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目的 探讨一氧化氮（nitric oxide,NO)在胆管癌细胞凋亡中的作用机制。方法 通过细胞培养,采用流式细胞仪等测定体外培养胆管癌细胞QB内NO含量,同时检测不同水平NO细胞内细胞凋亡率。结果 低浓度NO对胆管癌QB细胞凋亡无影响,高浓度的NO明显促进QB细胞的凋亡发生。结论 NO对胆管癌细胞内细胞凋亡具有双重作用。     

5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939增殖的影响

目的 研究5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza-Cdr）和曲古抑菌素A（TSA）在体内、体外对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响,探讨其应用于胆管癌生物学治疗的价值.方法 应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、胆管癌裸鼠种植模型,检测不同浓度的5-Aza-Cdr和TSA,以及联合化疗药物对QBC-939体内、体外增殖的影响.结果 5-Aza-Cdr和TSA对QBC-939有明显的抑制作用,呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期主要阻滞于G1/S期,凋亡不明显.QBC-939经处理后裸鼠体内种植瘤生成率降低,荷瘤小鼠给予5-Aza-Cdr,TSA和氟尿嘧啶后肿瘤生长速度减慢、部分体积减小.结论 5-Aza-Cdr和TSA在体内、体外能抑制人胆管癌细胞QBC-939的生长,可能为胆管癌的生物学治疗提供一种新的思路.     

肝门胆管癌细胞染色体畸变的检测及意义

我们用肝门胆管癌组织新鲜标本和胆管癌细胞系(QBC93 9)进行染色体制片 ,荧光原位杂交 (flurescenceinsituhybridization ,FISH)分析 ,研究肝门胆管癌瘤细胞染色体变化 ,报告如下。材料与方法1.一般资料 :肝门胆管癌新鲜瘤组织取自本院 10例手术患者 ,术前未经放疗和化疗 ;胆管癌细胞系QBC93 9由第三军医大学王曙光教授提供。新鲜癌组织和细胞系染色体标本制备及G显带采用直接法对中期核分裂像进行显微摄影 ,按ISCN进行核型分析。2 .荧光原位杂交 (FISH) :9号染色体探针购自基因公司。在分裂相最好的区域滴加 10 0～ 2 0 0 μlRNA…     

蟾毒灵抑制胆总管癌细胞QBC-939增殖和诱导凋亡的实验研究

目的观察蟾毒灵对人胆管癌细胞QBC-939增殖和凋亡的影响,以及凋亡相关蛋白表达量的变化。方法体外培养人胆管癌QBC-939细胞,运用MTT检测蟾毒灵对胆管癌细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测蟾毒灵对胆管癌细胞凋亡率和线粒体膜电位的影响;并采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase3、激活型的Caspase3(Cleaved-Caspase3)和Cleaved-PARP的表达量变化。结果蟾毒灵对人胆管癌细胞QBC-939增殖具有明显抑制作用,在一定浓度下表现出时间、剂量依赖性。流式细胞仪检测显示:细胞的凋亡率明显增加;线粒体膜电位随蟾毒灵浓度增加,膜电位发生下调。Western blotting结果显示:蟾毒灵处理QBC-939细胞48h后,Caspase3蛋白被剪接活化,激活型的Caspase3(Cleaved-Caspase3)表达量升高;同时,Caspase3的作用底物多聚聚合酶PARP的降解产物(Cleaved-PARP)表达明显升高,且呈浓度依赖性。结论蟾毒灵能够明显抑制人胆管癌QBC-939细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性;线粒体凋亡途径在蟾毒灵的抗癌过程中发挥了作用。     

VEGF-C对肝门部胆管癌细胞增殖以及侵袭能力的影响

目的:探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对肝门部胆管癌细胞侵袭和增殖的影响。方法:采用MTT法测定VEGF-C对肝门部胆管癌细胞系(FRH0201)细胞增殖的影响,流式细胞仪观察VEGF-C抗凋亡作用,应用3H-TdR掺入试验测定VEGF-C对FRH0201细胞同质黏附作用以及Boyden小室观察VEGF-C诱导肝门部胆管癌细胞转移的作用。结果:MTT法示VEGF-C能显著提高FRH0201的增殖活性,其效应随VEGF-C剂量以及时间增加而增加,并显著抑制细胞凋亡。在Boyden小室培养的FRH0201细胞中分别加入1、5和10ng/ml的VEGF-C刺激培养后,Boyden小室碳酸酯滤膜下层浸润的胆管癌细胞数均高于对照组。分别用上述浓度的VEGF-C诱导FRH020160、90和120min后,FRH0201细胞的黏附能力显著低于对照组。结论:VEGF-C可以促进胆管癌细胞增殖,抑制其凋亡,增强细胞侵袭能力,并且与降低细胞的同质黏附作用密切相关。     

