周期性单轴张、压应力对成骨样细胞增殖的影响

目的 观察张应力与压应力两种不同应力形式对成骨样细胞增殖的影响.方法 本研究应用Forcel四点弯曲体外细胞力学加载仪(ZL01256849. X)对人成骨样细胞株MG63加载,使用倒置相差显微镜观察不同力学加载强度对细胞贴壁生长的影响,应用流式细胞计量术检测生理水平周期性单轴张、压应力刺激下成骨样细胞MG63细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同应力形式对成骨样细胞增殖的影响.结果 细胞贴壁生长与应力水平相关,生理水平应力刺激下细胞贴壁及形态良好,超生理水平应力刺激不利于细胞贴壁生长.生理水平应力2000μstrain,0.5Hz加载1小时张力组细胞增殖指数上调,压力组变化不显著.结论 力值大小与细胞贴壁生长密切相关;不同形式的应力对成骨样细胞增殖的影响不同,应力加载早期,张应力促进成骨样细胞增殖,压应力影响不明显.     

富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响

目的研究富血小板血浆（PRP）对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能。方法采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液。碱性磷酸酶（ALP）染色检测不同体积分数PRP（0、1%、2%、3%）对MG63分化活性的影响,碘化丙啶（PI）荧光染色观察PRP作用下MG63细胞形态的变化,免疫细胞化学检测PRP对MG63表达转化生长因子-β（TGF-β）的影响,扫描电子显微镜（SEM）观察PRP对MG63在人工骨材料表面生长情况的影响,CCK-8法检测PRP对MG63增殖活性的影响,流式细胞术（FCM）检测经PRP培养后不同时间MG63的细胞周期,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PRP作用下MG63中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）mRNA的表达量。结果ALP检测见3%PRP组ALP阳性细胞染色最深,并随体积分数的增加染色强度增加,且PRP组细胞均出现不同程度的脱片现象。PI荧光染色见PRP组细胞核荧光染色较对照组增强。免疫细胞化学检测见3%PRP组TGF-β表达量最高（P＜0.05）。SEM观察：PRP组材料表面MG63密集,生长状态良好。CCK-8法测定细胞增殖活性,显示4.8%PRP组吸光度A450 nm值高于对照组（P＜0.05）。FCM检测表明：PRP组第2天S期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;第10天PRP组G0/G1期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;除第6天外,PRP组G2/M期细胞百分比均高于对照组。RT-PCR结果表明：PRP组MG63的Col-ⅠmRNA表达量较对照组明显上调。结论适宜体积分数的PRP对MG63的增殖、迁移和相关蛋白、基因的表达有促进作用,PRP具有统一、协调细胞生物学行为的作用。     

氧化应激对人成骨样细胞MG63活性的影响

目的 建立人成骨样细胞氧化应激模型,研究氧化应激对人成骨样细胞形态和增殖活力的影响.方法 用不同浓度黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(xanthine/xanthine oxidase,X/XO)的酶促反应产生的超氧阴离子自由基(O2-˙)刺激人成骨样细胞MG63,建立成骨细胞内氧化应激模型,用X/XO加黄嘌呤氧化酶抑制剂羟嘌呤醇研究其对该氧化应激模型的逆转作用.运用氧化敏感性荧光探针2'7'-二氯荧光黄双乙酸盐结合流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成,用倒置相差显微镜和MTT实验观察研究氧化应激对成骨细胞形态及增殖活力的影响.结果 X/XO处理MG63细胞后,细胞形态发生明显破坏;在相同处理时间下,X/XO浓度越高,细胞内ROS荧光强度值越高,吸光光密度(opitical density,OD)值越低,差异具有统计学意义(P<0.05),且X/XO加羟嘌呤醇联合处理组的细胞内ROS平均荧光强度较相同浓度X/XO单独处理组明显降低(P<0.05).在相同X/XO处理浓度下,随着处理时间的延长,细胞内ROS平均荧光强度逐渐增强,OD值明显降低,120 min时细胞内ROS平均荧光强度比对照组增加了345%.24 h时OD值为相同时间对照组的22.9%.结论 X/XO可导致人成骨样细胞氧化应激损伤,破坏人成骨样细胞的形态,抑制人成骨样细胞的增殖活力.X/XO抑制剂羟嘌呤醇可逆转X/XO引起的人成骨样细胞氧化损伤.     

