用聚合酶链反应快速检测血液中伤寒杆菌

用聚合酶链反应检测伤寒患者血液标本中伤寒杆菌。根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ的核苷酸序列，合成２对寡核苷酸引物，以该基因的ＤＮＡ片段作为模板，经首次ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ扩增后，产物分另为４５８ｂｐ和３４３ｂｐ的寡核苷酸片段。首次ＰＣＲ检测的敏感度可达１０条伤寒杆菌ＤＮＡ水平。     

16S-23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针对结核患者痰标本的检测

目的：应用结核分枝杆菌特异的寡核苷酸探针杂交检测结核患者痰标本中的结核分枝杆菌，以评价其在临床应用中的价值。方法 对生物素标记５‘－端的一个２０ｂｐ的寡核苷酸探针的敏感性、特异性的研究，并应用该探针对９０例结核患者和３０例非结核患者痰标本进行了检测。结果 寡核苷酸探针分别检测基因组ＤＮＡ、３５０ｂｐ ＰＣＲ扩增产物、２５０ｂｐ ＰＣＲ扩增产物的敏感性分别为５５ｎｇ，０．５ｎｇ，０．１ｎｇ。探针检测     

应用PCR快速诊断小儿结核性脑膜炎的研究

作者报道特异性寡核苷酸引物引导聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ。所用引物来自于编码结核杆菌的６５ＫＤａ蛋白质抗原基因，产生特异的３８３ｂｐ片段。对１０倍连续稀释的人型结核杆菌ＤＮＡ进行ＰＣＲ，可检测出１ｐｇ结核杆菌ＤＮＡ，相当于１０～１００个细菌。应用ＰＣＲ检测４２例结脑脑脊液，阳性率为５７．１４％，直接涂片镜检和细胞培养阳性率分别为７．１４％和１４．２８％；４６例非结脑脑脊液中，３种检测结果均阴性。研究结果表明，ＰＣＲ检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ有较高的敏感性和特异性，它快速、简便，有望成为一种临床常规检测结核杆菌方法。     

应用PCR快速诊断小儿结核性脑膜炎的研究

作者报道特异性寡核苷酸引物引导聚合酶链反应技术检测脑脊液中结核杆菌ＤＮＡ。所用引物来自于编码结核杆菌的６５ＫＤａ蛋白质抗原基因，产生特异的３８３ｂｐ片段。对１０倍连续稀释的人型结核杆菌ＤＮＡ进行ＰＣＲ，可检测出１ｐｇ结核杆菌ＤＮＡ，相当于１０－１００个细胞。应用ＰＣＲ检测４２例结脑脑脊液，阳性率为５７．１４％，直接涂片镜和细胞培养阳性率分别为７．１４％和１４．２８％；４６例非结脑脑脊液中，３种检测     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ的耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印迹杂文（ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３’寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份常规培养法ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩增阳性的标本，常规培养ＭＲＳＡ为阴性。作者认为，由于ＰＣＲ对检测ＭＲＳＡ的ｍｅｃＡ基因具有快速、较强的特异性和敏感性等特点，作为检测临床标本中的ＭＲＳＡ的方法是可行的。     

乙肝病毒PCR产物的鉴定及单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增

本文报道ＨＢＶ基因扩增产物的限制性酶切分析和寡核苷酸探针杂交鉴定、应用血清ＨＢＶＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物制备基因探针和单项抗ＨＢｃ阳性血清的ＨＢＶ基因扩增。ＰＣＲ用ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｗ３种亚型ＨＢＶ的Ｃ基因区共有序列为内外两对引物分单次或套式扩增，产物为６６ａｂｐ或４２８ｂｐ，两者序列中段共含－ＢｇＩⅡ酶切点并与一寡核苷酸探针同源。４２８ｂｐ产物被用以缺口平移标记３２Ｐ探针作斑点和转印杂交检测。结合分子杂交的ＰＣＲ结果从单项抗ＨＢｃ阳性的８／４２例慢性肝炎和２／１２例无症状受测者血清中检出ＨＢＶＤＮＡ，证实病毒低度复制和传染性。     

用双重PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

用双重ＰＣＲ法检测新生患儿及随访新生儿期诊断为巨细胞包涵体病患儿的尿及血标本中巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增片段为７２１ｂｐ，第二对引物扩增片段为１６７ｂｐ。新生患儿２３份尿标本，１７例检出阳性；１８份白细胞提取物，１２份阳性。随访患儿７例，４例在尿或血中检出ＣＭＶＤＮＡ。ＰＣＲ结果与病毒分离比较，两法的符合率为９５．６％，ＰＣＲ获得结果仅需１～２天。尿标本用于ＰＣＲ较血标本检出率高，预处理简便     

