紫草素、靛玉红对角质形成细胞凋亡的影响

目的：探讨凉血活血胶囊(liangcuehuoxue capsule)治疗银屑病的机制。方法：采用流式细胞仪分析细胞亚二倍体含量和Annexin V法分析细胞PS膜外化含量，观察凉血活血胶囊及其主要组成药物的主要成分紫草素(shikomn)、靛玉红(indirubin)对角质形成细胞凋亡的影响。结果：一定浓度的凉血活血胶囊及紫草素、靛玉红可诱导角质形成细胞凋亡。结论：诱导细胞凋亡可能是中药凉血活血胶囊治疗银屑病的作用机制之一。     

凉血活血胶囊对皮肤角质形成细胞凋亡的研究

目的 观察凉血活血胶囊对体外角质形成细胞株凋亡的影响,初步探讨其治疗银屑病的机制。方法 以TUNEL法检测银屑病患者皮损细胞凋亡、PCNA检测增殖细胞核抗原,并以碘化丙啶法和膜联蛋白V法在流式细胞仪上检测凉血活血胶囊对体外角质形成细胞凋亡作用的影响。结果 银屑病皮损中基底层和棘细胞中下层角质形成细胞增殖和凋亡较正常皮肤均有所增加。凉血活血胶囊可诱导培养的角质形成细胞凋亡,在1、5、10 mg/mL时分别为24.67±5.07、50.33±10.04、66.20±6.91,随着浓度增加,细胞凋亡率增加,与正常对照组比较差异有显著性,与试验对照复方青黛胶囊组比较差异无显著性。结论 银屑病皮损中角质形成细胞增殖和凋亡发生紊乱,两者在较高水平保持相对平衡。凉血活血胶囊可以诱导细胞凋亡,从而达到治疗银屑病的目的。     

靛玉红对角质形成细胞中促炎细胞因子表达水平的影响

目的:探讨靛玉红对人类永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的影响,初步阐明青黛膏治疗银屑病的机制.方法:以人类永生化角质形成细胞株HaCaT细胞作为研究对象,观察不同浓度靛玉红处理后HaCaT细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的变化,采用E...     

存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体介导存活素反义寡核苷酸转染体外培养的角质形成细胞。采用MTT方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞生长曲线的影响;采用RT-PCR方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞存活素表达水平的影响;采用流式细胞仪检测存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞细胞周期和凋亡的影响。结果存活素反义寡核苷酸作用于角质形成细胞后,细胞增殖受到明显抑制,存活素mRNA表达水平明显下降,细胞出现明显的凋亡现象。结论存活素反义寡核苷核酸能够抑制角质形成细胞增殖,促进角质形成细胞凋亡。提示存活素可能会成为一个新的治疗银屑病的靶分子。     

紫草素对角质形成细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的：探讨紫草素对角质形成细胞株colo-16增殖及凋亡的调节作用。方法：利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜技术检测不同浓度的紫草素对colo-16细胞株增殖及凋亡的影响。结果：紫草素对colo-16细胞株的作用与浓度及时间呈一定的关系，浓度越高，时间越长，其抑制作用越强。终浓度为0．25μg/ml、0．5μg/ml的紫草素，培养48h后，细胞的凋亡率分别为9．89％、25．04％，正常对照组为5．86％，两者相比差异显著。结论：紫草素值得进一步深入地研究与探讨。     

银屑病患者角质形成细胞凋亡以及维A酸与榄香烯的影响

目的 探讨银屑病患者角质形成细胞凋亡以及维A酸与榄香烯对体外培养的角质形成细胞凋亡的影响.方法 用TUNEL法测定28例银屑病患者角质形成细胞凋亡;流式细胞仪和DNA片段化观察维A酸与榄香烯对体外培养的角质形成细胞凋亡的影响.结果 28例银屑病患者中19例有大量凋亡细胞分布于表皮各层,另9例较少,分布于棘细胞层和颗粒层.浓度为1、5、10、20μg/mL的维A酸和浓度为20、40、60、80μg/mL的榄香烯可促进人角质形成细胞株Colo16细胞凋亡.结论 银屑病患者角质形成细胞凋亡异常增多,一定浓度的维A酸与榄香烯可在实验室内促进人角质形成细胞株Colo-16细胞凋亡.     

