去细胞异体神经桥接面神经缺损的实验研究

目的为修复面神经缺损寻找一种理想的材料。方法40只大鼠随机分成去细胞异体神经移植组和自体胫神经移植组，制成面神经缺损模型，分别以去细胞异体神经和自体神经移植修复。术后5个月分别行神经电生理、再生神经及下唇肌肉免疫组化等检测．结果两组的运动功能恢复、再生神经形态及数量、神经肌肉接头重建等相似（P〉0．05）结论去细胞异体神经有可能用于修复面神经缺损。     

去细胞神经同种异体移植的运动功能恢复

目的 研究去细胞同种异体神经移植修复大型哺乳类动物粗大和长段周围神经缺损的效果。方法 15只犬分为去细胞神经同种异体移植组（实验组）6只、自体神经移植组（对照组Ⅰ）6只、新鲜神经同种异体移植组（对照组Ⅱ组）3只。右侧坐骨神经主干造成5cm长缺损，分别以上述三种神经移植物桥接修复，术后6个月进行步态分析。结果 实验组和对照组Ⅰ功能恢复一般情况相似，对照组Ⅱ无任何恢复；实验组和对照组Ⅰ的右后肢运动及步态周期非常相似，踝关节跖屈及背伸肌群的肌力均有一定程度的恢复，但不及正常犬。结论 化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损，在术后6个月近期运动功能恢复与自体神经移植相似。     

去细胞异体神经材料复合碱性成纤维细胞生长因子修复周围神经缺损

目的　研究成纤维细胞生长因子 (bFGF)和去细胞异体神经联合修复周围神经缺损的效果。　方法　将日本大耳白兔 16只随机分为实验组和对照组。实验组用 3cm去细胞异体神经材料 (来源于新西兰兔 )修复异体神经缺损 ,术后每日注射bFGF到移植体周围 ,对照组注射等渗盐水。 2 0周进行形态和功能学检测。　结果　实验组白兔诱发电位幅值及神经传导速度恢复率分别为 (6 7.5 9± 2 9.6 3) %和 (5 9.79± 2 1.11) % ,显著高于对照组的 (4 9.0 7± 15 .74 ) %和 (36 .85± 18.6 9) % (P <0 .0 5 )。实验组移植体中央再生有髓纤维数为 (87.2 6± 2 0 .18)根 / 10 4μm2 ,显著高于对照组的 (6 8.79± 17.92 )根 / 10 4μm2 (P <0 .0 5 )。　结论　去细胞异体神经材料结合bFGF能较满意地修复一定长度神经缺损。     

去抗原异体神经复合甲状腺激素修复周围神经缺损

目的化学法去除同种异体神经髓鞘和雪旺细胞,形成去细胞基膜管支架后复合甲状腺激素,来桥接大鼠坐骨神经缺损,研究神经再生效果。方法SD大鼠坐骨神经用化学法处理得到去细胞基膜管支架;外源性三碘甲状腺原氨酸(T3)经化学处理后形成无菌、pH值中性的T3水溶液然后溶解在明胶水凝胶中,局部注射在去细胞基膜管支架上。实验分3组:去细胞基膜管复合甲状腺激素移植组(A)、去细胞基膜管移植组(B)和自体神经移植组(C)。术后进行形态学、坐骨神经功能指数(SFI)、神经电生理学、光镜、电镜及图像分析检测。结果术后8周SFI比较,C组(-36.36±1.91)优于A组(-41.58±2.98)和B组(-41.89±3.65),差异有统计学意义(P<0.01),A组和B组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后12周,A组(-31.38±1.87)和C组(-30.03±1.73)优于B组(-36.74±1.63),差异有统计学意义(P<0.01),A组和C组间差异无统计学意义(P>0.05)。运动神经传导速度(NCV)、远端再生有髓神经截面积恢复率在8周、12周两时间点上,A组、C组均优于B组,差异有统计学意义(P<0.01),A组和C组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复合甲状腺激素的去细胞基膜管修复神经缺损,效果优于单纯去细胞基膜管移植,与自体神经移植相比较,是一种很好的自体神经移植替代方法。     

