SLC22A18过表达对人乳腺癌MCF-7细胞化疗药物敏感性的影响

.05).结论 SLC22a18过表达使人乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇、环磷酰胺、米托蒽醌的敏感性下降,对顺铂的敏感性提高;该基因可能具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,并可能通过降低细胞内化疗药物蓄积产生耐药性.     

几种抗炎药对大鼠抗炎及血清细胞分子影响的研究

目的比较研究非甾体抗炎药醋氯芬酸、双氯芬酸和布洛芬对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用,并探讨其作用机制。方法应用弗氏完全佐剂制作AA动物模型,将Wistar大鼠35只随机分为正常对照组、模型组、醋氯芬酸组、双氯芬酸组和布洛芬组5组,通过组织学及双抗体夹心ELISA法检测比较5组大鼠关节局部的炎症情况,及其外周血细胞因子IL-1β和IL-6的含量。结果在醋氯芬酸组、双氯芬酸组和布洛芬组大鼠关节炎的炎症反应明显轻于模型组。细胞因子IL-1β和IL-6的含量在醋氯芬酸组、双氯芬酸组和布洛芬组均低于模型组（P〉0.05）;且醋氯芬酸组低于双氯芬酸组和布洛芬组（P〉0.05）;而双氯芬酸组和布洛芬组间无显著差异（P〈0.05）。结论醋氯芬酸、双氯芬酸和布洛芬均能降低AA大鼠血中的IL-1β和IL-6含量,有较好的抗炎作用,醋氯芬酸作用相对较为显著。     

转染ERα基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞白细胞介素-8表达的影响

目的 通过转染GFP-C1-ERα质粒建立稳定表达ERα的MDA-MB-23l细胞株,观察ERα对该细胞株白细胞介素(IL)-8表达的影响.方法 pEGFP-C1-ERα质粒经酶切和测序后转染MDA-MB-231细胞,使用G418筛选出稳定表达的克隆并鉴定.使用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定稳定转染ERα的MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231细胞及MCF-7细胞的IL-8mRNA的表达,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞上清液IL-8的浓度.结果 成功建立ERα阳性表达的MDA-MB-231细胞株,转染ERα的细胞株IL-8 mRNA的合成(105±16)ng/L明显低于MDA-MB-231细胞(195±32)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(32±4)ng/L(P<0.05),转染后细胞上清液IL-8浓度较未转染细胞明显降低,分别为(3499±312)ng/L和(6788±427)ng/L(P<0.05),但仍然高于MCF-7细胞(1846±44)ng/L(P<0.05).结论 稳定转染ERα基因抑制了MDA-MB-231细胞的IL-8的合成和分泌.     

吸入NO对婴幼儿体外循环中细胞因子变化的影响及意义

目的 探讨吸入一氧化氮(NO)对婴幼儿体外循环手术中细胞因子变化的影响及意义.方法 室间隔缺损的婴幼儿30例随机分为对照组和NO组,NO组在体外循环期间吸人40×10-6NO直至关胸.在体外循环前、主动脉开放后1、3、5、10 min分别取右上肺静脉血和右心房血测定TNF-α、IL-8、IL-10.结果 NO组IL-10水平较对照组增高(P<0.01),TNF-α、IL-8则较对照组明显降低(P<0.05).结论 NO能抑制炎症性细胞因子,促进抗炎细胞因子的活性,故可减轻体外循环并发症.     

终末糖基化产物对神经小胶质细胞IL-1β、IL-6表达的影响

目的：研究终末糖基化产物（AGEs）对神经小胶质细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法：以不同浓度、不同时间AGEs刺激体外培养的小鼠小胶质瘤细胞（BV-2细胞）,观察细胞形态的变化,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内IL-1β、IL-6mRNA水平,应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量。结果：与空白组和AGEs对照物组比较,AGEs组细胞活化呈阿米巴样,胞核大而圆,核仁明显,胞浆内颗粒物增多,以300mg/L作用18h组效果最显著。与空白组和AGEs对照物组比较,作用时间相同时,AGEs浓度为50mg/L时即可见细胞的IL-1β、IL-6mRNA水平明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,浓度为150mg/L时,细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量明显增加（P〈0.05）;作用浓度相同时,2h即可见细胞的IL-1βmRNA水平明显增加（P〈0.05）,6h见细胞的IL-6mRNA水平和细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,其中以300mg/L作用18h组效果最显著（P〈0.05）。结论：AGEs刺激可使小胶质细胞内IL-1β、IL-6高表达。     

