变活霉素诱导人红白血病细胞K－562向红系方向分化作用的研究

新蒽环类抗生素变活霉素由五种组分组成：变活霉素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和７－脱氧变活霉酮Ａ。变活霉素各组分体外抑制人红白血病Ｋ－５６２细胞生长和诱导其分化活性各不相同。经联苯胺染色，变活霉素Ｃ诱导后Ｋ－５６２细胞血红蛋白表达百分率为８６％。联苯胺染色阳性细胞最大值出现在第五或第六天；去除药物后，分化细胞为部分可逆性；诱导细胞失去在软琼脂上克隆生长的能力。与其它已知蒽环类抗生素比较，变活霉素Ｃ的促分化动力学变化与阿霉素、表阿霉素和柔红霉素相似。但变活霉素Ｃ较阿克拉霉素Ａ促分化活性要强。构效关系研究表明，蒽环类抗生素的促分化活性与蒽环上Ｃ＿３、Ｃ＿１１或Ｃ＿９或Ｃ＿１０位的取代基以及Ｃ＿７位的取代糖有很大关系。     

土贝母苷甲对人红白血病细胞K562的诱导分化作用

目的：研究土贝母苷甲对人红白血病细胞K562分化的影响.方法：采用台盼蓝拒染法检测土贝母苷甲对K562细胞增殖的影响;采用细胞形态学、细胞化学方法检测土贝母苷甲对K562细胞分化的影响; 采用Western blotting法检测土贝母苷甲对K562细胞早期原癌基因c-myc、c-fos表达的影响.结果：土贝母苷甲下调K562细胞c-myc的表达, 上调c-fos的表达, 诱导K562细胞产生血红蛋白, 诱导K562细胞向成熟红系细胞方向分化.结论：土贝母苷甲对人红白血病细胞K562具有诱导分化作用.     

α—双炔失碳酯诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究α－双炔先碳酯（Ａｎｏ）的抗肿瘤作用，方法：形态学研究分别应用光学显微镜和电子显微镜，细胞膜完整性检测用台盼蓝排除法，用流式细胞仪及琼脂糖凝电泳检测ＤＮＡ断裂，结果：Ａｎｏ２．５－５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１处理Ｋ５６２细胞４８ｈ，细胞生长被明显抑制，５０μｍｏｌ．Ｌ＾－１时抑制率达６７％，细胞主要阻滞在Ｇ１期，处理后的细胞染色质凝缩，核断裂，体积缩小，呈典型的凋亡改变，Ｋ５６２细胞经Ａｎｏ５     

白藜芦醇对K562白血病细胞抑制增殖和诱导分化的作用

目的探索白黎芦醇对K562白血病细胞株的抑制增殖和诱导分化作用。方法不同浓度的白黎芦醇处理K562白血病细胞6 d后,利用半固体集落生成实验检测K562白血病细胞集落数;通过细胞免疫化学法和Western-blot法检测分化相关转录因子GATA-1和PU.1蛋白表达情况;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b阳性细胞的表达率。结果白黎芦醇能够降低K562白血病细胞集落数,且呈剂量依赖性(P<0.05);提高分化相关转录因子GATA-1和PU.1蛋白表达水平,升高K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD42b的表达阳性的细胞率,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论白黎芦醇可能通过上调GATA-1和PU.1蛋白表达和升高CD11b、CD14和CD42b表达阳性的细胞率,诱导K562细胞向红系、粒系和巨核系方向分化,并抑制其增殖。     

氨基葡糖及其盐酸盐诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化

目的　研究氨基葡萄糖及其盐酸盐对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果。方法　利用hexamethylenebisac etamide (HMBA)、氨基葡萄糖及其盐酸盐 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察和流式细胞仪证实其分化方向。结果　氨基葡萄糖及其盐酸盐对K5 6 2细胞在 0 5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化并能使K5 6 2细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,与HMBA相比 ,氨基葡萄糖和盐酸盐在作用浓度和作用时间上都有明显优势。结论　氨基葡萄糖及其盐酸盐都可能成为新的高效、低毒的治疗髓系白血病的候选药物     

