枳棋子提取物对实验大鼠肝组织中TIMP-1与MMP-13表达的影响

目的：探讨枳棋子提取物对实验大鼠肝组织基质金属蛋白酶-13（MMP-13）与金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法：SD大鼠48只，随机分为2组：正常对照组（16只）与模型组（32只），用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型，共造模6周，6周末各组分别处死大鼠8只，取肝脏进行HE染色；模型组大鼠随机分为3组：自然恢复组、对照组和给药组，于12周末处死各组大鼠，取肝脏，运用半定量逆转录聚合酶链反应（砌：PCR）检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达。结果：MMP-13 mRNA的表达在各组之间并无显著性差异，而TIMP-1 mRNA在各组之间有显著性差异，与正常组相比，自然恢复组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA显著升高（P〈0．05），而与自然恢复组相比，对照组和给药组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA的表达显著降低（P〈0．05），其中给药组TIMP-1 mRNA比对照组显著降低（P〈0．05）。结论：枳棋子提取物逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1 mRNA的表达．逐渐恢复肝脏胶原降解系统。从而逆转肝纤维化。     

五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织MMP-2及其抑制剂表达的影响

[目的]研究五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织中Ⅳ型胶原以及基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制因子TIMP-2表达的影响,探讨五田保肝液对大鼠酒精性肝纤维化的治疗效果和可能机制。[方法]随机将100只Wistar大鼠分成6组:正常组、五田保肝液低、中、高剂量组、模型组、阳性药对照组,其中正常组10只,其他各组均18只。采用白酒加少量玉米油、吡唑的混合物灌胃,制备大鼠酒精性肝纤维化模型,造模12周后处死大鼠,以免疫组化法检测大鼠肝组织Ⅳ型胶原蛋白的表达,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2mRNA的表达。[结果]各组Ⅳ型胶原蛋白的表达均比正常组显著升高,但五田保肝液各剂量组和阳性药组Ⅳ型胶原蛋白的表达比模型组降低;模型组大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2的mRNA表达比正常组显著升高,但TIMP-2的mRNA表达升高幅度更大;五田保肝液和阳性药组MMP-2mRNA的表达较模型组升高,但TIMP-2mRNA的表达较模型组降低,且五田保肝液以中、高剂量效果更明显。[结论]五田保肝液可能通过上调MMP-2的表达、下调TIMP-2的表达,从而抑制大鼠酒精性肝纤维化的发生发展。     

苦参素对免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-1, TIMP-1表达的影响

目的:探讨苦参素对免疫性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响.方法:建立猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型.SD雄性大鼠44只,随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1 mg·kg-1)和苦参素组(60 mg· kg-1),ip,1次/d,连续8周.采用免疫组化方法检测MMP-1,TIMP-1在各组大鼠中的表达.结果:与模型组相比,苦参素组MMP-1表达为(3.42±0.53)％,高于模型组的(2.81±0.53)％,(P＜0.05);苦参索组TIMP-1表达水平为(30.62士3.18)％,明显低于模型组的(41.64±4.51)％,(P＜0.01);苦参素组TIMP-1/MMP-1比值也明显低于模型组(P＜0.01).结论:苦参素能增加免疫性肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-1的表达,抑制TIMP-1表达,调节TIMP-1/MMP-1比值,通过对细胞外基质(ECM)的调节起到抗肝纤维化的作用.     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-13、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1表达的影响,探讨PNS抗肝纤维化作用的可能机制.方法:将大鼠随机分成正常组、模型组、PNS低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)组和秋水仙碱(Col,0.1mg·kg-1)组.除正常组外其余各组采用CCl4皮下注射的方法诱导肝纤维化大鼠模型,每周2次,连续18周.于造模第9周起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和模型组灌胃等容量的生理盐水,疗程10周.实验结束后,计算肝脏、脾脏指数;比色法测定血清中ALT,AST含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝组织病理学改变,免疫组化技术测定肝组织中MMP-13,TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR技术测定MMP-13,TIMP-1mRNA的表达.结果:与模型组相比,三七总皂苷(100,200 mg·kg-1)不仅可减轻大鼠肝纤维化程度,降低肝脏、脾脏指数及血清ALT,AST的含量,还可显著升高肝纤维化大鼠肝脏MMP-13的表达,降低TIMP-1的表达.结论:三七总皂苷对大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与上调MMP-13,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解有关.     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:以复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏MMP-1、TIMP-1的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达显著升高,TIMP-1表达明显降低;鳖甲软肝组和秋水仙碱组MMP-1表达均显著高于模型组。与各治疗组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达高于鳖甲软肝组。结论:抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP-1表达、降低TIMP-1表达、促进细胞外基质降解等有关。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

青蒿琥酯对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的: 探讨青蒿琥酯(Art)影响基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的抗肝纤维化作用机制。 方法: 采用二甲基亚硝胺(DMN)ip 6周,制备大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art(5,15,45 mg·kg^-1)组、阳性对照秋水仙碱(Col, 0.1 mg·kg^-1)。检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量、动物血清透明质酸(HA),层连蛋白(LN),Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)水平及肝组织MMP-2 mRNA和蛋白的表达。 结果: 与模型组相比,Art各组能降低肝组织Hyp含量(P<0.01),同时血清HA,LN,PⅢP,肝组织MMP-2-mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05,P<0.01)。 结论: Art能有效抑制DMN诱导的大鼠肝纤维化及肝脏中MMP-2的表达。     

