压电基因传感器芯片技术在快速检测人乳头瘤病毒中的应用

目的：快速检出尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒（HPV）并分型。方法：利用基因芯片（Gene chip）与压电传感器（Piezoelectric biosensor）相结合的技术，通过HPV6、11、16、18四种型特异寡核苷酸探针建立一种快速检测HPV并分型的方法。并与常规的PCR和斑点杂交方法比较。结果：取复发型尖锐湿疣及相应的原发病例组织标本各22份，用压电基因传感器芯片技术检测结果为：原发型组织标本全部为阳性结果，其中HPV6：17（77.3％），HPV11：3（13.6％），HPV16：2（9.1％），HPV18：未检出；复发型组织标本中除第18例标本为阴性结果外，其余21份为阳性结果，其中HPV6：15（68.2％），HPV11：2（9.1％），HPV16：4（18.2％），HPV18：未检出。用PCR方法检测结果全部阳性，PCR扩增的产物经斑点杂交分型结果与其基本一致。结论：压电基因传感器芯片技术具有准确、快速、灵敏的优点。     

6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析

目的: 比较6对通用引物检测9种不同型别人乳头瘤病毒（HPV）的效果,为临床提供一种快速简便的HPV检测方法。方法: 收集女性宫颈脱落细胞标本954例,使用HPV分型试剂盒进行HPV DNA检测并分型。分别使用6对通用引物（① GP5/GP6,② GP5+/GP6+,③ CP Ⅰ/CP ⅡS,④ CP I/CP ⅡG,⑤ 外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+,⑥ SPF1/GP6++）对HPV-DNA阳性标本进行PCR检测,比较6对通用引物检测9种不同类型HPV DNA效果。结果： 采用HPV分型试剂盒从954例标本中共检出263例HPV-DNA阳性标本,阳性率为27.57%。在阳性标本中,采用通用引物SPF1/GP6++检出的阳性例数为223例,检出率为84.79%;采用巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检出的阳性例数为207例,检出率为78.71%。上述两对通用引物均可以检出9种型别HPV DNA。结论： 通用引物SPF1/GP6++检测效果最佳,但引物含次黄嘌呤,成本较高;巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检测效果次之,且合成成本较低。在HPV研究中可以根据实际情况选用。     

HPV感染的FQ-PCR检测结果分析

目的了解人乳头瘤病毒6,11和16,18型（HPV6,11、HPV16,18）感染情况。方法用荧光定量PCR（FQ—PCR）方法测定HPV6,11、HPV16,18。观察男女间不同部位感染情况、各年龄段感染情况。结果男性检出HPV6。11阳性标本157例（30％）,检出HPV16,18阳性标本1例（20％）。女性检出HPV6,11阳性标本81例（36．2％）,检出HPV16,18阳性标本41例（9．4％）。HPV6,11皮肤组织标本阳性率：男性为32．9％,女性为57.7％。两型HPV感染均以21岁-50岁年龄段为多。结论男女性HPV6,11感染总阳性率无明显差异,女性皮肤组织HPV6,11感染阳性率高于泌尿生殖道,也高于男性组。男性泌尿道也有HPV16,18感染者,建议重视这方面的检查。女性HPV16,18感染以中青年多见,提示宫颈癌发生有年轻化趋势。     

100例食管癌中的人乳头瘤病毒感染检测

目的　检测食管鳞癌中的人乳头瘤病毒 (HPV)感染 ,探索HPV与食管癌大体生长方式的关系。方法　应用通用引物PCR法和多重PCR法检测 10 0例食管癌组织标本中的HPV感染。结果　共检测出HPV阳性 2 6例 (2 6 / 10 0 ) ,按照食管癌的病理大体分型 ,其中溃疡型食管癌中HPV阳性 5例 (5 / 2 5 )、蕈伞型中阳性 3例 (3/ 2 5 )、缩窄型中阳性 12例 (12 / 2 5 )、髓质型中阳性 6例 (6 / 2 5 )。对 2 6例HPV阳性标本中的 2 0例进行了多重PCR检测 ,发现HPV6 / 11型 6例、HPV16型 11例、HPV18型 3例。结论　我国食管癌中存在HPV感染 ,存在HPV感染的食管癌可能并不是在HPV引起的湿疣样病变基础上发展而来。     

