食品中腰果过敏原成分PCR检测方法建立

目的建立食品中腰果过敏原成分的PCR检测方法。方法采用溴化十六烷三甲基胺(CTAB)法和磁珠法提取的坚果DNA,根据GenBank中腰果3种主要致敏蛋白AnaO1、AnaO2、AnaO3的基因序列,设计9对引物;通过扩增效果和特异性,筛选腰果最佳扩增引物对;采用腰果特异性引物对AnaO3 F3R3和植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果成分进行双重PCR扩增,确定方法特异性;通过腰果DNA梯度稀释确定该检测方法灵敏度;通过样品添加试验模拟食品中腰果过敏原成分的检测。结果采用CTAB法提取坚果DNA的A260/A280比值普遍<1.8,说明存在蛋白质污染,采用磁珠法提取DNA的比值>1.8,说明去除蛋白质较干净;9对引物中,引物对AnaO3 F3R3特异性最好,其最佳退火温度为55.4℃;采用该引物与植物通用引物对P lant 159,对腰果、杏仁、开心果等13种坚果DNA进行双重PCR,只有腰果样品能扩增出312 bp的特异性条带;采用该PCR法检测腰果过敏原成分的灵敏度为0.1 pg/μL;可以检出食品中>0.001%的腰果成分。结论建立了一种食品中腰果过敏原成分的双重PCR检...     

健康食品佼佼者——荞麦

<正>荞麦,又名三角麦、乌麦、花荞等,为蓼科植物荞麦的种子,原产于我国北方地区,现全国各地均有栽培,是唯一作为粮食用的蓼科双子叶植物。公元前5世纪的《神农书》中将荞麦列入为八谷之一,过去曾是人们的一种主要粮食。唐代时经朝鲜传入日本,如今荞麦及荞麦面条在日本十分流行,在美洲、法国及东欧也很受欢迎。近年来,由于荞麦含丰富营养与特殊保健成分颇受推崇,被誉为健康食品中的佼佼者。     

药食佳品——荞麦

荞麦不在五谷之列,但古人和外国人都很重视荞麦的食用。据报道,目前一些国家已形成“荞麦食品热”,特别在日本、韩国、新加坡等亚洲国家已把荞麦食品作为上等食品。 荞麦,是一年生草本植物,果实呈三角     

什么是食品过敏原标签

正随着食品业的发展,因食物过敏的人越来越多,越来越影响到人类的生活质量,甚至会危及生命,食物过敏已经成了最让人头疼的卫生问题之一,标注食物过敏原是保护消费者的一种方式,也是发达国家设置技术性贸易壁垒的重要手段之一。日本是食品安全法律法规比较完善、非常注重食品卫生与安全的国家,对食品过敏原进行研究起步也比较早。日本对标签的要求非常严格,在2001年修订的《食品卫生法》中明确提出对于导致食物过敏的成分必     

过敏性紫癜患儿血清过敏原特异性IgE的检测及临床意义

目的:了解血清过敏原特异性IgE在过敏性紫癜患儿中的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验检测80例过敏性紫癜患儿的血清过敏原特异性IgE。结果:80例患儿的血清总IgE阳性率为88.75%,其中62.5%的患儿查出特异性过敏原。吸入性过敏原中尘粉螨阳性率最高,食物性过敏原中虾蟹阳性率最高。结论:过敏性紫癜的发生与吸入性过敏原和食物性过敏原都有一定的相关性,血清过敏原特异性IgE检测可对过敏性紫癜的病因诊断和预防有参考意义。     

山西省消费者对食品过敏原认知态度的调查与分析

目的 通过对山西省消费者对食品过敏原了解程度的调查,分析其社会人口学特征影响因素,从而为进一步有针对性地宣传食品过敏原相关知识提供数据依据。 方法 采用配额抽样法对山西省11地市3 500名消费者进行问卷调查,采用SPSS19.0对调查数据进行统计分析,χ2检验进行统计推断。 结果 在3 416份有效问卷中,不了解食品过敏原的有1 505人,占44.1%;不同性别、年龄段、文化程度以及收入的消费者对于食品过敏原的了解程度的差异均有统计学意义(P<0.05);支持在食品包装上标明食品过敏原信息的有2 252人,占65.9%。 讨论 建议针对人口学特征对不同的消费者进行不同程度的食品过敏原知识宣传;根据食品过敏原信息标于食品包装标签的消费者支持度,相关部门、机构应加以重视和落实食品过敏原信息的标注。     