γ刀照射对胶质瘤细胞p16基因蛋白水平表达的影响

我们针对体外培养的胶质瘤细胞 ,在亚细胞水平探讨了肿瘤细胞γ刀照射后的凋亡机理 ,为以后研究提供依据 ,现报道如下。一、材料与方法1.主要试剂及来源 :培养基及蛋白酶为美国Ｆｌｕｋａ公司产品。小牛血清为长春生物制品所生产。兔抗鼠 ｐ16多抗(ＮＨ 46)为美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶染色试剂盒 (ＳＰ90 0 0 )为北京中山公司产品。2 .细胞培养 :Ｃ6细胞为高度恶性的胶质瘤细胞 ,购自美国生物菌种存储中心 (ＴＡＣＣ ,Ｐｏｃｋｖｉ ,ＭＤ ) ,接种于 2 5ｃｍ2培养瓶中单层培养。培养基含 10 %热灭活小…     

Oddi括约肌成型术后患者胆汁促增殖活性的探讨

目的　观察经十二指肠Oddi括约肌成型术 (TS)后患者胆汁 (TSB)对人胆管癌细胞QBC 93 9生长的影响 ,探讨TS与胆管癌发生与发展的关系。方法　应用四唑蓝 (MTT)比色法检测 12份TSB和10份正常胆汁 (NB)对QBC93 9细胞增殖的影响 ,应用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果　TSB与NB比较 ,前者明显促进QBC 93 9细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ;TSB处理 2 4h的QBC93 9细胞增殖指数显著上升 (P <0 .0 5 )。结论　TSB具有潜在的促增殖活性 ,TS与胆管癌的发生与发展关系密切。     

1,25二羟维生素D3对胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响

目的 探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]对胆管癌细胞系QBC939的体外增殖及凋亡的影响.方法 将不同浓度的1,25(OH)2 D3与胆管癌细胞系QBC939共同培养,采用MTT法测定细胞增殖能力、显微镜观察细胞形态学的改变、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡、免疫细胞化学观察bcl-2的表达.结果 0.1～0.5μmol/L的1,25(OH)2 D3对胆管癌细胞QBC939有抑制作用,呈剂量依赖性.经1,25(OH)2 D3作用72h后细胞G1期比例升高,S期比例下降,其中0.5μmol/L组细胞G1期由(50.3±1.0)%上升至(65.5±3.2)%,S期由(39.4±0.5)%下降至(23.6±0.7)%;并且可诱导细胞产生凋亡,0.5μmol/L组作用后细胞凋亡率由0.5%上升至24.6%;bcl-2的表达下调.结论 1,25(OH)2 D3能抑制胆管癌细胞系QBC939增殖并诱导细胞凋亡,其引起凋亡的机制可能与下调bcl-2的表达相关.     

胆囊收缩素对胆管癌细胞生长的影响

目的 探讨胆囊收缩素（CCK）对胆管癌细胞生长的影响。方法 应用细胞培养技术及^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(^3H-TdR）掺入法，研究CCK及其A受体拮抗剂L-364.718(L18)、B受体拮抗剂L-365.260(L60)对培养的人胆管癌细胞QBC939（QB）、OCUCb-LM1(OC)、HuCC-T1(Hu)、OZ生长的影响。结果 CCK通过其A和B受体显著的促进了QB和OC的生长，而对Hu和OZ的生长无明显影响。结论 CCK可促进胆管癌细胞的生长，胆管癌细胞可能无自分泌和旁分泌CCK的机制。     

