Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞凋亡在慢性肾炎中的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (Ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞凋亡的调控机制及其在慢性肾炎中的作用。方法 :通过人肾小球系膜细胞体外培养 ,采用原位末端标记和DNA凝胶电泳检测低浓度的Ox -LDL (0、 2 5、 5 0、10 0 μg/ml)对系膜细胞凋亡的影响 ,免疫组化维生素E干预前后Ox-LDL对系膜细胞Bax/Bcl- 2表达的影响 ;按血浆LDL水平 ,把有不同程度肾小球硬化的慢性肾炎患者肾标本分为LDL正常组和LDL升高组 ,分别采用DNA原位末端标记和免疫组化 ,检测肾小球细胞凋亡及Bax/Bcl- 2蛋白表达。结果 :低浓度Ox-LDL (0～ 10 0 μg/ml)以剂量依赖方式促进肾小球系膜细胞凋亡 ,并使肾小球系膜细胞Bax的蛋白表达呈时间 -剂量依赖性增加 ,P <0 0 1,Bcl- 2的蛋白表达轻度升高后呈时间 -剂量依赖性下降 ,P <0 0 1,导致Bax/Bcl- 2比值增大 ;维生素E干预后这种变化不明显 ,P >0 0 5。LDL升高组肾小球凋亡和Bax蛋白表达明显增加 ,P <0 0 1;Bcl- 2变化不明显 ,P >0 0 5 ,血LDL水平与肾小球硬化指数、凋亡指数、Bax/Bcl- 2比值有显著正相关关系。结论 :Ox -LDL能诱导肾小球系膜细胞凋亡 ;Bax/Bcl- 2比值上升可能是Ox -LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的重要机制 ;脂质异常可能是导致肾小球硬化中细胞减少的重要原因     

醋酸铅对人肾小球系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(HRMC)凋亡及Caspase-3表达的影响。方法取对数生长期的HRMC,分别采用含0、5、10、20μmol/L醋酸铅的完全培养液培养,于6、12、24、48h后以MTT法检测细胞增殖情况,并于培养24h后采用Hochest33342-PI染色法观测细胞的形态学变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的表达,细胞免疫化学法和Western blotting检测Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组(0μmol/L)相比,5、10、20μmol/L的醋酸铅可不同程度地抑制HRMC的增殖(P<0.01)。Hochest33342-PI染色显示醋酸铅作用后HRMC呈凋亡形态学改变,细胞数量减少,核染色质凝集,核膜破裂。RT-PCR显示醋酸铅作用后Caspase-3 mRNA表达升高。细胞免疫化学和Western blotting检测显示醋酸铅作用后Caspase-3蛋白表达升高。结论醋酸铅可促进人肾小球系膜细胞凋亡,Caspase-3参与了该过程。     

抑制整合素连接激酶（ILK）表达对大鼠肾小球系膜细胞细胞间隙连接蛋白43表达的影响

目的研究抑制整合素连接激酶（ILK）表达对大鼠肾小球系膜细胞（RMC）细胞间隙连接蛋白43（Cx43）表达的影响。方法将大鼠肾小球系膜细胞分为RMC组（n-6）、ILK-consiRNA转染组（n=6）和ILK-siRNA转染组（n=6）。合成抑制ILK基因的siRNA，待细胞长至60％融合后，ILK-siRNA转染组和ILK-con siRNA转染组分别用脂质体转染ILK-siRNA或ILK-con siRNA，RMC组仅加入脂质体，24h后收集细胞，提取总蛋白和总RNA，用RT-PCR和Western blotting观察ILK和Cx43 mRNA和蛋白的表达。转染后继续培养24、48、72h，MTT法检测细胞活力。结果与RMC组和ILK-con siRNA转染组比较，ILK-siRNA组ILK mRNA和蛋白的表达均下降30％-50％（P〈0.05，P〈0.01），Cx43 mRNA水平增加30％-40％（P〈0.05），Cx43蛋白水平增加60％-70％（P〈0.01）。应用ILK-siRNA转染系膜细胞后24、48、72h，细胞活力均显著高于RMC组和ILK-con siRNA转染组（P〈0.05，P〈0.01）。结论抑制ILK途径可上调肾小球系膜细胞Cx43的表达，增强细胞活力；Cx43的调节可能是部分通过ILK途径实现的。     