人乳头瘤病毒基因分型检测在宫颈癌早期筛查中的应用

目的探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒（HPV）基因检测与颈癌前病变的关系。方法采用HPV分型基因检测系统对妇科门诊就诊的妇女进行宫颈细胞HPV DNA检测（同时检测5种低危型和18种高危型HPV亚型）。结果827例标本中共检出HPV阳性210例（25．4％），共检出20种HPV亚型，其中单纯低危型HPV亚型感染45例（5．4％），单纯高危型HPV亚型感染142例（17．2％），高危、低危亚型共同感染13例（1．6％）；检出感染单一HPV亚型187例（22．6％），感染两种亚型以上23例（2．8％）。低危型主要为HPV11，其次为HPV43、6；高危型主要为HPV16、其次为58、31、33、18等亚型。结论女性生殖道HPV感染者较易发生颈癌前病变，提示早期发现及防治HPV感染对预防子宫颈癌的发生具有重要意义。     

三种方法诊断尖锐湿疣的对比研究

目的探讨原位分子杂交法诊断尖锐湿疣的敏感性与特异性，并与组织病理及醋白试验相比较。方法应用原位分子杂交法[所用探针为地高辛标记的DNA探针（HPV6／11，HPVl6／18，HPV31／33）]、组织病理及醋白试验分别检测实验组和对照组标本。结果37例标本中，醋白试验34例阳性；组织病理检查37例均阳性；原位分子杂交法的总阳性率为94．6％，HPV6／11阳性31例（阳性率83．7％），HPV16／18阳性2例（阳性率5．4％），1例标本HPV6／11及HPVl6／18均阳性（2．7％），HPV31／33阳性1例（阳性率2．7％），阳性标本可见细胞核着蓝色，阳性反应物主要分布在棘层空泡化细胞的细胞核内。结论原位分子杂交法检测HPV敏感性高，特异性强，能对感染有明确的组织学定位，而且还能进一步鉴定感染的型别，因此是诊断和研究尖锐湿疣的较好和先进方法。     

压电基因传感器芯片技术在快速检测人乳头瘤病毒中的应用

目的　快速检出尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒（HPV）并分型.方法　利用基因芯片（Gene chip）与压电传感器（Piezoelectric biosensor）相结合的技术,通过HPV6、11、16、18四种型特异寡核苷酸探针建立一种快速检测HPV并分型的方法.并与常规的PCR和斑点杂交方法比较.结果　取复发型尖锐湿疣及相应的原发病例组织标本各22份,用压电基因传感器芯片技术检测结果为：原发型组织标本全部为阳性结果,其中 HPV6: 17(77.3%), HPV11: 3(13.6%), HPV16: 2(9.1%), HPV18:未检出；复发型组织标本中除第18例标本为阴性结果外,其余21份为阳性结果,其中HPV6: 15（68.2%）,HPV11: 2(9.1%), HPV16: 4(18.2%), HPV18:未检出.用PCR方法检测结果全部阳性,PCR扩增的产物经斑点杂交分型结果与其基本一致.结论　压电基因传感器芯片技术具有准确、快速、灵敏的优点.     

女性生殖道感染的HPV6／11型和HPV16／18型核酸荧光定量PCR分析

目的 了解女性生殖道感染中HPV6／11型和HPV16／18型感染情况。方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对78例女性生殖道感染病人官颈分泌物进行HPV6／11型和HPV16／18型DNA荧光定量PCR检测。结果 FQ-PCR检测HPV6／11型和HPV16／18型阳性总检出率为88．5％(69／78)，其中尖锐湿疣病人HPV6／11型阳性为100％(36／36)，HPV16／18型阳性16．7％(6／36)；重度官颈糜烂者HPV6／11型阳性为8.3％(1／12)，HPV16／18型阳性66．7％(8／12)；低度子宫颈上皮内瘤样变(CIN Ⅰ)HPV6／11型阳性为100％(9／9)，上皮内瘤样病变Ⅱ、Ⅲ(CINⅡ、Ⅲ)级病变HPV6／11型阳性为18．2％(2／11)，HPV16／18型阳性为90．9％(10／11)。官颈癌病人HPV16／18型阳性为90％(9／10)。结论 FQ-PCR对HPV的分型特异性强，可避免假阳性的发生，对临床诊断生殖道感染有重要临床意义。     