ICOS基因转染对CIK细胞杀伤胆管癌细胞作用的研究

目的 探讨转染可诱导共刺激分子(inducible co-stimulator, ICOS)基因对细胞因子诱导杀伤(cytokine. induced killer, CIK)细胞杀伤胆管癌细胞的作用.方法 构建含ICOS基因的腺病毒载体并转染给CIK细胞(CIK-ICOS细胞组),单纯CIK及CIK-EGFP细胞为对照组,观察3组CIK细胞体外增殖与凋亡情况以及对胆管癌细胞的杀伤作用;ELISA法检测3组CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-2及TNF-α的表达.建立胆管癌移植瘤的SCID小鼠模型,按随机数字表法将40只SCID小鼠分为生理盐水对照组、CIK、CIK-EGFP、CIK-ICOS细胞治疗组,观察转染ICOS基因的CIK细胞对小鼠胆管癌细胞的杀伤作用.结果 CIK-ICOS细胞组体外增殖明显强于CIK及CIK-EGFP细胞组;培养第20天CIK-ICOS与CIK细胞凋亡率分别为0.69%和2.90%,第23天分别为0.89%和4.92%;在不同效靶比CIK-ICOS细胞组杀伤效应均显著高于CIK与CIK-EGFP细胞组(F=13.37,6.46,25.51,P<0.05);CIK-ICOS细胞组上清液中IFN-γ的浓度为(49.50±4.73)μg/L,显著高于CIK细胞组(30.53±3.73)μg/L及CIK-EGFP细胞组(30.12±2.64)μg/L(F=38.89,P<0.05).CIK-ICOS细胞治疗组小鼠肿瘤生长速度明显低于CIK与CIK-EGFP细胞治疗组,肿瘤坏死面积明显大于CIK与CIK-EGFP细胞治疗组,瘤内CIK细胞数量最多.结论 CIK细胞在体内外均具有杀伤胆管癌细胞的作用.转染ICOS基因后,CIK细胞体外存活时间延长、增殖能力增强、IFN-γ的表达增多,其在体内外抗胆管癌作用明显增强.     

赖氨酰氧化酶样蛋白2在胆管癌中的表达以及与血管内皮生长因子A及血管生成的关系

目的:探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)在胆管癌中的表达以及与胆管癌血管生成的关系。方法:下载GEO数据库中相关数据,比较胆管癌组织和癌旁组织LOXL2的mRNA表达差异;通过基因集富集分析法分析LOXL2在胆管癌中的功能;分析各数据集中LOXL2与血管内皮生长因子A(VEGFA)表达的关系。通过Western blot、qRT-PCR和ELISA检测下调或上调胆管癌细胞株中LOXL2的表达后,VEGFA的表达和分泌水平变化。用干扰或过表达LOXL2的胆管癌细胞的条件培养基培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,观察其管腔形成情况。结果:GEO数据库分析结果显示,LOXL2在癌组织中的表达明显比癌旁高(P0.05);LOXL2可能参与了胆管癌血管生成;各GEO数据集中LOXL2与VEGFA的表达均呈正相关(r=0.320、0.243、0.234、0.665,均P0.05)。在胆管癌细胞中,干扰LOXL2后VEGFA的表达及分泌水平均明显下降,过表达LOXL2后VEGFA的表达和分泌水平均明显升高(均P0.05)。干扰LOXL2的胆管癌细胞的条件培养基培养后HUVECs管腔形成明显减少,而过表达LOXL2的条件培养基培养后HUVECs管腔形成明显增加(均P0.05)。结论:LOXL2在胆管癌中的表达升高,并可能通过上调VEGFA的表达促进胆管癌的血管生成。     

