哮喘大鼠模型血清IL-12及IL-18的变化及相关性研究

目的：探讨哮喘大鼠模型血清中自细胞介素-12（IL-12）与白细胞介素-18（IL-18）之间的关系及其在气道炎症发生中的机制．方法：48只Wistar大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、哮喘组、地塞米松干预组,用卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏,雾化吸入OVA激发制备大鼠哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA,地塞米松干预组每次雾化前经腹腔注射地塞米松．雾化激发后24h取各组肺泡灌洗液进行嗜酸性细胞计数,并用ELISA方法测定血清IL-12,IL-18的水平,分析二者相关性．结果：哮喘组、地塞米松组和对照组血清IL-12水平分别为（53．1±9．6）ng／L,（82．4±8．1）ng／L和（140．1±13．4）ng／L,与哮喘组比较,地塞米松组血清IL-12水平显著升高,但低于对照组（P〈0．01）．三组血清IL-18水平分别为（353．5±11．9）ng／L,（250．6±8．4）ng／L和（100．5±12．7）ng／L,哮喘组与地塞米松组显著高于对照组（P〈0．01）．肺泡灌洗液中嗜酸性细胞数（49．3±4．0）×10^5／L,（31．9±3．6）×10^5／L和（14．8±4．1）×10^5／L,哮喘组与地塞米松组显著高于对照组．哮喘组血清IL-12,IL-18水平分别与肺泡灌洗液中EOS数量进行两两相关分析,显示IL—12与肺泡灌洗液EOS呈负相关（r=-0．746,P〈0．01）,而IL—18与肺泡灌洗液EOS呈正相关（r=0．682,P〈0．01）．结论：IL-12与IL-18可能共同参与哮喘气道炎症发病过程,并且两者的作用相互拮抗．     

滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型的炎性介质抑制作用

目的：研究滨蒿内酯（Seo）对豚鼠哮喘的抗炎作用及机制。方法：制备迟发性哮喘豚鼠模型，免疫组化法检测豚鼠血浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素5（IL-5）含量；电镜法对豚鼠肺组织细胞溶酶体磷脂酶A：（PLA2）进行染色，井通过图像分析定量检测其含量。结果：哮喘组IL-5及PLA2的含量与正常对照组比较明显增高（P〈0．05）；提前雾化给予42mg／L，340mg／L的Seo组与哮喘模型组比较明显降低IL-5及PLA2含量（P〈0．05）。结论：Seo可能通过抑制IL-5及PLA2发挥其对支气管哮喘的作用。     

内皮素在哮喘发病中的作用及地塞米松治疗效应的实验研究

内皮素（ＥＴ）是目前发现的最强的缩血管物质，它同时具有强烈的缩气管效应。为了研究ＥＴ在支气管哮喘发病中的作用，采用雾化吸入卵蛋白复制豚鼠哮喘模型，发现哮喘组发作期支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和血浆中ＥＴ均明显高于对照组［（２２４．８３６±１３５．６７０，１１３．６５３±７１．０４８）ｎｇ／Ｌ，Ｐ〈０．０１］和［（９６．８５０±２７．０１９，２１．２３７±７．６２０）ｎｇ／Ｌ，Ｐ〈０．０１］，且气道     

加味玄麦甘桔汤对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

目的从细胞凋亡的角度深入探讨加味玄麦甘桔汤对哮喘豚鼠气道炎性细胞浸润的影响及其作用机制。方法采用卵白蛋白致敏法建立豚鼠哮喘模型,以博利康尼做药物对照,治疗1周后对豚鼠进行支气管肺泡灌洗用于细胞记数及分类,同时分离BALF液中T淋巴细胞,采用流式细胞仪定量检测方法（FITC-Annexin V／PI染色法）测定其凋亡率。结果加味玄麦甘桔汤能显著减轻哮喘豚鼠的气道炎症、促进BALF中T淋巴细胞的凋亡,作用优于博利康尼（P〈0．05）。结论加味玄麦甘桔汤有明确的气道抗炎作用,促进T淋巴细胞凋亡可能为其主要的作用机制之一,      

