TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究

目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RA FLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径.方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平;用反转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测FLS中MMP-3 mRNA的表达水平.结果:TWEAK终浓度为50、100μg/L组诱导RA FLS合成MMP-3的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TWEAK终浓度为100μg/L诱导RA FLS的MMP-3 mRNA表达水平为对照组的1.26倍,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导RA FLS合成MMP-3及MMP-3 mRNA表达具有协同作用,协同作用组MMP-3的水平及MMP-3mRNA表达水平明显高于单纯TWEAK组,具有显著的统计学意义(P＜0.05).结论:TWEAK通过诱导RA FLS合成MMP-3,直接参与RA的关节损伤,TNF-α和IL-1β在此过程中发挥协同作用.     

TWEAK诱导成纤维样滑膜细胞合成MMP-9的研究

目的 通过探讨p38MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶9(MMP-9)过程中的作用,寻求RA治疗的新靶点.方法 将rhTWEAK与FLS共培养,Western blot法检测FLS中p-p38MAPK和p65的表达;对经或未经SB203580预处理的FLS,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-9水平,RT-PCR法检测FLS中MMP-9 mRNA的表达水平.结果 100 ng/ml的TWEAK作用于RA FLS,能够使p38MAPK磷酸化,并使细胞核内p65蛋白表达增加;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-9及MMP-9 mRNA的表达.结论 TWEAK诱导RA FLS合成IVlbtP-9过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,可诱导NF-κB表达.     

PTEN在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的:探讨第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达水平及意义。方法:利用组织块法获得并体外培养人RA-FLS、骨关节炎(OA)-FLS及关节创伤-FLS;采用实时荧光定量PCR法检测各组FLS中PTEN mRNA表达水平的差异;采用Western blotting法检测各组FLS的PTEN蛋白表达水平以及Akt Thr308位点磷酸化水平的差异。结果:(1)RA-FLS中的PTEN mRNA表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.01),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN mRNA表达水平无统计学差异。(2)RA-FLS的PTEN蛋白表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.05),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN蛋白表达水平无统计学差异。(3)RA-FLS中的Akt蛋白Thr308位点磷酸化水平显著高于OA-FLS及关节创伤-FLS(P0.01),且OA-FLS中该位点的磷酸化水平显著低于关节创伤-FLS(P0.01)。(4)RA-FLS中的PTEN蛋白水平与Akt Thr308位点磷酸化水平呈显著负相关(P0.01)。结论:RAFLS中PTEN基因呈低水平表达,可能与Akt Thr308位点磷酸化水平异常增高相关。     

RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

 目的：通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法：组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝（MTT）比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间（24、48和72 h）RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果：荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%（P<0.01）。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%（均P<0.01）。MTT结果显示,早期（24和48 h）RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%（P<0.01）。结论：转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。     

CyPA对类风湿关节炎中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用及其意义

目的:观察细胞环亲素A(CyPA)对人中性粒细胞HL-60株和类风湿关节炎(RA)患者外周血中性粒细胞的趋化和产生IL-8的作用.方法:选择12例RA患者,分离外周血中性粒细胞,采用Boyden小室趋化实验比较CyPA和/或IL-8对HL-60和RA患者粒细胞的趋化作用,采用ELISA检测CyPA促进培养的粒细胞产生IL-8作用,并与健康人比较.结果:CyPA组、 IL-8组及CyPA+IL-8组较阴性对照组趋化性显著增强( P <0.05);与IL-8组相比,CyPA抗体+IL-8组趋化指数降低( P <0.05);与CyPA组或IL-8组相比,CyPA+IL-8组趋化指数有所增加.RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较健康人显著增加( P <0.05);经CyPA刺激后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前增加,差异有统计学意义( P <0.05);阻断CyPA后,RA患者中性粒细胞培养上清中IL-8水平较CyPA刺激前无明显差异.结论:CyPA影响IL-8对中性粒细胞的趋化作用并对其分泌有影响.     

HMGB1促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-13

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)表达基质金属蛋白酶-13(MMP-13)。方法:HMGB1与RASF共孵育后,采用流式细胞术、实时RT-PCR、ELISA分别检测细胞周期和MMP-13的基因表达量以及蛋白表达水平。结果:1μg/ml HMGB1刺激滑膜成纤维细胞3小时,MMP-13 mRNA的表达明显增加;HMGB1刺激滑膜成纤维细胞48小时后MMP-13蛋白分泌增高,并且滑膜成纤维细胞增殖周期速度加快。结论:HMGB1可以激活滑膜成纤维细胞,使其增殖周期速度加快,MMP-13表达增加,提示HMGB1通过作用于滑膜成纤维细胞表达MMP-13加强关节结构破坏。     