不同低温冷冻预处理对异体神经移植再生影响的实验研究

目的 观察不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神经缺损修复的效果.方法 取96只同种属雄性大鼠,其中24只为取材组,72只随机分为对照组(A、B组)和实验组(C、D、E、F组),每组12只.A组为新鲜自体神经移植组,B组为新鲜异体神经移植组,C、D、E和F组分别为经4℃、-50℃、-80℃和-196℃甘油保存3周的神经移植组.术后2周,进行免疫组织化学观察;术后9、16周进行大体观察、光镜检察、电生理测定.结果 术后2周,B组移植段见明显T淋巴细胞浸润,C、D、E组次之,A组及F组末见T淋巴细胞.术后9周及16周,从神经再生效果评价看:A组神经再生效果最好,F组次之,C、D、E组再次,B组最差.结论 在各冷冻组中,以-196℃组神经再生效果最好,接近新鲜自体神经移植组.     

骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的实验研究

目的 探讨以Ⅰ型胶原海绵为载体的自体骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的效果。方法 32只成年新西兰白兔随机分成Ⅰ、Ⅱ两组，分别自股骨大转子及胫骨结节抽取骨髓基质细胞进行培养，扩增后种植于Ⅰ型胶原海绵上，继续培养2周后植入1．5cm长桡骨缺损。Ⅰ组一侧桡骨缺损植入Ⅰ型胶原 自体骨髓基质细胞复合物(A处理)，对侧桡骨不做任何植入(B处理)。Ⅱ组一侧桡骨缺损做A处理，对侧桡骨缺损植入Ⅰ型胶原海绵(C处理)，分别于术后8周和12周取材，观察骨缺损的修复情况。结果 术后12周，A处理组全部骨性愈合，B处理组由纤维组织填充，C处理组有少量骨痂形成。结论 以Ⅰ型胶原海绵为载体的自体骨髓基质细胞移植能有效修复骨缺损。     

平阳霉素局部注射对兔面神经影响实验研究

目的:探讨平阳霉素在腮腺局部注射对面神经的影响。方法:将实验兔随机分成A、B两组,每组12只。A组左侧为实验侧,B组左侧为阳性对照侧,A、B两组右侧为阴性对照侧。常规麻醉,暴露面神经的上下颊支,并在其周围注射相应的药物,A组左侧注射平阳霉素,B组左侧注射消痔灵,两组右侧注射生理盐水。然后分别在术后第1、3、6周进行面神经功能观察、神经传导速度检测、组织学观察。结果:(1)A组两侧术后各周期内未出现面神经功能障碍。B组左侧则在术后第3周出现明显的面瘫,第6周无明显恢复。(2)A组左侧在术后各周期内面神经传导速度无明显下降,P>0.05。B组左侧则在第3、6周面神经传导速度下降明显,P<0.05。(3)在光镜和透射电镜下观察,术后A组左侧神经组织学形态结构各实验周期内基本正常。而B组左侧在术后第3周出现明显的神经变性,6周时略有恢复。结论:平阳霉素在家兔面神经周围注射后不会造成面神经变性,这为在腮腺区应用平阳霉素治疗血管瘤提供了理论上依据。     