中国麻风皮肤病杂志2003年19卷总目录

皮肤科基础研究　5 氨基酮戊酸处理后HEp 2细胞的光敏感性研究 (2 9)……毛球部黑素细胞黑素合成开关 (43)…………………………端粒、端粒酶与皮肤病 (49)…………………………………IVT系统在过敏性皮肤病诊断检测中的应用 (12 1)…………霉酚酸酯在皮肤科的应用 (139)………………………………维A酸类药物在皮肤科的应用 (14 9)………………………IL 10及其在相关皮肤病中的研究进展 (2 4 4 )………………端粒酶在皮肤科领域的研究进展 (2 5 0 )………………………紫草素、靛玉红对角质形成细胞凋亡的影响 (32 5 )…………不同鬼臼…     

银屑病角质形成细胞p16基因微卫星杂合性缺失研究

目的探讨银屑病皮损区角质形成细胞p16基因D9S171,D9S1604微卫星位点杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)与银屑病发病的关系。方法采用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染技术对体外原代培养的银屑病皮损区和非皮损区角质形成细胞LOH进行分析。结果23例银屑病患者皮损区体外培养的角质形成细胞在D9S171和D9S1604两个微卫星位点,LOH分别为5例和10例。在非皮损区的相应位点LOH分别为2例和3例。D9S1604LOH频率明显高于非皮损区角质形成细胞(P<0.05);寻常性银屑病患者皮损区角质形成细胞中两位点LOH发生频率分别为23.5%(4/17)和47.1%(8/17),非寻常性银屑病分别为16.7%(1/6)和33.3%(2/6),两型银屑病两位点LOH发生频率相比差异均无显著性(P>0.05)。结论D9S1604微卫星位点LOH与银屑病的发生发展相关,而与临床类型相关无显著性。     

芦荟对银屑病患者外周血单核细胞和角质形成细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨芦荟对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)和角质形成细胞增殖和凋亡影响.方法选择寻常性银屑病患者PBMC,共20例,正常人16例,及角质形成细胞株Colo-16细胞.采用MTT方法检测细胞增殖,ELISA方法检测细胞凋亡.结果芦荟对正常人和银屑病患者PBMC增殖均有抑制作用(P＜0.01),无促进细胞凋亡作用,对角质形成细胞株Colo-16细胞有明显的抑制增殖和促进凋亡作用(P＜0.01).结论芦荟抑制银屑病患者PBMC的增殖和诱导角质形成细胞凋亡可能是芦荟治疗银屑病的重要药理作用之一.     

紫草素对糠秕马拉色菌作用下HaCaT细胞增殖的影响及其对缺氧诱导因子1α表达的调控

目的:观察紫草素对糠秕马拉色菌作用下角质形成细胞增殖的作用及其对缺氧诱导因子1α（hypoxic-inducible factor-1α,HIF-1α）蛋白及mRNA的作用,探讨紫草素通过抑制低浓度糠秕马拉色菌上调皮肤角质细胞的增殖与HIF-1α信号在银屑病中的可能机制。方法：培养人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞及糠秕马拉色菌,适合浓度糠秕马拉色菌诱导HaCaT细胞增殖,CCK-8法观察细胞增殖、蛋白免疫印迹法（Western Blotting）及实时荧光定量PCR(RT-PCR)法分别检测HIF-1α的蛋白及mRNA表达情况。结果：低浓度糠秕马拉色菌浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖（P<0.01）;紫草素抑制低浓度糠秕马拉色菌对HaCaT细胞的促增殖作用（P<0.01）;紫草素抑制低浓度糠秕马拉色菌对HaCaT细胞HIF-1α蛋白及mRNA表达的作用（P<0.01）。结论：低浓度糠秕马拉色菌通过HIF-1α信号通路上调皮肤角质形成细胞的增殖能力;紫草素拮抗低浓度糠秕马拉色菌上调皮肤角质形成细胞的增殖可能与抑制HIF-1α信号通路有关。     