食管癌活检组织P53基因 5、6、7、8外显子突变检测

目的：研究P53基因突变与食管癌的关系。方法：应用银染单链构象多态性技术（SSCP）检测食管癌活检组织P53基因5、6、7、8外显子PCR扩增产物。结果：56例食管癌标本经PCR－SSCP检测和病理确诊。检出P53基因突变阳性病人22例,检出率为39．3％（22／56）,其中5－8外显子阳性检出率别为1．79％（1／56）,7．14％（4／56）,17．85％（11／56）和10．71％（6／56）,结论：食管癌P53基因突变并非偶然事件。     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒的快速检测与分型

RDB是将我们设计的HPV6B、11、16、18、31、33、35的7个序列特异性寡核苷酸（SSO）探针分别依次固定在尼龙膜上,再与经PCR扩增的DNA靶序列杂交,即可在同一张膜上分辨7型HPVDNA的任一型。我们检测尖锐湿疣患者62例,对其中20例进行组织活检,阳性检出率为950（19／20）。阳性检出中,HPV6B型8例（40．0％）、HPV11型9例（45．0％）、HPV6B／11型（混合型）2例（10．0％）;对其中42例进行宫颈抹片检测,阳性检出率为92．9％（39／42）。阳性检出中,HPV6B型15例（35．7％）、HPV11型19例（45．2％）、HPV6B／11型3例（7.1％）、HPV16型2例（4．8％）。结果表明尖锐湿疣患者检出HPV总阳性率为94％,感染HPV型主要为HPV6B及11型。     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的PCR检测

应用ＰＣＲ对汕头地区６０例食管癌石蜡包埋标本进行人乳砂瘤病毒ＤＮＡ序列检测。结果：ＨＰＶ－ＤＮＡ总检出率为６３．３％，ＨＰＶ－６、１１、１６、１８型的检出率分别为３０．０％，４０．０％，３０．０％和１０．０％，其中多重感染占阳性例数的６０．５％。初步结果表明，汕头地区食管癌组织中有较高的ＨＰＶ感染率，此与食管癌的发生可能有密切关系。     

人乳头瘤病毒DNA的PCR检测

本文应用聚合酶链反应检测了70例尖锐湿疣，乳头瘤石蜡包理组织中的人乳头瘤病毒DNA，结果表明：HPV-DNA的检出率为70.0%(49/70)，多重感染占阳性例数的53.1%。HPV6和（或）HPV11为本地区尖锐湿疣、乳头瘤组织中HPV感染的主要型别。     

喉癌中HPV不同亚型的检测及测序

目的:检测人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)各型DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用.方法:用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPV各型DNA.同时进行DNA测序,结果:在123例喉癌标本中,HPV-L1,-16E6/E7,-18E6/E7阳性率都明显高于其他各型.123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高.结论:HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染.     

Molecular Epidemiological Study on Prevalence of Human Papillomaviruses in Patients with Common Warts in Beijing Area

Objective To study the circulation, distribution, and genomic diversity of HPVs in common warts in Beijing area of China. Methods Forty eight patients with pathologically diagnosed common warts were screened for the presence of HPV with HPV type-specific PCR and direct sequencing analysis. The genomic diversity of HPVs prevalent in Chinese patients was analyzed based on LCR. Results Forty one （85.5%） samples were positive for HPV DNA, 13（31.7%）-HPV-57, 12（29.3%）-HPV-la, 7（17%）-HPV-27 and 5（12.2%）-HPV-2a. Four cases were infected with two different HPV types, two （4.9%） with HPV-la and HPV-27, one （2.4%） with HPV-1 and HPV-57 and one （2.4%） with HPV-27 and HPV-57. In contrast to the prevalence of single strain of novel HPV-57 variant and HPV-1 prototype, two HPV-2 and three HPV-27 novel variants were found to circulate in Beijing. Conclusion HPV-1, -2, -27 and -57 are predominantly prevalent in patients with common warts in Beijing.     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）保守基因的通用引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织和５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，鳞癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主。但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关。结果提示：ＨＰＶ感染与食管癌的发生有一定关系，不同型别的ＨＰＶ与不同组织的亲和性有差别。     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV－DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ。结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同：３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ２＝１０．６，Ｐ＜０．０１）。初步结果表明，本地区喉乳头瘤主要与ＨＰＶ－６的感染密切相关。该法具有缩短检测时间、节省一个恒温水浴箱等优点。     