张力对成骨样细胞PGE2表达的影响

目的:探讨不同应变强度的机械张力刺激对体外培养的成骨样细胞PGE2表达的影响。方法:采用四点弯曲细胞力学加载仪对人成骨样细胞MG 63分别以 1 000、2 000、3 000、4 000、6 000、8 000μstrain的力学应变强度进行张力刺激,采用放射免疫法对受不同强度张力作用后成骨样细胞PGE2 的表达分别进行检测并相互比较。结果:成骨样细胞MG 63在受到强度为 1 000μstrain的张力刺激后,其PGE2 的生成量略降低但与对照组无显著性差别,随着张力强度的增加,其PGE2 的生成量显著升高。结论:不同强度的机械张力刺激能够不同程度的增强成骨样细胞PGE2 的表达,PGE2 信号转导途径是将力学刺激信号转入成骨细胞并促进成骨样细胞增殖的重要信号转导途径。     

rhbFGF/rhBMP-2对成骨样细胞增殖影响的实验研究

目的 :研究不同浓度rhbFGF、rhBMP 2独立或联合对体外培养兔成骨样细胞增殖的影响 ,探讨两者协同作用的可能最适浓度。方法 :取经矿化诱导第三代兔骨髓基质细胞获得的兔成骨样细胞以 2× 10 6/ml的浓度接种于 96孔板 ,用 3种浓度rhFGF、单一rhBMP 2、不同浓度rhFGF和rhBMP 2的组合等 7种条件培养基进行诱导培养 ,设空白对照组 ,每组 8孔。于 1、4、7、10d后用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果 :第 4d ,10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组的MTTOD值与 10ng/mlrhbFGF组无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但大于 10 0ng/mlrhBMP 2组、1ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组和 5 0ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组 ,且有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhbFGF和rhBMP 2的不同浓度组合对兔成骨样细胞的增殖有不同影响 ,其中 10ngrhbFGF 10 0ngrhBMP 2 /ml组合对细胞的增殖有最强的促进作用。     

MiR-34a可双向调控感染及非感染状态成骨样细胞的成骨分化

目的 将微小RNA-34a(miR-34a)转染至健康及炎症状态下成骨样细胞,检测其对细胞成骨分化能力的影响.方法 取人成骨样细胞(MG63)为实验细胞,将miR-34a拟态物转染至细胞并用实时定量PCR法(RT-PCR)及荧光显微镜检测转染效率.RT-PCR检测受牙龈卟啉单胞菌(Pg)感染的MG63细胞内miR-34...     

牙周韧带细胞与成骨样细胞的体外共培养

目的：探讨牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)和成骨样细胞的相互作用。方法：牙周韧带来源的PDLC和骨髓基质来源的成骨样细胞(osteoblast like cell，BC)进行体外套皿共培养，通过细胞增殖、蛋白质合成和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALPase)活性来分析细胞间相互作用。结果：PDLC较成骨样细胞增殖快，共培养条件对细胞增殖无显著影响；共培养对PDLC蛋白质合成没有影响，但对成骨样细胞蛋白质合成有影响；在共培养条件下，PDLC上调ALPase活性，成骨样细胞下调ALPase活性。结论：在共培养体系中，PDLC和成骨样细胞存在相互作用，两者的分化趋势受到相互诱导。     