支气管哮喘豚鼠肺内嗜酸粒细胞增多和凋亡的关系

目的　探讨支气管哮喘 (简称哮喘 )肺内嗜酸粒细胞 (Eos)增多与Eos凋亡的关系。方法　采用卵蛋白致敏的豚鼠哮喘模型 ,动态观察肺组织病理学、支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞学和Eos凋亡的变化。结果　致敏豚鼠抗原激发后 ,血管周围Eos迁移和浸润主要发生在 2 4h以内 ,而支气管周围Eos浸润和BALF内Eos增高持续 1周以上。哮喘豚鼠第 2 4,48,72hEos凋亡率分别为 (2 .1± 1.3 ) % ,(3 7± 2 3 ) % ,(4 6± 2 7) % ,显著低于正常豚鼠 [(10 .1±3 4) % ,P <0 .0 5 ] ,至 168h才接近于正常水平。糖皮质激素地塞米松治疗使Eos凋亡率显著增加 [(3 4 .1± 12 .2 ) % ,P<0 .0 1] ,伴随气道炎症消退。结论　哮喘Eos凋亡抑制可能是肺内Eos浸润增加的一个重要机制     

扎鲁司特对哮喘豚鼠的治疗作用

目的：研究扎鲁司特对哮喘豚鼠的防治作用。方法：选豚鼠24只，雌雄各半，随机分为4组。（1）阳性对照组，每只豚鼠腹腔内注射鸡卵蛋白（OVA）100mg，14天后雾化吸入1％OVA30min，每天1次，持续3d。（2）地塞米松组：哮喘模型制作同阳性对照组，但在每次致敏前腹腔内注射地塞米松2mgkg^1。（3）扎鲁司特组：哮喘模型制作同阳性对照组，但每次吸入1％OVA前30min，口服扎鲁司特5mgkg^1。（4）阴性对照组，用生理盐水低替OVA致敏及激发，各组激发后均观察豚鼠哮喘的症状及数量，最后一次以25％乌拉坦1.5mgkg^1肌注麻醉，解剖抽取左心室血液做血气分析，收集左肺支气管灌洗液作哮酸细胞（EOS）计数，取支气管行石蜡包埋切片，HE染色，计算每20个高倍视野下的EOS计数，所有参数用卡方或t检验统计，结果：扎鲁司特组、地塞米松组均显示出良好的防治哮喘的作用，与阳性对照组相比，扎鲁司特组、地塞米松组哮喘豚鼠的数量及症状均减少，减轻（P＜0．05）；动物血气分析结果显示；地塞米松阻PaO2值与阳性对照组明显增高（P＜0．05）；而扎鲁司特组无明显变化（P＞0．05）；但两种药物组PaCO2值均比阳性对照组低（P＜0．01）；支气管肺泡灌洗液EOS计数结果显示，地塞米松组与阳性对照组EOS数明显降低（P＜0．01），而扎鲁司特组变化不明显（P＞0．05）；20个高倍视野组切片EOS计数显示，阳性对照组高于地塞米松，扎鲁司特组（P＜0．05）。结论：扎鲁司特、地塞米松均有好的防治哮喘的作用。     

哮喘豚鼠一氧化氮和白细胞介素—1的变化研究

目的 观察哮喘豚鼠血清NO和IL－1浓度的变化。方法 24只豚鼠随机分为3组,每组8只。哮喘组：豚鼠致敏用10％卵蛋白1ml腹腔内注射,2周后用1％卵蛋白吸入激发哮喘发作,每日1次,连续10d;激素组：在致敏豚鼠激发前每只豚鼠腹腔内注射0.5mg氢化可的松;对照组：豚鼠致敏及激发均用生理盐水代替。测定各组豚鼠血清NO2^-/NO3^-和IL－1浓度。结果 哮喘组血表NO2^-2/NO3^-和IL－1浓度较正常对照组明显增高（P＜0．01）,激素组血清NO2^-/NO3^-和IL－1浓度较哮喘组明显降低（P＜0．01）。结论 NO和IL－11在哮喘发病中起重要作用。     

血小板衍生生长因子和转化生长因子—β1在致敏大鼠模型肺泡巨噬细胞中的表达变化

目的：探讨肺泡巨噬细胞在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法：16只Wistar大鼠随机分成2组：正常组、哮喘模型组,每组8只,采用鸡卵清白蛋白腹腔致敏和反复雾化吸入复制大鼠过敏性哮喘气道炎症模型。应用免疫组化和原位杂交法观察血小板衍生生长因子－b(PDGF-b)、转化生长因子－β1（TGF－β1）在肺泡巨噬细胞中的表达。结果：2组间肺泡巨噬细胞PDGF－b蛋白表达阳性率和表达强度差异无显著性,而模型组TGF－β1蛋白表达阳性率（P＜0．05）和表达强度计分（P＜0．05）高于正常组。原位杂交法显示,模型组TGF－β1 mRNA的表达阳性率（P＜0．05）亦高于正常组。结论：哮喘肺泡巨噬细胞表达高水平TGF－β1可能参与哮喘气道重塑过程。     

