SDZ对人大肠癌LOVO细胞系的作用及其对E-、N-Cadherin表达的影响

目的:研究SDZ对人大肠癌LOVO细胞系的作用及其对上皮型、神经型钙黏蛋白(E-、N-Cadherin)表达的影响。方法:用倒置显微镜和电镜观察SDZ对人大肠癌LOVO细胞的凋亡情况,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测加药后E-、N-Cadherin的表达情况。结果:SDZ对人大肠癌LOVO细胞株有促进凋亡的作用;对E-Cadherin的表达有上调作用,对N-Cadherin的表达无影响。结论:SDZ有加强肿瘤细胞间的黏附性,降低肿瘤浸润和转移的能力。     

应用PCR和单克隆抗体方法从人粪便及肿瘤组织中检测大肠癌基因突变的研究

目的：检测大肠癌病人粪便中脱落细胞与肿瘤组织细胞的DNA，对比两者K—ras基因序列和突变位点的变化，为临床非介入性的、简便的大肠癌诊断提供理论和实验依据。方法：分离和提纯大肠癌组织及粪便中脱落细胞的DNA，用PCR(Polymerase chain reaction)法扩增K—ras基因，克隆K-ras基因PCR产物并进行DNA序列的测定。免疫组化检测大肠癌相应抗原的表达：采用ELISA法，用大肠癌单克隆抗体对大便样品进行检测。结果：同一病人的大肠癌组织细胞与粪便中的脱落细胞的K—ras基因的序列完全一致，并检测到1例K—ras基因点突变。K-ras基因突变与否与大肠癌病理类型和大肠癌单克隆抗体检测大便样品中脱落细胞的癌抗原表达水平有一定的相关性。结论：以大肠癌分子发病机理为基础的非介入性检测粪便中K-ras突变是可行的，有望成为正常人群大肠癌筛查以及诊断的新方法之一，可以为大肠癌的早期发现及监测大肠癌的发生、发展和预后提供理论和实验依据。     

百里醌抑制大肠癌生长的实验研究

目的:探讨百里醌抑制体内外大肠癌生长的影响及机制。方法:不同浓度百里醌作用人大肠癌细胞株SW480后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测大肠癌细胞中NF-κB、Bcl-2和Survivin的表达;建立裸鼠大肠癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组和实验组(n=10),第3周开始分别经灌胃给予溶媒(1%乙醇)和百里醌(3 mg/只),每周3次,共两周,术后第8周处死裸鼠,测量肿瘤瘤重并计算抑瘤率;免疫组织化学法检测肿瘤组织的NF-κB、Bcl-2和Survivin的表达。结果:与对照组相比,百里醌可显著抑制大肠癌SW480细胞生长,并诱导细胞凋亡;百里醌可明显抑制NF-κB、Bcl-2和Survivin在SW480细胞中表达;与对照组相比较,实验组裸鼠皮下移植瘤生长被显著抑制,肿瘤组织中NF-κB、Bcl-2和Survivin表达下调。结论:百里醌具有抑制体内外大肠癌生长的作用,可能是通过抑制大肠癌中NF-κB及其调控蛋白Bcl-2及Survivin的表达而实现。     

肠道脱落细胞DNA含量图像分析在大肠癌诊断中的意义

为了探索大肠癌早期诊断的方法,本文进行了肠道脱落细胞学研究,并将细胞DNA含量图像分析应用于脱落细胞性质的鉴别。通过对116例临床病人的肠道脱落细胞DNA分析结果表明:该方法对大肠癌的灵敏度为72.73％,特异度为91.49％;对腺瘤的灵敏度为14.29％,特异度为93.15％;其结果与组织细胞DNA含量图像分析相近。本文的试验结果证明,DNA含量图像分析适合于肠道脱落细胞检查,有较好的临床应用价值。     

