沙利度胺对人脐静脉内皮细胞增殖和血管生成的影响

目的 探讨沙利度胺治疗血管发育不良所致消化道出血的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞至对数生长期,分为空白对照组、溶剂对照组(二甲基亚砜)和不同浓度(10、20、40、60、80、100μg/ml)沙利度胺组,根据加或不加成纤维细胞生长因子(bFGF,10 ng/ml),共分为16组.刺激72 h后,MTT法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附法和实时定量PCR法测定血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达.结果 加或不加bFGF刺激,中、高浓度(≥40/μg/ml)沙利度胺均能抑制人脐静脉内皮细胞增殖.未加bFGF刺激时.20μg/ml沙利度胺能明显抑制VEGF表达.加bFGF刺激时,10 μg/ml沙利度胺即能明显抑制VEGF表达.未检出TNF-α表达.结论 体外实验中,沙利度胺能抑制人脐静脉内皮细胞增殖和VEGF表达,从而抑制血管生成,达到治疗血管发育不良所致消化道出血的目的 .     

缺氧条件下血管活性因子对血管内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨在缺氧条件下人脐静脉血管内皮细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达及缩血管活性物质内皮素 ,舒血管活性物质NO和NO抑制剂LNNA对VEGF基因表达的影响。方法　体外培养人脐静脉血管内皮细胞 ,经缺氧及血管活性物质处理 ,Northern杂交、酶联免疫检测和计算机图像分析等观察VEGFmRNA和蛋白表达水平。结果　缺氧 6h内皮细胞可见VEGF表达。ET可促进VEGFmRNA的表达 ,NO可明显抑制VEGFmRNA的表达 ,NO抑制剂LNNA也影响VEGFmRNA的表达。ELISA检测VEGF蛋白水平分别为 6h组 (8 2± 1 1) μg/L ,ET +6h组 (9 37± 1 0 2 ) μg/L ,NO +6h组 (2 86± 0 91) μg/L ,LNNA +6h组 (14 75± 1 87)μg/L。 结论　缺氧可诱导人脐静脉血管内皮细胞分泌VEGF并受血管活性物质的调控 ,ET促进其表达 ,NO抑制其表达。     

缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响

目的 探讨缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响.方法 建立人胰腺癌SW1990细胞体外缺氧培养模型,随机分为缺氧培养8 h、16 h、24 h组及常规培养组.采用RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 HIF-1α在常规培养细胞中的表达较弱,而在缺氧培养细胞中的表达水平明显增高.SW1990胰腺癌细胞株HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白在缺氧条件下的表达显著增强,并随缺氧时间的延长而升高.结论 缺氧可诱导人胰腺癌SW1990细胞Glut1和VEGF的表达,这种作用可能是通过HIF-1α途径介导的.     

姜黄素对缺氧HepG2细胞中HIF-1α表达的影响及可能机制

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,并探讨其可能机制.方法:0、1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Westernblot免疫印迹法和RT-PCR检测HIF-1α的蛋白及mRNA的表达:0 μmol/L,10 μmol/L姜黄素,10 μmol/L姜黄素 10 μmol/L MG-132处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,用Western blot检测HIF-1α和VEGF的蛋白水平.结果:HepG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,HIF-1α蛋白水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(F=79.81,P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.但各剂量组HIF-1α的mRNA水平与对照组比较无显著性差异;蛋白酶体抑制剂MG-132可以逆转姜黄素所致的HepG2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制(F=68.47,83.79,均P<0.01).结论:姜黄素通过蛋白酶体途径,在转录后水平抑制缺氧HepG2细胞HIF-1α表达.     

缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响

目的探讨缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响。方法建立人胰腺癌SW1990细胞体外缺氧培养模型,随机分为缺氧培养8h、16h、24h组及常规培养组。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白的表达。结果HIF-1α在常规培养细胞中的表达较弱,而在缺氧培养细胞中的表达水平明显增高。SW1990胰腺癌细胞株HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白在缺氧条件下的表达显著增强,并随缺氧时间的延长而升高。结论缺氧可诱导人胰腺癌SW1990细胞Glut1和VEGF的表达,这种作用可能是通过HIF-1α途径介导的。     

RNA干扰HIF-1α对血管生成拟态相关基因表达的影响

目的: 探讨常氧及缺氧培养条件下RNA干扰沉默人食管鳞癌细胞Ec a-109缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管生成拟态相关基因表达的影响.方法: 选择未转染处理的食管鳞癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1α SiRNA的Eca-109细胞, 分别予以常氧和缺氧培养, 缺氧培养12、24、36、48、60、72、96 h, 采用Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α蛋白及mRNA表达, 同时Western blot法检测上皮细胞激酶(EphA2)、血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、层粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)等血管生成拟态相关基因的表达.结果: 缺氧条件下培养Eca-109细胞HIF-1α蛋白表达较常氧时增高, 以24-48 h为明显, 72-96h开始减弱, 而HIF-1α mRNA检测差异无统计学意义( F = 0.70, P = 0.67);RNA干扰后细胞在常氧下HIF-1α、EphA2、LN-5γ2蛋白几乎无表达, 缺氧后亦无增强现象, VE-cadherin、MMP-2蛋白表达较未干扰细胞稍有减弱, 缺氧后表达稍增强, 但差异无显著性(均P>0.05).结论: RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达, HIF-1α基因沉默后可以不同程度减少EphA2、LN-5γ2等血管生成拟态相关基因的表达.     

含阿托伐他汀大鼠血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞生长因子的影响

目的观察促炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNG-α)对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化机制。方法运用内皮体外培养人脐静脉内皮细胞方法,采用免疫组化方法观察TNF-α损伤的VEGF表达影响。结果TNF-α使人脐静脉内皮细胞中VEGF表达增加。结论阿托伐他汀可以抑制炎症刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF的表达,具有抗动脉粥样硬化作用。     

YC-1对人肝癌细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是机体细胞适应缺氧应激产生的转录因子,在特异性缺氧状态下发挥生物学活性,广泛存在于肿瘤组织中.HIF-1是由HIF-1 α和HIF-1β组成的异二聚体,HIF-1α是氧调节亚单位,决定HIF-1的活性.HIF-1通过与靶基因血管内皮生长因子(VEGF)等特定序列DNA结合而调控它们的转录.本研究应用HIF-1α抑制剂3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1苯甲基引唑(YC-1)作用于肝癌细胞,检测药物干预前后肝癌细胞株HIF-1、VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的变化,明确YC-1对人肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对缺氧诱导的肝细胞癌HepG2细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.方法:在缺氧条件体外培养肝细胞癌HepG2细胞16 h,并以不同浓度EGCG处理,即低剂量(10 μmol/L)、中剂量(50 μmol/L)、高剂量(100 μmol/L),制成细胞爬片以免疫组化SABC法检测HIF-1α及VEGF表达的变化,同时设常氧组及缺氧对照组进行比较.结果:常氧状态下HepG2细胞中HIF-1α几乎无表达,VEGF有少量表达.缺氧对照组经16h缺氧后HIF-1α表达明显上调,与常氧组相比有显著差异( t = 3.579,P<0.01);VEGF表达亦较常氧组明显上调,两者有明显差异( t =6.372,P<0.01).同浓度的EGCG对缺氧各组细胞HIF-1α及VEGF表达,与缺氧对照组相比均有不同明显抑制作用(HIF:F = 56.818,P<0.05;VEGF:F = 10.016,P<0.05),EGCG对HIF-1α及VEGF表达的抑制作用呈剂量依赖性,且相关分析显示,HIF-1α及VEGF蛋白表达同步化( r=0.617,P<0.05).结论:EGCG可从蛋白水平下调缺氧诱导的HepG2细胞HIF-1α及VEGF的表达水平,从而有可能抑制肿瘤血管新生.     