膈下逐瘀汤对免疫性肝纤维化大鼠肝组织MMP-9和TIMP-2表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤灌胃给药干预。消化法检测肝组织羟脯氨酸含量,ELISA法检测肝组织MMP-9和TIMP-2蛋白含量,实时定量RT-PCR检测肝组织MMP-9和TIMP-2 mRNA表达。结果:与模型对照组比较,膈下逐瘀汤可显著降低肝组织羟脯氨酸、MMP-9及TIMP-2蛋白含量,下调肝组织MMP-9、TIMP-2 mRNA水平。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与调节MMP-9和TIMP-2的表达有关。     

膈下逐瘀汤逆转猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的:通过观察膈下逐瘀汤对实验性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清2.0 mL.kg-1腹腔注射,每周2次共12周诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤每天按7.37 g.kg-1灌胃给药12周。Masson染色法观察肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织MMP-13和TIMP-1含量,实时定量Rt-PCR检测肝组织MMP-13和TIMP-1 mRNA表达。结果:猪血清组肝组织胶原面积为(10.38±2.01)%;MMP-13蛋白(14.05±2.64)ng.g-1;MMP-13 mRNA(1.91±0.73)倍;TIMP-1蛋白(14.91±1.07)ng.g-1;TIMP1 mRNA(18.40±2.84)倍。与猪血清组比较,膈下逐瘀汤给药可显著降低肝组织胶原面积(6.66±1.04)%(P<0.05),增加肝组织MMP-13蛋白(20.03±2.14)ng.g-1和MMP-13mRNA(4.12±0.59)倍(P<0.05),降低肝组织TIMP-1蛋白(13.47±1.22)ng.g-1和TIMP-1mRNA(4.89±0.74)倍(P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维含量,其机制可能与调节MMP-13和TIMP-1的表达有关。     

肝力克对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-2及其抑制物的影响

目的:观察中药肝力克对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2及其抑制物的影响.方法:40?l4皮下注射,建立大鼠肝纤维化模型;将肝纤维化大鼠随机分为肝纤维化模型组、肝力克大剂量组、肝力克中剂量组和肝力克小剂量组,分别给药.取肝组织常规HE染色,观察大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度,用原位杂交法检测大鼠肝组织中MMP-2及TIMP-2mRNA表达.结果:模型组大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均较正对照组明显升高(P＜0.01);经肝力克大、中、小剂量组治疗后,大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均较肝纤维化模型组大鼠明显降低(P＜0.05,P＜0.01);模型组大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2mRNA表达均较正常对照明显升高(P＜0.01),经肝力克治疗后,大、中、小剂量组大鼠肝组织TIMP-2mRNA表达较肝纤维化模型组明显降低(P＜0.05);但MMP-2mRNA表达与肝纤维化模型组大鼠相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:肝力克有明显减轻实验性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度及纤维化程度的作用;下调肝纤维化大鼠肝组织TIMP-2mRNA表达,可能是其抗纤维化作用机理之一.     

苦碟子注射液对大鼠肝纤维化模型肝脏MMP-1、TIMP-1的影响

目的观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1表达,以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系,以及苦碟子注射液和大黄虫丸对它们的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组与苦碟子注射液高剂量组、苦碟子注射液低剂量组和大黄虫丸组,采用40%CC l4橄榄油溶液造模(0.15 mL/100 g),2次/周,并从实验第3周开始给大鼠用20%乙醇灌胃(1 mL/100 g),隔天1次造模。造模结束给予苦碟子注射液高低剂量和大黄虫丸治疗,12周末在股动脉处取血,取肝脏标本。采用HE方法检测模型对照组和各给药组病理变化情况、血清PCⅢ水平变化。免疫组织化学法检测肝组织MMP-1、TIMP-1。结果模型对照组及各给药组与正常对照组比较均呈程度不同的病理损害,MMP-1、TIMP-1表达均显著增高(P均0.05),且TIMP-1表达明显高于MMP-1表达。各给药组与模型对照组比较,MMP-1表达均无显著性差异(P均0.05),TIMP-1表达却均明显减少(P均0.05)。结论肝脏炎症活动及纤维化会出现程度不同的病理损害,可能与MMP-1及TIMP-1表达明显失衡有关。苦碟子注射液及大黄虫丸治疗对其有一定的抑制作用。     