健康食品佼佼者:荞麦

荞麦,原产于我国北方地区,现全国各地均有栽培,是惟一作粮用的蓼科双子叶植物。近年来,由于荞麦(特别是苦荞麦)营养丰富,含特殊的保健成分而颇受推崇,被誉为健康食品中的佼佼者。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的灵敏度和特异性研究

目的:研究SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分(35S基因和NOS基因)方法的灵敏度、特异性和线性关系。方法:使用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法检测不同转基因含量的标准品,并对转基因阳性和阴性样品分别进行扩增,分析扩增曲线和Ct值。结果:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法检出限为0.05%,转基因大豆标准品和阳性样品中检出35S基因和NOS基因成分,阴性样品中未检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测35S和NOS转基因成分方法灵敏度高,特异性较好,标准曲线线性良好。     

儿童哮喘血清特异性过敏原检测及临床意义

目的:探讨吸入性和食入性过敏原特异性IgE检测在儿童哮喘中的临床意义。方法:对238例哮喘患儿进行血清吸入性和食入性过敏原特异性IgE检测,将受检儿童分为婴幼儿、学龄前、学龄期3组,对过敏原状况进行分析比较。结果:儿童哮喘发病以婴幼儿期及学龄期多见,其中婴幼儿以食入性过敏为主,学龄期儿童以吸入性过敏为主,学龄前儿童则两者均可发生。结论:哮喘患儿以吸入性过敏原为主。血清特异性过敏原检测是儿童哮喘过敏原检测的方法之一。对有明确过敏原的哮喘患儿应及早进行针对性防治及脱敏疗法。     

哮喘儿童过敏原调查分析

目的:对湖州地区哮喘儿童过敏状况进行分析,以协助临床诊断治疗。方法:采用MEDIWISS Ana-lytic Gmbh检测仪检测血清总IgE水平及过敏原。结果:300例患儿中总IgE抗体阳性率88.6%,其中吸入性过敏原阳性率为60.00%,食入性过敏原阳性率为47.00%。吸入性过敏原阳性以对屋尘螨/粉尘螨过敏者最多占48.33%,食物性过敏原中对牛奶过敏者最多,占19.33%,其次是鸡蛋白过敏者为12.00%。结论:引起湖州地区儿童支气管哮喘的过敏原以吸入性过敏原为主,其阳性率随年龄增长而升高;尘螨是最重要的过敏原,同时亦需重视食物性过敏原对哮喘的影响。     

实时荧光定量PCR技术在副溶血性弧菌快速检测中的应用

目的:建立副溶血性弧菌荧光定量PCR检测方法,应用于食品、食物中毒样本的快速检测。方法:食品样本先选择性增菌,取上层液提取DNA,粪样直接提取DNA,用实时荧光定量PCR方法进行检测,并与常规培养法进行比较。结果:用实时荧光定量PCR检测食品54份,食物中毒粪样12份,检测阳性食品21份、粪样9份,检测结果与培养法比较,阳性检出率分别为食品38.9%、31.5%;粪样均为75.0%。结论:副溶血性弧菌的实时荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点。     

Real-Time PCR探针法检测食物中毒中沙门菌方法建立及应用

目的:建立食物中毒中沙门菌Real-Time PCR检测方法并将其应用。方法:选取沙门菌侵袭蛋白A基因(in-vA)进行引物和探针设计,并对反应条件不断优化,进行灵敏度和特异度测试,建立检测沙门菌的Real-Time PCR方法。结果:DNA灵敏度检测沙门菌达到56 fg/PCR体系,菌液灵敏度检测沙门菌达到9 CFU/ml,特异度100%。用建立的方法对四起食物中毒、2000份健康从业人员体检肛拭样品、80份食品监测样品进行了检测,共检出沙门菌15株。结论:该方法具有高灵敏性和高特异性的特点,可以应用在沙门菌引起的食物中毒的快速检测中。     

