肺癌移植成功率为６０％ ～８５％ 。结论：利用人肺腺癌细胞系Ａ５４９ 可以建立皮下异种种瘤移植的裸小鼠肺癌模型。     

七叶灵方诱导裸鼠人肺腺癌A549移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究中药复方七叶灵方诱导人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用.方法:皮下接种人肺腺癌A549细胞,建立裸鼠移植瘤模型,随机分为不用任何治疗的对照组(A组)、化疗组(B组)、化疗加七叶灵治疗组(C组)和七叶灵治疗组(D组),每组12只,分别给予相应处理.治疗开始后每周测量肿瘤体积并换算成瘤重.采用原位细胞凋亡检测试剂盒,检测瘤组织凋亡细胞数.结果:A组瘤重显著高于其他各组(P＜0.05),C组、D组与B组比较亦有显著差异(P＜0.05).凋亡细胞数各组间具有显著差异(P＜0.05),D组瘤组织中的凋亡细胞数显著高于B组和C组(P＜0.05).A组则表现出早期细胞为高分化,到后期肿瘤组织坏死及部分细胞凋亡.结论:在裸鼠体内中药七叶灵方具有诱导A549细胞凋亡的作用.     

ADSCs对辐射诱发C57小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其机制

目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分别处死4组小鼠,计算小鼠胸腺指数.刀豆素A(ConA)诱导的胸腺淋巴细胞转化率采用MTY法测定,运用流式细胞仪检测胸腺淋巴细胞的细胞周期以及T淋巴细胞亚群的变化.结果:照射+ ADSCs组相对于照射组小鼠的胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数显著增高(P＜0.05),并且CD4+T淋巴细胞的含量显著增加(P＜0.05),CD8+T淋巴细胞明显下降(P＜0.05),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P＜0.05).结论:ADSCs可能通过调节小鼠胸腺内细胞水平的变化,保护小鼠胸腺细胞的免疫功能.