LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞（Mφ）,细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P〈0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P〉0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P〈0.05。②随着LPS浓度增加,TNFα分泌量逐渐升高,呈剂量依赖关系。但当LPS浓度达10μg/ml时,TNFα分泌量下降。结论LPS能够诱导Mφ胞膜表面TLR4表达和TNFα分泌升高,并且在一定浓度范围内呈量-效关系.     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LPS使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/mlLPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h。用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI)。结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P<0.01。TLR2MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P<0.05。2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%±1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P<0.01。TLR4MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P<0.05。结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应。     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

TLR4基因的shRNA对内毒素刺激下RAW264.7细胞TLR2表达的影响及机制

目的 观察针对Toll样受体4的发夹结构RNA(short hairpin RNA,shRNA)对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞Toll样受体2表达的影响,并探讨其机制.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及shRNA克隆位点的质粒pEGFP/TLR4-siRNA,运用脂质体Lipofectamine2000转染至小鼠巨噬细胞系RAW264.7.转染24 h后予新霉素(G418)筛选获取稳定转染细胞株.然后将细胞分为三组:空白组(Blank group),未转染细胞LPS刺激组(LPS group)和稳定转染细胞LPS刺激组(LPS-TLR4-siRNA group),采用荧光定量PCR及流式细胞学方法检测各组细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,Western blot检测NF-κB p65的表达,同时用ELISA方法检测细胞分泌的TNF-α水平的变化.结果 将pEGFP/TLR4-siRNA转染至RAW264.7细胞后,增强型荧光蛋白的表达为(45.25±9.23)%.LPS-TLR4-siRNA组细胞的TLR2mRNA及蛋白的表达均明显低于LPS组(P＜0.05),同时NF-κB p65表达下调及分泌TNF-α的水平下降(P＜0.01).结论 针对TLR4 mRNA的shRNA能降低LPS刺激下的RAW204.7细胞TLB2的表达.     

间充质干细胞对巨噬细胞活化及其功能影响的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化的影响.方法 采用贴壁筛选法分离、纯化小鼠骨髓MSC,巯基乙酸钠腹腔注射刺激后收集小鼠腹腔巨噬细胞(MPM).实验分为四组(A组:MPM;B组:MPM+LPS;C组:MPM+LPS+MSC;D组:MPM+LPS+MSC上清),建立共培养体系.在LPS(终浓度1 μg/ml)刺激巨噬细胞18 h后收集细胞培养上清,检测TNF-α、TGF-β和一氧化氮(NO)等细胞因子分泌量的变化,同时在体系中加入大肠杆菌标准菌株ATCC25922,共孵育24 h后瑞特染色检查巨噬细胞吞噬功能的变化.结果 巨噬细胞活化后培养上清中TNF-α和NO的含量明显上升[分别为(147.4±37.1)pg/ml,(59.9±8.7)μmol/L];而MSC存在时,TNF-α显著减少[(97.6±30.3)pg/ml,P=0.032],NO降到(50.9±29.5)μmol/L(P＞0.05);当有MSC上清存在时,TNF-α和NO进一步减少为(58.3±31.5)pg/ml,(-3.4±2.3)μmol/L(P＜0.01).MSC对巨噬细胞活化后的吞噬率及吞噬指数没有影响.结论 MSC可抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的活化,而对其吞噬功能没有影响.     

脓毒症患者单个核细胞Toll样受体4表达与内毒素耐受的关系

目的观察革兰阴性菌感染所致脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达与内毒素耐受之间的关系。方法以重症监护病房治疗的32例革兰阴性菌感染所致脓毒症患者为研究对象,另选20例为健康对照组。两组入选人员均晨起空腹采血,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪技术检测单个核细胞表面TLR4的表达;另一部分外周血分离单个核细胞,并加入1μg/ml脂多糖(LPS)培养24h,同样进行流式细胞仪检测单个核细胞表面TLR4的表达。并应用放射免疫法测定血清及外周血单个核细胞培养液中TNF-α、IL-6的浓度。结果 (1)脓毒症组外周血单个核细胞表面TLR4表达、血清细胞因子TNF-α、IL-6浓度均明显高于健康对照组(均P<0.001)。(2)脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后培养上清液中TNF-α、IL-6的浓度显著低于健康对照组(均P<0.05),脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后TLR4表达较刺激前轻度下调,但刺激前后组间无统计学差异(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血单个核细胞体外给予大剂量LPS刺激后可以产生内毒素耐受,但这种现象不能单纯用TLR4的表达下调解释,其可能存在更复杂的机制。内毒素耐受状况下,单个核细胞表现为促炎因子表达的明显下调。     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。     