不同类型支气管扩张剂对致敏豚鼠模型咳嗽反应的作用

目的比较丙卡特罗和氨茶碱对致敏豚鼠模型咳嗽反应的作用。方法通过卵蛋白致敏和激发建立咳嗽变异型哮喘豚鼠模型,腹腔注射不同剂量的丙卡特罗和氨茶碱,观察吸入辣椒素溶液诱导的咳嗽反应、气道对乙酰甲胆碱的反应性（PC150）和支气管肺泡灌洗液的细胞数量及成分。结果丙卡特罗和氨茶碱对正常豚鼠的咳嗽反应无影响,但明显抑制卵蛋白致敏和激发豚鼠增高的咳嗽反应,最大抑制率分别为49%和48%（P〈0.05）,并呈现剂量依赖性,伴有气道高反应性的下降（P〈0.05）,而支气管肺泡灌洗液中细胞数和成分无改变（P〉0.05）。但丙卡特罗和氨茶碱的作用无差别（P〉0.05）。结论丙卡特罗和氨茶碱通过支气管舒张作用减轻模型豚鼠的咳嗽反应,不同类型支气管扩张剂的效果相似。     

热哮方治疗支气管哮喘药效学的研究

为研究热哮方（由麻黄、半夏，金银花等组成）治疗哮喘的药效学，采用动态温浸法制备热哮方，以二硝基氟苯（DNFP）诱导小鼠迟发性超敏反应（DTH）以及豚鼠支气管肺泡灌洗法，观察热哮方对DNFP诱导DTH的影响。致敏豚鼠支气管肺泡液中的嗜酸细胞数。实验结果表明，热哮方对DNFP诱导的小鼠耳肿胀具有较强的抑制作用，并能明显减少致敏豚鼠支气管肺泡灌洗液中的嗜酸细胞数，证实热哮方有抗变应性炎症作用。     

1,6-二磷酸果糖对组胺升高豚鼠气道阻力的抑制作用

为了探讨1，6－二磷酸果糖（FDP）的平喘作用，我们比较研究了FDP对组胺致敏豚鼠呼吸力学的影响。结果表明，给豚鼠静注组胺s8μg／kg30s后，肺阻力从（0．032±0.004）kPa·ml－1·s－1升至（0．088±0．014）kpa·ml-1.s-1。而静注FDP400mg/kg15min后再次静往同等剂量组胺，在30s后肺阻力仅从（0．032±0.006）KPa·ml-1.s-1升至（O．040±O．008）kpa.ml-1.s-1，两次升高幅度具有明显差异（P＜O．01）。提示FDP能明显抑制组胺诱发的豚鼠支气管收缩作用。     

H5亚型禽流感病毒单抗-生物素捕获ELISA的建立

为制备过敏性哮喘模型，腹腔注射抗原(卵蛋白，OA)致敏豚鼠，2周后使豚鼠吸入雾化卵蛋白激发哮喘发作，以正常豚鼠为空白对照组，比较血、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸细胞及BALF细胞总数及气道反应性，并进行病理学检查以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态。结果表明卵蛋白激发后，豚鼠的血、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸细胞总数较对照组增高，吸入组胺后气道内压较对照组明显增高，病理学结果显示为嗜酸性炎性浸润。     