复发性生殖器疱疹患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的检测

目的 研究外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞(Treg细胞)表型和功能改变所致的细胞免疫抑制效应在复发性生殖器疱疹(RGH)发病机制中的作用.方法 采用免疫荧光标染技术,经流式细胞仪检测34例RGH患者和33例正常人外周血CD4⁺CD25⁺T细胞转录因子Foxp3及细胞毒T细胞相关抗原4(CTLA-4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关基因(GITR)、程序性死亡1(PD-1)等抑制性膜分子的表达水平.同时,用免疫磁珠细胞分选技术从外周血中分选出高纯度的CD4⁺CD25⁺T细胞,经体外刺激后分析胞内分泌白介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)阳性细胞数.结果 RGH患者外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量比正常人对照组显著增加(P<0.001),CD4⁺CD25⁺T细胞表面抑制性膜分子CTLA-4、GITR、PD-1表达明显增强(P分别<0.001、<0.001及<0.01),胞内IL-10和TGF-β阳性细胞增多(P值分别<0.01及<0.001).结论 单纯疱疹病毒感染可诱导CD4⁺CD25⁺Treg细胞活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答.     

尖锐湿疣患者外周血及经体外诱生的HPV16抗原特异性CD8+细胞毒性T细胞检测

目的 研究尖锐湿疣患者外周血HPV16抗原特异性CD8⁺细胞毒性T细胞(CTL)表型变化及正常人T细胞对病毒抗原肽体外刺激的细胞免疫应答反应在尖锐湿疣发病机制中的作用。方法 采用免疫荧光标染重组MHCⅠ类分子-多肽五聚体技术,流式细胞仪定量检测10例尖锐湿疣患者外周血HPV16E7_11-20(HLA-A^*0201/YMLDLQPETF)抗原特异性CTL(Pent⁺CD8⁺)、活化CTL(Pent⁺CD8⁺CD69⁺)及记忆性CTL(Pent⁺D8⁺CD45RO⁺)数量。同时,用HPV16E7_11-20合成多肽、重组人白介素7、白介素2体外刺激13例正常人外周血单一核细胞产生抗原特异性CTL,并对其进行表型分析,以无关肽HBVcore_18-27作为阴性对照。结果 尖锐湿疣患者外周血CD8⁺T细胞中HPV16抗原特异性CTL、活化CTL及记忆性CTL百分数分别为0.76%±0.43%.0.36%±0.20%及0.33%±0.15%,对照组分别为0.24%±0.07%,0.17%±0.05%及0.15%±0.06%。两组比较,P值分别<0.01,<0.05及<0.01。病毒多肽体外刺激T细胞7d后,抗原特异性CTL、活化CTL及记忆性CTL百分数分别为0.75%±0.16%,0.35%±0.15%及0.33%±0.18%,均比非刺激组的0.24%±0.06%,0.16%±0.03%及0.13%±0.04%明显增多,P值均<0.01。结论 HPV感染诱导CD8⁺T细胞克隆性增殖,产生抗原特异性CD8⁺CTL,高效、特异性直接杀伤病毒感染的靶细胞,在抗病毒T细胞免疫应答过程中发挥作用。     

特应性皮炎患者趋化因子及其受体的研究

目的 探讨几种重要的趋化因子及其受体的表达在特应性皮炎(AD)发病中的作用。方法 采用酶联免疫吸附试验检测39例AD患者及正常人血清中γ干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、嗜酸粒细胞趋化因子、胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)及巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)等水平;同时用流式细胞仪分析外周血CD4⁺T细胞表面趋化因子受体CXCR3、CXCR4、CCR3、CCR4及CCR5的表达。结果 与正常人对照组相比,AD患者血清SDF-1α、TARC和MDC水平显著升高(P<0.001),IP-10及嗜酸粒细胞趋化因子水平则无明显改变(P>0.05),外周血CXCR3、CCR3、CCR4及CCR5在CD4⁺T细胞表达水平显著增加(P<0.001);血清TARC和MDC水平的变化与疾病严重程度相关(r分别为0.669及0.409,P分别为<0.001及<0.01)。结论 具有生物活性趋化因子及其受体介导的T细胞和嗜酸/嗜碱粒细胞的聚集、激活后释放的炎性介质在AD发病中起着重要作用。     

