鸦胆子油乳诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的:研究鸦胆子油乳对膀胱癌细胞的作用,探讨其抑制膀胱癌的机制.方法:将5μl/ml鸦胆子油乳作用于人BIU-87膀胱癌细胞,利用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察作用结果.结果:鸦胆子油乳阻止BIU-87膀胱癌细胞由G0/G1周期进入S期,并诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡.结论:鸦胆子油乳抗癌作用机制之一是诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡.     

端粒酶催化亚单位基因反义寡核苷酸诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(hTRT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用。方法合成针对hTRT的28mer ASODN,转染前列腺癌细胞12～36 h后,细胞计数、透射电镜、DNA Ladder、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测癌细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)技术检测hTRT基因表达和端粒酶活性。结果0.5～2.0μmol/L ASODN转染后,癌细胞体外生长抑制16.08％～53.41％(P<0.05),部分癌细胞呈现凋亡形态学改变和DNA片段化,凋亡率为9.36％～37.54％(P<0.05),hTRT表达减弱24.48％～86.73％(P<0.01),端粒酶活性降低24.74％～76.72％(P<0.01)。 结论运用ASODN阻断端粒酶hTRT基因表达,能降低端粒酶活性,显著诱导前列腺癌细胞凋亡。     

RNAi沉默PLCε基因对膀胱癌BIU-87细胞株的增殖调控作用

目的 探讨RNA干扰技术沉默PLCε基因表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖的抑制作用.方法 构建靶向PLCε基因特异性shRNA重组质粒pGenesil-PLCE,经脂质体介导转染BIU-87细胞株,蛋白质印迹法、RT-PCR方法检测PLCε在癌细胞蛋白及mRNA水平的表达,噻唑盐法观察重组质粒对BIU-87细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学染色分析增殖细胞核抗原(PCNA)含量改变,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 构建的重组质粒pGenesil-PLCε能明显抑制PLCE基因表达,且能明显抑制BIU-87细胞增殖;转染重组质粒0、24、48和72 h后细胞增殖抑制率分别为2.01%、32.85%、39.78%、37.19%,重组质粒组与对照组、阴性质粒组比较,差异有统计学意义(P<0.01).细胞内PCNA表达下调了33.08%;G0/G1期细胞(71.50±4.48)%与空白对照组(40.75±2.30)%、阴性质粒组(40.00±1.76)%比较明显增多,G2/M期细胞(8.16±0.51)%与空白对照组(31.20±1.76)%、阴性质粒组(35.94±1.58)%相比减少.差异均有统计学意义(P<0.01),细胞阻滞于G0/G1期,细胞增殖状态受到明显抑制.结论 PLCε基因在促进膀胱癌细胞增殖中发挥莺要作用,可能成为膀胱癌生物学治疗潜在的分子靶点.     

抑制端粒酶活性诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨抑制端粒酶粒酶活性各市县导膀胱癌细胞凋亡的可能性。方法 采用具有5′-d(TTAGGG)-3′序列的硫代磷酸反义寡核苷酸（PS-ODN）与膀胱癌EJ细胞共培养,观察细胞内端粒酶活性变化。细胞生长状态及细胞凋亡形态学变化。结果 经PS-ODN处理的膀胱癌细胞内端粒酶活性下降或消失,细胞生长状态受到明显抑制,并出现细胞凋亡特有的形态变化。结论 具有5′-d(TTAGGG)-3′序列的PS-ODN能够抑制膀胱癌细胞内的端粒酶活性,抑制膀胱癌细胞生长,诱导膀胱癌细胞凋亡。     