TIM-1对哮喘小鼠气道MUC5AC及Th2细胞因子表达的影响

目的 研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1(TIM-1)表达对哮喘小鼠气道MUC5AC及Th2细胞因子的作用,探讨气道黏液高分泌的机制。方法 30只健康雌性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为正常组、哮喘组和TIM-1抗体组,每组10只。检测小鼠外周血单个核细胞（PBMCs）TIM-1+细胞比例、气道MUC5AC mRNA表达、肺泡灌洗液（BALF）中IL-13、IL-4、IL-5表达及黏液细胞和细胞内黏液量的改变。结果（1）哮喘组及TIM-1抗体组小鼠外周血PBMCs中TIM-1+ 细胞比例（11.20%,5.11%）均显著高于正常组（0.64%,P<0.05);而TIM-1抗体组明显低于哮喘组（P<0.05）。（2）哮喘及TIM-1抗体小鼠气道黏液细胞MUC5AC mRNA相对表达(17.3±1.4,5.6±0.3)及IL-13[(16.80±0.63) ng/ml,(5.70±0.64)ng/ml]、IL-4[（614.72±117.39）pg/ml,（325.78±86.54）pg/ml]、IL-5[（1681.13±613.55）pg/ml,（513.42±86.87）pg/ml]表达量均显著高于正常组[1, (1.09±0.25)ng/ml,（17.56±3.01）pg/ml,（30.78±9.67）pg/ml ],TIM-1抗体组小鼠上述指标显著低于哮喘组（P<0.05）。（3）气道MUC5AC及IL-13表达与TIM-1+细胞表达均呈正相关,r1=0.946,P1=0.004; r2=0.984,P2=0.000. 结论 哮喘小鼠外周血TIM-1+细胞升高,可致气道黏液过度分泌;抑制TIM-1表达可减少哮喘气道黏液高分泌。调节TIM-1表达有可能成为减少黏液高分泌及治疗哮喘的新途径。     

针刺对哮喘豚鼠血清及肺泡灌洗液中NO水平的影响

采用硝酸还原酶法测定NO，观察针刺对过敏性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗液中NO的变化，结果表明，与对照组相比，哮喘豚鼠肺泡灌洗液中NO含量非常显著升高（P＜0．01），电针后NO含量显著降低（P＜0．05）。但对照组，哮喘组及电针组血清中NO含量均无明显变化（P＞0．05），结果提示，针刺对哮喘局部肺组织起针对性的平喘作用，且针刺的平喘作用与NO有密切关系，针刺对NO的调节可能是其抗哮喘的作用机理之一。     

哮喘小鼠模型中小鼠外周血IL-18水平与肺中嗜酸性粒细胞测定

目的测定哮喘小鼠外周血IL-18水平与哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量。方法24只BALB／C鼠随机分为两组，B组小鼠腹膜注射OVA抗原3次后给予雾化OVA抗原激发哮喘。末次激发后24h处死小鼠。ELISA法测定哮喘小鼠外向血IL-18水平，获取哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液，细胞计数板法与组织染色法测定支气管肺泡灌洗液中白细胞总数与嗜酸性粒细胞数量。结果哮喘小鼠外周血IL-18升高，且与生理盐水对照组差异有显著性（P〈0．01）。哮喘组小鼠肺支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比与生理盐水对照组相比差异均有显著性（P〈0．01）。结论IL-18可能参与哮喘的病理反应。     

低压缺氧治疗哮喘后血浆皮质醇BALF中嗜酸性粒细胞的变化

目的：探讨低压缺氧治疗哮喘的机制,方法：采用卵蛋白致敏和激发制成豚鼠哮喘模型,比较正常组,诱发哮喘发作后２４小时（发作组）,未经任何治疗哮喘豚鼠（对照组）以及低压缺氧治疗哮喘豚鼠（治疗组）的血浆皮质醇、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）和低密度嗜酸性粒细胞（ＨＥＯ）以及肺组织病理学变化。     

一氧化氮在过敏性哮喘豚鼠发病机理中的作用

本文采用镉还原柱层析和比色法测定过敏性哮喘豚鼠模型血浆及支气管肺泡灌洗液中亚硝酸/硝酸根离子(NO_2~-/NO_3~-)水平,以探讨一氧化氮(NO)在过敏性哮喘发病机理中的作用。结果表明:过敏性哮喘豚鼠血浆中NO_2~-/NO_3~-水平与正常豚鼠组比较无明显变化(分别为21.551±2.278μmol/L;22.558±2.695μmol/L.t=0.807.p>0.05),而支气管肺泡灌洗液中NO_2~-/NO_3~-水平显著升高(分别为10.162±1.283μmol/L;6.196±0.824μmol/L.t=7.358.p<0.001)。本文显示:作为NO产生水平的良好指标,支气管肺泡灌洗液中NO_2~-/NO_3~-水平与过敏性哮喘密切相关;哮喘患儿基础型一氧化氮合成酶(NOS)缺陷,而诱导型NOS功能活跃.使NO产生过多导致气道水肿,高反应性而致哮喘发病。研究制备选择性诱导型NOS抑制剂对治疗和预防哮喘具有诱人的前景。     