缺氧诱导胃癌细胞SGC-7901中三叶因子3与血管内皮生长因子相互关系研究

目的 探讨在缺氧条件下胃癌细胞SGC-7901中三叶因子3(TFF3)与血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子(HIF-1α)的相互关系,了解TFF3在胃癌发生发展过程中的作用机制.方法 使用氯化钴( CoCl2)构建胃癌细胞株SGC-7901的缺氧模型.运用携带靶向干扰人类TFF3的pU6 siTFF3和pU6-mock分别转染胃癌细胞株SGC-7901.以嘌呤霉素为筛选药物,建立稳定特异性抑制TFF3的胃癌细胞株.在缺氧环境和常氧环境下培养胃癌细胞株SGC-7901和靶向干扰TFF3后的胃癌细胞株SGC-7901,运用定量PCR、ELISA和Western印迹分析等方法分别测定其TFF3、HIF-1α和VEGF的蛋白和mRNA表达情况.运用免疫荧光法观察在缺氧环境和常氧环境下胃癌细胞株SGC-7901中TFF3、HIF-1α的分布及表达量.结果 CoCl2缺氧处理能诱导胃癌细胞株SGC-7901中H1F-1α、TFF3和VEGF mRNA表达量上升(分别为33.4±1 8、14.8±1.1和15.1±1.2).稳定干扰TFF3的SGC-7901细胞在缺氧诱导下能下调VEGF和HIF-1蛋白的表达.结论 TFF3介导调节了缺氧条件下VEGF和HIF-1的表达,TFF3有可能是潜在的抗血管生成胃癌治疗靶点.     

Role of vascular endothelial growth factor in angiodysplasia: an interventional study with thalidomide

Background and Aim: The pathogenesis of angiodysplasia is still not fully understood and effective therapy is not available. Thalidomide was reported to be effective in the treatment of angiodysplasia, but the mechanisms underlying its activity are, as yet, unknown. We aimed to investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in angiodysplasia tissues, and the role of hypoxia‐inducible factor‐1α (HIF‐1α) and basic fibroblast growth factor (bFGF) on VEGF expression in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Additionally, we aimed to study the role of thalidomide in these parameters. Methods: Immunohistochemistry was performed to visualize VEGF in angiodysplasia lesions. HUVEC were incubated under hypoxic conditions or in the presence of bFGF. Effects of exposure to thalidomide were studied. Cell growth was assessed in methylthiazolyte‐trazolium assays. Enzyme‐linked immunosorbent assays and real‐time polymerase chain reaction were performed to assess the expression of VEGF at protein and mRNA levels. Western blot was performed to detect the expression of HIF‐1α under hypoxic conditions. Results: VEGF was strongly expressed in 75% of patients with angiodysplasia lesions, as compared to expression in patients without angiodysplasia lesions. VEGF was also induced in HUVEC under hypoxic conditions (P < 0.05). bFGF was found to stimulate the proliferation of HUVEC and enhance the expression of VEGF. Thalidomide suppressed bFGF‐induced proliferation significantly and decreased VEGF expression, both at the protein and mRNA levels. Thalidomide also inhibited HIF‐1α in a dose‐dependent manner (P < 0.05). Conclusions: VEGF may play an important role in the pathogenesis of angiodysplasia. Thalidomide can suppress VEGF, either induced by HIF‐1α or bFGF.     

丙型肝炎病毒核心蛋白对低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨HCV核心蛋白对低氧诱导因子1 α(HIF-1 α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法 将HCV核心蛋白基因的真核表达载体flag2B-core和HIF-1 αsiRNA转染Huh7.5.1细胞;采用RT-PCR和Western blot法分别检测HIF-1 α、VEGF在mRNA和蛋白水平的表达变化,采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中VEGF的含量.对各组间数据进行t检验.结果 Huh7.5.1细胞转染flag2B-core后,HIF-1 α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平升高,细胞上清液中VEGF含量明显高于对照组[(654.5±43.7) pg/ml与(365.9±26.8)pg/ml,t=653.1％,P＜ 0.01)];Huh7.5.1细胞共转染flag2B-core和HIF-1 α siRNA后,HIF-1 α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平降低,细胞上清液VEGF含量明显低于对照组[(389.2±29.6) pg/ml与(768.8±47.3) pg/ml,t=1330.22,P＜0.01).结论 HCV核心蛋白能够上调HIF-1 α和VEGF的表达;HCV可能通过核心蛋白来调节HIF-1 α和VEGF的表达.     

