基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用

目的建立快速凝固酶阴性葡萄球（CNS）菌种的基因鉴定方法。方法对培养获得的、经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统鉴定为CNS的100株临床分离菌株和质控菌株应用tRNA基因间长度多态性PCR分析（tDNA-PCR）和肠杆菌基因间相同序列（ERIC）两种分子生物学方法进行常见的CNS菌种鉴定，同时改良实验条件，并将tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法的鉴定结果与传统的Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph鉴定系统进行比较。结果tDNA-PCR及ERIC-PCR两种分子生物学方法对质控菌株及经Auto Scan-4微生物分析仪和API Staph系统鉴定的12种临床分离CNS菌株均可以得到各自不同的电泳图谱，它们可以快速、准确地对常见12种CNS，包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、华纳葡萄球菌、模仿葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、心耳葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、头状葡萄球菌、施氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌和里昂葡萄球菌进行菌种鉴定。从图谱的肉眼观察看，12种CNS均可以很好地鉴别开。tDNA-PCR及ERIC-PCR与Auto Scan-4和API Staph鉴定系统的一致率为95％。经Taq酶聚合后进行电泳，tDNA-PCR在100～600bp产生6～10条DNA片段；ERIC-PCR在100～1200bp仅产生1～8条DNA片段。结论tDNA-PCR及ERIC-PCR是快速、敏感的CNS菌种鉴定的方法，具有高度的特异性。     

葡萄球菌对克林霉素诱导型耐药的检测及分析

葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药率呈明显上升趋势,且出现诱导型克林霉素耐药的菌株。我们对临床分离到的葡萄球菌进行了红霉素、克林霉素耐药性的检测,报告如下。1材料和方法1．1菌株试验菌株为本院2003-2005年临床分离到的金黄色葡萄球菌(SA)153株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 137株。所有菌株均经Vitek细菌分析仪鉴定确认。纸片法药敏试验的质控菌株为ATCC25923金黄色葡萄球菌。1．2仪器与试剂35℃恒温箱,Vitek细菌分析仪、GPI细菌鉴定卡(生物梅里埃公司),红霉素药敏纸片(15μg)、克林霉素药敏纸片(2μg),M-H琼脂(Oxoid)公司。1．3药敏试验按2004 NCCLS中的D-试验的规程操作。     

利奈唑胺对革兰阳性球菌的体外抗菌活性研究

目的检测利奈唑胺对临床分离的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌等革兰阳性球菌的体外抗菌活性,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用VITEK-32全自动微生物分析仪和ATB自动微生物分析仪鉴定和药敏系统对临床分离的常见革兰阳性球菌267株进行鉴定和药敏试验．根据其药敏结果比较8种抗菌药物对葡萄球菌、肠球菌的抗菌活性。结果在临床分离的267株菌中金黄色葡萄球闺111株,MRSA74株（占66．7％）,凝同酶阴性葡萄球菌96株（表皮葡萄球菌57株、溶血葡萄球菌39株）,MRCNS有80株（占86．0％）,粪肠球菌45株、屎肠球菌13株。利奈唑胺对207株葡萄球菌、58株肠球菌体外抗菌活性分别为100％,93．1％,与万古霉素相当,明显高于其他常用的抗生素（如红霉素、头孢唑林、环丙沙星等）。其对金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌的MIC50和MIC90分别为1．1mg／L;1.1mg／L：2.4mg／L。结论耐甲氧西林葡萄球菌发生率高,多重耐药严重,利奈唑胺对葡萄球菌的抗菌活性与万古霉素相当．对肠球菌也有较强的抗菌活性。葡萄球菌、肠球菌对左氧氟沙星、四环素、红霉素均产生了不同程度的耐药性。     