白细胞介素-6抑制白细胞介素-1β诱导的兔纤维环细胞凋亡的研究

目的探讨白细胞介素(IL)-6对IL-1β在体外诱导兔纤维环细胞凋亡作用的影响。方法以10μg/L浓度的IL-1β诱导体外培养的原代兔纤维环细胞发生凋亡,然后分别加入10μg/ L和100μg/L的IL-6以影响纤维环细胞凋亡进程。对细胞行Annexin-V-PI染色和Caspase-9功能染色,采用流式细胞仪检测结果。结果IL-1β诱导下,凋亡纤维环细胞比例由(2.67±1.08)%上升至(20.37±1.57)%,而在两种浓度IL-6的干预下,细胞凋亡比例分别为(18.17±4.68)%和(9.42±1.27)%,与IL-1β诱导退变的纤维环细胞差异有统计学意义(P＜0.05)。而Caspase-9功能阳性细胞也由(19.40±0.98)%分别降至(15.13±1.45)%和(10.17±2.50)%(P＜0.05)。结论IL-6对IL-1β诱导的体外兔纤维环细胞凋亡有明显的抑制作用,这种抑制作用可能是通过抑制纤维环细胞内Caspase-9的激活实现的。对IL-6抑制作用的进一步研究,将有助于明确椎间盘细胞凋亡的调控途径,为椎间盘退变的治疗寻找新切入点。     

大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

不同模型中乳腺癌细胞化疗药物敏感性差异的研究

【摘要】 目的 比较三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞对化疗药物表柔比星敏感性的差异。方法〓(1)分别采用细胞计数和集落计数的方法在三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的生长曲线;(2)分别用四甲基偶氮唑哇盐法(MTT)和集落计数的方法检测三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中表柔比星对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的细胞生长抑制率曲线和集落形成抑制率曲线;(3)通过IC50计算软件计算出相应乳腺癌细胞的IC50值,最后用t检验的统计学方法比较不同模型中乳腺癌细胞的IC50值是否有统计学差异。结果〓三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中的乳腺癌细胞MCF-7、231细胞均可达到指数生长期即均可达到良好的生长状态;三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞的IC50值差异无统计学意义。结论〓三维软琼脂模型和三维壳聚糖支架模型中乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性无明显差异,提示不同的三维生长环境对乳腺癌细胞的化疗药物敏感性没有显著影响。     

抗内毒素Fab'对严重烧伤早期炎症细胞因子的影响

目的 观察抗内毒素Fab'对严重烧伤早期肠源性内毒素血症小鼠肠道损伤的保护作用.方法 采用严重烧伤早期肠源性内毒素血症小鼠模型,分为烧伤组、治疗组及对照组,分别于6、12、24、48 h四个时相点测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-lβ、IL-10的浓度.结果 与正常对照组比较,烧伤后血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平增高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平较烧伤组显著降低(P<0.01).病理检查结果提示治疗组较烧伤组肠黏膜损伤明显减轻.结论 抗内毒素Fab'能抑制内毒素所诱导的TNF-α、IL-1β产生,同时调节血清中的IL-10水平,减轻内毒素对机体的损害,从而起到对严重烧伤后肠源性脓毒症的防治作用.     

乳腺癌中白细胞介素-10和血管内皮生长因子的表达及其对树突状细胞的抑制作用

目的 探讨乳腺癌中自细胞介素（IL）-10和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对树突状细胞（DC）的影响。方法 应用免疫组织化学方法检测71例乳腺浸润性导管癌中IL-10和VEGF的表达及S100＋DC和CD1a＋DC的分布情况，分析它们之间的关系。结果 IL-10和VEGF的阳性率分别为69．0％（49／71）和70．4％（50／71）。S100＋13（2和CD1a＋DC的阳性率分别为76.1％（54／71）和53．5％（38／71）。IL-10表达仅与CD1a＋DC的密度呈负相关（rs=-0．244，P＜0．05），而VEGF表达与S100＋DC和CD1a＋DC的密度均呈负相关（分别rs=-0．380，P＜0．01和rs=-0．476，P＜0．01）。结论 乳腺癌细胞分泌的IL-10和VEGF可能通过抑制DC的产生和分化成熟而抑制机体对肿瘤细胞的免疫杀伤作用。     

Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究

目的：观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法：采用脂质体lipofec-tamine2000介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR和Western-blot法检测未转染对照组、空载体pcDNA3．1转染对照组、pcDNA3．1-Smac转染组胃癌细胞中Smac基因的表达。选用紫杉醇（1、5、10ug／mL）处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄片。结果：同未转染对照组和空载体pcDNA31转染对照组比较,pcDNA31-Smac转染组SGC-7901细胞SmacmRNA和蛋白表达水平显著增高（F）〈O01）;紫杉醣处理24、48h后,pcDNA3．1-Smac转染组细胞生长抑制率增加（P〈O01）;使用化疗药物后,细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,pcDNA3．1-Smac转染组细胞形态变化最为显著。结论：转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达,能提高SGC-7901细胞对化疗药物的敏感性。     