针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3及其抑制因子-1基因表达的影响与髓核超微结构观察

目的:通过观察针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1、MMP-3)及其抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响及髓核超微结构,探讨其缓解颈椎间盘退变的作用机制。方法:参照动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变造模方法,将造模成功大鼠随机分为模型组、颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组,并设空白对照组,每组15只。夹脊穴组取C2-7椎旁夹脊穴,颈周腧穴组取颈周的双"脑空"穴、"脑户"穴、"大椎"穴、双"曲垣"穴、双"天宗"穴,进行针刀干预,每5d治疗1次,各治疗3次;药物组采用布洛芬胶囊+颈复康颗粒灌胃,每天1次,治疗10d。各组继续喂养20d后处死采集标本,用定量多聚酶链反应检测大鼠颈椎间盘MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,并在电镜下行髓核超微结构观察。结果:MMP-1、MMP-3的基因表达检测,模型组高于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组低于模型组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组低于药物组(P0.05);TIMP-1的基因表达检测,模型组低于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组高于模型组及药物组(P0.05)。髓核超微结构观察:椎间盘髓核退变程度为空白组颈周腧穴组/夹脊穴组药物组模型组。结论:针刀松解颈周腧穴可通过调控MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,影响椎间盘细胞外基质的合成和降解,从而延缓椎间盘退变。     

雄芍汤对免疫性肝纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1的影响

目的:研究雄芍汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响.方法:大鼠分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊对照组(0.525 g·kg-1)、雄芍汤预防组(7.9 g·kg-1)和高、低剂量组(15.8,7.9g·kg-1).采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型.酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清MMP-9含量,实时荧光定量PCR技术检测肝组织中TIMP-1 mRNA的表达.结果:雄芍汤7.9 g·kg-1剂量预防组MMP-9含量显著高于模型组(P＜0.01).雄芍汤15.8 g·kg-1剂量组TIMP-1 mRNA表达显著低于模型组(P＜0.01).结论:雄芍汤可以促进免疫性肝纤维化大鼠血清MMP-9生成,抑制大鼠肝组织TIMP-1 mRNA表达.调节MMP与TIMP的协调平衡可能是雄芍汤抗肝纤维化的机制之一.     

清化瘀毒方对酒精性大鼠肝纤维化血清HA、LN、PCⅢ含量及TIMP-1的影响

目的:探讨清化瘀毒方对酒精性大鼠血清肝纤维化指标及组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的作用机制。方法:采用以酒精为主导的复合因素建立酒精性大鼠肝纤维化模型,实验初随机分成正常对照组10只,造模组55只;造模成功后,造模组采用随机分成3组,分别为复方鳖甲软肝片组10只,清化瘀毒方组10只和模型空白组10只;于第20周末次给药后禁食,麻醉后打开腹腔,抽取腹主动脉血并离心检测AST、ALT、HA、LN、PCⅢ及TIMP-1的含量。结果:清化瘀毒方组AST、ALT、HA、LN、PCⅢ含量比模型空白组下降,有统计学意义(P<0.05);血清TIMP-1的表达清化瘀毒方组与模型空白组相比,有统计学意义(P<0.05)。结论:清化瘀毒方能改善肝功能,使血清中的肝纤维化指标下调,降低TIMP-1的蛋白表达升高,具有抗炎保肝、抗肝纤维化作用。     

复方鳖甲软肝方对单侧输尿管结扎大鼠肾组织MMP-9/TIMP-1表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂(1MMP-9/TIMP-1)在肾间质纤维化中的表达情况及其复方鳖甲软肝方的调节作用。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)动物模型。将大鼠随机分为7组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组和复方鳖甲软肝方低、中、高剂量组。术后4周处死大鼠,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织MMP-9/TIMP-1的表达。结果模型组肾组织表现为纤维化病理改变,正常组及假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度MMP-9/TIMP-1表达;模型组MMP-9表达明显减少而TIMP-1则呈强阳性表达。复方鳖甲软肝方小、中、大剂量组与模型组比MMP-9强阳性表达(P!0.05),TIMP-1的表达较模型组明显减少(P!0.05)。结论复方鳖甲软肝方可通过对肾组织MMP-9/TIMP-1平衡的调节而发挥抗纤维化的作用。     

加味消渴康对糖尿病肾病大鼠肝组织细胞外基质相关调节因子表达的影响

目的基于中医＂肝肾同源＂理论,观察加味消渴康对糖尿病肾病大鼠肝组织转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）,Smad-4蛋白（drosophila mothers against decapentaplegic protein-4）,基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）和金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1）表达的影响。方法采用单侧肾切除加链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病模型,将造模成功后的50只糖尿病肾病大鼠随机分为模型组、西药组和中药小、中、大剂量组,每组10只,另选取10只正常大鼠作为正常对照。其中西药组予氯沙坦（5.2 mg/kg·d）灌胃,中药组予加味消渴康灌胃（小、中、大剂量分别为13.125 g/kg·d,26.25 g/kg·d和52.5 g/kg·d）,正常组及模型组每日灌服2 ml蒸馏水,共灌胃12周。各组大鼠于第12周末处死取出肝脏,运用ELisa法观察大鼠肝组织TGFβ1、Smad-4、MMP-9和TIMP-1的表达。结果与正常组相比,各组大鼠肝中TGF-β1,Smad-4和TIMP-1表达明显升高,而MMP-9的表达明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,中药治疗后,各组大鼠TGF-β1,Smad-4的表达与模型组相比明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.01）,而TIMP-1和MMP-9的表达则分别具有降低和升高的趋势。结论加味消渴康对DN大鼠的肝损伤具有一定的保护作用。