肾衰宁对肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响

 目的观察中药复方制剂肾衰宁灌肠液(以下简称肾衰宁,SSN)对体外培养的人肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响,冀以从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用双抗夹心ELISA法和放免法,观察SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞产生纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和胶原Ⅵ(Col Ⅳ)的影响.结果肾衰宁灌肠液大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ的抑制率也相应增加.结论肾衰宁对体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ有明显的抑制作用,提示肾衰宁抑制系膜细胞产生细胞外基质是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞细胞问隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞问隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 将大鼠肾小球系膜细胞分为RMC组(n=6)、ILK-con siRNA转染组(n=6)和ILK-siRNA转染组(n=6).合成抑制ILK基因的siRNA,待细胞长至60%融合后,ILK-siRNA转染组和ILK-con sLRNA转染组分别用脂质体转染ILK-siRNA或ILK-con siRNA,RMC组仅加入脂质体,24h后收集细胞,提取总蛋白和总RNA,用RT-PCR和Western blotting观察ILK和Cx43 mRNA和蛋白的表达.转染后继续培养24、48、72h,MTT法检测细胞活力.结果 与RMC组和ILK-con siRNA转染组比较,ILK-siRNA组ILK mR-NA和蛋白的表达均下降30%～50%(P<0.05,P<0.01),Cx43 mRNA水平增加30%～40%(P<0.05),Cx43蛋白水平增加60%～70%(P<0.01).应用ILK-siRNA转染系膜细胞后24、48、72h,细胞活力均显著高于RMC组和ILK-con siRNA转染组(P<0.05,P<0.01).结论 抑制ILK途径可上调肾小球系膜细胞Cx43的表达,增强细胞活力;Cx43的调节可能是部分通过ILK途径实现的.     

凝血酶对肾小球内皮细胞和系膜细胞增殖的影响

凝血酶对肾小球内皮细胞和系膜细胞增殖的影响①１００８５３北京解放军总医院徐启河陈香美傅博关键词凝血酶；内皮；肾小球中国图书资料分类号Ｒ６９２有研究表明，肾小球内凝血过程中的关键酶凝血酶可以促进肾小球系膜细胞〔１〕和上皮细胞〔２〕增殖。尽管肾小球内皮细...     

肾康注射液对高糖培养系膜细胞肥大的影响

目的：观察肾康注射液对高糖培养系膜细胞肥大的影响.方法：将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白对照组、甘露醇组、高糖组、高糖＋缬沙坦组及高糖＋肾康注射液高、中、低剂量组.应用流式细胞术观察细胞大小、周期分布,用[3H]胸腺嘧啶核苷（[3H]TdR）及[3H]亮氨酸（[3H]Leu）掺入法反映细胞DNA及蛋白质合成情况.结果：高糖组系膜细胞G1期比例增高,G2期、S期比例下降,蛋白质合成增加,DNA合成减少,细胞体积增大;肾康注射液组与高糖组比较,细胞周期分布趋于正常,蛋白质合成减少,DNA合成增加,细胞体积减小.结论：肾康注射液可抑制高糖培养系膜细胞的肥大反应.     

高糖促进肾小球系膜细胞纤维连接蛋白合成的实验研究

为观察高糖状态下人类肾小球系膜细胞（GMC）增殖及纤维连接蛋白（FN）合成情况，体外培养GMC，以噻唑蓝掺入法（MTT）和细胞计数观察GMC增殖，用RT－PCR及双抗夹心ELISA方法检测FN的基因及蛋白质水平变化。结果发现，高糖对GMC增殖有抑制作用，对FN的合成呈浓度及作用时间依赖性增高。提示高血糖在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用。     

高糖促进肾小球系膜细胞纤维连接蛋白合成的实验研究

目的 观察高糖状态下肾小球系膜细胞（GMC）增殖及纤维连接蛋白（FN）合成情况。方法 采用体外GMC培养,噻唑蓝（MTT）掺入法和细胞计数观察GMC增殖,用RT－PCR及双抗夹心ELISA方法检测FN的基因及蛋白质水平变化。结果 高糖对GMC增殖有抑制作用,对FN的合成呈浓度及作用时间依赖性增高。结论 高血糖在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用。     

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的 探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法 将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结...     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞PAI-1 基因表达的调节作用及其机制