儿童感染葡萄球菌的分布及耐药性分析

目的分析西安市儿童医院葡萄球菌的分布及耐药性。方法医院患者各类感染标本中分离出的葡萄球菌506株,用VITEK-32型全自动微生物分析仪进行细菌鉴定,用琼脂纸片幸广散（K—B）法进行药敏试验。结果儿童感染的葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌占52．4％．其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为54．3％;住院患者的金黄色葡萄球菌中MRSA占64．3％,门诊患者的MRSA占20．6％;尿标本的金黄色葡萄球菌中MRSA检出率最高（83．3％）。凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）检出率为85．6％;住院患者CNS中MRCNS占90．8％,门诊患者MRCNS占62．2％;来自血液标本的CNS中MRCNS检出率最高（93．0％）。CNS的分布以表皮葡萄球菌为主（46．5％）。MRSA对β-内酰胺类、喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类和四环素有很高的耐药率,均达80．0％以上。MRCNS除氯霉素及利福平外．对所测抗菌药物耐药率均在50．0％以上。结论标本来源不同,葡萄球菌的分布也不同。葡萄球菌耐药率有所上升,对不同抗菌药物耐药性有较大差异。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

葡萄球菌属对抗菌药物的耐药性分析

目的了解葡萄球菌属临床分离株的耐药性及对大环内酯类、林可霉素类及链阳霉素类（MLS）的耐药表型。方法用Kirby-Bauer法测定葡萄球菌属对14种抗菌药的敏感性，进行D试验测定MLS耐药表型。结果在230株葡萄球菌属中，耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSCN）分别为9．9％和79．8％。对青霉素都呈现高度耐药。未发现万古霉素及替考拉宁耐药菌株，126株葡萄球菌属对红霉素耐药，54．8％（23／42）株金葡菌为结构型耐药；在凝固酶阴性葡萄球菌中（CNS），44．0％（37／84）为结构型耐药，41．7％（35／84）为外排型耐药。对红霉素耐药但对克林霉素敏感的葡萄球菌中，17株为诱导型克林霉素耐药。结论应加强对葡萄球菌的耐药性监测，临床微生物实验室应进行D试验。指导临床合理使用抗生素。     

1种鉴定凝固酶阴性葡萄球菌的两步一补法及其评价

近年来,凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negativeStaphylococci,CNS)引起的临床和院内感染逐年增加,而常用的鉴定程序烦琐、耗材费高。鉴于此,我院自1 998年起建立并逐步完善了两步一补鉴定CNS的方法[1 ] 。4h能鉴定出5 2 .4 %的菌株,2 4h能鉴定出96 .1 %的菌株,4 8h能鉴定出1 0 0 %的菌株。一、材料和方法1 .菌株来源　1 0 3株CNS菌株中从血液标本分离1 4株、静脉插管1 2株、呼吸道1 8株、泌尿道4 2株、其他标本1 7株。金黄色葡萄球菌(ATCC 2 5 92 3)与表皮葡萄球菌(ATCC 1 2 2 2 8) 2种质控菌株由中国药品生物制品检定所提供。2 .…     

可诱导型克林霉素耐药的葡萄球菌检测及耐药性调查

目的了解可诱导型克林霉素耐药的葡萄球菌的耐药状况及发生率。方法用常规的方法对2005年1月至2007年12月临床各种标本进行培养及分离，Vitek-2全自动微生物鉴定仪进行鉴定及药物的敏感性试验检测，诱导型克林霉素耐药采用双纸片法进行检测。结果750株葡萄球菌中可诱导型克林霉素耐药的葡萄球菌有92株，占12．3％，387株金黄色葡萄球菌中有321株为红霉素耐药，其中235株为持续型克林霉素耐药，34株为可诱导型克林霉素耐药，占8．8％（34／387）；363株凝固酶阴性葡萄球菌中有294株为红霉素耐药，其中224株为持续性耐药，58株为可诱导型克林霉素耐药，占16．0％（58／363）。92株可诱导型克林霉素耐药的葡萄球菌对万古霉素、替考拉宁、磷霉素、喹努普汀／达福普汀、褐霉素及利奈唑烷均敏感，对其他抗生素存在不同程度耐药。结论临床微生物实验室应加强可诱导克林霉素耐药的检测，以指导临床合理使用林可霉素类抗生素。     