siRNA沉默高迁移率蛋白A2基因对人膀胱移行细胞癌细胞T24增殖凋亡的影响

目的 观察siRNA靶向沉默HMGA2基因在人膀胱移行细胞癌T24细胞中表达的变化,探讨抑制HMGA2基因对T24细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 针对人HMGA2基因构建siRNA干扰片段,瞬时转染T24细胞后,采用Western-blot方法检测转染siRNA干扰片段48h后T24细胞蛋白表达量的变化,CCK-8法检测T24细胞增殖和流式细胞仪（FCM）检测T24细胞周期和凋亡情况.结果 转染后48h的T24细胞HMGA2蛋白表达水平较空白对照组（CON）和阴性对照组（NC）显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,转染HMGA2-siRNA的实验组抑制T24细胞增殖,T24细胞S期细胞比例（35.47±0.23）％高于CON组和NC组（P＜0.05）,实验组T24细胞凋亡率为（17.25±0.24）％,明显高于CON组和NC组（P＜0.05）.结论 HMGA2基因的特异性siRNA可以抑制T24细胞增殖,细胞周期阻滞在S期,并促进其凋亡.     

转染XIAP基因对丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：探讨XIAP基因对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞3天后．用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XIAP基因的表达．用低剂量MMC诱导细胞凋亡启动,用MTT比色法分析检测癌细胞生长活性．用3末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果：各组癌细胞在低剂量MMC的诱导下发生凋亡、与单用MMC组比较．转染XIAP基因的癌细胞组的凋亡率显著降低。结论：XIAP基因在癌细胞中的过度表达可以明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,其可能在膀胱癌多药耐药中起一定作用。     

X射线照射诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨Ｘ射线照射对膀胱癌细胞系存活状态的影响。方法 应用荧光染料（ＥＢ和ＡＯ）染色、荧光显微镜观察法，对膀胱癌ＥＪ和ＢＩＵ－８７细胞用不同剂量Ｘ射线照射及照射后不同时间收集细胞检测。结果 Ｘ射线照射可诱导诱胱癌细胞凋亡和坏死，细胞凋亡和坏死的多少与照射剂量及照射后的时间长短有关。在照射１００－１０００ｃＧＹ时凋亡细胞数明显增多，照射１０００￣２０００ｃＧＹ时坏死细胞数明显增多，随照射剂量增加和     

小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用。方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3300bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒。应用Lipofeetamine^TM 2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果。设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒。Lipofectamine^TM 2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞。分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况。结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRV和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3300bp和约300bp条带,而后者出现3300bp和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒。K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制。结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达。     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 凋亡的可能性。方法　应用细胞和分子生物学技术检测不同浓度ＡＴＲＡ 对Ｔ２４ 细胞生长和凋亡的影响。结果　３ ×１０－５ ～３ ×１０－ ７ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ可显著抑制Ｔ２４ 细胞增殖。用３×１０－５ ｍｏｌ／Ｌ和３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 作用细胞６ 天,可出现典型凋亡特征;３ ×１０－５ 、３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 组及对照组的细胞凋亡率分别为２０ ．１６ ％ 、１５ ．３１％和１ ．４９ ％ ;ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性的ＤＮＡ 梯形带。结论　ＡＴＲＡ对人膀胱癌细胞Ｔ２４ 有剂量生长抑制作用,且可成功地诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 发生凋亡。     

反义bcl-2 RNA促进膀胱癌BIU-87细胞的凋亡

为探讨反义ｂｃｌ２对膀胱癌ＢＩＵ８７细胞凋亡的作用，应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将插有反义ｂｃｌ２基因片段的重组逆转录病毒载体转染ＢＩＵ８７细胞，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果显示：Ｇ期细胞比率增高，细胞周期分析可见凋亡峰，细胞形态学观察凋亡细胞增多，ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带。结果提示：反义ｂｃｌ２瞬时表达可促进ＢＩＵ８７细胞凋亡     

雅胆子油乳诱导膀胱癌BIU—87细胞凋亡的研究

目的：研究雅胆子油乳对膀胱癌细胞的作用。探讨其抑制膀胱癌的机制。方法：将5ul/ml雅胆子油乳作用于人BIU-87膀胱癌细胞,利用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察作用结果。结果：鸦胆子油乳阻止ＢＩＵ-87膀胱癌细胞由G0/G1周期进入S期,并诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡。结论：鸭胆子油乳抗癌作用机制之一是诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡。     