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。     

卡莫氟固脂纳米粒对人大肠癌细胞多药耐药的逆转的机制研究

研究卡莫氟固脂纳米粒对人大肠癌细胞多药耐药的逆转作用,并对其逆转机制进行了初步探讨.采用MTT法比较了卡莫氟不同药物形式的细胞毒作用;采用RT-PCR技术考察卡莫氟固脂纳米粒对敏感和耐药人大肠癌细胞中mdr 1和MRP的基因表达的影响.卡莫氟固脂纳米粒能下调耐药人大肠癌细胞中mdr 1的mRNA表达,对其中的MRP的mRNA的表达没有显著影响.卡莫氟固脂纳米粒能逆转人大肠癌细胞由mdr 1 介导的多药耐药,而对MRP介导的多药耐药没有显著影响.     

高龄大肠癌合并糖尿病的围手术期处理

目的:探讨高龄大肠癌合并糖尿病的外科治疗措施.方法: 对我院1997～2004年治疗的29例高龄大肠癌合并糖尿病病人进行总结分析.结果:29例病人均顺利通过手术.平均住院25d.术后3例出现尿路感染,1例肺部感染,3例病人切口推迟愈合,2例吻合口瘘,无死亡病例.结论: 对高龄大肠癌合并糖尿病病人只要围手术期严格控制血糖,选择合理的手术方式,完全可以达到理想的外科治疗效果.     

大肠癌病理分型、浸润深度与淋巴结转移相关关系的研究

目的:探讨大肠癌病理分型及浸润深度与淋巴结转移的关系。方法:回顾性研究了306例大肠癌病理资料,对大肠癌的病理分型分期及浸润深度与淋巴结转移进行分析。结果:低分化腺癌、印戒细胞癌的淋巴结转移率和淋巴结转移度较高分化腺癌高;大肠癌浸润肠壁全层的淋巴结转移率和转移度较仅浸润黏膜层的高。结论:大肠癌分化程度、病变深度与淋巴结转移密切相关。     

新辅助化疗对大肠癌细胞凋亡和P53表达的影响

目的:研究新辅助化疗能否引起大肠癌细胞的凋亡和对大肠癌组织P53表达的影响。方法:选取中南大学湘雅二医院老年外科2004年9月至2006年9月收治的大肠癌手术病人68例,分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(term inal-deoxynucleotidyl transferase med iatednick end labeling,TUNEL)和免疫组化S-P法对68例患者大肠癌组织中的肿瘤细胞的凋亡指数(Apoptotis index,AI)和P53表达进行检测。结果:新辅助化疗组肿瘤细胞的AI均数为3.56%,明显高于对照组的2.29%(P<0.01)。新辅助化疗组P53阳性表达率为22.60%,明显低于对照组的33.60%(P<0.05)。结论:新辅助化疗可以显著诱导大肠癌细胞凋亡,降低凋亡相关基因P53的表达。     

榄香烯乳对大肠癌HCT-116细胞侵袭及miR-155表达的影响

目的观察榄香烯乳对人大肠癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的榄香烯乳处理人大肠癌HCT116细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR方法检测癌细胞miR-155 mRNA水平。结果人大肠癌HCT116细胞经榄香烯乳处理后,迁移和侵袭力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。榄香烯乳处理组miR-155 mRNA水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论榄香烯乳可降低人大肠癌细胞侵袭能力,下调miR-155 mRNA表达是其重要机制之一。     

高龄大肠癌150例临床分析

目的 :分析 15 0例高龄大肠癌的临床特点及积极手术治疗的可行性。方法 :通过对合并有其他疾病的高龄大肠癌病人积极行手术治疗及术后严密监护 ,了解其术后并发症率。结果 :15 0例病人 ,132例手术 ,根治性加姑息性切除占 91 2 % ,手术死亡率 2 3%。结论 :对于高龄大肠癌应改变传统的保守疗法 ,争取积极手术治疗 ,严密的围手术期监测 ,可降低并发症及病死率。     