葡萄球菌296株的检出及耐药分析

目的 研究葡萄球菌的感染及耐药性的变迁，指导临床用药。方法 采用VITEK鉴定系统和API系统鉴定菌株，药敏试验采用VITEK药敏系统和纸片扩散法。结果 296株葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占金黄色葡萄球菌感染的57．5%(50／87)，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN)占78．4%(160／204)。296株葡萄球菌除对万古霉素100％敏感外，对9种抗生素大多数呈高耐药状态。结论 近年来引起医院感染的葡萄球菌数量与往年相比显增多，且耐甲氧西林的葡萄球菌逐年上升，MRSCoN上升趋势突出于MRSA，二对9种抗生素(除万古霉素外)都呈交叉耐药，应加强其对抗生素包括万古霉素的耐药性监侧。     

1种鉴定凝固酶阴性葡萄球菌的两步一补法及其评价

近年来，凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococci，CNS)引起的临床和院内感染逐年增加，而常用的鉴定程序烦琐、耗材费高。鉴于此，我院自1998年起建立并逐步完善了两步一补鉴定CNS的方法。4h能鉴定出52．4％的菌株，24h能鉴定出96．1％的菌株，48h能鉴定出100％的菌株。     

凝固酶阴性葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的检测与分析

目的了解本地区凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对红霉素及克林霉素的耐药性和克林霉素诱导型耐药的发生率，分析红霉素耐药CNS对大环内酯类抗菌药物的耐药机制。方法用双纸片扩散法检测280株CNS对红霉素和克林霉素的耐药性，用D试验检测红霉素对克林霉素的诱导耐药率。结果280株CNS中，红霉素敏感且克林霉素敏感株占15．7％，红霉素耐药且克林霉素耐药株占37．5％，红霉素耐药且克林霉素敏感株占46．8％；红霉素耐药且克林霉素敏感的CNS中，诱导型克林霉素耐药的检出率为57．3％，其中甲氧西林耐药CNS（MRCNS）和甲氧西林敏感CNS（MSCNS）中的检出率分别为56．8％和66．7％，两者差异无统计学意义。结论临床微生物实验室应加强CNS中诱导型克林霉素耐药的检测，以指导临床合理使用抗菌药物。     

Vitek GPI卡鉴定凝固酶阴性葡萄球菌临床应用评估

凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)已成为医院感染的重要致病菌之一.本试验用Vitek GPI卡和API条来鉴定CNS,并与传统方法作对照,评估GPI卡鉴定CNS的准确率.结果显示,100株CNS菌株,Vitek GPI卡鉴定与传统方法比较,符合率为64%,API葡萄球菌鉴定系统与传统方法比较,符合率为93%.其中,GPI卡鉴定可信度在90～99%之间的菌株为65.4%(53/81),API系统鉴定可信度在90～ 99 %之间的菌株为58.3%.实验说明,Vitek GPI卡鉴定葡萄球菌虽快速,但与传统法比较,鉴定符合率较低,而API系统虽时间较长,但符合率高.     

Vitek-32微生物分析仪检测耐甲氧西林葡萄球菌评价

目的以聚合酶链反应（PCR）检测mecA基因作为标准方法,评价Vitek-32微生物分析仪检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的可靠性。方法收集金黄色葡萄球菌72株,MRCNS 64株,采用微生物分析仪Vitek-32配套的GPS-110卡检测MRSA与MRCNS,并与PCR及头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果Vitek-32微生物分析仪检测MRSA及MRCNS的灵敏度及特异性分别为100．0％和89．7％、100．0％和80．0％;头孢西丁纸片扩散法的灵敏度及特异性均为100．0％。结论微生物分析仪Vitek-32操作简单、快速,检测MRSA及MRCNS的灵敏度高,是一种较好的方法。对于可疑株,用头孢西丁纸片扩散法复查可提高特异性。     