脉冲强磁场对膀胱肿瘤细胞BIU-87凋亡的影响

目的：探讨脉冲强磁场对体外培养的膀胱肿瘤细胞BIU-87凋亡的影响。方法：将体外培养的膀胱肿瘤细胞株BIU87随机分为对照组及脉冲强磁场组，脉冲强磁场组置于磁场强度为8T，重复频率为15次／s的脉冲强磁场中进行干预，每天干预2h。分别于磁场干预第1天、第2天及第3天后采崩倒置显微镜观察细胞生长情况，采用MTT法检测肿瘤细胞凋亡情况（OD值），以流式细胞仪俭测膀胱肿瘤细胞BIU87的凋亡率。结果：倒置显微镜观察脉冲强磁场组细胞于干预第1天后即出现细胞体积变小、核固缩等凋亡表现，磁场干预第3天后可见染色体固缩、碎裂，出现大量脱落的凋亡小体等凋亡。MTT法检测显示脉冲强磁场组干预第1天、第2天及第3天后肿瘤细胞增殖抑制率分别为15．79％、28．84％、37．25％，肿瘤细胞OD值较对照组差异有统计学意义（P〈0．05）；以流式细胞仪检测脉冲强磁场组肿瘤细胞凋亡率较对照组明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：脉冲强磁场对膀胱肿瘤细胞BIU-87有明显抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。     

光动力学疗法诱导人膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的:联合应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜研究叶绿素衍生物光动力学疗法诱导人膀胱癌细胞(T-24 and SCaBER)凋亡的现象.方法:光动力疗法体外作用于人膀胱癌T-24and SCaBER细胞,细胞凋亡指数采用双免疫荧光染色(Annexin V/PI)和流式细胞仪技术测定,凋亡细胞的形态学研究采用AO/EB双染色和激光共聚焦显微镜技术.结果:经光动力学作用后的膀胱癌细胞通过诱导凋亡而被抑制了细胞的活性.细胞被阻滞于G0～G1期.结论:叶绿素衍生物光动力学疗法通过诱导凋亡而抑制膀胱肿瘤的生长,激光共聚焦显微镜能提供更可靠的细胞早期凋亡的影像学资料.     

塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响

目的：研究选择性环氧化酶2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响。方法：常规培养的贴壁生长的T24细胞,分别与不同浓度塞来昔布、POE2等共培养,MTT法测定塞来昔布及PGE。对T24细胞增殖活性的影响,流式细胞仪测定塞来昔布及PGEz处理后T24细胞的凋亡率;建立细胞悬浮培养体系,将悬浮生长的T24细胞,分别与塞来昔布、PGE。等共培养,流式细胞仪测定塞来昔布及PGE2处理后T24细胞的凋亡率（失巢凋亡率）。结果：塞来昔布呈剂量依赖性地显著抑制贴壁生长的T24细胞的增殖、增加其凋亡,而PGE2和对贴壁生长的T24细胞增殖和凋亡无明显影响;塞来昔布显著增加而PGE2显著抑制T24的失巢凋亡。结论：选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可显著抑制T24细胞的生长,诱导贴壁及悬浮生长状态的T24细胞产生凋亡,其可能机制之一是逆转了Cox-2产物PGE2对T24细胞的抗凋亡保护作用,包括对抗肿瘤药物及脱壁诱导的细胞凋亡的抑制作用。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响

目的:构建Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响.方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度.用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对BIU87细胞生长的抑制作用.结果:当感染复数(MOI)=25时,Ad-Surp-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为74.56%,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(χ2=58.64,P<0.05);Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为68.27%,在SV-HUC-1细胞中转染率为72.52%,差异无统计学意义(χ2=0.075,P>0.05).Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(χ2=0.016,P>0.05).与PBS相比,Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染后第4天这一差异显著(F=15.96,P<0.05),而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异.结论:成功构建了含有Survivin启动子驱动LRIG1基因的重组复制腺病毒Ad-Surp-LRIGl并鉴定正确,Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体外能明显抑制膀胱癌细胞BIU87的生长.     

转人GM—CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及体外生物学特性

经逆转录病毒载体将人GM-CSF基因导入人膀胱癌细胞株BIU-87细胞中,建立了转基因细胞株BIU/GM。经流式细胞仪行细胞DNA周期分析表明GM-CSF基因的导人及表达对BIU-87细胞的增长无影响。免疫荧光测定发现转GM-CSF基因及表达不能促进BIU-87细胞表面HLA-ABC、DR、DQ抗原的表达。转基因瘤细胞株经6000rad X射线照射灭活后,丧失增殖能力,逐步死亡,但能维持一定水平的GM-CSF分泌活性达两周以上。从而为制备灭活的转基因瘤苗提供了初步经验。     

羟基喜树碱对高危浅表性膀胱癌模型5637细胞的凋亡作用研究

目的：观察羟基喜树碱（HCPT）对高危浅表性膀胱癌模型5637细胞的凋亡作用,研究HCPT不同作用时间和不同浓度对5637细胞的影响,进一步讨论HcPT在膀胱灌注化疗中的作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MIT）检测不同浓度、不同作用时间下HCPT对5637细胞增殖的影响;采用流式细胞术测定低浓度（5μmol／L）、不同作用时间（12、24h）HCPT诱导5637细胞的凋亡率;用Hochest33258染色观察细胞凋亡情况;采用荧光定量PCR检测5μmol／L HCPT作用5637细胞12h相较未加药5637细胞中凋亡相关基因的变化。结果：5μmol／L HCPT作用5637细胞12h后,早期凋亡细胞占23.5％。HCPT随着作用时间的延长,凋亡率并不会随之增加,HCPT诱导凋亡的作用在肿瘤细胞与药物作用后的某一时间点达到高峰。Hochest33258染色和荧光定量PCR检测凋亡相关基因也证明HCPT这一浓度在这一时间点有诱导癌细胞凋亡的作用。结论：羟基喜树碱具有诱导高危浅表性膀胱癌细胞凋亡的作用。适当延长药物作用时间,可以促进其药效的发挥。     

从膀胱癌患者分离并培养人膀胱平滑肌细胞

目的：建立从膀胱癌患者的分离并培养膀胱平滑肌细胞的实验技术.方法：取一小块无明显肿瘤生长的膀胱组织,分离并培养膀胱平滑肌细胞;动态观察细胞形态变化、生长增殖情况以及平滑肌肌动蛋白（SMA）、结蛋白（Desmin）和广谱细胞角蛋白（AE1/AE3）的表达.结果：接种24 h后即有长梭形细胞贴壁生长,10天后长至80%融合,呈典型的＂峰谷＂样形态;传代后1天为潜伏期,2～6天为指数生长期,然后进入融合平台期,需再次传代.第2代细胞的SMA和Desmin表达阳性率分别高达（99.0±0.8）%和（97.0±2.1）%,不表达AE1/AE3.随着传代次数的增加,细胞去分化,细胞形态变成短梭状或椭圆形;SMA和Desmin的表达开始下降,传至第5代时,SMA和Desmin阳性率分别降至（78.0±3.3）%和（74.0±2.6）%;至第7代时,SMA和Desmin阳性率降至（51.0±3.0）%和（49.0±2.6）%.第7代细胞经血清饥饿培养48 h后,细胞又能再分化,形态转变成长梭状,SMA和Desmin阳性率可分别升至（90.0±3.5）%和（88.0±2.5）%,具有显著性差异.结论：本研究所培养的人膀胱平滑肌细胞具有较高的纯度,血清饥饿能促进去分化的细胞再分化,能为构建组织工程膀胱提供种子细胞.