以HPV基因通用引物行PCR检测阴茎肿瘤组织中HPV.DNA

为了探讨人乳头瘤病毒感染与阴茎肿瘤的关系。用人乳头瘤病毒基因通用引物行聚合酶链反应,检测５２例阴茎鳞癌。ＨＰＶ阳性率为６７％,３１例为ＨＰＶ－１６,３例为ＨＰＶ１６／１８,１例为ＨＰＶ１１／１８。４例阴茎淋巴结转移灶标本,３例检出与原发癌一致的ＨＰＶ．ＤＮＡ。６例阴茎乳头状瘤标本,４例检出ＨＰＶ－６或１１。２０例正常阴茎包皮均阴性。提示ＨＰＶ有阴茎肿瘤的发生发展中有一定的作用,但与肿瘤的病理分级无     

Comparison of polymerase chain reaction and catalyzed signal amplification in situ hybridization methods for human papillomavirus detection in paraffin-embedded cervical preneoplastic and neoplastic lesions

BACKGROUND: Two molecular methods for HPV genotyping in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue were evaluated: in house polymerase chain reaction assay (PCR) with consensus and type-specific primers and a novel procedure of in situ hybridization-a catalyzed signal amplification system (CSA-ISH, Genpoint, DAKO, Glostrup, Denmark). The number of HPV positive cases and detected viral types were compared in cervical biopsies and cone specimens according to histopathological diagnosis. Primer efficiency in detecting various types of HPV by PCR method was evaluated. METHODS: DNA samples (101) were used as a template to amplify with three pairs of consensus (MY09/11, GP5+/6 +, CPI/IIG) and four type-specific HPV primers (HPV-6/11, 18, 16 and 33). The according histological tissue sections were analyzed with CSA-ISH method, using commercial HPV biotinylated probes HPV-6/11, 16/18 and 31/33/51. RESULTS: The degree of concordance for PCR and CSA-ISH was 64.4%. In 63 of 101 samples (62.4%), HPV was detected by PCR, while only 35 (34.7%) were positive using CSA-ISH. CSA-ISH found lower percentages for all HPV types, except HPV-6/11. A lower percentage of positive results in all high-grade lesions was detected by CSA-ISH. Multiple infections were detected by PCR in only one sample and in three samples by CSA-ISH. Detection with My09/11 primers followed by Gp5+/6+ primers, in nested reaction, gave the highest number of positive results: 58 of 63 (92%). None of the samples diagnosed as condylomata planum or CIN I was positive for HPV-6/11 (low risk type), which was detected exclusively in condylomata acuminatum group. CONCLUSIONS: A significantly higher number of positive samples was detected with PCR than with CSA-ISH method. CSA-ISH method should be improved, especially in detecting HPV in high-grade lesions. CSA-ISH may be more accurate in detection of multiple infections. GP5+/6+ in nested reaction after MY09/11 detected the highest number of positive results. Samples diagnosed as benign lesions positive on HPV-X must be monitored as possible candidates for progression. CIN I lesions, which were HPV negative, probably will not progress. This finding may be important in planning therapy and avoiding unnecessary treatment.     

采用通用引物进行PCR检测宫颈中人乳头瘤病毒的基因

采用可检测九个型别人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的通用引物进行多聚酶链反应，在４７份宫颈糜烂患者的宫颈细胞标本中检出了ＨＰＶ阳性的标本２３份。在这２３份阳性标本中ＨＰＶ１６型特异性引物进一步用ＰＣＲ进行扩增，检出ＨＰＶ１６型阳性者１０份，在２４份ＨＰＶ阴性的标本中用ＨＰＶ１６型特异性引物未检出ＨＰＶ１６阳性的标本。结果表明：用通用引物进行ＰＣＲ检测人乳头瘤病毒的感染，方法简便、灵敏、经济，特别适合于ＰＣＲ     

多重多聚酶链反应和原位杂交检测成人咽喉病变中人乳头瘤病毒感染

用多重我聚酶链反应（ＰＣＲ）和生物素标记探针的原位杂交方法对３６例石蜡包埋的成人咽、喉部乳头状瘤、上皮不典型增生和鳞状细胞癌的组织标本进行了检测。结果共检出６例ＨＰＶＤＮＡ阳性病例，全部为ＨＰＶ６／１１，其中仅１例伴ＨＰＶ１６型感染。６例阳性病例包括喉乳头状瘤３例，咽乳头状瘤、喉粘膜上皮高度不典型增生及喉鳞癌各１例。原位杂交显了ＨＰＶＤＮＡ在肿瘤组织、组织中的分布。