泌尿系凝固酶阴性葡萄球菌快速两步一补法鉴定

目的　介绍一种凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)快速鉴定方法———“两步一补法”,并用该法检测泌尿系CNS的分布情况。方法　CNS菌株先经二步鉴定:第一步4h ,包括:蕈糖、尿素酶、碱性磷酸酶;第二步2 4h ,包括:鸟氨酸脱羧酶、新生霉素敏感性、磷霉素敏感性、厌氧生长。极少数不能鉴定的CNS菌株,用补充试验完成。结果　该方法4h能鉴定6 1 .0 %的菌株,2 4h能鉴定95 .1%的菌株,4 8h能完成其余4 .9%的菌株鉴定;182株CNS分布以表皮葡萄球菌为主(5 7 .7% ) ,其次是溶血葡萄球菌(17. 1% )与腐生葡萄球菌(7 .1% )。结论　“两步一补法”在鉴定CNS方面,具有可靠、快速、简单、经济等优点,适合临床医学与预防医学对CNS的研究,特别是基层微生物室普及使用。     

葡萄球菌中克林霉素诱导型耐药检测及敏感性试验分析

目的通过调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素的耐药性,指导临床合理使用克林霉素。方法对医院2007年1月至2008年7月分离的葡萄球菌进行克林霉素、红霉素药敏试验和克林霉素敏感性试验（D-试验）的数据进行回顾性分析。结果分离到229株金黄色葡萄球菌、136株表皮葡萄球菌、171株溶血葡萄球菌、25株其他葡萄球菌,其对克林霉素的耐药情况分别是：金黄色葡萄球菌71．6％（164／229）、表皮葡萄球菌66．9％（91／229）、溶血葡萄球菌66．1％（113／J71）、其他葡萄球菌60．0％（15／25）。其中D-试验阳性的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、其他葡萄球菌分别有48株、29株、17株、2株,阳性率分别是67．6％、54．7％、41．5％、40．0％;D-试验阳性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌分别有29株、19株,阳性率分别是76．3％、59．6％;甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌和甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌分别有37株、11株,阳性率分别是54．4％、35．5％。结论葡萄球菌对克林霉素耐药率高,D-试验阳性率高,检测葡萄球菌时要常规做克林霉素的敏感性试验和D-试验。     

Phoenix-100全自动微生物鉴定/药敏系统检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的调查我院耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的阳性率及其耐药特点。方法用Phoenix-100全自动微生物鉴定／药敏系统鉴定细菌,检测细菌对15种药物的最低抑菌浓度。结果121株葡萄球菌中MRS的阳性率为86．8％,β-内酰胺酶的阳性率达100％。结论Phoenix-100全自动微生物系统对指导临床合理使用抗生素、有效控制感染具有积极意义。     

国产 ＭＡＬＤＩ⁃ＴＯＦ ＭＳ 系统 Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 对临床微生物的鉴定性能 评估