分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究分枝石蕊多糖（CFP-1）是否能诱导K562细胞凋亡。方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法;用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片;用流式细胞仪检测凋亡细胞数。结果：CFP-1（50-800mg/L）明显抑制K562细胞增殖,并且呈浓度依赖性,K562细胞与CFP-1300mg/L共同培养5d后,观察到典型的凋亡形态变化,电泳呈现梯形条带。结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡。     

β—胡萝卜素对人早幼粒白血病细胞的诱导分化作用

研究了β－胡萝卜素对人早幼粒白血病细胞＜ＨＬ－６０细胞＞的诱导分化作用，结果表明：经β－胡萝卜素处理后，ＨＬ－６０细胞增殖速度减慢，逐渐获得使ＮＢＴ还原的能力；处理１２０小时后，ＨＬ－６０细胞具有呼吸爆发功能，形态学检查亦发现细胞向成熟方向转变。     

6,7-二甲氧基香豆素对K562细胞红系分化的影响

摘要：目的 探讨6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin,6,7-DOC)对K562细胞红系分化的影响及作用机制。方法：选择K562细胞作为研究对象,用联苯苄胺染色,考察1 μmol·L-1、5 μmol·L-1、10 μmol·L-1 6,7-DOC分别于0h、24h、48h、72h对K562细胞红系定向分化的联苯苄胺阳性率的影响;采用Western Blot检测不同浓度6,7-DOC诱导后K562细胞中红系分化标志蛋白α-globin、β-globin、γ-globin的表达变化;采用CCK-8和流式细胞术检测经6,7-DOC诱导后K562细胞的增殖和细胞周期分布情况。结果：5 μmol·L-1、10 μmol·L-1 6,7-DOC组联苯胺染色阳性率显著高于对照组,且呈时间与剂量依赖性;10μmol·L-1 6,7-DOC组α-globin、β-globin、γ-globin的蛋白表达量显著高于对照组;5 μmol·L-1和10μmol·L-1 6,7-DOC组两组细胞增殖率均显著低于对照组,且呈剂量、时间依赖性,6,7-DOC使K562细胞大量阻滞于G0/G1期,S期比例减少。结论：6,7-DOC能够抑制K562细胞增殖,使红系分化标志蛋白α-globin、β-globin、γ-globin表达增加,促进K562细胞向红系定向分化。     

RPL15在K562细胞向红系分化过程中的功能和机制研究

目的研究RPL15基因在K562细胞向红系诱导分化过程中的表达变化,并确定其对珠蛋白表达及红系分化的影响。方法用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,采用实时荧光定量PCR(q PCR)及Western blot法检测RPL15在K562红系分化过程中的表达情况。利用RNA干扰(RNAi)技术抑制K562细胞中RPL15的表达,进而通过四甲基联苯胺染色、q PCR及流式细胞技术检测K562细胞中血红蛋白、红系分化相关基因以及CD235a和CD71表达的变化。结果在K562细胞向红系分化过程中,RPL15的m RNA及蛋白水平均呈先升高后下降趋势。与对照组相比,干扰RPL15表达后,向红系分化24、48和72 h的K562细胞血红蛋白染色阳性率均明显下降;向红系分化的K562细胞中α-、β-、ε-、γ-珠蛋白及红系分化相关基因GATA1和HSP70相对表达量均明显下调(均P<0.05);而抑癌基因P53的m RNA表达水平显著上调(P<0.01)。同时CD235a⁺CD71⁺K562细胞比例在RPL15干扰后显著降低(P<0....     