双靶点survivin siRNA治疗大肠癌的实验研究

目的:探讨双靶点survivin siRNA对大肠癌细胞SW620表达的影响及siRNA干扰后诱导肿瘤survivin表达降低的机制。方法:构建survivin双靶点特异性的RNA封闭性载体,survivin1,survivin2和survivin1 2通过培养大肠癌细胞SW620,survivin封闭性载体转染SW620细胞;Western-bloting检测survivin蛋白表达情况。结果:DNA测序证实表达质粒构建成功;对照组、survivin1,survivin2、survivin1 2组的β-actin蛋白均有显示,而且量基本相同;而survivin1,survivin2,survivin1 2蛋白表达明显低于对照组,survivin蛋白表达比对照组明显降低。结论:双靶点survivin siRNA能够下调大肠癌survivin表达,为大肠癌的治疗提供有价值的参考依据。     

组织因子对大肠癌细胞抗凋亡作用影响

目的探讨人类大肠癌细胞胞膜蛋白组织因子(TF)对大肠癌细胞抗凋亡作用的影响。方法提取人大肠癌Lovo细胞DNA,以梯度浓度的TF激活剂凝血因子VIIa(FVIIa)激活去血清培养Lovo细胞,以有效浓度TF抗体封闭阻断这一作用。用流式细胞术测定细胞凋亡率,以Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3及Bcl-2的表达。结果 FVIIa能使细胞产生有效抵抗去血清培养诱导的细胞凋亡,其抗凋亡作用与FVIIa浓度呈现剂量效应关系。胞膜TF封闭抗体能有效阻断这一作用。Caspase-3及磷酸化Bcl-2蛋白在TF上述抗凋亡作用中被活化。结论激活大肠癌Lovo细胞TF能有效抑制细胞凋亡,且这一作用可被TF封闭抗体有效阻断。     

PI3K p85α蛋白表达缺失联合5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制

目的:探讨PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU对大肠癌SW480细胞促凋亡作用的机制。方法:复苏培养PI3Kp85α干扰组SW480细胞(PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480)和SW480对照组细胞,Western blot鉴定干扰效果,采用Western blot方法比较两组细胞中凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim表达的差异。结果:Western blot结果显示SW480干扰组细胞PI3Kp85α蛋白抑制率为84%,5-FU刺激48h后,PI3Kp85ɑ/RNAi-SW480细胞组凋亡蛋白Bax、Bcl-6、Bim的表达较SW480对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失联合5-FU可通过增加促凋亡蛋白的表达促进大肠癌SW480细胞凋亡,为进一步阐明大肠癌细胞恶性增值的分子机制打下基础。     

半乳糖氧化酶试验在临床筛检大肠癌中的应用

我们应用半乳糖氧化酶试验(Go-s)对350例大肠癌及非癌病人进行了检侧,结果表明:该法对大肠癌检出的敏感性为97.5％,特异性为94.07％,阳性预示值为82.98％,提示Go-S可作为普查大肠癌的一种新方法。     

Survivin和P53基因在慢性血吸虫病并大肠癌中的表达及意义

目的 探讨Survivin和P53基因在慢性血吸虫病并大肠癌中的表达及意义.方法 选取2010年至2015年大肠癌手术病人的病理标本,其中未患血吸虫的大肠癌病人34例,伴有血吸虫感染的大肠癌病人16例,通过PCR-SSCP方法检测P53基因第5~8外显子突变情况,利用 PT-PCR检测Survivin mRNA的表达,研究P53基因第5~8外显子突变情况和Survivin mRNA在大肠癌伴血吸虫病人和未伴血吸虫病人中的表达情况差异.结果 在所有入组人群的P53基因检测上,均无发现突变情况;而大肠癌合并血吸虫病的患者结直肠中Survivin mRNA的表达明显高于单大肠癌患者.结论 检测慢性血吸虫并大肠癌病人中Survivin的基因水平,能够了解血吸虫病对大肠癌的影响,为进一步寻找靶基因提供了线索.     