摘要：目的 评估珠海迪尔 Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 型基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ?ＴＯＦ ＭＳ）系统及其 ２ ６３０ 种数据库 （以下简称 Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 系统）对临床微生物的鉴定能力。 方法 共纳入 ２０１６—２０２０ 年浙江大学医学院附属第二医院留存 的临床分离菌株 ９１３ 株，覆盖 １８ 个属 ５２ 个种或复合群。 采用直接涂抹法进行鉴定，比对仪器为德国布鲁克 Ｂｉｏｔｙｐｅｒ ＭＳ 系统 及其 ＤＢ２９６９ 数据库（以下简称 Ｂｉｏｔｙｐｅｒ ＭＳ），对于两台质谱仪不一致的鉴定结果，采用 １６Ｓ ｒＲＮＡ 扩增测序作为判定的金标 准。 针对复合群（鲍曼不动杆菌复合群、阴沟肠杆菌复合群以及肺炎克雷伯菌复合群），采用二代测序的鉴定结果作为金标 准，统计学方法采用卡方检验。 选取 １３ 株室内质控菌株作为重复性评估的检测样本，每株菌在 Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 系统上平行检 测 ３ 次，判断其鉴定结果的一致性。 结果 对 ９１３ 株临床菌株，Ｂｉｏｔｙｐｅｒ ＭＳ 系统种水平鉴定准确率为 １００％（９１３ ／ ９１３，９５％ＣＩ： ９９．４８％ ～ ９９．５８％），Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 系统种水平鉴定准确率为 ９９．７８％（９１１ ／ ９１３，９５％ＣＩ：９９．１２％ ～ ９９．２０％），２ 株表皮葡萄球菌鉴 定为柯氏葡萄球菌；在临床微生物的鉴定能力方面，２ 种方法差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 重复性评估结果显示，Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 系统对 １３ 株室内质控菌株的鉴定结果完全一致。 结论 Ｓｍａｒｔ ＭＳ ５０２０ 系统对临床常见微生物有很好的鉴定能力，包括 复合群的鉴定能准确鉴定到复合群，对一些难区分菌如嗜血杆菌、链球菌等均能准确鉴定，但对复合群内具体种的细分能力 有限，需要结合分子生物学、血清学或其他补充实验来准确鉴定。     

一种简单的筛选耐甲氧西林葡萄球菌方法

目的推荐美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)关于6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板(以下简称盐平板法)检测甲氧西林耐药葡萄球菌。方法使用NCCLS推荐的盐平板法检测华山医院临床分离的葡萄球菌共894株。结果(1)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)苯唑西林纸片法的检出率为84．2％(538／639)，盐平板法的检出率为86．4％(552／639)，而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率2种方法分别为82．0(209／255)、90．6％(231／255)；(2)有14株纸片法测定为中介的金黄色葡萄球菌和22株纸片法检测为甲氧西林敏感(MS)的凝固酶阴性葡萄球菌，盐平板检测均为甲氧西林耐药(MR)，经聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因结果均为阳性，显示PCR检测与盐平板检测结果一致；(3)随机取上述纸片法和盐平板2种方法检测均为MS者9株、MR者15株，同时进行mecA基因的PCR检测，结果显示全部与盐平板法和苯唑西林纸片法检测结果符合。结论在临床微生物实验室应该采用NCCLS推荐的6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板对MRSA和MRCNS进行检测，以供临床诊断和选用抗生素。     

葡萄球菌克林霉素诱导型耐药的研究

目的了解葡萄球菌临床分离株克林霉素诱导型耐药的分布情况,指导临床合理使用抗生素。方法用美国BD公司Phoenix-100型全自动细菌鉴定药敏系统鉴定细菌及做药敏试验,用美国临床实验室标准化委员会标准克林霉素诱导耐药试验检测红霉素对克林霉素的诱导耐药。结果在159株红霉素耐药、克林霉素敏感或中介的葡萄球菌中,克林霉素诱导耐药比例为52.8%,其中金黄色葡萄球菌(SUA)48株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)111株,克林霉素诱导耐药率SUA组为75.0%,CNS组为38.7%,差异有统计学意义(P<0.01)。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)56株,甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)103株。克林霉素诱导耐药率MRS组为87.5%,MSS组为34.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论临床分离葡萄球菌克林霉素诱导型耐药比较常见,建议临床微生物室应常规做克林霉素诱导耐药试验。     

葡萄球菌感染的耐药性监测和治疗对策

目的：了解葡萄球菌的耐药情况，指导临床合理使用抗生索。方法：用VITEK-32、GPI、GPS-107进行菌种鉴定、耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检测和药敏实验。结果：188株葡萄球菌中凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）136株，其中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）120株，检出率为88．2％。MRS对万古霉索、呋喃妥因100％敏感，对利福平敏感性高。结论：我院MRS检出率较高，应重视对MRS耐药性的监测，治疗由MRS菌株引起的严重感染应首选万古霉素。