为探讨血管紧张素Ⅱ与系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物－1（PAI－1）基因表达的关系，从健康成人肾（肾移植配型不合）培养肾小球系膜细胞，经过10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L浓度的血管紧张素Ⅱ刺激后，分别检测系膜细胞血管紧张素ⅡAT1和AT2受体基因表达以及PAI－1基因表达，并测定培养上清中纤溶酶原激活物的活性。结果发现，在血管紧张素Ⅱ刺激下，系膜细胞AT1受体mRNA表达明显增强，而AT2受体的基因表达不论是在正常状态下，还是在血管紧张素Ⅱ刺激后均未检测到；血管紧张素Ⅱ诱导48h后，系膜细胞PAI－1的基因表达显著增强，并呈现浓度依赖性，而培养上清中纤溶酶原激活物的活性则下降。说明血管紧张素Ⅱ能显著促进系膜细胞PAI－1基因的表达，其作用可能是通过AT1受体介导的。     

纤维蛋白诱导活化系膜细胞表达明胶酶A、B的机制研究

为观察纤维蛋白对系膜细胞（HMC）表达明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的作用并探讨其活化机制,应用RT-PCR、明胶酶谱分析法分别在基因转录水平与蛋白质活性水平上检测纤维蛋白对HMC表达MMP-2、MMP-9的作用,采用纤维蛋白酶谱法与平板法检测纤维蛋白对HMC表达纤溶酶原激活物（PA）活性的影响。结果发现,纤维蛋白呈剂量与时间依赖性促进HMC MMP-2与MMP-9表达的上调,并同时促进HMCtPA与uPA的表达;应用抑肽酶阻断纤溶酶活性后能够完全阻断pro-MMP-2与pro-MMP-9的活化。提示肾脏局部沉积的纤维蛋白可以促进HMC表达与活化MMP-2、MMP-9、而MMP-2与MMP-9的活化依赖于PA/纤溶酶系统的调控。     

肿瘤坏死因子α对系膜增生性肾小球肾炎的作用

临床确诊为系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）的１１８例分为轻、中、重３组。从每组中随机抽取８例作为实验组，取３例正常肾组织作为对照组。然后对所选取的２７例进行免疫电镜检查。结果显示：正常及空白对照组肾小球内未见金颗粒，轻度ＭｓＰＧＮ的系膜细胞（ＭＣ）内Ｇｏ、ＲＥＲ附近有少量散在分布的金颗粒；中度ＭｓＰＧＮ增生的ＭＣ内金颗粒数增多，Ｇｏ、ＲＥＲ及Ｌｙ附近与轻度比较有显著性差异（Ｐ＜０００１）；重度ＭｓＰＧＮ增生的ＭＣ内见有大量金颗粒聚集呈团、线状或散在分布，与轻、中度ＭｓＰＧＮ比较均有显著性差异（Ｐ＜０００１）。以上结果表明肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）可由ＭＣ产生，随着病变进展ＴＮＦα在ＭＣ内逐渐增多     

重组人白细胞介素-1β对小鼠骨髓粒系细胞和红系细胞的正负调节作用

为阐明IL-1对粒系细胞和红系细胞的作用,我们通过对小鼠骨髓及外周血的研究探讨了IL-1对粒系和红系造血细胞的调节作用.结果表明:IL-1单剂量腹腔注射后第7天红系造血细胞明显减少,外周血网织红细胞在第8天显著下降.在5～10万U/kg剂量范围内IL-1明显促进粒系细胞的增殖.应用流式细胞仪对DNA分析显示IL-1并不引起全骨髓细胞DNA的变化,但大体积细胞在注射IL-1后第3天S期细胞明显增多.我们的结果表明IL-1抑制红系造血细胞的分化增殖,在适当的剂量范围内促进粒系细胞的增殖和分化成熟.其作用的分子基础是诱导造血细胞的细胞周期变化.     

延肾制剂对系膜细胞产生ICAM-1和VCAM-1的影响

 目的观察中药复方制剂延肾(以下简称延肾制剂,YSH)对重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激后体外培养的人肾小球系膜细胞产生细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion moleculeI,ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(Vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)的影响,冀以从细胞生物学水平探讨延肾防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用双抗夹心ELISA法,分别加入重组rhIL-1β及rhIL-1β+YSH大鼠血清.观察体外培养的人肾小球系膜细胞在rhIL-1β刺激后,ICAM-1和VCAM-1的生成及YSH对ICAM-1和VCAM-1生成的影响.结果 rhIL-1β可明显刺激人肾小球系膜细胞产生ICAM-1和VCAM-1,YSH大鼠血清对rhIL-1β刺激后人肾小球系膜细胞所产生的ICAM-1和VCAM-1有抑制作用,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系.结论延肾对rhIL-1β刺激后肾小球系膜细胞所产生的ICAM-1和VCAM-1有明显的抑制作用,提示YSH抑制系膜细胞自分泌ICAM-1和VCAM-1是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