胆管癌细胞增殖与生长激素-胰岛素样生长因子轴的关系

目的探讨生长激素(GH)在体外对胆管癌细胞QBC939增殖的影响及其可能机制。方法将处于生长对数期的胆管癌细胞QBC939随机分为实验组(GH组)和对照组(NS组),GH组按剂量和培养时间分为50μg/L 2 h(GH50-2 h),50μg/L 24 h(GH50-24 h),100μg/L 2 h (GH100-2 h),100μg/L 24 h(GH100—24 h)四个亚组,NS组按培养时间也分为NS-2 h、NS-24 h两个亚组,2 h和24 h后分别吸取上清用酶联免疫吸附试验法检测胰岛素样生长因子(IGF)1/2并将细胞计数;胆管癌细胞用不同浓度GH培养24 h后固定,以流式细胞仪测定细胞周期;同时在不同浓度GH干预的培养液中行细胞爬片后固定,用原位杂交法检测IGF1/2受体的mRNA(IGF1R mRNA/IGF2R mRNA)。结果培养液中加人GH 2 h后,QBC939细胞无明显增多(P>0.05),但24 h后细胞数目增多明显,差异有统计学意义(P<0.05),且24 h后流式细胞仪检测显示,与NS组(S%:34.60±1.37;PI:0.42±0.01)比较,GH组S%和细胞增值指数(P1)[GH50组:S%(39.36±1.62;PI:0.48±0.02);GH100组:(S%:45.74±2.15;PI:0.53±0.02)]也明显增加(P<0.05)。IGF1R mRNA/IGF2R mRNA在胆管癌中呈阳性表达,且GH可诱导细胞IGF1R mRNA表达,但不诱导IGF2R mRNA的表达增强。结论GH在体外能促进胆管癌QBC939细胞的增殖和分化,其机制可能是通过GH-IGF1-IGF1R轴发挥作用的。     

胃泌素及其受体拮抗剂对胃癌细胞PCNA、p53基因表达的影响

为探讨胃泌素促肿瘤细胞增殖作用的机制,我们观察了胃泌素及其受体拮抗剂对MKN45胃癌细胞PCNA、p5 3基因表达的影响。一、材料与方法1.主要试剂:MKN45胃癌细胞株(上海市消化疾病研究所提供) ,5肽胃泌素(上海丽珠东风生物技术公司产品) ,丙谷胺(江苏金坛制药厂赠) ,PCNA、p5 3单抗及ABC免疫组织化学试剂盒购自华美生物工程公司(Sigma产品)。2 .细胞培养:MKN45胃癌细胞株培养于含10 %小牛血清的RPMI 164 0培养液中,置3 7℃二氧化碳培养箱,隔天换液,3d传代。3 .试剂配制及实验分组:用体积分数为0 .0 5小牛血清的164 0培养液将胃泌素…     

胆管结石患者胆汁对人胆管癌细胞增殖的影响

目的观察胆管结石患者胆汁对人胆管癌细胞QBC939生长的影响 ,探讨胆管结石与胆管癌发生、发展的关系。方法应用噻唑蓝比色法检测 2 0份胆管结石患者胆汁和 10份正常胆汁对QBC939增殖的影响 ,应用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果胆管结石患者胆汁与正常胆汁比较 ,明显促进QBC939细胞增殖 ,用胆管结石患者胆汁处理 4 8h的QBC939细胞增殖指数显著上升 (P <0 0 1) ,胆管结石胆汁组 (47%± 10 % )S期细胞比例比正常胆汁组 (2 3%± 3% )明显增高 (P <0 0 1) ,G0 /G1期细胞比例 (42 %± 8% )比正常胆汁组 (6 3%± 10 % )明显降低 (P <0 0 5 )。结论胆管结石患者胆汁具有潜在的促增殖活性 ,胆管结石与胆管癌的发生、发展关系密切     

RNA干扰封闭AKT2增加人肝癌细胞对吉西他滨敏感性的研究

细胞凋亡的抑制可参与恶性肿瘤的进展和化疗药物耐药性的产生.因而诱导肿瘤细胞凋亡已成为目前治疗恶性肿瘤的一项重要生物学策略.AKT2在体外培养的细胞中及体内均有阻止细胞凋亡的作用.为了探讨靶向封闭AKT2蛋白在肝细胞癌治疗中的意义和价值,我们建立AKT2表达减少的稳定细胞株SMMC7721-AKT2-shRNA,观察其对药物敏感性的变化. 材料与方法 1.主要试剂:兔抗人AKT2多克隆抗体购自CST公司、兔抗人bax多克隆抗体、兔抗人bcl-2多克隆抗体均购自SantaCruz公司;吉西他滨(Gem)购自Lilly公司;Supersilencing质粒购自上海吉玛制药有限公司;人肝癌细胞株SMMC7721苏州大学附属第一医院血研所提供.     