机械牵张力对人牙周膜细胞成骨样细胞功能的影响

目的 观察机械力作用下牙周膜细胞成骨样细胞特性的改变，以深入探讨正畸牙齿移动的机理。方法 利用自行研制的细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施加间歇性机械牵张力，检测其成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶（alkaline phosphotase,ALP)、骨桥蛋白（osteopontin,OPN)和骨钙素（osteocalcin,OCN)表达的改变。结果 人牙周膜细胞在受到机械牵引力刺激后表现为ALP分泌活性的影响，而且24h的时段内波动，2、4h和24h出现2个显著增高期（P＜0．01）；OCN受机械牵张力影响出现较缓慢和晚期的表达增强，加力4h后缓慢增高，在12h最为明显（P＜0．05）；非分泌型ALP、OPN随观察时间延长蛋白表达水平，如ALP、OCN和OPN都增强，具有时序性。提示人牙周膜细胞在机械力诱导下向成骨样细胞分化成熟，从而可能在机械力介导的骨改建中起作用。     

成骨生长肽对纯钛表面成骨细胞样细胞增殖和分化的影响

目的探讨成骨生长肽（osteogenic growth peptide,OGP）涂层对纯钛表面新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响。方法实验分为纯钛组（Cp-Ti组）、碱-热水陈化处理组（AW-Ti组）和碱热处理-OGP涂层组（OGP-Ti组）,将体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞接种于3组钛片表面,进行细胞培养,第1、3、5、7天通过四甲基偶氮唑盐光密度值检测法测定细胞在材料表面的增值情况,培养第7、11、15天通过检测碱性磷酸酶活性测定细胞在材料表面的分化成熟情况。结果培养第1、3、5、7天,AW-Ti组和OGP-Ti组的细胞光密度值均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养第1、5、7天,OGP-Ti组细胞光密度值均高于AW-Ti组（P〈0.05）。培养7、11、15 d后,AW-Ti组和OGP-Ti组的ALP活性均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养7 d时,AW-Ti组和OGP-Ti组ALP活性差异无统计学意义（P〉0.05）;培养11、15 d时,OGP-Ti组的ALP活性均高于AW-Ti组（P〈0.05）。结论钛表面OGP涂层具有良好的生物相容性,能够提高其表面生物学活性。     

成骨样细胞与聚乳酸体外复合培养的实验研究

目的：研究成骨样细胞与生物可降解聚合物基质的关系，用聚乳酸(polylactic acid，PLA)构建细胞——聚合物复合体的适用性。方法：自新生Wistar大鼠颅盖骨分离成骨样细胞，并将其种植到PLA方片上复合培养。结果：复合培养第7天HE染色显示，鳞状细胞出现。第10、13天，细胞数据明显增多，鳞状细胞占主体，细胞排列规则，极向一致。结论：成骨样细胞在PLA上显示良好粘附力和形态并能增殖生长。聚乳酸可以构建细胞——聚合物复合体并有望成为组织工程化骨中细胞外基质替代物。     

The effect of immobilization of heparin and bone morphogenic protein-2 to bovine bone substitute on osteoblast-like cell's function

PURPOSE

This study was performed to investigate the ability of recombinant human-bone morphogenic protein-2 immobilized on a heparin-grafted bone substrate to enhance the osteoblastic functions.

MATERIALS AND METHODS

The Bio-Oss®, not coated with any material, was used as a control group. In rhBMP-2-Bio-Oss® group, rhBMP-2 was coated with Bio-Oss® using only deep and dry methods (50 ng/mL, 24 h). In heparinized rhBMP-2-Bio-Oss® group, dopamine was anchored to the surface of Bio-Oss®, and coated with heparin. rhBMP-2 was immobilized onto the heparinized- Bio-Oss® surface. The release kinetics of the rhBMP-2-Bio-Oss® and heparinized rhBMP-2-Bio-Oss® were analyzed using an enzyme-linked immunosorbent assay. The biological activities of the MG63 cells on the three groups were investigated via cytotoxicity assay, cell proliferation assay, alkaline phosphatase (ALP) measurement, and calcium deposition determination. Statistical comparisons were carried out by one-way ANOVA test. Differences were considered statistically significant at ^*P<.05 and ^**P<.001.