巢式聚合酶链反应检测血液中恙虫病立克次体56kDa抗原基因

目的通过恙虫病立克次体５６ｋＤａ抗原基因片段检测,探讨早期病原诊断的方法。方法采用巢式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）对１１例确诊及１０例疑诊恙虫病患者血液标本进行检测,并以血清ＩｇＧ抗体间接免疫荧光试验（ＩＦ）对比分析。结果１１份ＩＦ检测阳性的标本,ＮＰＣＲ均阳性;１０份ＩＦ阴性的标本,７例ＮＰＣＲ检测阳性,总阳性率为８５．７％。而作为阴性对照的１０份血标本则无阳性。结论本法用于临床血液标本中恙虫病立克次体ＤＮＡ的快速检测,具有敏感性高、特异性强的优点。     

用聚合酶链反应快速检测痰液中结核杆菌

本研究以结核杆菌染色体中重复出现的长度为１２３个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段作为聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的模板，合成一对寡核苷酸引物。痰液标本先经三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），乙二胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ－２Ｎａ）和三硝基甲苯（Ｔｒｉｔｏｎｘ－１００）加热、震荡处理，裂解结核杆菌，再作ＰＣＲ扩增和琼脂糖凝胶电泳。同时，与痰液直接涂片、抗酸染色镜检抗酸染色阳性杆菌作比较。用该ＰＣＲ检测的检出率为９１．４％（３２／３５），而涂片抗酸染色的检出率仅为３４．３％（１２／３５）。两者相比有非常显著性差异（ｘ２＝２４．４７６，Ｐ＜０．００１）。由于改进了ＰＣＲ前痰液标本的处理方法，使整个ＰＣＲ检测过程所需时间缩短至９ｈ。我们认为该ＰＣＲ检测结核杆菌是特异、敏感和快速的，可在临床实验室应用。     

女性生殖道沙眼衣原体感染的PCR诊断

应用ＰＣＲ技术从阴道炎患者分泌物中进行沙眼衣原体的检测，ＰＣＲ反应的引物为衣原体外膜蛋白基因上具有种特异性的保守区的一对寡核苷酸序列，扩增片段长度１４４ｂｐ。总共检测了４３９例患者，ＣＴ的阳性率为４６．２％。ＰＣＲ方法是诊断ＣＴ的遗传物质ＤＮＡ，具有高的特异性和敏感性，且操作简便，适合于临床作为早期诊断的手段。     

应用嵌套式PCR法检测结核杆菌DNA

应用嵌套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）法检测结核菌ＤＮＡ，所用内、外两对寡核苷酸引物衍生于３７．７ｕ（３８ｋＤａ）蛋白抗原ｂ的编码（Ｐａｂ）ＤＮＡ序列。对６种抗酸分枝杆菌和１０种非分枝杆菌ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色证实，只有人型结核杆菌、牛型结核杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）出现３２２ｂｐ特异扩增带，而其他菌种未见此种扩增。第１步和第２步ＰＣＲ分别检测到的最低限量为１０ｐｇ和１０ｆｇ的靶ＤＮＡ。采用此法检测７２份临床标本，结果显示：该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便的优点，尤适用于肺内外结核的早期诊断。     

PCR法检测耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌的mecA基因

临床标本进行ＤＮＡ抽提后，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）将具有６２３个ｂｐ耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的ｍｅｃＡ基因扩增，经琼脂糖电泳及ＤＮＡ印普杂交（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ），并用ＥＣＬ３｀寡核苷酸标记增强化学发光进行检测，其结果与ＭＲＳＡ常规培养方法作比较。结果显示，７３份临床标本中，１５份传阅耕ＭＲＳＡ和ＰＣＲ法ｍｅｃＡ基因均为阳性，另１份ｍｅｃＡ基因扩     

日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的PCR扩增

根据已知的日本血吸虫菲律宾株的副肌球蛋白分子的部分ｃＤＮＡ序列，设计两对寡核苷酸引物（引物１／２和引物３／４），以聚合酶链式反应（ＰＣＲ），用引物１／２从本室两个日本血吸虫中国大陆株ｃＤＮＡ库中均扩增出与预期大小（９２７ｂｐ）一致的特定ＤＮＡ片段。巢式ＰＣＲ——以第一扩增产物为模板，用引物３／４扩增出约５００ｂｐ的单一条带，与预期片段（４９４ｂｐ）大小一致。表明ＰＣＲ产物为编码副肌球蛋白的目的基因片段。     