白藜芦醇对单核细胞表达CC类趋化因子受体2基因和内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响

目的 探讨白藜芦醇对活化的人脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1及对人单核细胞株THP-1细胞表面CC类趋化因子受体2基因表达的影响.方法 半定量逆转录聚合酶链反应法检测THP-1细胞CC类趋化因子受体2 mRNA的表达;以肿瘤坏死因子α激活人脐静脉内皮细胞,酶联免疫吸附法测定活化的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌.结果 10 μmol/L和50 μmol/L白藜芦醇可以抑制THP-1细胞CC类趋化因子受体2 mRNA的表达(0.19±0.02和0.06±0.02比0.73±0.15,P<0.01),且随着白藜芦醇剂量的升高(1、10、50 μmol/L),基因表达抑制也逐渐加强(P<0.01);10 μmol/L和50μmol/L白藜芦醇可减少活化的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌(9 663.33±927.38 ng/L和2 822.17±472.47 ng/L比16 595.67 ±1 667.39 ng/L,P<0.01),随着白藜芦醇剂量升高,单核细胞趋化蛋白1分泌逐渐减少(P<0.01).结论 白藜芦醇能剂量依赖性地抑制单核细胞CC类趋化因子受体2基因的表达,并减少活化的内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌,从而有效抑制单核细胞的趋化,发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

炎症细胞因子对人脐静脉内皮细胞分泌VEGF、ICAM-1的影响

目的：探讨炎症因子自细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNFα）对人脐静脉内皮细胞（HU—VEC）分泌血管内皮生长因子（VEGF）、细胞间粘附分子1（ICAM-1）的影响。方法：人脐静脉内皮细胞在37℃、5％CO2的条件下常规培养。实验采用4～5代细胞;按1×10^5／ml密度接种于5cm^2的培养皿中。24h后换液。生长接近80％融合时进行干预。按IL-1β组、TNF—α组、IL-1β＋TNF—α组、空白对照组进行刺激（IL—1β和TNFα干预浓度均为10ng／m1）,每组12个样本;在共同培养24h后收集细胞上清液。应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中VEGF、ICAM—1的浓度。结果：IL—1β组、TNF—α组、IL—1β＋TNF-α组的VEGF值（ng／ml）分别为（27．91±0．63）、（13．54±1．17）和（13．05±0．11）,均明显高于对照组（4．21±0．91）,P=0．000;IL—1β组、TNF-α组、IL-1β＋TNF—α组的ICAM-1值（ng／ml）分别为（2．88±0．98）、（2．96±0．03）和（2．30±0．20）．均明显高于空白对照组（0．25±0．01）。P=0．000。结论：炎症因子IL—1β、TNF—α均可促进人脐静脉内皮细胞分泌斑块不稳定相关标志物VEGF、ICAM-1,可能是炎症在急性冠脉综合征的发生、发展中起重要作用的机制之一。     

缺氧条件下人脐静脉内皮细胞Ang-2、Notch1、Dll4、HIF-1α表达以及沙利度胺对其表达的影响水

背景：沙利度胺治疗胃肠道血管畸形所致的难治性消化道出血安全、有效,而胃肠道血管畸形所致的消化道出血可能与缺氧引起的血管代偿性增生有关。目的：探讨人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成素2（Ang-2）、Noteh1、Dll4和缺氧诱导因子（HIF）-1α在缺氧环境中的表达以及沙利度胺的干预机制。方法：HUVEC分别于常氧和缺氧环境下培养。缺氧培养的HUVEC分为溶剂对照组和不同浓度（25、50、100、200μg／mL）沙利度胺组。以Real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测Ang-2、Noteh1、Dll4、HIF-1α mRNA和蛋白表达。结果：缺氧条件下Ang-2、Noteh1、Dll4、HIF-1α mRNA和蛋白表达均高于常氧状态,差异有统计学意义（P〈0．05）。沙利度胺可呈浓度依赖性地抑制HUVEC Ang-2、Noteh1、Dll4 mRNA和蛋白表达（P〈0．05）。结论：沙利度胺对Ang-2、Noteh1、Dll4表达的抑制作用可能是其抑制血管生成从而治疗胃肠道血管畸形致消化道出血的机制之一。     