RESULTS

The heparinized rhBMP-2-Bio-Oss® showed more sustained release compared to the rhBMP-2-Bio-Oss® over an extended time. In the measurement of the ALP activity, the heparinized group showed a significantly higher ALP activity when compared with the non-heparinized groups (P<.05). The MG63 cells cultivated in the group with rhBMP-2 showed increased calcium deposition, and the MG63 cells from the heparinized group increased more than those that were cultivated in the non-heparinized groups.

CONCLUSION

Heparin increased the rhBMP-2 release amount and made sustained release possible, and heparinized Bio-Oss® with rhBMP-2 successfully improved the osteoblastic functions.     

神经生长因子调控降钙素基因相关肽的表达及对MG-63细胞增殖的影响

目的 探讨创伤愈合过程中神经生长因子（NGF）调控降钙素基因相关肽（CGRP）的表达,以及影响MG-63细胞增殖的作用机制。方法 加入不同质量浓度的NGF刺激MG-63细胞,1、2、3、4 d后收集样本,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测CGRP的表达,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测CGRP mRNA的表达,采用细胞计数法（CCK-8）检测MG-63细胞的增殖;在MG-63细胞中加入NGF受体阻断剂,采用RT-QPCR和CCK-8检测CGRP mRNA的表达及MG-63细胞的增殖效率。结果 在NGF作用下,MG-63细胞分泌的CGRP表达量明显上调,随NGF质量浓度升高,CGRP表达量也相应升高,具有浓度依赖性,CGRP表达量随NGF作用时间延长也相应增加（P<0.05）;随NGF质量浓度升高和作用时间延长,MG-63细胞的增殖效率也相应增加（P<0.05）。加入NGF受体阻断剂后此作用相应减弱（P<0.05）。结论 在创伤愈合过程中NGF能通过上调CGRP的表达量影响MG-63细胞的增殖,从而促进创伤愈合。     

成骨样细胞受力后细胞骨架中微丝形态结构变化的初步研究

目的:探讨成骨样细胞株UMR-106受机械力作用后细胞骨架微丝蛋白F-actin的变化。方法:成骨样细胞株 UMR-106体外扩增,实验组以225@g相对离心力离心10 min后,分7组分别继续培养15、30 min,1、4、6、12、24 h,并设立相应对照组。所有样本经BODIPYFLPhallacidin处理后,在激光扫描共聚焦显微镜下观察、记录图片并测定单个细胞的平均荧光强度。结果:对照组F-actin较粗,呈束状,排列较整齐;实验组除24 h外,其余各组的纤维明显较对照组纤细、短,散乱分布于胞浆内、无方向性;但两组间差异随时间延长逐渐减小。除24 h外,实验组的平均荧光强度较对照组明显降低,差异有显著性;随时间延长,实验组荧光强度逐渐回升,到24 h组时较对照组增强。结论: 成骨样细胞受力后细胞骨架微丝的结构明显变化,荧光染色变弱,表明在机械力作用下微丝结构趋于解聚。去除刺激后随时间延长,实验组逐渐恢复并比对照组增高,说明细胞骨架受力后的改变是可恢复和改建的。     