伤寒杆菌聚合酶链反应检测方法

目的 探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌。用于伤寒杆菌菌血症的诊断．方法 根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ核苷序列设计特异性革酸引物,应用聚合酶链反应技术快速检出血培养物中的伤寒杆菌。结果 对伤寒杆菌和７株非伤寒要直菌,同时进行ＰＣＲ增,结果只有伤寒杆菌出现４５８ｂｐ的牧场划性扩增区带,其他７株非伤寒 杆菌均未出现４５８ｂｐ的扩增菌悬液进行扩增,结果表明,在１００个菌细胞时即可扩增出明显的     

我国慢性乙型肝炎及肝癌患者中乙型肝炎病毒核心基因内缺失突变？…

研究乙型肝炎病毒核心基因内缺失突不在慢性乙肝及肝癌患者中存在的状态及意义。方法提取标本ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹及杂交,或用ＰＣＲ扩增核心基因,分析片段大小,部分作克隆及测定。结果３５例慢性乙肝患者血清中３０例核心基因为阳性。３０例中３例除有正常大小片段外,还有相对小分子质量片段。１５例肝癌患者肝癌组织ＰＣＲＣ基因阳性为９例,（６０％）,未见小片段。肝癌组织中２份存在ＣＩＤ（２／９,２２％）,克     

半巢式PCR一步法扩增伤寒患者单核细胞中伤寒沙门菌DNA

建立适用于临床检测血中伤寒沙门菌ＤＮＡ扩增方法。分离患者单核细胞，加热裂解制板ＤＮＡ，半巢式ＰＣＲ一步法扩增Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。     

PCR技术检测大肠肿瘤及肿瘤样病变中EB病毒DNA

目的 探讨人类大肠肿瘤中是否存在疱疹病毒属中ＢＥ病毒的感染，ＥＢ病毒是否参与了肿瘤的致病作用。方法 应用ＰＣＲ方法对１０例大肠良性肿瘤或肿瘤样病变标本和１０例大肠恶性肿瘤病变标本进行ＥＢ病毒ＤＮＡ扩增。结果 在２０例病变标本中，ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性率为１９／２０，所得ＤＮＡ片段为３１１ｂｐ。结论 人类大肠良恶性肿瘤组织及某些称谓癌前病变的组织中存在的ＥＢ病毒感染。致病作用可能和宿主细胞之间基因调控，     

EB病毒BHRF1反义寡核苷酸片段诱导鼻咽癌SUNE-1细胞株的凋亡

目的：观察ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段对鼻咽癌ＳＵＮＥ１细胞株增殖的影响。方法：ＰＣＲ、３ＨＴｄＲ的掺入法及电泳等。结果：ＰＣＲ从ＳＵＮＥ１细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒的４种（ＢＨＲＦ１、ＤＮＡ酶、胸苷激酶及核抗原１）全基因片段；适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能引起无血清培养的ＳＵＮＥ１细胞株增殖受抑制；透射电镜及琼脂糖凝胶电泳检测结果发现与ＳＵＮＥ１细胞发生凋亡有关。结论：适当浓度ＢＨＲＦ１反义寡核苷酸片段能抑制无血清培养的ＳＵＮＥ１细胞株的增殖。     

PCR检测结核分枝杆菌复合群IS_(986)DNA重复序列

用ＰＣＲ检测ＭＴＢＣ特异的ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列。ＩＳ９８６ＤＮＡ重复序列全长１３５８ｂｐ，特异地存在于ＭＴＢＣ细菌染色体ＤＮＡ中，并且多次重复出现。作者参照文献，在此序列内合成一对引物，扩增出１８８ｂｐ的ＭＴＢＣ特异的ＤＮＡ片段。实验证明具有高度的特异性和敏感性。与其它的分枝杆菌和人血细胞ＤＮＡ无交叉反应。最小检出极限为１０ｆｇＤＮＡ或１０个菌体／ｍｌ。对ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如引物浓度、ＴａｑＤＮＡ聚合酶用量、循环程序等进行了优化选择。在临床标本细菌ＤＮＡ抽提中首次采用了简便的ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ煮沸法，节省了成本，使整个检测时间缩短至６～８ｈ，适合于临床实验室对结核病病原学的检测     

HpaII—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨａｐⅡ－ＰＣＲ）检测７８例急性白血病（ＡＬ）患者降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｄ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率６８．８％（３３／４８），急性非淋巴细胞白血病７３．３％（２２／３０），敏感性达１０＾－３。证明ＣＴ基因５＇高度