生精细胞凋亡与电离辐射

哺乳动物睾丸精子发生过程中具有自发的生殖细胞死亡现象。这种死亡主要是通过细胞凋亡机制实现的。深入了解睾丸生财亡规律，性激素和理化因素对其影响，以及电离辐射的关系，对示生殖细胞凋亡的本质具有重要的生物学和遗传学意义。     

生精细胞凋亡与电离辐射

哺乳动物睾丸精子发生过程中具有自发的生殖细胞死亡现象,这种死亡主要是通过细胞凋亡机制实现的。深入了解睾丸生精细胞凋亡规律,性激素和理化因素对其影响,以及与电离辐射的关系,对揭示生殖细胞凋亡的本质具有重要的生物学和遗传学意义。     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的：研究低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法：应用原位末端标记（TUNEL）和常规HE染色法分别结合光镜定量地观察75mGyX射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞在生精周期中凋亡的适应性反应。结果：当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）X射线照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞影响不明显，当1．0、1．5、2．0、2．5、3．0Gy（D2）X射线照射前3、6、12、24h给予75mGy（D1）预照射时，发现当D2剂量较小（1．0、1．5、2．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早，较明显，而且持续时间较长；反之，当D2剂量较大（2．5和3．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少只有照后6h）出现，而且不显著。结论：低剂量电离辐射可以诱导精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

低剂量X射线照射选择性诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的 研究低剂量X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法 昆明雄性小鼠接受诱导剂量(D1，75mGy)和攻击剂量(D2，1．0，2．0和3．0Gy)全身照射。通过不连续泛影葡胺密度梯度离心法分离小鼠睾丸组织不同种类生精细胞，流式细胞术(FCM)检测各类生精细胞凋亡。结果 当D2照射前6h给予D1预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的损伤作用，而对精子细胞和精子影响不明显。当D1和D2间隔3，6，12和24h，发现D2剂量较小(1．0和2．0Gy)时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早、较明显，而且持续时间较长；反之，D2剂量较大(3．0Gy)时，精原细胞和精母细胞凋亡百分率变化不明显。结论 低剂量X射线照射可以选择性诱导小鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

低剂量辐射对小鼠睾丸生精细胞中细胞色素c和caspase-3表达的影响

目的 研究低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞细胞色素c（Cytc）和caspase-3蛋白表达的影响。方法 采用免疫组化法（SABC法），观察低剂量X射线照射后，小鼠睾丸各类生精细胞Cytc和caspase-3表达的剂量与时程效应关系。结果 0、0.025、0．05、0．075、0．1和0.2Gy照射后12h，小鼠睾丸各类生精细胞不同程度表达Cyt c和caspase-3，以精原细胞和精母细胞表达为主，精于细胞和精于则表达相对较少，而且，随着剂量的增加，表达也增多。0．075Gy照射后。两种蛋白的表达开始随时间推移而增强，12h达到峰值，然后下降，但仍高于正常组。结论低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞Cytc和caspase-3蛋白的表达具有一定的剂量和时程效应规律性。     

缺锌对大鼠睾丸细胞凋亡影响机制的研究

 目的 探讨缺锌对睾丸细胞凋亡影响的可能机制,研究其对睾丸一氧化氮合酶(NOS)活性和血清睾丸酮水平的影响.方法 选用2月龄Wistar雄性大鼠16只,均分为实验组和对照组,实验组和对照组分别喂养缺锌和常锌饲料,喂养4周后,采用原子吸收分光光度法测定血清锌含量;采用放射免疫分析法测定血清睾丸酮含量;采用NADPH-d组织化学显示睾丸细胞NOS活性;采用原位缺口平移法计数睾丸细胞凋亡数目的 变化.结果 缺锌大鼠血清锌较对照组明显降低(P<0.05);血清睾丸酮较对照组明显降低(P<0.01);睾丸间质细胞NOS阳性细胞数目(378.44±51.78No./10个曲细精管)较对照组(192.57±26.30No./10个曲细精管)明显增多(P<0.01),NOS活性反应强度明显增高;睾丸曲细精管生精细胞凋亡的数目(21.41±3.82 No./10个曲细精管)较对照组(6.94±12.44 No./10个曲细精管)明显增多.结论 锌是睾丸发育必需的营养素,缺锌可诱导睾丸生精细胞凋亡;缺锌大鼠睾丸酮水平降低,睾丸细胞NOS活性明显增强,这种变化可能是缺锌诱导睾丸细胞凋亡的重要机制.     