兔肘关节尺侧副韧带急性损伤手术与非手术治疗后的生物力学比较

目的 比较兔急性肘关节尺侧副韧带损伤后手术修复与非手术治疗效果的差异.方法 选取新西兰兔81只,完全随机分为三组,27只暴露出右尺侧副韧带后,但不切断,作为正常对照组(A);27只为切断右肘尺侧副韧带后随即缝合韧带,称为韧带缝合组(B);27只切断尺侧副韧带后不缝合,称为韧带不缝合组(C).分别在术后3,6,12周三个阶段取材,进行生物力学检测.结果 术后12周,B组断裂时的位移为(6.06±0.48)mm,C组为(7.72±0,44)mm(P＜0.05),B组位移接近A组[(5.87±0.46)mm](P＞0.05);B组的最大载荷为(68.23±5.64)N,C组为(42.45±3.66)N(P＜0.05),B组接近A组[(72.86±2.99)N](P＞0.05);B组的轴向刚度为(11.33±1.52)N/mm,C组为(5.52±0.67)N/nan(P＜0.05),B组接近A组[(12.49±1.44)N/mm](P＞0.05);B组的功耗为(0.206±0.017)J,C组为(0.163±0.013)J(P＜0.05),B组接近A组[(0.213±0.010)J](P＞0.05).结论 肘关节尺侧副韧带急性损伤后手术治疗明显优于非手术治疗.     

低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的效果比较

目的 比较低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的疗效。方法 取45只成年雄性SD大白鼠，随机分为A、B、C、D4组。A、B、C组为实验组，每组10只；D组为供体组，15只，切取双侧坐骨神经15mm作为供神经。A组的供体神经在－196℃下保存3周，37℃生理盐水复温后桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；B组用70％酒精浸泡8小时后，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；C组的供体神经不经任何预处理，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段。术后17周进行电生理测定，光镜观察及移植异体神经中段的轴突计数。结果 A、B实验组的电生理测定及移植神经中段的轴突计数结果无显著性差异，光镜下的形态学变化相似。A、B组与C组、电生理测定与移植体中段轴突计数均有显著性差异。结论 两种预处理方法降低异体神经的抗原性具有相似的近期效果。     

患侧腘绳肌腱移植重建膝关节前交叉韧带治疗膝关节三联征

目的比较采用患侧与健侧自体腘绳肌腱移植重建前交叉韧带损伤伴侧副韧带损伤的临床疗效。方法选择膝关节三联征患者28例,随机分为两组:A组(取患侧腘绳肌腱重建前交叉韧带+侧副韧带修复)和B组(取健侧腘绳肌腱重建前交叉韧带+侧副韧带修复)。比较两组患者手术时间,术前后关节活动度、Lysholm评分。结果两组的术后关节活动度恢复、Lysholm评分比较无统计学差异(P>0.05),两组手术时间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用患侧自体腘绳肌腱移植重建前交叉韧带治疗膝关节三联征可获得良好疗效。     

人工神经制备修复兔长段神经缺损的实验研究

目的：研究静脉（V）、基底膜（BM）、雪旺细胞（SC）和神经生长因子（NGF）制备人工神经桥接15mm兔坐骨神经缺损的作用。方法：用日本大耳白兔70只，分为7组（A、B、C、D、E、F、H），每组10条坐骨神经。各组均修复坐骨神经15mm缺损，以自体神经移植作为对照组（A）。术后观察3d,2,4,8和12周肢体运动，肌电图动作电位波幅，潜伏期和传导速度，记录电生理结果。术后12周取材，肉眼观察标本。比较近侧吻合口段（a)，移植体中段（b)，远侧吻合口段（c)神经再生情况，随机半数组织行HE染色，免疫组化髓磷脂碱性蛋白（MBP）染色，另半数组织做Cajar吡啶神经银染色，镜下观察神经再生情况，断端连接情况，并对各组再生神经束面积，有髓神经纤维密度，有髓神经纤维直径和轴突直径进行测量分析。结果：在实验组中以H组（V＋BM＋NGF＋SC组）修复情况最佳，上述各指标与自体神经移植组比较，差异无显著性意义（P＞0．05）。结论：V＋BM＋NGF＋SC组修复神经缺损，效果最好，符合神经组织学结构，能达到自体神经移植的效果，很有可能成为周围神经缺损修复的一种新的方法。     

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的　用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法　SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果　伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论　Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。     