系统性红斑狼疮遗传流行病学研究

目的 探讨遗传因素在系统性红斑狼疮发病中的作用。方法 应用病例对照研究方法对166例SLE先证者和383例对照的亲属资料进行遗传流行病学研究。结果 12.05%的先证者的一级亲属患有SLE。一级亲属、二级亲属患病率依次为1.698%、0.606%,显著高于对照组一级亲属患病率(0.115%)(P<0.01),其OR值及95%可信区间分别为14.88(4.22~62.70)、5.31(1.38~23.95),且一级亲属患病率>二级亲属患病率>三级亲属患病率>群体患病率。应用Penrose方法计算,s/q接近1/√q。Falconer多基因阈值模型估计SLE先证者一级、二级、三级亲属的遗传度分别为78.8%±4.45%、58.8%±10.9%、39.2%±32.0%,三者加权平均遗传度为75.2%±4.12%。结论 SLE具有多基因遗传病的特点,遗传因素在决定SLE的易患性上起到重要的作用。     

芹黄素对过氧化氢所致黑素细胞凋亡的作用

目的采用过氧化氢(H2O2)诱导的黑素细胞体外氧化应激模型探讨芹黄素对黑素细胞的抗氧化保护作用。方法采用MTT法测定不同浓度芹黄素预处理前后H2O2对正常人表皮黑素细胞活力的影响,An-nexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡情况,DCFH-DA流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)的含量。结果 250μmol/L的H2O2作用于黑素细胞24h,黑素细胞活力降低至(36.42±7.21)%,凋亡率增加至(48.82±12.55)%。0.6μmol/L,2.5μmol/L和10.0μmol/L芹黄素预处理1h后,H2O2所致细胞活力分别增加至(41.53±5.25)%,(45.33±6.28)%和(51.92±5.29)%,凋亡率减少至(42.25±7.69)%,(37.54±8.82)%和(32.25±58.28)%。250μmol/L的H2O2作用于黑素细胞2h后,黑素细胞ROS含量增加至空白对照组的(69.22±8.57)倍。10μmol/L芹黄素预处理1h后H2O2所致黑素细胞ROS含量为空白对照组的(54.48±5.03)倍,低于单用H2O2处理组。结论芹黄素可能通过减少ROS生成和抑制氧化应激对HO所致黑素细胞凋亡具有保护作用,其可能具有开发为治疗白癜风新药的前景。     

氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响

目的 探讨基态氧和单线态氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响。方法 取对数生长期的HaCaT细胞，分别与不同浓度的ALA避光孵育4 h，随后给予相应剂量的He-Ne激光照射，照射后12 h以MTT法检测细胞存活率；PI单染法检测细胞凋亡率；二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）标记法测定细胞内活性氧基（ROS）水平。为了造成光动力反应前后细胞的化学缺氧以及淬灭产生的单线态氧基（1O2），将不同浓度的氯化钴（CoCl2）和叠氮钠（NaN3）分别加入培养基，比较ALA-PDT处理组与未处理组HaCaT细胞凋亡和死亡率以及细胞内ROS水平的变化。结果 MTT结果表明，ALA-PDT诱导HaCaT细胞的凋亡与死亡率与ALA浓度和He-Ne激光照射剂量呈正相关。经400 μmol/L CoCl2处理的细胞，胞内ROS水平显著降低，细胞死亡率未处理组为57.65% ± 2.88%，处理组降至16.68% ± 1.86%，细胞凋亡率则分别为43.80%和15.40%。10 mmol/L NaN3几乎能完全清除ALA-PDT诱导产生的ROS，增强HaCaT细胞对ALA-PDT诱导的细胞死亡或凋亡的抵抗。结论 改变光动力反应前后细胞内的基态氧与单线态氧含量，能调控ALA-PDT诱导的HaCaT细胞凋亡和死亡。     