杀菌通透性增加蛋白体外抑制革兰阴性细菌脂多糖激活血小板的作用

本研究旨在探索杀菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein,BPI)能否抑制G-细菌脂多糖(LPS)激活血小板的作用。取10例健康体检者全血制备富含血小板血浆(PRP,1×108/ml)。实验分为4组:正常血小板组:不作任何处理;LPS组:LPS(10μg/ml)刺激6 h;BPI组:BPI(100μg/ml)处理1 h;BPI+LPS组:BPI(100μg/ml)预孵育1 h后,再接受LPS(10μg/ml)刺激6 h。应用流式细胞术(FCM)检测各组血小板膜Toll样受体-4(TLR-4)的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PRP上清中细胞因子释放水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)。结果表明,与正常血小板组相比,LPS刺激血小板后血小板膜TLR-4表达及上清中TNF-α和IL-6浓度均明显增高(P<0.001)。在接受BPI预处理后,LPS刺激血小板表达TLR-4及TNF-α和IL-6的作用明显下降,但仍高于正常血小板组。BPI单独刺激血小板不引起血小板TLR-4表达增高及细胞因子水平改变。结论:BPI能够抑制LPS诱导的血小板活化。     

Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度;取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高;与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高;与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高;与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达;调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.     

Toll样受体4在实验性急性坏死型胰腺炎形成中的介导作用

目的　应用抗内毒素受体 Toll样受体 4 (TLR4 )抗体体内注射观察其对小鼠实验性急性坏死型胰腺炎 (ANP)的影响 ,探讨内毒素信号通路 ,尤其是Toll样受体 4在ANP发生中的介导作用。方法　 1 0只BALB/c小鼠随机分为ANP组和ANPTLR4抗体处理组。ANP模型制备采用腹腔内注射雨蛙肽和脂多糖 (LPS)。TLR4抗体处理组于LPS注射前 1 5min静脉注射TLR4单克隆抗体 ,剂量为 2 0 μg。 1 2h后处死小鼠并收取标本。测定血清淀粉酶和乳酸脱氢酶 (LDH)水平 ;胰腺组织切片行HE染色并作病理评分 ;RT PCR检测胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRNA表达变化 ;免疫组化和westernblot检测胰原组织核因子 -κΒ (NF κΒ)p6 5亚单位蛋白表达的改变 ;酶组织化学方法检测中性粒细胞特异性髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果　与ANP模型组相比 ,TLR4抗体处理组血清淀粉酶活性 [1 2 6 1 2± 5 70 6U/Lvs2 341 2± 892 2U/L ,P <0 0 5 ]和LDH活性 [1 92 6± 4 0 0U/Lvs2 5 74± 2 77U/L ,P <0 0 5 ],较ANP模型组显著升高 ;病理评分结果显示 ,TLR4抗体处理组胰腺组织坏死和炎症反应程度明显加重 ;胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRAN表达呈显著上调 ;胰原组织NF κBp6 5亚单位的蛋白表达也呈上调趋势 ;反映中性粒细胞     

姜黄素拮抗LPS活化巨噬细胞对胰岛β细胞的损伤

目的检测姜黄素对LPS诱导小鼠巨噬细胞极化的影响,并检测不同极化状态下细胞培养上清对小鼠胰岛β细胞的损伤作用;研究姜黄素通过拮抗LPS诱导巨噬细胞M1极化保护胰岛β细胞的效应与机制。方法体外培养小鼠小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,通过LPS(2μg/ml)诱导建立M1极化模型,采用姜黄素(7.5 1μmol/l)单独或与LPS共同处理细胞。通过流式细胞术检测巨噬细胞CD40、CD86和CD206表达,并通过ELISA技术检测细胞培养上清液中TNF-α含量。采用不同诱导条件下巨噬细胞培养物上清液处理小鼠胰岛β细胞,检测其细胞凋亡与细胞增殖,分析胰岛β细胞损伤的程度。结果姜黄素可拮抗LPS诱导小鼠巨噬细胞向M1极化,降低细胞培养上清中TNF-α的含量,保护M1极化细胞培养液上清中TNF-α等炎症性细胞因子对胰岛β细胞的损伤。结论姜黄素拮抗LPS活化巨噬细胞对胰岛β细胞的损伤     