沙利度胺治疗血管发育不良所致消化道出血的疗效观察

目的 观察和研究沙利度胺治疗血管发育不良所致消化道出血的临床疗效及其机制.方法 收集2004年11月-2006年12月血管发育不良所致反复发作的消化道出血患者18例,给予沙利度胺片100 mg/d口服,疗程4个月.中位随访时间16.7个月,观察治疗前、后患者临床疗效和血清血管内皮生长因子(vEGF)和肿瘤坏死因子一a(TNF-a)水平变化.结果 患者临床疗效总评分由治疗前的(15.000±3.630)分降至治疗后的(5.330±3.325)分,差异有统计学意义(P＜0.01).随访期间,18例患者平均出血次数为(1.000±1.237)次,输血量为(100.000±240.098)ml,均比治疗前显著减少[(11.220±6.404)次和(1422.220±1556.601)ml,P值均＜0.01];血红蛋白含量为(9.533±2.278)g/ml,比治疗前显著上升[(5.950±1.656)g/ml,P＜0.01].5例患者服药前血清中VEGF浓度为180 pg/ml、TNF-α浓度为58 Pg/ml,治疗后VEGF和TNF-α浓度明显降低(116和34 pg/ml,P值均＜0.01).结论 沙利度胺能明显抑制血管发育不良消化道出血患者的血清VEGF、TNF-α水平,对血管发育不良所致的消化道出血疗效显著.     

肠道血管畸形出血患者低氧诱导因子-1和血管生成素-2表达及沙利度胺的干预研究

目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-1及血管生成素(Ang)-2在血管畸形所致反复消化道出血中的表达及沙利度胺的干预作用.方法 筛选25例因反复消化道出血经胶囊内镜或小肠镜检查诊断为血管畸形者和18名无严重器质性疾病的正常对照者.另选取10例接受沙利度胺治疗(每日4次,每次25 mg,疗程4个月)并至少随访1年的血管畸形者.分别留取血标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管畸形组与正常对照组以及沙利度胺治疗前后血清HIF-1及Ang-2的表达差异.结果 血管畸形组血清HIF-1及Ang-2表达量[分别为(113.84±26.66)和(652.11±140.39)ng/ml]均明显高于正常对照组[分别为(43.28±17.30)和(265.60±53.88)ng/ml,P值均=0.000],且二者表达显著相关(r=0.700,P=0.000).沙利度胺治疗前后HIF-1及Ang-2表达差异无统计学意义(P值分别=0.498和0.136).8例沙利度胺治疗有效者治疗后Ang-2表达量降低了(113.80±73.60)ng/ml(P=0.003).结论 HIF-1及Ang-2可能与血管畸形的形成有关,沙利度胺对血清Ang-2的抑制程度能预知其疗效或预后.

Abstract：

Objective To study the expressions of hypoxia inducible factor (HIF)-1 and angiopoietin (Ang)-2 in repeated gastrointestinal bleeding due to vascular malformation, and the efficacy of treatment with thalidomide. Methods Twenty-five patients with repeated gastrointestinal bleeding due to vascular malformation confirmed by capsule endoscopy or enteroscopy were collected and 18 subjects without severe diseases were served as controls. Ten patients with gastrointestinal vascular malformation, who received 25 mg of thalidomide 4 times daily for 4 months and were followed up for at least one year, were also enrolled. The serum samples from all participauts were detected for expressions of HIF-1 and Ang-2 using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The expressions of HIF-1 and Ang-2 were compared between angiodysplasia group and control group.The expressions of HIF-1 and Ang-2 were comparatively evaluated before and after treatment with thalidomide in treatment group. Results The expressions of HIF-1 and Ang-2 in vascular malformation group [( 113. 84 ± 26. 66 ) ng/ml and ( 652. 11 ± 140. 39) ng/ml, respectively] were significantly higher than that of control group [(43.28±17.30) ng/ml and (265.60±53.88) ng/ml,respectively, P=0. 000]. The expression of HIF-1 was positively associated with that of Ang-2. (r=0. 700, P= 0. 000). There was no difference in expressions of HIF-1 and Ang-2 before and after treatment with thalidomide (P=0. 498 and =0. 136, respectively). However, significant reduction of Ang-2 [(113. 80±73. 60) ng/ml(P=0. 003)] was found in 8 effectively treated patients after thalidomide treatment. Conclusions HIF-1 and Ang-2 might play an important role in the formation of vascular malformation. The extent of Ang-2 reduction after thalidomide treatment may be helpful in evaluating its efficacy or prognosis.     