温肾生精饮对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用

目的：研究温肾生精饮（主要由鹿茸、人参、锁阳、大云、黄芪、淫羊藿和当归等15味药材组成）对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化损伤的保护作用及其机制。方法将8周龄的昆明种雄性小鼠随机分组,正常对照组腹腔注射生理盐水,模型组、西药组和中药组连续5 d腹腔注射80 mg／（ kg? d）的环磷酰胺,然后将正常对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,西药组和中药组小鼠分别灌胃克罗米芬或温肾生精饮30 d。检测各组小鼠附睾精子密度和精子活率;观察睾丸生精上皮的发育;检测睾丸组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPH－Px）和过氧化氢酶（CAT）的水平;免疫组织化学法检测睾丸生精小管中生存素（survivin）的表达;TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果与模型组和西药组比较,温肾生精饮显著提高了生精障碍小鼠的精子密度和精子活率,促进了生精小管上皮的发育,显著提高了生精障碍小鼠睾丸内GSH－Px和CAT的活性,降低了睾丸组织中MDA水平,且上调了生精细胞中生存素的表达水平,降低了生精小管和生精细胞的凋亡指数。结论温肾生精饮能显著修复环磷酰胺致小鼠睾丸生精功能损伤,其修复机制可能与提高睾丸组织中的抗氧化水平、减少生精细胞凋亡有关。     

电磁脉冲辐射对小鼠睾丸结构的影响

目的 :探讨不同场强的电磁脉冲辐射对睾丸结构的影响。方法 :二级昆明雄性小鼠 114只 ,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠分别接受 8× 10 3 ,2× 10 4,6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射 ,于照射后 6h ,1d ,3d ,7d ,14d和 2 8d观察睾丸和附睾病理学改变。结果 :3种场强的电磁脉冲辐射均未引起小鼠肛温和阴囊皮肤温度的明显升高 ,但睾丸却发生显著的各级生精细胞水肿、坏死和脱落 ,曲细精管内成熟精子稀少和缺失 ;最敏感的靶细胞是精原细胞和精子细胞 ;周边部曲细精管病变最明显 ;病变的严重程度与场强的大小呈正相关。结论 :8× 10 3 ～ 6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射小鼠 ,可引起小鼠睾丸严重的非热效应性生精细胞结构损伤。     

壬基酚对雄性大鼠生精功能及相关激素和酶的影响

目的初步研究不同剂量壬基酚对雄性大鼠的生精功能及血清激素和睾丸内相关酶的影响。方法雄性大鼠48只,随机分为4组,即对照组、壬基酚低、中、高(50、100、200 mg/kg)剂量组,对照组每日灌胃给予植物油(0.15 ml/100 g),给药组每日灌胃给予壬基酚油溶液,连续28 d。染毒28 d后处死大鼠,取血,放免法检测血清睾酮(T)、皮质酮(CORT)、促卵泡刺激素(FSH)以及黄体生成素(LH)水平。摘取右侧睾丸制备组织匀浆,采用分光光度法测定SOD、MDA、GSH以及LDH的活性。取左侧睾丸分析初级精母细胞染色体畸形率。取附睾,检测附睾尾精子数量、精子活动率和精子畸形率。结果染毒28 d后,与对照组相比,壬基酚组大鼠血清T、FSH和LH水平降低,其中高剂量组降低显著(P<0.05)。CORT升高,但无显著性差异。另外,随染毒剂量增加,大鼠睾丸组织SOD活力、GSH和MDA水平呈现逐渐上升趋势,各染毒组LDH活性升高。壬基酚组大鼠精子数、精子活动率显著低于对照组,精子畸形率显著高于对照组,初级精母细胞染色体畸变率高于对照组。结论壬基酚对雄性大鼠有明显的生殖毒性。其可能通过降低大鼠血清T、FSH和LH水平,增加睾丸组织GSH和LDH活力产生作用。     