五重散对C-BSA肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin mRNA、VEGF mRNA表达的影响

目的:观察五重散对阳离子化牛血清蛋白(C-BSA)肾病大鼠肾小球Nephrin mRNA、VEGFmRNA表达的影响.方法:通过多次腹腔注射C-BSA建立C-BSA肾病大鼠模型,将其随机分成五重散高剂量组(TCM1)、低剂量组(TCM2),雷公藤多甙片组(GTW),模型组,并设空白对照组,每组各7只,观察各组24 h尿蛋白定量、血浆蛋白、血脂、肾小球足细胞Nephrin mRNA、VEGF mRNA表达.结果:五重散能减少C-BSA肾病大鼠蛋白尿,与模型组相比(P＜0.01),能够上调Nephrin mRNA 表达和减少VEGFmRNA表达,降低血脂,升高血浆白蛋白.结论:五重散对C-BSA模型大鼠具有明显的治疗作用,表现为减少蛋白尿,改善血脂状况,恢复足细胞相关蛋白的表达及其分布,逆转足细胞病变.     

延肾口服液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生白细胞介素-8的影响

 目的观察具有补气、活血、化浊作用的中药复方延肾口服液(以下简称延肾)对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的影响,从细胞生物学水平探讨延肾防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用MTT比色法和双抗夹心ELISA法,观察延肾大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和IL-8生成的影响.结果脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)可明显刺激人肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8,延肾大鼠血清对LPS刺激后人肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8有抑制作用,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对系膜细胞增殖和产生IL-8的抑制率也相应增加.结论延肾对LPS刺激后肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8有明显的抑制作用,提示延肾抑制系膜细胞增殖和自分泌IL-8是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞及肾组织PD-L1/PD-L2的表达变化

目的 观察系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肾组织活检标本中抑制性协同刺激分子PD-L1/PD-L2表达的变化.方法 收集2007年11月-2008年5月在第三军医大学新桥医院住院的25例原发性系膜增生性肾小球肾炎患者作为病例组,另外选择10例正常人作为正常对照组.全血法多色流式细胞染色技术检测两组的PBMC CD4+和CD8+T细胞上PD-L1和PD-L2的表达水平;免疫组化方法检测肾组织活检标本中PD-L1和PD-L2的表达情况.结果 病例组患者PBMC CD4+ T细胞比例(31.78%±8.48%)明显高于正常对照组(22.17%±8.00%,P<0.05),而CD8+ T细胞比例(23.06%±10.32%)与正常对照组(21.56%±5.32%)比较差异无统计学意义(P>0.05).病例组患者PBMC CD4+和CD8+ T细胞上PD-L1表达阳性率(分别为14.21%±11.87%、12.92%±12.86%)均较正常对照组(分别为5.39%±4.92%、5.06%±4.61%)显著升高(P<0.05);而两组PBMCCD4+及CD8+T细胞上PD-12的表达很少甚至无表达,两组间差异无统计学意义(P>0.05).正常对照组中肾组织PD-L1表达很少甚至无表达,病例组肾小管上皮细胞可见PD-L1阳性表达;两组肾活检组织中均未检测到PD-L2表达.结论 系膜增生性肾小球肾炎患者中抑制性协同刺激分子PD-L1表达上调,可能参与了疾病的免疫发病机制.     

新交泰饮对顺铂肾毒性大鼠TGF-β1表达的影响

目的:观察新交泰饮对顺铂肾毒性大鼠TGF-β1表达的影响,探讨其抗顺铂肾毒性的作用机制.方法:取60只大鼠随机分为5组,空白组、模型组、苯那普利阳性对照组(苯那普利组)、新交泰饮低剂量组(低剂量组)、新交泰饮高剂量组(高剂量组).采用尾静脉注射顺铂5 mg/kg,1 次/w,连续3次的方法复制顺铂肾毒性模型.于第1次注射顺铂当日,各组开始进行相应药物灌胃,6 w后观察大鼠肾组织的病理变化及TGF-β1在肾组织中的表达.结果:各给药组大鼠肾脏的病理变化明显减轻,模型组TGF-β1在肾小管上皮细胞强阳性表达,各给药组TGF-β1的表达明显减弱.结论:新交泰饮能减轻肾脏的病理变化,使TGF-β1在肾组织中的表达明显下调,这可能是本药抗顺铂肾毒性的作用机制之一.