正确认识周围神经断裂伤的修复方法

周围神经缺损的修复方法,目前仍以自体神经移植术较为常用。由于来源受限,供区受损,供求神经难以匹配,轴突再生需要跨越两个吻合口,从而影响疗效,因而需要开发其它途径。通过大量的实验研究和临床尝试,诸多学者推出了许多新的修复方法。本文只选其7种,即受损神经自身延长端端缝合、神经端侧缝合、神经侧侧缝合、神经断端肌肉内埋入、骨骼肌桥架移植、去细胞异体神经移植和组织工程化人工神经等。笔者针对每种方法的设计机制以及存在的问题和对临床疗效的影响等方面进行讨论,目的是以求提高对各种方法的认识,使其在临床中得到正确选用。只有严格掌握适应证,才能提高临床疗效。     

大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)-雪旺细胞(Schwann cell,SC)-细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly(DLlactide-co-glycolide acid),PLGA]桥接体对大鼠坐骨神经缺损后外周靶器官及脊髓神经元的保护作用.方法 建立SD大鼠右侧坐骨神经15 mm缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管,构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植对照组.在术后1,3,6,9周行腓肠肌湿重恢复率及运动终板检测,并于术后9周行CM-Dil和霍乱毒素B亚单位-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行示踪检测.结果 术后各组动物术侧腓肠肌湿莺和运动终板数量下降,3周后除ECM-PLGA组和PLGA组外,腓肠肌湿重和运动终板数量逐渐增加.9周时OEC-SC-ECM-PLGA组腓肠肌湿重、运动终板数量及运动终板长轴长度与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).9周时CM-DiI和CB-HRP逆行示踪结果显示,OEC-SC-ECM-PLGA组标记的脊髓前角运动神经元数量与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损后的外周靶器官及脊髓神经元具有一定的保护作用.     

复合全氟三丁胺携氧材料的嗅鞘细胞移植促进大鼠周围神经损伤修复的研究

目的探究复合全氟三丁胺（perfluorotributylamine,PFTBA）的嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植能否更进一步促进外周神经损伤后神经再生以及功能恢复。方法从大鼠嗅球分离并纯化OECs并鉴定。制作大鼠坐骨神经缺损模型。将60只坐骨神经缺损大鼠随机分为3组：自体神经移植组,OECs神经导管组,PFTBA-OECs神经导管组。在体内环境下分别测试术后3、7、14、28 d PFTBA对OECs存活率的影响。术后4周,对再生神经进行免疫荧光染色以及超薄切片,确定PFTBA-OECs对再生神经的作用。并在术后2、4、8周分别对各实验组大鼠坐骨神经功能指数值进行测量,以确定神经功能恢复情况。结果分离纯化的原代OECs纯度为(95.8±2.1)%;体内条件下,PFTBA能够大幅提高OECs的存活率（P<0.05）;与OECs神经导管组比较,PFTBA-OECs神经导管组极大地促进了神经轴突的再生（P<0.05）;再生神经透射电镜显示,PFTBA-OECs神经导管组再生神经轴突数量明显多于OECs神经导管组,髓鞘厚度明显优于OECs神经导管组（P<0.05）;术后坐骨神经功能指数值显示,PFTBA-OECs神经导管组大鼠功能恢复情况明显优于OECs神经导管组（P<0.05）。结论PFTBA能够明显提升OECs的促神经修复能力,明显提升神经损伤后的轴突再生能力以及髓鞘化程度,为解决细胞移植后面临的缺氧微环境提供了解决方案。     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.     

大块脱钙异体骨关节移植修复兔节段性骨关节缺损

目的：探讨脱钙异体骨关节移植修复节段性骨关节缺损的作用．方法：在兔桡骨近段造成２０ｍｍ长骨关节缺损，分别移植脱钙异体骨关节和自体骨关节及不移植，通过Ｘ线照片、生物力学试验和组织学检查作对照观察．结果：脱钙异体骨关节移植后通过新生骨和软组织爬行替代生成新的骨关节，具有正常骨关节形态特征，抗扭转强度接近正常；自体骨关节移植后的愈合过程与骨折愈合过程基本相似；不移植组至术后２４周仍未见新的骨关节形成．结论：脱钙异体骨关节具有低抗原性、高骨诱导能力和诱导关节软骨再生的特点，可作为临床修复节段性骨关节缺损的移植材料．