莪术油诱导K-562细胞凋亡分子机制的实验研究

目的探讨莪术油(OCW)诱导慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K-562凋亡及可能的分子机制。方法以不同浓度OCW(0,2.5,5,10和20 mg/mL)处理K-562细胞24 h后,光镜下观察形态学改变;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechest33258荧光染色及FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;半定量RT-PCR及Western blot方法检测bcr/abl、bcl-2、p53、Fas/FasL表达的变化。结果OCW明显抑制K-562细胞增殖,诱导细胞凋亡,与浓度呈正相关;各组药物干预后Fas/FasL基因在mRNA和蛋白水平呈浓度依赖性上调,而bcr/abl、bcl-2、p53基因表达无明显变化。结论不同浓度OCW能有效诱导K-562细胞凋亡,其作用可能通过Fas/FasL途径而实现的,与bcr/abl、bcl-2、p53基因无明显相关。     

Decreased Proliferation and Erythroid Differentiation of K562 Cells by siRNA-induced Depression of OCTN1 (SLC22A4) Transporter Gene

Purpose Recently, it was reported that OCTN1 transporter (SLC22A4) is associated with rheumatoid arthritis (RA) and Crohn’s disease. Additionally, we reported that OCTN1 is expressed in hematopoietic cells, preferentially in erythroid cells. Accordingly, we assessed the physiological role of OCTN1 by examining the effect of knockdown of OCTN1 in blood cells using siRNA method. Materials and Methods Vector-based short hairpin RNA (shRNA) was used to establish K562 cell line which shows stably decreased expression of OCTN1. The characteristic of knockdown of OCTN1 in K562 cells was investigated by cell proliferation, cell differentiation, and uptake of ergothioneine that is a good substrate of OCTN1. Results Several clones of K562 cells exhibited significantly reduced expression of OCTN1 mRNA and protein. They also showed a decreased growth rate and butyrate-dependent differentiation to erythrocytes compared with control-vector transfected cells. In addition, uptake of [³H]ergothioneine by K562 cells suggested that Na⁺-dependent and high-affinity transporter which is similar to the characteristics of OCTN1 is functional. Moreover, uptake of ergothioneine by K562 cells which exhibit decreased-expression of OCTN1 was decreased in comparison with wild type K562 cells. Conclusions It was suggested that OCTN1 is involved in the transport of physiological compounds that are important for cell proliferation and erythroid differentiation.     

青黛复方对K-562细胞Bcr/Abl融合基因及p210蛋白表达的影响

目的 探讨青黛复方对K-562细胞调亡、Bcr/Abl融合基因及p210蛋白的影响.方法 以不同浓度青黛复方(0、2.5、5、7.5、10和20 mg/ml)处理K-562细胞24 h后,采用半定量RT-PCR技术检测各组Bcr/Abl融合基因的表达,Western blot技术检测p210 Bcr/Abl蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 随药物作用浓度升高,K-562细胞凋亡率呈浓度依赖性增加;Bcr/Abl在mRNA和蛋白水平均呈浓度依赖性下调,尤以10 mg/ml和20 mg/ml处理组更为显著.结论 青黛复方能部分抑制K-562细胞Bcr/Abl的表达并呈浓度依赖关系,其对慢性髓细胞性白血病(CML)的疗效可能是通过促进细胞凋亡而实现的.     

金雀异黄素对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡作用

目的探讨金雀异黄素对人红白血病细胞系K562细胞的生长抑制、诱导凋亡作用。方法不同浓度的金雀异黄素处理K562细胞后,用MTT比色法检测细胞生长增殖作用,Wright-Gimesa法观察细胞的形态学变化,FCM检测K562细胞凋亡峰。结果金雀异黄素对K562细胞具有与时间、浓度呈正相关的生长抑制作用。形态学显示金雀异黄素高浓度组细胞发生核固缩、核碎裂,并有凋亡小体出现。细胞周期显示对照组K562G2／M期细胞8．9％,金雀异黄素75gmol·L^-1时升高到60．6％（P〈0．05）;金雀异黄素75gmol·L^-1时K562细胞亚G1期细胞为27．3％,对照组为0．4％（P〈0．05）。结论金雀异黄素对K562细胞具有很强的生长抑制作用,K562细胞可发生明显G2／M期阻滞,金雀异黄素诱导了K562细胞发生凋亡。     

CIK细胞诱导及对K562细胞毒作用的研究

目的 体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性.方法 从外周血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK细胞作比较,检测CIK的增殖能力,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56,MTT法检测对K562细胞系杀伤活性.结果 CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第21d扩增倍数超过120倍,CD3 、CD56 细胞扩增倍数达15倍以上;CIK对K562细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞.结论 CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景.     