Survivin基因RNA干涉对MCF-7乳腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的探讨Survivin短发卡状RNA抑制Survivin的表达对人乳腺癌MCF-7细胞紫杉醇敏感性的影响。方法通过脂质体介导将Survivin短发卡RNA表达质粒pSurvivin shRNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7并检测Survivin mRNA及蛋白的表达情况；噻唑蓝（MTT）比色法和Annexin—V法分别检测紫杉醇处理后转染pSurvivin shRNA细胞、未转染细胞以及转染阴性对照质粒细胞的增殖和细胞凋亡的变化；采用Western blot法观察紫杉醇作用过程中Survivin表达的变化。结果与未转染细胞及转染阴性对照质粒细胞比较，转染pSurvivin shRNA质粒的细胞Survivin mRNA和蛋白表达明显下降；在同一紫杉醇作用浓度下，细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显增高。此外在紫杉醇作用的早期（6h内），转染阴性对照质粒细胞以及未转染细胞均出现了Survivin表达一过性增加，而转染pSurvivin shRNA的细胞中未观察到Survivin表达的增加。结论短发卡状RNA干扰技术阻抑乳腺癌细胞中Survivin的表达，可增强乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

Increasedl-arginine transport in a nitric oxide-producing metastatic colon cancer cell line

Background: Little is known about amino acid transport in human neoplastic cells. We previously characterizedl-arginine transport in the primary human colon cancer cell line, SW480, and found it is principally mediated by the sodium-independent system y⁺. In this study, we characterizedl-arginine transport in the metastatic cell line, SW620, and compared it with that in the primary cell line, SW480. Methods: Transport of³H-l-arginine in cell monolayers was analyzed in the presence and absence of sodium. Kinetic studies were performed over a range ofl-arginine concentrations to determine transporter affinity (K_m) and maximal transport velocity (V_max). Transport was further characterized through blockade with known amino acids. In addition, the effect of cell age (i.e., time in culture) on arginine transport was examined at 2 and 9 days after seeding. Cellular proliferation was asssessed by using the colorimetric 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. Results: l-Arginine uptake was primarily sodium independent in the SW620 cell line. Kinetic and amino acid-inhibition studies revealed a single high-affinity, sodium-independentl-arginine transporter (V_max=1286.3 ± 158.3 pmol/mg protein/30 s; K_m=46.8 ± 4.2 μM). Sodium-independent transport was blocked by system y⁺ substratesl-homoarginine,l-ornithine andl-lysine. Sodium-dependent uptake occurs through a single transporter with system B^O,+ characteristics (K_m=16.15 ± 2.1 μM; V_max=329.94 ± 29.7 pmol/mg protein/30 s). Arginine transport increased with time in culture with day 2 cells transport velocity =241.7 ± 33.6 pmol/mg protein/30s, whereas day 9 cells transport velocity =377 ± 15.4 pmol/mg protein/30 s (p<0.01). Cellular-proliferation studies revealed a doubling time of 3.2 days for SW620 and 5.4 days for SW480 (p<0.05). Conclusions: l-Arginine transport in these neoplastic cell lines occurs primarily through sodium-independent, high-affinity system y⁺. V_max was increased 180% in the metastatic variant (SW620), suggesting upregulation of the y⁺ transporter. The increased y⁺ activity may be a mechanism to provide continuous substrate for tumor growth.     

封闭乳腺癌转移抑制基因1的表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7的转移

目的 构建乳腺癌中乳腺癌转移抑制基因1( BRMS1)反义基因重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞MCF-7转移能力的影响。方法 应用基因重组技术将BRMS1反义基因构建于腺病毒载体pAD-X,转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒,并用real-time聚合酶链反应(PCR)进行BRMS1基因表达的验证。将重组腺病毒pAD-aBRMS1感染MCF-7细胞后,应用Tran-°swell小室法观察对细胞侵袭和运动能力的影响。结果 酶切结果与预期相符,real-time PCR可检测到感染BRMS1反义基因重组腺病毒后MCF-7细胞没有BRMS1基因表达。病毒转染后Transwell 小室可见,MCF-7细胞的侵袭和运动能力均受到显著的抑制(P值均＜0.01)。结论 重组反义BRMS1腺病毒载体正确构建,其对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和运动都有抑制作用。     