两种方法比对食品中阪崎肠杆菌检验

目的:比对食品中阪崎肠杆菌检验的国标法和实时荧光PCR法,确保检测结果准确。方法:分别按照GB4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》和PCR法操作要求进行检验,所得结果进行比对分析。结果:查10类食品共850份样品,检出阪崎肠杆菌54株,国标法检出率为6.4%;PCR法阳性率为7.4%。结论:联合使用两种方法鉴定阪崎肠杆菌可提高检测结果的可靠性,报告以国标法为准。     

多重PCR检测食品中的金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌

目的建立一种能同时检测食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法采用7.5%NaCl肉汤对食品样品中的金黄色葡萄球菌进行增菌,同时采用GN增菌剂对食品样品中的志贺菌和沙门菌进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、志贺菌的ipaH基因、沙门菌的invA基因设计引物,通过多重聚合酶链反应(PCR)反应对食品样品中上述三种病原菌的目标基因进行扩增,同时对反应体系进行优化。结果特异性实验表明本方法的特异性良好。对污染金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的牛奶样品进行检测,检出限为1cfu/ml。结论本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中金黄色葡萄球菌、志贺菌和沙门菌的快速检测,具有快速、简便、灵敏的特点。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

Allergenic potential and enzymatic resistance of buckwheat

Buckwheat is known as a health food but is one of the major food allergens triggering potentially fatal anaphylaxis in Asia, especially in Japan and Korea. This study was conducted to investigate the characteristic of enzymatic resistance of buckwheat protein and allergenic potential. Enzymatic resistance of buckwheat protein was performed with in vitro digestibility test in simulated gastric fluid (SGF), pH 1.2, using pepsin and simulated intestinal fluid (SIF) using chymotrypsin. Reactivity of buckwheat proteins to human IgE was performed using six allergic patients sensitized to buckwheat. Buckwheat''s IgE levels were measured using the Phadia UniCAP-system. Buckwheat protein, 16 kDa, still remained after 30 min treatment of pepsin on SDS-PAGE. Even though 16 kDa almost disappeared after 60 min treatment, two out of the six buckwheat patients'' sera showed reactivity to hydrolysate after 60 min treatment, indicating that allergenicity still remained. In simulated intestinal fluid (SIF) using chymotrypsin, buckwheat protein, 24 kDa, showed resistance to hydrolysis with chymotrypsin on SDS-PAGE, and still had allergenicity based on the result of ELISA. Our results suggest that buckwheat proteins have strong resistance to enzyme degradation. This may be attributed in part to the allergenic potential of buckwheat. Further study should be continued regarding buckwheat allergy.     

食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的PCR检测

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术（MPCR）特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157：H7的STX、rfbE、fliC基因。结果分别在228，378，709bp处扩增出3个目的基因片段，且只有肠出血性大肠埃希菌O157：H7获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便，为食品中肠出血性大肠埃希菌O157：H7的快速检测提供了新的手段。     

Evaluation of a multiplex PCR system for simultaneous detection of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Escherichia coli O157:H7 in foods and in food subjected to freezing

Conventional culture methods were compared to a multiplex polymerase chain reaction (PCR) assay for simultaneous detection of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Escherichia coli O157:H7 from enrichment cultures of various types of artificially inoculated and naturally contaminated foods. The multiplex PCR assay was evaluated in 44 types of spiked food samples, including meat, produce, fish, and dairy products targeting genes specific for each pathogen for simultaneous detection. The sensitivity of the assay was 相似文献   

大肠埃希菌O157:H7的实时荧光PCR检测方法研究

目的建立一种敏感、特异、快速的大肠埃希菌O157:H7的检测方法,应用于突发公共卫生事件及食源性致病菌流行病学调查的检测。方法根据GenBank大肠埃希菌O157:H7rfbE基因序列,设计引物和TaqMan探针,对实时荧光PCR反应条件进行优化,建立实时荧光PCR检测大肠埃希菌O157:H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果大肠埃希菌O157:H7菌株的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1×102cfu/ml。模拟污染的猪肉、羊肉、鸡肉、生食蔬菜样品,均可检出1×104cfu/ml的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3 h。结论建立的实时荧光PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、快速等优点,可用于大肠埃希菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。