沙眼衣原体K血清型诱导细胞凋亡

目的探讨沙眼衣原体(CT)K血清型对细胞凋亡的影响。方法用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡百分率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡“梯状带”,观察沙眼衣原体K血清型感染36h,48h,60h对BGM细胞和Mc-Coy细胞凋亡的影响。结果沙眼衣原体感染的BGM细胞在36h,48h,60h的细胞凋亡百分率分别为(3.41±0.09)%,(8.96±0.78)%和(16.60±0.41)%,沙眼衣原体感染的McCoy细胞在36h,48h,60h的细胞凋亡百分率分别为(2.63±0.11)%,(8.78±0.58)%和(12.93±0.45)%,均显著高于相应的对照组(P<0.01),且凋亡百分率随时间延长而增加(P<0.01)。结论沙眼衣原体K血清型能诱导细胞凋亡。     

Expression of GD3 disialoganglioside antigen on peripheral T-lymphocytes in patients with disseminated malignant melanoma

Abstract Disialoganglioside antigens GD2 and GD3 are expressed on most melanoma cells. On melanoma surrounding T-cells in immunohostological sections, disialogangliosides can also be found, as well as in a small % of T-lymphocytes in peripheral blood from healthy persons. In order to find out if there is a difference in ganglioside expression on peripheral T-lymphocytes between melanoma patients and healthy persons, we examined the expression of CD3 as T-lymphocytic antigen and GD2 or GD3 antigens, respectively, by flow cytometry. We used peripheral mononuclear blood cells of 12 patients with advanced disseminated malignant melanoma and of 12 healthy control donors. For immunostaining, murine monoclonal antibodies Leu-4, 14G2a and MB3.6 were used, recognizing CD3, GD2 and GD3. GD2 expression was found on only a low proportion of T-lymphocytes in patients and healthy persons (pat.: mean = 1.2%± 0.7%, co.: mean = 0.4%± 0.4%). Disialoganglioside antigen GD3, however, could be demonstrated on an average of 8.4%± 4.6% of patients' and on 4.0%± 2.1% of healthy persons' T-cells. There is a statistically significant difference (P < 0.01) between the data of patients' and control group. We conclude that there is a correlation between advanced malignant melanoma and expression of GD3 antigen on patients' peripheral T-lymphocytes. The immunological relevance of our findings is discussed.     

Efficacy and safety of desloratadine combined with dipyridamole in the treatment of chronic urticaria

Chronic urticaria (CU) imposes profound impairment on patient's quality of life. Our study was done to evaluate the clinical efficacy and safety of desloratadine combined with dipyridamole, which is a platelet adhesion inhibitor in the treatment of CU. A randomized study was done in 64 autoimmunity CU patients with positive autologous plasma skin test (APST): 34 patients as treatment and 30 controls. The treatment group was treated with desloratadine and dipyridamole, and the control group was treated with desloratadine only. The efficiency and side‐effect were evaluated at the end of treatment. The levels of fragment F₁₊₂ were measured by enzyme‐linked immunosorbent assay in all patients at pre‐ and post‐treatment. The clinical effectiveness rates of treatment and control group were, respectively, 85.20% (21 cured, 8 obvious effectiveness) and 70% (14 cured, 7 obvious effectiveness); they have a significant difference (x = 4.09, P < 0.05). Before treatment, the weals and pruritus in the treatment and control group were, respectively, (1.74 ± 0.90, 1.79 ± 0.73) and (1.67 ± 0.84, 1.73 ± 0.78). After treatment, the weals and pruritus in treatment and control group were, respectively, (0.38 ± 0.73, 0.58 ± 0.89) and (0.67 ± 0.96, 1.10 ± 1.12). These findings provide new insights into the pathogenesis of CU and suggest new therapeutic opportunities for treating this disease.     

siRNA抑制生存素基因对恶性黑素瘤细胞A375凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375生存素基因表达后,对A375细胞凋亡的影响。方法 构建针对凋亡抑制基因生存素的siRNA真核表达载体pU-生存素-siRNA,用电穿孔法转染A375细胞,采用蛋白质印迹技术检测生存素的表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 转染pU-生存素-siRNA后,生存素在A375细胞中的表达(0.24±0.02)较对照组(0.98±0.21)明显下降,试验组细胞的凋亡率(83%)较对照组(28%)明显增加。结论 通过RNA干扰技术可抑制生存素的表达,诱导A375细胞的凋亡增加。