奥曲肽抑制体外培养人肝癌细胞生长的实验研究

我们通过观察奥曲肽对体外培养的7402人肝癌细胞株生长的影响,探讨生长抑素抑制肝癌细胞生长的机理。材料与方法1.细胞培养:将人肝癌细胞用1640培养液CO2恒温培养箱内培养3~6d然后备用。对各个观察指标重复1~2次。2.药物敏感性实验:(1)噻唑蓝(MTT)比色法:加入不同浓度的奥曲肽,     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞增殖细胞周期的影响及其抑瘤作用

本研究旨在观察人骨形成蛋白(ＢＭＰ) 2对人脑胶质瘤细胞增殖、细胞周期的影响及其抑瘤作用 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :人脑胶质瘤细胞系ＳＨＧ 44由本所保存。 18只ＢＡＬＢ/Ｃ胸腺缺陷裸小鼠 ,4～ 6周龄 ,体重 (18± 2 )ｇ ,购自本校动物实验中心。重组人骨形成蛋白 2 (ｒｈＢＭＰ 2 )由本校生物化学教研室蒲勤博士提供 ,16 40培养基及胰蛋白酶购自Ｇｉｂｃｏ公司。四甲基唑蓝 (ＭＴＴ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)购自华美生物公司。2 .细胞培养 :参照司徒镇强[1] 方法。3.ＭＴＴ实验 :以 5× 10 3 个对数生长期细胞接种于…     

Transwell侵袭实验测定M受体对胆管癌细胞侵袭的影响

目的 探讨Transwell体外侵袭模型适用于胆管癌侵袭性研究的实验条件和方法.观察M受体兴奋剂及拈抗剂对胆管癌侵袭力的影响.方法 将不同浓度(0.5×105/mL、1.0×105/mL、1.5×105/mL、2.0×105/mL)的胆管癌细胞200μL置入Transwell小室侵袭模型,分别培养12 h、24 h、3...     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对胆管癌细胞株QBC939的抑制作用

NS-398是一种选择性环氧合酶-2(COX-2)的抑制剂,其抗肿瘤作用与其抑制COX-2的活性,减少前列腺素生成有关[1].本研究旨在探讨NS-398对人胆管癌细胞QBC939的作用机制. 一、材料与方法 1.材料:人胆管癌QBC939细胞株购买于上海中国科学院细胞库.0.25％胰蛋白酶、改良RPMI 1640培养液、胎牛血清、噻唑蓝(MTT,美国Hyclone公司),二甲基亚砜(DMSO)、NS-398(美国Sigma公司),人血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、人COX-2 ELISA试剂盒(烟台塞尔斯生物技术有限公司),细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所),Alexa Flour 488膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)细胞凋亡检测试剂盒(美国Invitrogen公司),Transwell小室(美国Corning公司),流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司).     

PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究

目的探讨脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（L-OHP）,分别进行人胆管癌细胞体外培养和体内接种生长,观察分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法.方法将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体.转胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养.绘制细胞生长曲线及MTT细胞活性观察;利用免疫组化检测转染前后PTEN阳性表达率;透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化;流式细胞分析细胞的周期变化和细胞凋亡情况;体外细胞侵袭力抑制试验;裸鼠体内肿瘤生长,病理学及电镜扫描的观测.结果PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达,阳性表达率升高（P＜0.05）;肿瘤细胞活性下降（P＜0.05）,细胞周期G1～S期抑制,细胞凋亡率增加（P＜0.01）;透射电镜细胞较成熟、分化好;细胞侵袭力明显抑制（P＜0.05）;裸鼠体内肿瘤未转染组生长早,加入奥沙利铂后生长受抑制（P＜0.05）,病理证实为腺癌.结论1.脂质体成功将PTEN基因转染人胆管癌QBC939细胞,并稳定表达.2.PTEN基因转染后细胞生长速度无明显变化;MTT实验活性细胞数有所下降.3.转PTEN基因后的胆管癌细胞超微结构变化显示线粒体增多,细胞较成熟、分化好;流式细胞议分析,细胞周期G1期被抑制,细胞凋亡多,侵袭力受到抑制;4.接种转PTEN基因裸鼠的体内成瘤显著抑制;6.转基因的生物治疗联合奥沙利铂（L-OHP）对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用.