哮喘小鼠模型肺组织、肺泡灌洗液中TNF-α及 IL-12水平比较

目的：观察支气管哮喘小鼠模型肺泡灌洗液（ BALF）中TNF-α,IL-12水平,了解两者的水平及诊断价值。方法40只雌性Balb/C小鼠,随机分成2组：A正常对照组、B支气管哮喘模型组,每组各20只。采用卵蛋白（ OVA）等致敏支气管哮喘模型组;第21天后,哮喘模型组1％卵蛋白溶液雾化吸入,雾化时间共5周,对照组用生理盐水雾化吸入。分别观察两组哮喘发作症状、ELISA检测肺泡灌洗液中TNF-α,IL-12的水平。结果支气管哮喘模型组肺泡灌洗液中TNF-α显著升高,IL-12降低,且IL-12与TNF-α呈密切负相关（ r＝-0．964,P＜0．01）。结论哮喘的发生发展不仅与炎症介质TNF-α的异常释放增多有关,还与内源性的抗炎介质IL-12的释放不足有关,而且IL-12能够抑制TNF-α的合成。     

内皮素与运动性支气管痉挛相关——内皮素拮抗剂对过度通气诱导豚鼠支气管痉挛的影响和脉冲振荡肺功能仪对运动性哮喘的临床评估

目的 探讨内皮素受体拮抗剂对过度通气诱导豚鼠支气管痉挛的影响。方法 ①将19只小鼠分成两组。（A）bosentan组：在过度通气前予bosentan;（B）对照组：在过度通气前给予生理盐水。在诱发前后分别测定肺阻力与肺顺应性,用含5％CO2、95％O2干燥混合气通过动物呼吸机提供机械通气。分别收集肺泡灌洗液。②14例哮喘病人和141例健康对照者,用脉冲振荡仪测定呼吸阻抗,而后进行运动激发试验并再次测定呼吸阻抗。最后,收集两组血清并测定ET-1浓度。结果 ①动物试验组,过度通气显著诱发对照组肺阻力增加,为3．28倍,肺顺应性下降,下降为49．9％,而bosentan组无明显变化。肺泡灌洗液bosentan组明显多于对照组（P〈0．001）。②临床试验组哮喘病人在运动后5～10min外周阻力大于中央阻力,诱发前后,R5-R20,Zrespir,resonance frequency（Fres）and X5均有显著变化（Table6、Fig3）．R5-R20增高≥0．032kPa／L／s,71．4％哮喘病人X5的变化率≥41％,571％病．AVT-Zrespir图表现气流诱捕。哮喘组血浆内皮素-1浓度为（66．6±12．13）ng／mL,对照组为（40．7±5．6）ng／mL（P=0．022）,哮喘组运动激发前后呼吸阻抗和血浆内皮素-1浓度有明显相关性。结论实验证明内皮素受体拮抗剂能抑制过度通气诱发豚鼠支气管收缩。运动性周围支气管痉挛中ET1起重要作用。     

雷公藤多甙对哮喘豚鼠炎症的抑制作用

目的：通过哮喘豚鼠模型研究雷公藤多甙（ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｐｏｌｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅ，ＴⅡ）对哮喘豚鼠炎症的抑制作用。方法：用卵白蛋白诱发致敏豚鼠哮喘发作，同时进行ＴⅡ与地塞米松（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ＤＥＸ）的对照治疗，观察豚鼠支气管－肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中细胞学、肺组织病理及超微结构的变化。结果：豚鼠诱发哮喘后２４ｈ和７２ｈＢＡＬＦ中炎性细胞、嗜酸细胞总数及其分类计数的结果显示，哮喘组较正常对照组明显增多，而ＴⅡ和ＤＥＸ治疗组尤其是ＴⅡ大剂量组则明显减少，与正常对照组比无显著差异（Ｐ＞０．０５），与哮喘组比有明显差异（Ｐ＜０．０５）。组织形态学也显示ＴⅡ对哮喘豚鼠迟发性哮喘反应有明显的抑制作用。结论：ＴⅡ对哮喘豚鼠炎症有明显的抑制作用。