恐惧应激对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的观察恐惧应激对大鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡的影响。方法36只SD大鼠随机分为急性应激组、亚急性应激组、慢性应激组和对照组,建立大鼠恐惧应激模型,在观察不同时间后取材,RT-PCR法检测睾丸组织中caspase-3、bax和bcl-2 mRNA的表达并比较bax/bcl-2的比值,TUNEL法检测睾丸内精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞的凋亡情况。结果caspase-3mRNA的表达水平,急性应激组与其对照组比较无显著差异(3.85±0.84vs3.30±0.74,P>0.05),而亚急性应激组与其对照组比较(5.34±1.13vs3.67±0.34)、慢性应激组与其对照组比较(5.88±0.31vs4.08±0.60)均显著增高(P<0.05)。bax/bcl-2比值,急性应激组与其对照组比较无显著差异(1.61±1.01vs1.15±0.29,P>0.05),而亚急性应激组与其对照组比较(2.68±0.86vs1.60±0.42,P<0.05)、慢性应激组与其对照组比较(3.88±0.60vs2.99±0.76)均显著增高(P<0.001)。急性应激组生殖细胞凋亡指数与对照组比较无显著差异(3.75±0.50vs1.50±0.58,P>0.05),而亚急性应激组(10.50±1.29)和慢性应激组(21.50±1.73)与对照组相比较均显著增高(P<0.001)。结论长期恐惧应激可导致大鼠睾丸生精细胞发生凋亡,caspase-3、bax和bcl-2等参与了其凋亡过程。     

脂肪间充质干细胞移植对兔心肌梗死后心功能及凋亡的影响

目的：探讨脂肪间充质干细胞（ADMSCs）心肌内移植对兔心肌梗死后心功能及凋亡的影响及其机制。方法：结扎兔左前降支（LAD）制作急性心肌梗死（AMI）模型,同时将4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记的ADMSCs注射到梗死区,造模前及移植后4周超声心动图检测心功能,测量左室体重指数,缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞并计数。结果：移植组可见标记的植入细胞,心功能较对照组明显改善,左室体重指数、凋亡指数均显著小于对照组。结论：脂肪间充质干细胞心肌内移植能减少兔心梗后心肌细胞凋亡、减轻左室重构,从而改善兔心肌梗死后心脏功能。     

阿帕替尼对脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的:研究小分子酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸阿帕替尼对脑胶质瘤细胞U87MG放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将胶质瘤细胞U87MG分为空白对照组、阿帕替尼组、单纯照射组、阿帕替尼联合照射组。CCK-8法检测不同浓度阿帕替尼(5、10、20、40、80 μmol/L)对细胞增殖的影响;创伤愈合实验和侵袭实验检测阿...     

白杨黄素影响两种胃癌细胞系增殖与凋亡的研究

 目的 研究白杨黄素对两种胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45是否具有抑制作用的分子生物学机制.方法 通过MTT法检测白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定经白杨黄素处理后两种细胞的细胞周期,Westen-blot测定凋亡相关因子Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达水平.结果 白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞具有增殖抑制作用,呈时间浓度依赖性;能够将细胞周期阻滞于Sub G1期;能上调Caspase-3,下调Survivin和Bcl-2的基因表达.结论 白杨黄素能够诱导SGC-7901和MKN-45细胞的凋亡并有效地抑制其增殖.其机制可能与干扰细胞周期及激活Caspase-3,抑制Survivin和Bcl-2有关.     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半胱氨酸（Cys）对人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度（A）值均高于对照组（P〈0.05）,表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组（P〈0.05）,bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用的影响

目的探讨MEK/ERK信号转导通路是否参与了阿魏酸钠（SF）对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用。方法以谷氨酸诱导大鼠皮层神经元凋亡为模型。采用Westernblot观察Bcl-2、caspase-3、磷酸化ERK1/2表达的改变。结果阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞caspase-3的表达,提高Bcl-2、磷酸化ERK1/2的表达。PD98059可以减弱SF的保护作用。结论 MEK/ERK1/2通路参与阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡。