MTT法检测NK和LAK活性的方法学探讨

获取不同来源的脾单个核细胞（人，鼠），用ＭＴＴ法检测了脾细胞的ＮＫ，ＬＡＫ活性，并对实验条件进行了探讨，寻找出了ＭＴＴ法检测ＮＫ，ＬＡＫ活性的最适效靶比（＜５０：１），最佳杀伤时间（ＮＫ２４小时，ＬＡＫ４８小时），探讨了实验的各操作步骤，检测数据的分析，处理，并与同位素法进行了比较，ＭＴＴ法的检测结果与同位素法有良好的一致性，但本方法操作简单，重复性好，且避免了同位素污染，经济，方便，不失为ＮＫ，     

猪苓多糖和硒诱导LAK细胞的研究

健康人外周血单个核细胞在体外分别不同浓度的猪苓多糖、亚硒酸钠，ＩＬ－２诱导３天为ＬＡＫ细胞，采用５：１、１０：、的效靶比例，以ＭＴＴ法检测ＬＡＫ活性。结果表明不同浓度的猪苓多糖和硒单独能诱导ＬＡＫ细胞，且不同浓度之间，两种效靶比例之间有显著差异。进一步实验发现猪苓多和硒对ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞活性有调节作用。     

红细胞对LAK细胞增殖及杀伤活性的影响

本文采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入及ＭＴＴ法研究了红细胞（ＲＢＣ）对人自体外周血ＬＡＫ细胞增殖及杀伤活生的影响，发现ＲＢＣ对ＬＡＫ的ＤＮＡ合成有抑制作用，ＭＴＴ法证明Ｒ抑制ＬＡＫ细胞增殖并随ＲＢＣ浓度的加大，其抑制作用加强。ＲＢＣ对ＬＡＫ细胞的杀伤活性明显地增强作用，并呈浓度依赖关系。     

MTT法测定LAK、TIL、CD3AK活性初步研究

ＭＴＴ法测定ＬＡＫ、ＴＩＬ、ＣＤ３ＡＫ活性初步研究刘军权，陈复兴（解放军第９７医院，２２１００４）８０年代初，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ［１］首先观察到正常人和肿瘤患者的外周血淋巴细胞经含有ＩＬ─２的培养基培养（即ＬＡＫ细胞），能杀伤ＮＫ抵抗性肿瘤细胞后。现...     

特异性i—RNA对烧伤患者NK细胞数量,活性和NKCF活性影…

为探讨特异性免疫核糖核酸（ｉ－ＲＮＡ）预防烧防感染的作用及机理，一研究将符合一定条件的４５名严重烧伤患者随机分成两组，对照组采用常规治疗，治疗组在此基础上应用牧民特ｉ－ＲＮＡ，并采用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＡＰＡＡＰ法、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放法和四甲基偶氮唑盐（ＴＴ）比色法，检测了两组烧伤患者伤后第１天和第１０天外周血的ＮＫ细胞数量、ＮＫ细胞活性和ＮＫ细胞毒因子（ＮＫＣＦ）活性。结果发现，伤后第天     

热休克体外诱导自身T细胞对慢性髓系白血病细胞的杀伤

目的 研究热休克对慢性髓系白血病（ＣＭＬ）患自身Ｔ细胞杀伤（ＡＴＫ）肿瘤细胞活性的影响。方法 用＾５１Ｃｒ释放法检测自身Ｔ细胞对热休克处理的ＣＭＬ靶细胞（△ＣＭＬ）和未灯克处理的ＣＭＬ靶细胞（δＣＭＬ）的ＡＴＫ活性,用流式细胞仪检测ＣＭＬ细胞热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）的表达,淋巴细胞混合培养（ＭＬＴＣ）法刺激扩增Ｔ细胞,并检测其免疫表才ＡＴＫ活性。结果 ２１例ＣＭＬ患中有４例显示对δＣＭＬ有     

细胞免疫功能在儿童急性白血病患儿治疗前后变化及临床意义

应用流式细胞仪（ＦｌＯＷｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ＦＣＭ）结合单克隆抗体对２４例急性白血病（ＡＬ）患者治疗前及治疗后４Ｗ外周血反映细胞免疫功能的部分指标即天然杀伤细胞（ＮＫＣ）与Ｔ细胞亚群进行测定。结果表明：未经治疗的ＡＬ患者ＮＫＣ数量及Ｔ３、Ｔ４、Ｔ４／Ｔ８比值均明显低于正常组（Ｐ〈０．０１）,治疗后ＮＫＣ、Ｔ３、Ｔ４及Ｔ４／Ｔ８比例均有不同程度的上升。提示：ＮＫＣ及Ｔ细胞亚群在ＡＬ的发生,发展上有重     

腹腔镜胆囊切除术对机体免疫的影响

前瞻性地研究了腹腔镜胆囊切除术（ＬＣ）对机体体液免疫和细胞免疫的影响。１９９６年３￣７月２９例ＬＣ病人于手术前、后１天上午７时检测了周围血ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ（单向扩散法）、ＩｇＥ（酶联免疫法）、Ｔ细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８（ＡＰＡＡＰ法及直接免疫荧光法）及ＮＫ细胞活性（酶释放法）。其结果经均数配对ｔ检验，免疫球蛋白、Ｔ细胞亚群及ＮＫ细胞活性均未发现明显差异。初步结果表明ＬＣ     

特异性iRNA对烫伤后大鼠免疫功能作用的量效关系的实 …

为探讨特异性免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ）对烫伤大鼠免疫功能作用的量效关系，利用烫伤大鼠实验模型，采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法和溶血分光光度法等技术，分别测定了不同剂量（０．２５，０．５，１．０，１．５和２．０ｍｇ）特异性ｉＲＮＡ治疗后，烫伤大鼠ＩＬ－２活性，ＮＫ细胞活性，ＴＮＦ活性和特异性抗体产生含量的变化，实验结果发现，应用特异性ｉＲＮＡ治疗后，各组烫伤大鼠上述各项免疫指标明显改     

自体LAK细胞对白血病细胞清除作用的实验研究

采用￣（５１）Ｃｒ４小时释放试验，细胞培养及组化分析技术，研究了２６例初诊急性髓细胞白血病患者（ＡＰｓ）和其中的１２例缓解期患者（ＲＰｓ）的ＬＡＫ细胞对自体白血病细胞（Ａｕｔｏ－ＬＢ）的清除作用。ＡＰｓ的外周血或骨髓通过双层Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ分离所得富含淋巴细胞层中含２０％～５０％的Ａｕｔｏ－ＬＢ，在ｒＩＬ－２１０００Ｕ／ｍｌ的培养基中培养１～２周Ａｕｔｏ－ＬＢ消失。而￣（５１）Ｃｒ４小时释放试验的结果是ＡＰｓ－ＬＡＫ和ＲＰｓ－ＬＡＫ细胞胞对Ａｕｔｏ－ＬＢ的杀伤活性分别为１２．９％±１２．３％和２４．１％±１２．０％，均较其对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性（３６．０％±３２．０％和６６．２％±１８．１％）显著减低（Ｐ＜０．０１），提示：Ａｕｔｏ－ＬＢ细胞表面能被ＬＡＫ细胞识别的决定簇较Ｒａｊｉ细胞系低。但体外培养过程中Ａｕｔｏ－ＬＢ能被清除。提示：清除机制除了有ＬＡＫ细胞的直接杀伤外，尚有其它机制参与，体外培养过程中Ａｕｔｏ－ＬＢ表面决定簇表达增加。     

肿瘤坏死因子细胞毒活性测定方法的比较

本研究对测定肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）细胞毒活性的中性红、结晶紫、四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）和￣３ＨＴｄＲ释放测定方法进行了比较，结果除ＭＴＴ测定法的敏感性明显偏低外，其它３种方法的敏感性无显著性差别。用丝裂霉素Ｃ处理Ｌ＿（９２９）靶细胞使中性红测定法的敏感性提高１０倍，用放线菌素Ｄ处理靶细胞使其敏感性提高４×１０￣３倍。靶细胞密度增加２倍，结晶紫测定法的敏感性降低３倍多。结果表明：靶细胞密度为３×１０￣４／孔，用放线菌素Ｄ处理的结晶紫测定法具有简便、快速、灵敏、稳定等特点，其灵敏度为５．２５±１．４５ｐｇ／ｍｌ。我们把靶细胞密度增加到７．５×１０￣４／孔的结晶紫测定法，敏感性稍降低，但测定时间缩短了２０小时。     

急性白血病患者自体骨髓移植后的IL-2治疗

急性白血病患者自体骨髓移植后的ＩＬ２治疗韩明哲李成文冯四洲邱录贵韩俊领刘汉芝姜蓉严文伟白细胞介素２（ＩＬ２）是一种能扩增细胞毒性Ｔ淋巴细胞、增强自然杀伤（ＮＫ）细胞活性和激活ＬＡＫ细胞活性的细胞因子［１］，自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）后ＩＬ２治疗能...     

猪内毒素休克外周与内脏微循环灌注的动态变化

目的：通过对脓毒性休克时全身血流动力学及内脏微循环改变的研究,探索新的治疗途径。方法：小型猪２０只,随机分为４ 组：①正常对照组（Ｃ组）：仅给生理盐水;②内毒素组（Ｌ组）：单纯持续泵入内毒素;③Ｎ硝基左旋精氨酸甲酯（Ｌ ＮＡＭＥ）治疗组（ＬＮ 组）：泵入内毒素后１ 小时持续泵入Ｌ ＮＡＭＥ;④Ｌ ＮＡＭＥ对照组（Ｎ 组）：仅给Ｌ ＮＡＭＥ。结果：内毒素持续泵入后１小时,外周（骨骼肌）微循环灌注增高,至４小时末上升约７０％ ;肝、胃、肠等内脏器官微循环灌注急剧下降,至４ 小时末下降约６０％ （Ｐ＜ ０．０５）;门静脉血流量也相应下降。应用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂Ｌ ＮＡＭＥ后,血浆一氧化氮（ＮＯ）明显下降,ＮＯＳ活性明显减弱,内脏微循环灌注进一步下降。结论：内毒素休克时外周与内脏微循环灌注是不平衡的,内脏微循环灌注急剧下降,血流淤滞为其重要特征。ＮＯＳ抑制剂Ｌ ＮＡＭＥ能提高血压,但不能改善内脏微循环。     

MTT比色法测定NK细胞活性及其影响因素

ＭＴＴ比色法测定ＮＫ细胞活性及其影响因素南京医科大学一附院中心实验室（２１００２９）陈子庆，丁小健，潘世扬，王韬，毕志刚ＮＫ细胞活性与肿瘤免疫、抗病毒免疫、自身免疫病等均有密切关系。我们参照文献略加改良，建立了ＭＴＴ比色法测定ＮＫ细胞活性方法。初步用...     

骨髓基质细胞对人多发性骨髓瘤细胞系自分泌白细胞介素6诱…

研究了小鼠骨髓基质细胞对诱导人白细胞介素６（ＩＬ－６）依赖性多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞自分泌ＩＬ－６的作用。结果表明：人ＭＭ细胞系ＸＧ－１培养上清（ＳＮ１）没有可检测水平ＩＬ－６活性；小鼠骨髓基质细胞系ＭＦ－Ｌ培养上清（ＳＮ２）仅有低水平ＩＬ－６活性（１００Ｕ／ｍｌ）；ＸＧ－１细胞和ＭＦ－Ｌ细胞／上清共同培养上清（ＳＮ３，ＳＮ４）均含极高的ＩＬ－６活性（１０５０Ｕ／ｍｌ），并可被ＩＬ－６单抗ＢＥ－８     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞耐药的初步研究

目的：克服肿瘤细胞的多药耐药（ＭＤＲ）。方法：用人工合成互补于ｍｄｒ１基因５′端转录起始部位的反义寡核苷酸（ＯＤＮ），直接转染耐药细胞株ＫＢ－８－５细胞，或以脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为载体进行基因转染实验，通过ＭＴＴ法检测细胞对柔红霉素（ＤＮＲ）的敏感性，流式细胞仪分析细胞内ＤＮＲ含量及免疫组化方法确定细胞表面糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达水平。结果：ＯＤＮ可增加ＫＢ－８－５细胞内的ＤＮＲ浓度从而提高耐药细胞对ＤＮＲ的敏感性，ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ进一步加强上述作用。在ＤＮＲ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ组中，约有７４．４３％的被转染细胞对ＤＮＲ敏感而致死，基本达到药物敏感细胞株ＫＢ－３－１的水平。ＯＤＮ转染的ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ为弱阳性表达，低于阳性对照ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ表达水平。结论：ＯＤＮ的逆转作用可能与其互补结合的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ降解或直接阻滞了Ｐｇｐ合成使其表达降低有关。     