PDCD4对DAP5表达及大肠癌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探讨程序性死亡基因4(PDCD4)对死亡相关蛋白5（DAP5) 的表达及对人大肠癌细胞系LOVO凋亡的影响。方法 构建重组真核表达载体pFLAG/PDCD4,转染人大肠癌细胞LOVO,G418（500 mg/L）筛选获得稳定表达PDCD4的细胞系。RT-PCR及Western blotting检测LOVO细胞中PDCD4的mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡情况,Western blotting检测LOVO细胞DAP5表达的变化。结果 成功建立稳定表达PDCD4的大肠癌 细胞LOVO-pFLAG/PDCD4。转染PDCD4 的LOVO-pFLAG/PDCD4 组与空白对照LOVO 组、转染空载质粒的LOVO-pFLAG组相比,PDCD4蛋白表达和mRNA水平明显升高（P < 0.01）;细胞凋亡率明显增加（P < 0.01）;同时伴有DAP5蛋白表达明显升高（P < 0.01）。结论PDCD4能够诱导大肠癌细胞LOVO的凋亡,其机制可能与上调DAP5的表达有关。     

灰离褶伞菌中活性物质体外抗肿瘤实验研究

目的:选择野生的灰离褶伞子实体作为研究对象,采用层析法,并辅助以萃取和重结晶等分离提取的方法,分离纯化灰离褶伞活性物质并测定其体外抗肿瘤活性。方法:采用层析法并辅助以萃取和重结晶等多种方法,进行活性物质的提取、分离;采用MTT法测定灰离褶伞活性物质对体外培养的大肠癌HT29、人胃癌细胞株BGC823两种肿瘤细胞的抑制作用。结果:灰离褶伞活性物质对大肠癌HT29、人胃癌细胞株BGC823两种细胞的抑制率均随着浓度的增大而增大。灰离褶伞活性物质的MTT检测OD值均显著或极显著低于阴性对照组。结论:灰离褶伞活性物质对大肠癌HT29、人胃癌细胞株BGC823两种肿瘤细胞均有较强的抑制作用,且其抑制率与浓度呈良好的量效关系。     

细胞外信号调节激酶在大肠癌组织的表达及临床意义

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)在大肠癌组织的表达及其临床意义。方法采用免疫组化检测70例大肠癌及其切缘黏膜组织中的ERK表达,Western blot法检测ERK蛋白表达,流式细胞术检测大肠癌细胞凋亡和细胞周期。结果 ERK在大肠癌组织的阳性表达率高于切缘黏膜组织(P<0.01)。ERK在大肠癌组织中蛋白表达亦高于切缘黏膜组织(P<0.01)。ERK表达阳性组大肠癌细胞凋亡率低于阴性组(P<0.01),而细胞增殖率和异常染色体比例高于阴性组(P<0.05)。ERK蛋白表达与大肠癌细胞凋亡呈负相关(r=-0.705,P<0.01),而与大肠癌细胞增殖呈正相关(r=0.469,P<0.05)。大肠癌患者TNM分期、年龄及淋巴结转移与ERK表达有关(P<0.01);ERK表达阳性组患者累计生存率低于阴性组(P<0.05)。结论 ERK在细胞质内蓄积可促进大肠癌细胞增殖且抑制细胞凋亡;ERK表达与大肠癌进展密切相关,是影响大肠癌预后的潜在因子。     

NKT细胞在大肠癌患者外周血中的表达及意义

目的探讨自然杀伤性T(NKT)细胞与大肠癌临床病理参数的相关性,并推测其在大肠癌发生、发展中的作用。方法采集27例大肠癌患者和25例健康体检者(对照组)外周静脉血,运用流式细胞术检测外周静脉血中NKT细胞的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果大肠癌患者外周静脉血中NKT细胞表达较健康体检者明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),但大肠癌患者外周静脉血中NKT细胞的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、有无转移及肿瘤临床分期(TNM),二者比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论大肠癌的发生可能与患者外周血中NKT细胞的异常高表达有关,但其分化程度及分期与NKT细胞的关系仍有待进一步研究确定。