色胺酮对人白血病细胞株K562细胞增殖抑制、凋亡诱导的影响

目的探讨色胺酮(Tryptanthrin,Try)对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响。方法K562细胞进行常规培养后,利用MTT方法进行Try(1.56～50)mg.L-1的细胞增殖影响;Hoechst33258荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期及凋亡情况等指标;综合评价Try对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果Try在3.12～50mg.L-1浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪结果显示,不同浓度Try作用48h后,K562细胞可发生明显的凋亡;同时Try也可影响K562的细胞周期,将细胞阻滞于G0/G1期,随Try剂量增大G0/G1期细胞比例也逐渐增高,并出现明显的亚二倍体凋亡峰;同时,S期细胞比例随剂量增大而逐渐降低。结论色胺酮能明显抑制K562细胞增殖并具有诱导K562细胞发生凋亡的作用。     

壳聚糖纳米颗粒对K562细胞增殖的影响

目的 评价壳聚糖纳米颗粒对K562细胞增殖的影响,并探讨相关机制。方法 采用MTT法对壳聚糖纳米颗粒的最佳作用时间和作用浓度进行筛选,免疫荧光技术和透射电镜技术考察壳聚糖纳米颗粒对K562细胞形态的影响,流式细胞仪检测壳聚糖纳米颗粒对线粒体膜电位、细胞内ROS含量和Ca²⁺浓度的影响。结果 壳聚糖纳米颗粒(15 μg·mL^-1)可以明显诱导K562细胞出现凋亡改变,表现为：细胞核变小,出现核聚缩等现象。同时线粒体膜电位崩解,ROS含量增加,Ca²⁺浓度增加。结论 壳聚糖纳米颗粒对K562细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

西洋参有效部位对K562细胞凋亡诱导的实验研究

目的利用人的白血病细胞K562对西洋参有效部位(Panaxquinquefolium’effectiveparts,PQEP)的抗癌作用机制进行研究。方法K562细胞进行常规培养后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法进行PQEP(6.25～400mg·L-1)的细胞毒性测试;利用倒置相差显微镜和荧光显微镜(DAPI染色)来观察细胞形态学改变;凝胶电泳法观察细胞凋亡;通过流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期分布。结果PQEP对K562细胞有明显细胞毒性,呈时间和剂量依赖关系;PQEP能明显诱导细胞皱缩,膜膨胀和核染色质固缩和碎裂,形成大约为180～200bp或其多聚体组成的寡核苷酸片断;流式细胞仪观察显示PQEP剂量依赖性地提高凋亡细胞DNA含量,阻止细胞在G1期。结论PQEP能够诱导K562细胞发生凋亡。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中对线粒体膜电位的影响

目的:观察辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡时线粒体膜电位(Δψm)的变化及其与时间的关系。方法:常规培养细胞24h,辛伐他汀(20μmol.L-1)处理K562细胞12、24、48、72h,观测细胞形态学改变;MTT法检测细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位改变,并与溶剂对照组比较。结果:与对照组比较,辛伐他汀作用K562细胞48h后细胞出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;作用12、24、48、72h后细胞凋亡率分别增加(2.55±0.35)%、(6.1±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,K562细胞凋亡率随着药物作用时间延长而增加;细胞膜电位降低百分率分别为(0.7±0.24)%、(39.6±4.80)%、(24.4±2.45)%、(6.0±1.62)%,24h时膜电位降低百分率最大。结论:线粒体跨膜电位降低是凋亡发生的早期事件,辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过使线粒体跨膜电位崩溃,从而导致细胞凋亡。