基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的 基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱（SC）体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法 采用脂多糖（LPS）刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型，给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度；设Control组、LPS组（10μg/mL LPS）、SC组（10μg/mL LPS+不同浓度SC）,ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况；RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子（MyD88）和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达；Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果 MTT结果显示，LPS和SC分别在0～10μg/mL、0～40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响；ELISA结果表明，与Control组相比，LPS组细...     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体的表达

目的：探讨小鼠失血性休克（无复苏）对心肌Toll样受体（toll-like receptor,TLR）表达变化的影响及其可能的意义.方法：45只C57BL/6的小鼠随机分为3组：失血组、假手术组、脂多糖（LPS）组（尾静脉注射LPS 5mg/kg）,每组15只小鼠,采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型;心肌TLR-2 mRNA和TLR-4 mRNA的表达利用RT-PCR的方法进行分析;左室收缩功能以测定的左室收缩末压（left ventricular end-systolic pressure,LVESP）作为指标.结果：①与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降;②与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后均可导致左室收缩功能障碍;③失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4基因的表达水平均出现不同程度的上调,而假手术组在各时间点未见明显改变.结论：①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4基因表达的上调与心功能障碍存在密切联系,但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异;②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4升高增强了机体的天然免疫能力,提高了机体对急性炎症的应激能力,对机体具有保护作用,但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害.     

NF-κB参与感染诱导血管内皮细胞DcR3表达升高的初步研究

目的 利用体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)实验研究核转录因子-κB(NF-κB)参与感染诱导诱骗受体3(DcR3)表达升高的信号转导机制。方法 针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖(LPS)0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸(LTA)5、50、500 ng/mL和酵母聚糖(zymosan)10、100、1 000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组：LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组(未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC)。流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2(TLR2)和TLR4的表达,采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中DcR3的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平,Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达。结果 流式细胞术检测HUVEC细胞表面TLR2和TLR4的表达分别为(82.23%±2.15%)和(77.87%±1.06%)。以低、中、高3个浓度刺激HUVEC细胞后,与...     

血小板对TLR4表达及活化在脂多糖诱发小鼠血小板减少中的作用

目的 探讨脂多糖(LPS)诱发小鼠血小板减少中血小板活化、血小板对Toll样受体4 (TLR4)的表达的变化及中性粒细胞对其影响.方法 中国医学科学院放射医学研究所ICR小鼠87只随机(随机数字法)分为健康对照(C)组、模型(M)组(3,6,12,24,48,72 h时点)及中性粒细胞减少症(NEP)组.M组尾静脉注射LPS 8 mg/kg后分别于相应时点取血,NEP组注射LPS 24 h前予尾静脉注射抗中性粒细胞单克隆抗体,注射LPS24h后取血.血细胞分析仪检测小鼠血小板参数:血小板计数(PC)、平均血小板体积( MPV)和血小板分布宽度(PDW);ELISA法检测小鼠血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和可溶性CD40配体(sCD40 L)浓度;流式细胞仪检测血小板TLR4阳性表达率.组间比较采用单因素方差分析.结果 尾静脉注射LPS3h后小鼠PC(×109 L-1)下降30％[(719.8±135.9) vs.(1013.1±136.6,P＜0.01],24h内达谷值[(374.7±115.1) vs.(1013.1±136.6),P＜0.01];MPV和PDW 12～48 h较C组增大(P＜0.01);LPS攻击后6～24h血浆TNF-α,M-CSF,sCD40L显著升高(与C组比较P ＜0.01),PC与血浆M-CSF(r=-0.746,P＜0.01),sCD40L(r=-0.573,P＜ 0.001)水平负相关;LPS刺激6h后血小板TLR4阳性表达(％)较C组增加[ (50.37±3.20) vs.(45.76±2.49) P＜0.01];NEP组血小板TLR4表达率(％)低于M组同时点[ (48.32±2.17) vs.(55.69±3.95,P＜0.01].结论 以sCD40L及M-CSF升高为代表的血小板过度活化与血小板TLR4表达中性粒细胞依赖性上调共同参与脂多糖诱发小鼠血小板减少.     

黄芩总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发及COX-2的影响

目的探讨黄芩总黄酮在抗氧化、抗炎方面的作用。方法通过小鼠腹腔巨噬细胞(PM)吞噬鸡红细胞试验研究对巨噬细胞吞噬功能的影响;对趋化三肽(fMLP)诱导的小鼠PM呼吸爆发的影响;对脂多糖(LPS)诱导小鼠PM合成COX-2酶的影响。结果黄芩总黄酮100mg/kg、200mg/kg剂量组能显著降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分数、吞噬指数;黄芩总黄酮1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml剂量组均能极显著降低呼吸爆发的峰值,抑制率随剂量增加而增大;黄芩总黄酮100μg/ml剂量组能显著降低PGE2值,黄芩总黄酮1μg/ml、10μg/ml剂量组能降低PGE2值,无统计学意义。结论黄芩总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、呼吸爆发、COX-2酶合成均有一定的抑制作用,这可能是其抗氧化、抗炎作用的部分机理。     

Toll样受体4在免疫相关细胞中的作用

Toll样受体(TLRs)是参与固有免疫的重要蛋白分子,也是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。TLR4是TLRs家族的重要成员之一。TLR4通过调控中性粒细胞和单核巨噬细胞的活化,可促进细胞因子的释放,启动固有免疫应答。同时TLR4能促进树突状细胞的成熟,激活初始T细胞,启动适应性免疫应答。在T细胞和B细胞的适应性免疫应答中,TLR4可促进细胞分泌细胞因子,介导全身炎症反应,并调控记忆性细胞的生成。本文就TLR4在中性粒细胞、树突状细胞、单核巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞中的作用进行综述。     

高强度超声对荷宫颈癌小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响

目的探讨高强度超声（HIU）治疗对荷瘤鼠巨噬细胞功能的影响。方法应用双抗夹心酶联免疫（ELISA）技术检测HIU组、手术组、荷瘤组及对照组小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α分泌。结果受LPS刺激时,HIU组、手术组、荷瘤组及对照组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清TNF-α浓度分别为：（1322±616.91）、（1044±671.33）、（606.50±230.73）、（938.00±625.50）pg/ml,HIU组与荷瘤组比较P〈0.05;未经LPS刺激时,HIU组、手术组、荷瘤组及对照组巨噬细胞培养上清TNF-α浓度分别为：（792.35±388.00）、（543.25±348.49）、（268.13±68.55）、（848.88±501.10）pg/ml,HIU组、对照组与荷瘤组比较P〈0.05。结论HIU治疗能够增强荷瘤小鼠巨噬细胞的功能。     

血管生成素样蛋白4对M2型巨噬细胞分化的影响

目的探讨血管生成素样蛋白4(ANGPTL 4)对M2型巨噬细胞分化的影响。方法首先利用流式细胞术检测ANGPTL 4~(-/-)小鼠和对照组小鼠M2型巨噬细胞频率,并通过LPS刺激,检测M2型巨噬细胞表达频率变化。最后流式细胞仪分选出F4/80~+巨噬细胞,分别用LPS和重组ANGPTL4蛋白处理,将纯化的巨噬细胞与CD4~+T细胞共培养,胞内染色法检测CD4~+T细胞IL-4的分泌情况。结果生理状态下ANGPTL 4~(-/-)小鼠和对照小鼠脾脏M2型巨噬细胞的频率无显著差异。LPS刺激对ANGPTL4~(-/-)小鼠来源M2型巨噬细胞的表达无影响。ANGPTL 4~(-/-)小鼠脾脏巨噬细胞不能促进CD4~+T细胞向Th2分化。巨噬细胞体外与CD4~+T细胞共培养48 h后,对CD4~+T细胞分泌IL-4无影响。结论 ANGPTL 4对M2型巨噬细胞的分化无明显影响。     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体2/4 mRNA的表达

目的 探讨无复苏对失血性休克小鼠心肌Toll样受体（TLR）表达变化的影响及其意义。方法 将45只C57BL／6小鼠随机分为失血性休克模型组、假手术组、脂多糖（LPS）组（由尾静脉注射LPS5mg／kg），每组15只；采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型。心肌TLR2mRNA和TLR4mRNA表达采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法进行分析；测定左室收缩末压（LVESP）以反映左室收缩功能。结果 ①与假手术组比较，失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降，均可导致左室收缩功能障碍；②失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4的mRNA表达水平均出现不同程度上调，而假手术组在各时间点未见明显改变。结论 ①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4的mRNA表达上调与心功能障碍存在密切联系，但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异；②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4的mRNA升高增强了机体的天然免疫功能，提高了机体对急性炎症的应激能力，对机体具有保护作用，但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害。