缺血-再灌注对大鼠心肌内源性一氧化氮含量的影响

目的 观察缺血-再灌注过程中心肌-氧化氮(NO)合成和代谢的变化.方法 采用健康SD大鼠(n-6)建立离体心肌缺血-再灌注损伤模型.采用电化学微传感器监测N0含量;采用Griess法监测NO代谢产物含量;采用分光光度计检测一氧化氮合酶(NOS)活性;采用RT-PCR法测定NOS mRNA表达.连续监测心功能.结果 再灌注早期心肌N0含量显著降低(P<0.05),随后升高,但再灌注后各观察时点的心肌NO含量均显著低于基础值平衡末(P<0.05).再灌注早期心肌NO代谢产物增加,随后减少.再灌注早期心肌NOS活性升高,随后降低.再灌注60 min时内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达显著降低(P<0.05),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达变化不大,心肌NO含量与冠脉循环流量(CF)、左室内压(LVDP)、左室压变化速率最大值(dp/dtmax)和左室压变化速率最小值(dp/dtmin)的恢复率成正相关.结论 缺血-再灌注可降低心肌内源性NO含量,主要原因是再灌注早期促进N0消耗而后期抑制N0合成.     

Serpin B3对大鼠乳腺癌Walker256细胞骨转移的影响

目的：探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B3（Serineproteinase Inhibitor B3,Serpin b3）对大鼠乳腺癌Walker256细胞骨转移的影响。方法：构建靶向干扰Serpin b3 (RNAi)慢病毒,感染乳腺癌Walker256细胞,以干扰Scramble序列作为对照,实时荧光定量PCR和Western blot检测Serpin b3干扰效率。将32只SPF级雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机均分为四组：阴性对照组、阳性对照组、LV-Scrl组、LV-serpin b3 shRNA组,各组分别于右腿胫骨平台注射20ul灭菌PBS、Walker256细胞、转染Scrl的Walker256细胞、转染RNAi的Walker256细胞;模型构建成功后21d,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组大鼠转移瘤中Serpin b3 mRNA、蛋白表达含量;取各组大鼠患侧胫骨组织行甲苯胺蓝染色观察肿瘤组织病理变化。结果：阳性对照组Serpin b3在乳腺癌细胞中高表达,和阳性对照组相比,Lv-Serpin b3 shRNA在大鼠Walker 256细胞高效率表达,导致在骨转移瘤组织中Serpin b3 mRNA、蛋白表达明显降低（P<0.05）,且患侧骨组织破坏程度减轻。结论：Serpin b3在乳腺癌组织中高表达,干扰Serpin b3表达能减弱乳腺癌Walker256细胞的骨转移倾向。     

局部晚期乳癌新辅助化疗(附5例临床报告)

对5例局部晚期不能根治切除的乳癌(T_4N_2M_0/T_4N_2M_1),根据体外药物敏感试验结果,进行化疗,5例病人化疗均有效(CR 1例,PR 4例),原发病灶由T_4降为T_2,转移灶缩小或消失,使不能手术的乳癌变成可以手术切除,从而提高治疗效果。在肿瘤个体化治疗方面作了有益的尝试。     

利血平对人乳腺癌耐药细胞多药耐药性逆转作用的实验研究

目的 检测利血平对人乳腺癌耐药细胞的多药耐药性的影响，为临床使用利血平逆转乳腺癌的多药耐药性提供可靠的依据。方法 以流式细胞术检测利血平对人乳腺癌耐药细胞系ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞内的荧光染料罗丹明－１２３的浓度影响；以噻唑蓝（ＭＴＴ）法检测５～３０ｕｍｏｌ／Ｌ浓度的利血平对人乳腺癌耐药细胞的阿霉素毒性的影响。结果 本实验流式细胞仪检查５～３０ｕｍｏｌ／Ｌ的利血平可以显著增加人乳腺癌耐药细胞内罗丹明     

白细胞介素8在人乳腺癌细胞侵袭和增殖中的作用

目的探讨白细胞介素8（IL－8）在乳腺癌细胞侵袭和增殖中的作用。方法运用细胞因子抗体芯片技术分析11株人类乳腺癌细胞的细胞因子表达谱,研究细胞因子在乳腺癌进展中的作用机制。结果细胞因子表达谱显示IL－8的表达水平与乳腺癌细胞雌激素受体状态,转移能力和波形丝蛋白的状态均相关,与人类乳腺癌细胞的侵袭直接正相关。IL－8抗体可以特异性地阻断IL－8介导的细胞侵袭作用,但对乳腺癌细胞增殖无明显作用。结论IL－8可能是乳腺癌进展和细胞侵袭中的关键因子,在乳腺癌细胞侵袭中起重要作用。