检测NK细胞活性的三种方法的比较分析

检测ＮＫ细胞活性，经典的方法是同位素和法，但由于同位素的设备条件和防护等问题，使其应用受到限制，人们一直在探索能为临床接受的替代方法。本文的研究表明，ＭＴＴ还原法与ＬＤＨ释放法，均能用于ＮＫ细胞活性检测ＭＴＴ还原法的灵敏度优于ＬＤＨ释放法，且与＾３Ｈ－ＴｄＲ标记法有较了的相关性，是易于普及和推广应用的一种测定ＮＫ细胞活性的方法。     

维甲酸诱导HL-60细胞分化中对细胞周期素依赖性激酶活性的影响

目的探讨维甲酸（ＲＡ）对ＨＬ６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用与细胞周期素依赖性激酶（ＣＤＫ）活性变化的相关性。方法用５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或芳维甲（ＡＥ）处理ＨＬ６０细胞１～４天,在观察细胞生长、四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原实验以及细胞周期分析的基础上,用组蛋白Ｈ１激酶活性分析技术检测ＣＤＫ２的活性,免疫沉淀法分析结合于ＣＤＫ２和ＣＤＫ４上的相应的细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ和Ｄ的量。结果ＨＬ６０细胞在ＡＴＲＡ或ＡＥ作用下,细胞增殖减慢,对ＮＢＴ的还原能力明显增强,９０％左右的细胞被阻滞在Ｇ１／Ｇ０期;在Ｇ１到Ｓ期转换过程中起关键作用的ｃｙｃｌｉｎＥ／ＣＤＫ２的活性显著下降,结合于ＣＤＫ４上的ｃｙｃｌｉｎＤ１的量减少。结论ＲＡ抑制ＨＬ６０细胞增殖并诱导其分化可能与ＣＤＫ２和ＣＤＫ４的活性下降有密切关系     

骨髓基质细胞对人多发性骨髓瘤细胞系自分泌白细胞介素6诱导作用的研究

研究了小鼠骨髓基质细胞对诱导人白细胞介素６（ＩＬ－６）依赖性多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞自分泌ＩＬ－６的作用。结果表明：人ＭＭ细胞系ＸＧ－１培养上清（ＳＮ＿１）没有可检测水平ＩＬ－６活性；小鼠骨髓基质细胞系ＭＦ－１培养上清（ＳＮ＿２）仅有低水平ＩＬ－６活性（１００Ｕ／ｍｌ）；ＸＧ－１细胞和ＭＦ－Ｌ细胞／上清共同培养上清（ＳＮ＿３，ＳＮ＿４）均含极高的ＩＬ－６活性（１０５０Ｕ／ｍｌ），并可被ＩＬ－６单抗ＢＥ－８特异性中和，而且不同浓度的ＳＮ＿３，ＳＮ＿４可以促进其他依赖外源性ＩＬ－６的人ＭＭ细胞系（ＸＧ－２，４，６）生长。鉴此证实了小鼠骨髓微环境基质细胞可以诱导ＭＭ细胞自分泌ＩＬ－６，后者可促进ＭＭ细胞生长。     

α 干扰素联合白细胞介素2对淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶表达的影响

目的：研究α干扰素（ＩＦＮ－α）对白细胞介素２（ＩＬ－２）激活的淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶表达的影响。方法：４小时标准５１Ｃｒ释放实验检测ＮＫ和ＬＡＫ活性，ＡＢＣ酶标法检测颗粒酶Ｂ的表达，溶血法测定穿孔素活性，ＢＬＴ法测定颗粒酶Ａ的表达。结果：ＩＦＮ－α能增强ＩＬ－２诱导的外周血淋巴细胞中ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性。ＩＬ－２和ＩＦＮ－α分别作用于淋巴细胞１天即可增加穿孔素活性，二者联合可使活性进一步增强（Ｐ＜０．０５），于培养第３天，ＩＬ－２和联合组的穿孔素仍有高表达，但ＩＦＮ－α组则下降至对照组水平。ＩＦＮ－α和ＩＬ－２单独或联合对淋巴细胞颗粒酶Ａ和Ｂ的表达无影响。结论：ＩＦＮ－α增加ＩＬ－２激活淋巴细胞的细胞毒作用可能与其增加淋巴细胞穿孔素表达相关。