葡萄糖对不同氧浓度下内皮祖细胞表达低氧诱导因子-1α的影响

目的 观察葡萄糖对低氧（1%氧浓度）和常氧（21%氧浓度）状态下内皮祖细胞表达低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨低氧在糖尿病周围血管病发生中的可能作用.方法 常规培养健康人外周血来源的内皮祖细胞,加入不同浓度葡萄糖（5、10、33 mmol/L）分为A、B、C 3组,并在常氧和低氧条件下分别进行培养.实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测内皮祖细胞表达HIF-1α及VEGF的水平,免疫印迹法检测HIF-1α蛋白表达,ELISA法检测VEGF分泌水平.结果 （1）低氧组表达HIF-1α mRNA（A、B和C组分别为1.25±0.34、1.35±0.26和0.75±0.22）高于常氧组（A、B和C组分别为1.03 ±0.25、1.21±0.28和0.61±0.17）,差异具有统计学意义（A、B和C组t值分别为1.96,2.11,1.89,均P＜0.05）;而在相同氧浓度下,B组的内皮祖细胞表达HIF-1α mRNA高于A组和C组,差异具有统计学意义（低氧组F=23.54,P＜0.01;常氧组F=29.46,P＜0.01）.（2）在相同葡萄糖浓度下,低氧组和常氧组VEGF的蛋白表达差异无统计学意义（t值分别为0.933、1.258和1.001,均P＞0.05）.在低氧浓度下,VEGF的蛋白表达A、B和C组分别为2953±237、2473±205和1768±195,差异具有统计学意义（F=137.43,P=0.000）;在常氧浓度下,A、B和C组VEGF蛋白分别为2868±247、2377±197和1844±203,F=97.96,P=0.000.结论 高糖对低氧条件下的内皮祖细胞具有毒性作用,能减弱其表达HIF-1α和VEGF,可能在糖尿病周围血管病的发生中发挥一定作用.     

PM2.5激活HIF-1α-NF-κB/VEGF通路对肺损伤的影响

目的 分析HIF-1α在PM_2.5暴露致肺损伤中的影响。方法 构建经气管滴注PM_2.5悬液诱导大鼠肺损伤的动物模型,通过蛋白质免疫印迹、病理切片、ROS与TUNEL染色和ELISA等方法,分析不同PM_2.5暴露剂量下HIF-1α表达和肺损伤情况;构建抑制HIF-1α表达的动物模型,通过蛋白质免疫印迹、免疫荧光和ELISA等方法探讨HIF-1α在PM_2.5暴露致肺损伤中的作用机制。结果 PM_2.5暴露造成肺组织病理性损伤,提高肺组织ROS水平、细胞凋亡率和湿干比,促进支气管肺泡灌洗液中各类炎症细胞计数和炎症因子IL-6、TNF-α水平增高,激活肺组织HIF-1α的蛋白表达,且以上效应与PM_2.5暴露浓度相关;抑制HIF-1α可降低NF-κB表达,降低支气管肺泡灌洗液中炎症因子水平,改善肺组织炎症;抑制HIF-1α可降低VEGF表达,降低支气管肺泡灌洗液中白蛋白水平和肺组织湿干比,改善肺组织水肿。结论 PM_2.5通过激活“HIF-1α-N...