Fractalkine对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的明确fractalkine(CX3CL1)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的影响。方法通过组织块法培养RA-FLS。分别用0、50、100ng/mL重组人fractalkine刺激RA-FLS24h,用四唑盐(MTT)法检测其吸光度值,比较各组间增殖率。结果 50ng/ml及100ng/ml fractalkine均可促进RA-FLS增殖(P=0.005,P=0.022)。结论 Fractalkine可促进RA-FLS的增殖,可部分解释RA-FLS自主增殖的特性。     

Fractalkine对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中NF-κB活化及内源性fractalkine mRNA表达的影响

目的:观察Fractalkine(FKN)对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)核转录因子κB (NF-κB)活化以及内源性FKN mRNA表达的影响.方法:通过组织块法培养RA-FLS.在RA-FLS中加入100 μg/L FKN,分别作用0 h、1 h及2 h,用Western blotting检测RA-FLS胞浆及胞核中NF-κB p65蛋白表达量变化以明确NF-κB的活化情况;加入100 μg/L重组人FKN分别作用0 h、12 h、18 h后,用RT-PCR检测FKN mRNA表达的变化.结果:重组人FKN刺激1 h后,RA-FLS胞浆中NF-κB p65蛋白水平明显低于无FKN刺激的对照组(P<0.05);FKN刺激后2 h,细胞核中NF-κB p65蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05).100 μg/L重组人FKN刺激RA-FLS,呈时间依赖方式诱导内源性FKN mRNA表达.FKN刺激RA-FLS18 h,细胞中FKN mRNA的表达水平明显升高(P<0.05).结论:外源FKN可刺激RA-FLS内源性的FKN mRNA表达上升,提示RA-FLS中可能存在FKN的正反馈现象.FKN对NF-κB有活化作用,可能对RA患者关节中炎症的启动、血管生成和骨质破坏有重要作用.     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的表型及其侵蚀软骨的特性

目的:分离培养类风湿关节炎(RA)滑膜细胞、检测其表面标志及研究其对软骨的侵蚀特性。方法:取6例RA患者滑膜,分别采用组织块、胰蛋白酶消化及胶原酶、胰蛋白酶先后消化培养后,用相差显微镜观察细胞的形态、用流式细胞术(FCM)检测培养细胞表面标记CD3、CD19、CD14、CD68、CD44、CD55、CD90及细胞内脯氨酰-4-羟基化酶(Prolyl-4-hydroxylase)的表达并与传统的免疫组化染色法检测波形蛋白的表达相比较。并用SCID小鼠研究成纤维样滑膜细胞(FLS)对软骨的侵蚀作用。结果:(1)3种方法均分离出FLS,胶原酶与胰蛋白酶先后消化法分离细胞所需时间少、获得的细胞数多、纯度较高。(2)第2代细胞与第3代细胞的均质性分别达90%及98%以上。(3)在第3~6代的细胞比较稳定,增殖活跃;第7代以后增长缓慢,逐渐老化。(4)流式细胞术分析显示,原代细胞随着传代次数的增加逐渐纯化,第3~6代CD90 细胞>98%,脯氨酰4-羟基化酶 细胞>98%;与免疫组化检测波形蛋白的表达相一致。(5)将第4~5代的细胞和软骨一起植入SCID小鼠,或单独注入SCID小鼠的膝关节,都可导致软骨的浸蚀性破坏。结论:以胶原酶与胰蛋白酶先后消化分离FLS,效果较好,CD90、脯氨酰4-羟基化酶可作为鉴定FLS的标志。用SCID小鼠可研究FLS对软骨的侵蚀特性。     

TNF-α诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MAPKs通路的活化

研究ＩＮＦ－α在类风湿关节炎（Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）成纤维样滑膜细胞（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ，ＦＬＳ）信号转中ＭＡＰＫｓ激活情况。方法：原代培养类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞：应用Ｗｅｓｔｅｎｂｌｏｔ检测ＴＮＦ－α短时间内引起ＲＡＦＬＳ蛋白质酷氨酸磷酸化状态变化，及其对ＭＡＰＫｓ家族成员活化的浓度效应和时间相特点。结果：ＩＮＦ－α可以瞬时引起     

High extracellular matrix metalloproteinase inducer/CD147 expression is strongly and independently associated with poor prognosis in colorectal cancer

As in most solid tumors, colorectal cancer prognosis strongly depends on the extent of local invasion and lymph node and distant metastases. Extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) is a transmembrane glycoprotein that activates matrix metalloproteinases, a group of enzymes that play an important role in tumor invasion and metastasis formation. This study investigates the EMMPRIN expression in a large cohort of patients with colorectal cancer. Immunohistochemical analysis of tissue microarrays from 285 patients shows that increased EMMPRIN protein expression does not correlate with clinicopathologic parameters and is an independent prognostic factor of poor survival, with mean survival times of 103 months in EMMPRIN negative/low versus 57 months in EMMPRIN intermediate/high patients (P < .001). This pronounced association of increased EMMPRIN levels and--on average--a 45% reduction in overall survival could help improve the risk stratification in patients with colorectal cancer; moreover, the lack of correlations with classical measures of cancer invasion/spreading may suggest the relevance of alternative EMMPRIN pathways beyond matrix metalloproteinase activation.     

The roles of CyPA and CD147 in cardiac remodelling

Cyclophilin A (CyPA), an abundantly expressed protein belonging to the immunophilin family, is involved in a variety of physiological and pathological activities together with its extracellular receptor, CD147. Many studies have provided compelling evidence supporting critical roles of CyPA in immune and infectious diseases and malignant tumours. Recent studies have revealed that both CyPA and CD147 strongly promote cardiovascular inflammation, myocardial ischaemia-reperfusion injury, and myocardial remodelling processes. Here, we review the potential roles of CyPA and CD147 in cardiac remodelling and their implications for the development of novel pharmacological therapies for heart failure.     

CD147抗体对破骨细胞中基质金属蛋白酶活性影响的体外研究

目的:建立人破骨细胞(Osteoclast,OCs)体外诱导分化模型,研究CD147单克隆抗体对OCs分化过程中基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达及活性的影响。方法:通过采集健康成年志愿者外周血所分离的单个核细胞贴壁培养,应用NF-κB配体激活因子(Receptor or Activator ofNF-KB Ligand,RANKL)与巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导单个核细胞向OCs分化。本实验分为抗体组(RANKL+M-CSF+CD147单克隆抗体)与对照组(RANKL+M-CSF)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与骨吸收实验检测鉴定OCs分化及活性情况,Real-Time PCR技术检测CD147、MMP-9和MMP-2 mRNA在破骨前体细胞(Osteoclast precursor cells,OPCs)中表达情况,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-9、MMP-2酶蛋白的活性变化情况。结果:①对照组经TRAP染色和骨吸收实验检测到破骨样细胞形成并具有骨吸收功能,而抗体组OCs分化及活性均受到抑制;②在24、48小时时相点上抗体组CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA的相对表达量均低于相应的对照组(P<0.05),且MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量与CD147 mRNA的表达量呈正相关。③明胶酶谱检测细胞培养上清,可见在24、48小时两时相点上抗体组OCs细胞中MMP-2、MMP-9酶原及活性酶的酶解量均较相应对照组明显降低(P<0.05)。结论:CD147单克隆抗体可以抑制OCs分化成熟过程中MMP-9及MMP-2的表达与活性;CD147对MMP-2、MMP-9活性的调节,可能是其对OCs活化调节的机制之一。     

PMA对THP-1细胞和RA患者单核细胞及培养上清中CD147表达的影响

目的：研究豆蔻佛波醇乙酯（PMA）刺激前后,体外培养的人单核细胞系THP-1细胞和类风湿关节炎（RA）患者外周血单核细胞（human peripheral blood monocytes,HPBM）上及培养上清中CD147的表达.方法：以贴壁法分离RA患者HPBM.用PMA刺激体外培养的RA患者HPBM和THP-1细胞,采用流式细胞术动态检测THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147的表达.用双抗体夹心ELISA法检测培养上清中CD147分子的含量.结果：PMA刺激前,THP-1细胞膜及RA患者HPBM表面CD147分子的表达均较高,培养上清中均可检测到CD147分子.PMA刺激后,THP-1细胞培养上清中CD147的含量升高,THP-1细胞上CD147的表达先升高后降低,最后进入稳定期;RA患者的HPBM上CD147的表达下降,培养上清中CD147的含量升高,于刺激后2 d进入稳定期.结论：THP-1细胞、RA患者HPBM膜表面CD147分子可从细胞上脱落或由细胞直接分泌到培养液中.PMA可上调可溶性CD147的表达.     

CD147分子通过VEGF促进类风湿关节炎滑膜组织中的血管新生

目的观察类风湿关节炎(RA)滑膜组织中CD147表达强度与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平间的相关性,并探讨成纤维样滑膜细胞(FLS)表面CD147的水平变化对VEGF表达的影响。方法收集15例RA患者滑膜,以4例骨关节炎(OA)患者滑膜作对照,采用免疫组织化学SP染色方法检测滑膜组织中CD147和VEGF的表达;体外原代培养FLS细胞,分别加入CD147抗体,PI3K通路阻断剂,MAPK通路的ERK1/2、P38及JNK阻断剂等作用FLS细胞,ELISA检测细胞培养上清中VEGF的表达水平。结果与4例OA滑膜组织CD147和VEGF表达相比,15例RA滑膜组织中均有CD147、VEGF均高表达。其中,表达CD147的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、单核-巨噬细胞和淋巴细胞;表达VEGF的细胞主要为成纤维样滑膜细胞、微血管周围成纤维样细胞及血管平滑肌细胞。滑膜组织中CD147和VEGF的表达强度间具有统计学意义。ELISA结果显示,在使用LY294002或抗HAb18GmAb阻断CD147表达后,VEGF的表达量显著下降(P<0.05);而MAPK阻断剂(PD98059、SP600125和SB203580)等对VEGF表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论CD147经PI3K-Akt信号通路在RA滑膜组织中上调VEGF促进血管新生。提示CD147在RA血管新生和血管翳形成中有重要意义。     

CD147 immunoglobulin superfamily receptor function and role in pathology

The immunoglobulin superfamily member CD147 plays an important role in fetal, neuronal, lymphocyte and extracellular matrix development. Here we review the current understanding of CD147 expression and protein interactions with regard to CD147 function and its role in pathologic conditions including heart disease, Alzheimer's disease, stroke and cancer. A model linking hypoxic conditions found within the tumor microenvironment to upregulation of CD147 expression and tumor progression is introduced.     

CD147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究

目的了解CD147与胆管癌侵袭转移的关系。方法通过RT-PCR和免疫荧光法了解CD147在胆管癌细胞株QBC939中的表达,然后构建反义CD147分子基因片断的重组腺病毒抑制胆管癌细胞株CD147分子的表达,观察其基质金属酶MMPs改变及生长情况。结果 CD147分子在胆管癌细胞株QBC939中表达,表明反义CD147通过抑制肿瘤细胞的CD147分子的表达,主要减少了肿瘤组织中基质金属酶MMP-2,而不是MMP-9的表达,导致肿瘤的生长抑制。结论 CD147分子的高表达能够促进胆管癌的肿瘤生长,并且CD147促进肿瘤生长的能力可能与MMP-2的高表达密切相关。     

Epithelial expression of extracellular matrix metalloproteinase inducer/CD147 and matrix metalloproteinase-2 in neoplasms and precursor lesions derived from cutaneous squamous cells: An immunohistochemical study

Extracellular matrix metalloproteinase inducer (CD147) is a transmembrane glycoprotein involved in the regulation of matrix metalloproteinases (MMPs). The study investigated CD147 and MMP-2 expression in epidermis of cutaneous squamous lesions.     

CD147 (EMMPRIN) and matrix metalloproteinase-2 expression in uterine endometrioid adenocarcinoma

Low-grade uterine endometrioid adenocarcinomas (EACs) may exhibit a distinct pattern of myometrial invasion characterized by the presence of microcystic, elongated, and fragmented (‘MELF’) glands but the factors influencing this pattern of invasion are not known. Immunohistological expression of CD147 (extracellular inducer of matrix metalloproteinase, EMMPRIN) and matrix metalloproteinase-2 (MMP2) was studied in 22 EAC and the results compared between the ‘conventional’ neoplastic glands, foci of MELF-type invasion, and in the tumor-associated stroma. The conventional tumor areas showed strong membranous expression of CD147, and staining was more consistently present toward the central (luminal) aspect of the larger glands. In contrast, the tumor cells showed only focal expression of MMP2, and in some cases CD147 and MMP2 staining was inversely correlated. The neoplastic epithelium within MELF areas usually was negative for both CD147 and MMP2. However, there was consistent MMP2 expression in the reactive stroma that characteristically surrounds foci of MELF pattern invasion. This micro-anatomical variation in protein expression within EAC suggests a functional alteration in the neoplastic epithelium during the invasive process. It is likely that stromal MMP2 plays a role in potentiating invasion in these tumors but this may be regulated by factors other than CD147.     

子宫颈癌中CD147蛋白和MMP-9 mRNA的表达及意义

目的 探讨CD147蛋白、MMP-9 mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及其与侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组化MaxVision法、RT-PCR技术检测10例慢性子宫颈炎组织(对照组)和40例子宫颈鳞状细胞癌患者的外科手术切除标本组织中CD147蛋白、MMP-9 mRNA的表达,应用图像分析软件分别对CD147和MMP-9 mRNA的表达进行平均光密度和灰度分析.结果 CD147蛋白和MMP-9 mRNA的表达结果显示:子宫颈鳞状细胞癌组高于对照组慢性子宫颈炎组织(P值均＜0.01);有淋巴转移组高于无转移组(P＜0.01、P＜0.05);CD147蛋白在宫颈鳞状细胞癌低分化组表达与中分化组表达差异无显著性(P＞0.05),但MMP-9 mRNA表达为低分化组高于中分化组(P＜0.05).结论 CD147蛋白和MMP-9 mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中呈高表达,它们之间的表达具有正相关性,二者可能共同参与了子宫颈鳞状细胞癌的侵袭和转移过程.