不同刺激因子对脐血干／祖细胞体外增殖影响的比较

背景:目前细胞因子支持的脐血体外扩增是安全性较高、最有可能运用于临床的方法之一.目的:比较白血病抑制因子、白细胞介素6及脂多糖对脐血干,祖细胞体外增殖的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照实验,于2003-08/2004-05在广东医学院附属医院中心实验室完成.材料:10例正常脐血标本取自广东医学院附属医院妇产科及湛江市妇幼保健院妇产科,白血病抑制因子为达科为试剂公司产品,白细胞介素6为晶美试剂公司产品,脂多糖由广东医学院附属医院李延平教授自制.方法:密度梯度法体外分离培养脐血单个核细胞,应用磁分选器和单克隆抗体免疫磁珠(阳性)分选法提取脐血CD34+细胞.建立液体培养体系,为含体积分数为40%的胎牛血请、20 g/L牛血清白蛋白、20 μg/L粒巨集落刺激因子、20 μg/L干细胞因子、20 μg/L白细胞介素3的RPMI 1640培养液.取2×108 L-1脐血CD34+细胞,加入配制的液体培养体系50 μL,设立8组:第1组仅加入RPMI 1640作为对照,第2～4组分别单独加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6,第5～7组分别加入脂多糖、白血病抑制因子、白细胞介素6的两两混合液,第8组加入3种刺激因子的混合液,上述各组脂多糖、自血病抑制因子、白细胞介素6的终浓度分别为10 U/mL,10 μg/L,10 mg/L.主要观察指标:MTT法测定不同刺激因子在液体培养体系中对脐血CD34+细胞增殖的影响.结果:培养3d后与对照组比较,单用白血病抑制因子对脐血CD34+细胞具有促增殖作用(F=3.33,P＜0.01),单用脂多糖或白细胞介素6的效果均不显著(F=2.14,1.83.P＞0.05):刺激因子两两联用及3种刺激因子联用时,对脐血CD34+细胞均具有促增殖作用(F=3.54～4.06,P均<0.01),且3种刺激因子联用时的促增殖效果尤为显著.结论:在特定的液体培养体系中,单独使用白血病抑制因子可明显促进脐血干,祖细胞体外增殖,联合情况下白细胞介素6、脂多精与白血病抑制因子具有促增殖协同作用.     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞，并具有免疫原性低，无肿瘤细胞污染，来源广泛，获取容易等优点，使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干粗细胞（HSPC）数不足以满足成人移植的需要，在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题，并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

无血清脐血巨核系祖细胞体外扩增的研究

脐血造血干细胞移植后血小板恢复延迟是一大难题,目前认为这主要与脐血中巨核系祖细胞数量不足及脐血巨核细胞分化成熟延迟有关,而将部分脐血进行巨核系祖细胞体外扩增后输注受者体内是有望解决这一难题的重要途径。但适用于临床应用的扩增条件至今仍未确立。本课题采用人脐血单个核细胞(MNC)在无血清培养体系中使用TPO,IL-3,SCF,IL-6等细胞因子进行不同的组合,在培养的0,6,10,14天进行MNC、CD41^ 细胞及CFU-MK数的检测。以寻找最佳的细胞因子组合及最佳的收获时机。结果表明：无血清条件下TPO与IL-3,SCF,IL-6等细胞因子联用可实现脐血巨核系祖细胞有效的体外扩增,各因子组中以TPO IL-3 SCF IL-6组扩增效果为最佳。其CFU-MK数于第10天最多,扩增达6．8倍,CD41^ 细胞扩增达8．8倍。结论：在人脐血MNC无血清培养条件下。TPO IL-3 SCF IL-6组为巨核系祖细胞体外扩增较佳的因子组合。由于TPO IL-3 SCF IL-6组的CFU-MK数于第10天最多,CD41^ 细胞数亦为同期最高,故培养后收获时间宜控制在其体外培养的第10天。     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞,并具有免疫原性低,无肿瘤细胞污染,来源广泛,获取容易等优点,使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干祖细胞(HSPC)数不足以满足成人移植的需要,在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题,并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

烧伤大鼠血清对骨髓红系粒系造血的影响

目的：观察烧伤血清对骨髓红系粒系造血的影响，探讨促进造血细胞增殖的物质。方法：用5kg溴钨灯致大鼠背部30％体表面积Ⅲ度烧伤，伤后无菌抽取大鼠血清。按10mg／L蛋白加入到骨髓红系或粒系体系中培养。结果：烧伤后3，12，24，48，72和96h，骨髓红系(CFU-E，RFU-E)和粒分(CFU-GM)集落数均显著高于正常对照组：伤后24h达3377，179．7，2405个／1&;#215;10^5骨髓有核细胞(bone marrow cell,BMC)；对照组仅98．5，68．7，1052个／1&;#215;10^5BMC；差异非常显著(t=8．3l，9．65，7．84，P&;lt;0．01)结论：烧伤血清对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用。     

脐血造血干/祖细胞体外定向诱导扩增的研究

目的　观察不同因子组合在体外对脐血 (CB)中的巨核系等造血祖细胞的诱导扩增作用。方法　用体外液体悬浮培养法 ,将白细胞介素 3(IL 3)、白细胞介素 6 (IL 6 )、血小板生成素 (TPO)、脐血血浆 (CBP)作为刺激因子 ,添加不同的细胞因子组合 ,对CB的单个核细胞 (MNC)短期培养 2 1d。在培养的 0、7、14、2 1d检测新鲜细胞和培养细胞中的有核细胞数 (NC)、巨核系祖细胞 (CFU Mk)、粒巨噬系祖细胞 (CFU GM)、混合系祖细胞 (CFU GEMM)增殖倍数。结果　在 2 1d内 ,3个实验组的NC数 ,CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM都有不同程度的增加 ,其中NC、CFU GM在培养的 2 1d达到高峰。CFU Mk、CFU GEMM在培养的 14d达高峰。在含有TPO的实验组中 ,CFU Mk的增殖倍数高于不含TPO的实验组 ,CFU GM、CFU GEMM增殖的倍数也高于不含TPO的实验组。含有CBP的实验组对CFU GM、CFU Mk、CFU GEMM有明显的促增殖作用。结论　CB中的含有丰富的造血干 祖细胞 ,可以在不同细胞因子的刺激下进行定向扩增 ,TPO可以促进干 祖细胞向巨核系分化 ,对粒巨噬系祖细胞也有促进作用。脐血血浆可以作为协同刺激因子促进CB中干 祖细胞增殖。     

人脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究新进展

人脐血造血干／祖细胞增殖能力强，在不同的细胞生长因子联合作用下，可以有目的地扩增，使单份脐血造血干／祖细胞数量增加。动物实验证实了体外扩增并未降低造血干／祖细胞在小鼠体内的造血重建能力。因此，脐血造血细胞体外扩增有望解决成人济血移植中存在的造血干／祖细胞数量不足的问题。     

骨髓增生异常综合征造血干/祖细胞体外增殖、分化特征研究

我们对骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)患者骨髓ＣＤ34 细胞进行检测和富集 ,并对富集后的骨髓细胞进行体外培养 ,以研究其增殖分化特征及对不同造血因子的反应。病例和方法1　病例来源　 1 993年 3月～ 1 997年 1 0月于我院住院的ＭＤＳ患者 2 9例 ,其中男性 2 0例 ,女性 9例 ;中位年龄 3 7岁(2 4～ 65岁 )。按ＦＡＢ诊断及分型标准[1]1 1例为低危组 (ＲＡ/ＲＡＳ) ,1 8例为高危组 (ＲＡＥＢ/ＲＡＥＢ ｔ)。2　试剂来源　所用单克隆抗体包括抗Ｔ细胞 (ＣＤ3、ＣＤ2 )、ＮＫ细胞 (ＣＤ5 6 )、Ｂ细胞 (ＣＤ2 0 )、粒细胞 (ＣＤ11ｂ)、红细胞 (…     

造血干/祖细胞体外扩增的临床应用现状

重组人造血生长因子 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ ,ＨＧＦ)以及造血干 祖细胞 (Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ,ＨＳＰＣ)动员、采集和分离技术的进步不仅推动了临床大剂量化疗的发展 ,同时也促进了体外扩增ＨＳＰＣ临床应用这一细胞治疗新领域的开展。众多研究显示 ,体外扩增ＨＳＰＣ是可行的。这一技术可克服单份脐血应用于成人ＨＳＰＣ数量的不足 ;对于骨髓移植来说 ,可以减少骨髓的采集量和采集时间 ,对减轻供者的痛苦以及费用具有重要的意义 ;同样对那些外周血干细胞…     

烧伤大鼠血清对骨髓红系粒系造血的影响

目的:观察烧伤血清对骨髓红系粒系造血的影响,探讨促进造血细胞增殖的物质。方法:用5kW溴钨灯致大鼠背部30%体表面积Ⅲ度烧伤,伤后无菌抽取大鼠血清。按10mg/L蛋白加入到骨髓红系或粒系体系中培养。结果:烧伤后3,12,24,48,72和96h,骨髓红系(CFU-E,BFU-E)和粒分(CFU-GM)集落数均显著高于正常对照组;伤后24h达337.7,179.7,240.5个/1×105骨髓有核细胞(bonemarrowcell,BMC);对照组仅98.5,68.7,105.2个/1×105BMC;差异非常显著(t=8.31,9.65,7.84,P<0.01)。结论:烧伤血清对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用。     

肿瘤坏死因子α对红系祖细胞造血影响的实验研究

我们通过对正常人纯化的CD3 4+细胞的体外培养 ,观察特殊的红细胞标记血型糖蛋白A(GlycophorinA ,GpA)和CFU E的变化 ,以及TNF受体 (TNFR)在红系祖细胞上的表达情况 ,探索TNF α在人类红系祖细胞生长发育过程中对红系造血的影响。材料和方法1　试剂　牛血清白蛋白 (BSA)购于Sigma公司 ,胎牛血清(FCS)、青霉素和链霉素购于FlowLaboratories公司。胰岛素购于Calbiochem公司。异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的抗CD4 FITC、抗CD3 4 FITC、抗CD40 FITC、抗CD86 FITC及藻红蛋白(PE)标记的抗CD3 4 PE、抗CD80 PE抗体购…     

成骨生长肽对红系造血祖细胞的体外促增殖作用

目的：通过研究人工合成成骨生长肽(sOGP)对红系造血祖细胞的体外促增殖作用，初步探索sOGP促造血活性的作用环节。方法：将正常小鼠和人骨髓有核细胞在标准红系祖细胞基础培养基中进行培养，设定sOGP的不同浓度梯度，于培养48h后计数小鼠CFU—E集落数，培养第4天与第14天计数人CFU—E、BFU—E集落数，将数据与空白对照组及EPO阳性对照组进行比较。结果：sOGP能够有效促进小鼠CFU—E及人CFU—E、BFU—E的体外增殖，量效关系明显，其有效作用浓度范围为10^-16～10^-10mol／L，高峰浓度约为10^-14～1011^-12 mol／L，呈低浓度、广范围及双相作用的特点。但是，sOGP对红系造血祖细胞的体外促增殖效果要弱于阳性对照药EPO。结论：sOGP能够在体外有效地促进红系造血祖细胞的增殖，可能是通过对骨髓基质细胞的作用而促进造血和造骨。     

造血干细胞体外红系定向培养方法的研究进展

<正>红细胞源于骨髓多功能造血干细胞,是血液中数量最多的1种血细胞,通过血红蛋白起着运输O2和CO2的重要生理功能;红细胞输注是目前治疗贫血等多种疾病的常用手段,在成分输血中红细胞制品约占50%[1]。目前临床用血的来源基本上还是人源性的,随着临床需求的日益增加,以     

神经生长因子对小鼠红系造血的影响及内在机制研究

本研究探讨神经生长因子（NGF）对红系造血的影响及内在机制。采用流式细胞术、祖细胞集落测定、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法（ELISA），对经大腿肌肉注射NGF一定时间后小鼠骨髓细胞的（BMC）增殖周期、BFU—E、CFU—E集落产率、外周血红细胞相关指标、肾脏EPO水平、骨髓细胞GM—CSF、脾脏EPO受体（EPOR）mRNA的表达及血清中EPO，GM—CSF和IL-1浓度进行检测，并观察培养体系中加入不同浓度的NGF时BFU—E、CFU—E集落产率的变化及与EPO、IL-3的关系。结果表明：注射NGF（7．5μg／kg）持续7天，骨髓细胞中S＋G2／M期细胞比例、CFU-E和BFU—E集落产率、脾EPOR mRNA量显著高于注射生理盐水的对照组。持续13到19天，外周血网织红细胞比例、红细胞数、血红蛋白含量也有升高；在体外CFU—E培养中，无论是否加入EPO，加入的NGF均能剂量依赖性地促进集落的形成，且只加入NGF组的集落产率显著高于只加入EPO组。在BFU—E培养中加入NGF和IL-3时，集落产率显著高于加入EPO和IL-3组。结论：NGF可能通过提高造血细胞对EPO的反应性并可激活造血细胞上与EPO作用后一样的信号通路，进而促进骨髓细胞进入有丝分裂，促进造血干细胞向红系方向分化，促进BFU—E和CFU—E的形成，增加外周血中网织红细胞、红细胞、血红蛋白含量。     