MTA及GIC对MG-63细胞增殖和分化功能影响的实验研究

目的：比较玻璃离子粘固剂（glass ionomer cement,GIC）、无机三氧化复合物（mineral trioxide aggregate,MTA）对MG-63细胞增殖和分化功能的影响。方法：配制GIC、MTA两种材料的浸提液,浓度分别为10g/L、20g/L、40g/L,使用不同浸提液对MG-63细胞进行培养,对照组为DMEM培养基。72h后,分别测定不同浓度组细胞的增殖功能和碱性磷酸酶活性。结果：细胞增殖功能测定结果为MTA各浓度组的A值均较对照组高,并且随着浸提浓度的提高,A值增大,差别有统计学意义（P〈0.05）;GIC各浓度组的A值均较对照组低,随着浸提浓度的提高,A值减小,差别有统计学意义（P〈0.05）。细胞碱性磷酸酶活性测定结果为MTA组A值均较对照组高,与对照组进行单因素方差分析,其中20g/L、40g/L浓度组差别有统计学意义（P〈0.05）;GIC各浓度组A值均比对照组低,其中40g/L浓度组与对照组进行进行单因素方差分析,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：MTA与GIC相比能促进细胞的增殖与分化。     

化疗对舌癌细胞增殖和细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨舌癌化疗的作用机制。方法:60例患者的术后石蜡标本分为3组,其中舌癌化疗组10例,舌癌组30例,舌乳头状瘤组20例。采用原位末端标记法和免疫组织化学染色,并检测舌癌化疗后的细胞增殖、细胞凋亡及Bcl-2表达。结果:舌癌组细胞增殖指数(PI)显著高于乳头状瘤组(P<0.05),而细胞凋亡指数(AI)低于乳头状瘤组(P<0.05);舌癌化疗组与舌癌组比较,AI显著升高(P<0.05),PI显著降低(P<0.05);舌癌化疗组与舌癌组比较,Bcl-2阳性细胞指数明显降低(P<0.05);舌癌化疗组中PI与AI呈负相关(r=-0.739),Bcl-2阳性细胞指数与AI呈负相关(r=-0.787)。结论:化疗药物抑制肿瘤生长的机制可能与抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡有关,这种作用可能是通过下调Bcl-2表达水平实现的,提示舌癌术前化疗对肿瘤的预后有重要意义。     

RAMP1-siRNA 对 CGRP 促 MG-63细胞增殖作用影响的实验研究

目的:探讨阻断降钙素基因相关肽(CGRP)受体活性修饰蛋白(RAMP1)在MG-63细胞中表达对促成骨样MG-63细胞增殖作用的影响。方法:体外转录合成法合成及筛选RAMP1 siRNA,传代培养的MG-63细胞分为:RAMP1 siRNA干扰组、空载体组、空白对照组。实时聚合酶链反应、免疫荧光法分别检测降钙素受体样受体(CRLR)、受体组分蛋白(RCP)在MG-63细胞中mRNA表达及膜上的分布变化。结果:转染siRNA后MG-63细胞RAMP1、CRLR mRNA和荧光强度明显下调(P<0.05),RAMP1干扰组RCP mRNA的表达及荧光强度高于其它2组(P<0.05)。RAMP1 siRNA干扰后,MG-63细胞的增殖被抑制(P<0.05)。结论:转染RAMP1 siRNA降低了MG-63细胞CRLR的表达,抑制了MG-63细胞的增殖能力。     

机械压力对成骨样细胞增殖活性及功能状态的影响

目的:初步探讨机械压力对成骨样细胞增殖活性及功能状态的影响,为研究正畸矫治力对牙周及骨组织的生长改建的机理提供理论依据。方法:对体外培养的成骨样细胞在受到顶-底轴向压力(225 ×g) 后6、12、18、24、30、36 h ,利用流式细胞术及MTT比色法,检测细胞增殖动力学的变化及线粒体琥珀酸脱氢酶的代谢活性。结果:加力组较对照组各期细胞所占百分比及细胞功能状态都有显著性差异( P < 0101) ,其中以加力后12 h、S 期细胞的增加及功能状态的降低最为明显,而增殖指数增加的最大值出现在加力后18 h ,加力组与对照组各项指标在24 h 后趋于一致;前向散射光参数FSC 两组间无显著性差异。结论:顶-底轴向压力(225 ×g) 可显著影响成骨样细胞的增殖活性和功能状态,并随时间的推移逐渐恢复,未发生病理性损害。