脐血体外红系定向扩增和分化的研究进展

通过选择合适的培养条件，诱导脐血干／祖细胞定向扩增和分化，产生大量所需的功能细胞，以满足基础研究和临床应用，这已成为目前脐血体外培养研究的新热点。本文就脐血体外红系定向扩增和分化的研究作一综述。     

造血干/祖细胞体外定向诱导分化为粒细胞的研究

为探讨利用人造血干/祖细胞体外定向诱导分化的人粒细胞应用于临床大剂量放，化疗后预防感染的可行性，利用源自人胎盘脐带血的CD34^ 细胞及SCF，IL-3，IL-6和G-CSF的细胞因子组合的培养条件。体外进行向粒细胞的诱导分化。结果表明，在该体系条件下可诱导分化出约1000倍数量的细胞，流式细胞仪检测诱导效率可达60%以上。且诱导分化的细胞染色体未出现异常。裸鼠致瘤实验表明该细胞不具致瘤性。细胞体外生长14-21天为高峰，33天后细胞不再增殖，且诱导分化出的细胞具有吞噬细菌的功能。结论：利用细胞工程的方法体外“生产”出的粒细胞具有应用安全性，且具备生理状态下产生的此种细胞应具备的基本功能。为其临床应用提供了基础。     

间充质干细胞和内皮祖细胞对脐血造血干/祖细胞体外扩增效力的影响

目的比较脐带来源的间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)和内皮祖细胞(Endothelial progeni-tor cells,EPCs)对脐血造血干/祖细胞(Hematopoietic stem/progenitor cells,HSCs/HPCs)的体外扩增效力。方法正常人脐血中分离单个核细胞(Mononuclear cells,MNCs),流式细胞术检测其中HSCs/HPCs所占比例,将MNCs分别接种于处理后的MSCs或EPCs或仅接种于培养液中,比较不同培养条件对HSCs/HPCs扩增能力、表面抗原CD34的表达以及集落形成能力的影响。结果共培养过程中,MSC组和EPC组的MNCs扩增倍数均明显高于对照组,且EPC组更为显著。扩增7天后,对照组、MSC组和EPC组的HSCs/HPCs CD34的表达均较扩增前下降,其中EPC组下降的最为显著,MSC组最不显著。共培养4天后,MSC组的HSCs/HPCs集落形成总数为EPC组的2.47倍(**,P<0.01),共培养7天后,MSC组的HSCs/HPCs集落形成总数为EPC组的3.45倍(**,P<0.01);EPC组与对照组的HSCs/HPCs集落形成总数无显著性差异。结论 MSC和EPC均可为HSCs/HPCs的体外扩增提供适宜的微环境,MSC可抑制HSCs/HPCs的分化,有助于维持其表面抗原CD34的表达,并保持其造血重建潜能和归巢能力;而EPC则可有效促进HSCs/HPCs的分化。     

中药制剂对粒系造血祖细胞的增殖作用

目的：为了研究中药制剂对放射病的治疗效果和对造血系统作用及作用的机理。方法：笔者选用元参等11种中药组成方剂，小鼠一次皮下注射后，第2、4、6、8、10天观察外周血细胞、胸腺重量、骨髓有核细胞、粒系造血祖细胞、胸腺细胞与骨髓细胞混合培养后粒系造血祖细胞的变化。结果：中药制剂对外周血白细胞，骨髓有核细胞，胸腺重量，粒系造血祖细胞有明显的升高作用，胸腺细胞对粒系造血祖细胞的增殖有明显的放大作用。