P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失时谷氨酸和γ-氨基丁酸释放中的作用

目的 评价P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失(OGD)时谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)释放中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片和神经元突触体,放入95%O2-5%CO2预充饱和人工脑脊液(aCSF)中35 ℃下孵育30 min后,取大鼠海马脑片96张,随机分为3组(n=32);取大鼠海马神经元突触体72份,随机分为3组(n=24).对照组(C组)于95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育60 min;OGD组于95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中35 ℃下孵育60 min;亮蓝G组(BBG组)于预先加入P2X7受体拮抗剂亮蓝G 1 μmol/L、95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育20 min,随后移至2 ml含亮蓝G l μmol/L、95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中孵育60 min.于OGD即刻、20、40、60 min(T1-4)时,分别随机取海马脑片和神经元突触体各6份,测定Glu和GABA的释放量.各时点分别取海马脑片2张,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马脑片Glu和GABA释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T3-4时海马脑片Glu释放量减少,T4时GABA释放量减少(P＜0.05),病理学损伤减轻.与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马神经元突触体Glu和GABA的释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T2-4时海马神经元突触体GABA释放量差异无统计学意义(P＞0.05),Glu释放量增加(P＜0.05).结论 P2X7受体介导了大鼠海马OGD时Glu和GABA的释放,其中胶质细胞上的P2X7起主导作用.     

浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响

目的 探讨浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,制备脑片.取符合标准的海马脑片32片,随机分为4组(n=8):氧糖缺失组(OGD组)、七氟烷组(Sev组)、浅低温组(MH组)和浅低温+七氟烷组(MH+Sev组).OGD组和MH组分别于37℃或32℃下用经95%N2-5%CO2混合气体饱和的无糖(氧糖缺失)人工脑脊液(ACSF)灌流脑片14 min;Sev组和MH+Sev组分别于37℃或32℃下用预先经4%七氟烷平衡的有氧有糖ACSF灌流脑片14 min,再用预先经4%七氟烷平衡的氧糖缺失ACSF灌流脑片14 min.记录海马CA1区缺氧到复氧1 h期间的顺向群峰电位(OPS).采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与OGD组比较,Sev组和MH组OPS消失时间延长,OPS恢复程度升高,MH组LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与MH组比较,MH+Sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与Sev组比较,MH+sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01).结论 浅低温(32℃)联合4%七氟烷可减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤.     

异丙酚对内毒素诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞P2X7受活化和IL-1β蛋白合成的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞P2X7受体活化和IL-1β蛋白合成的影响.方法 RAW264.7巨噬细胞经1 μmol/L亮蓝G(BBG)或1～100 μmol/L异丙酚孵育20 min,随后经1 μg/ml LPS孵育4 h,采用ELISA法测定IL-1β的释放量,采用Western blot法测定胞内IL-1β前体蛋白和成熟体蛋白含量,并计算异丙酚抑制IL-1β释放的半数有效浓度(IC_(50)).采用全细胞膜片钳记录模式,RAW264.7巨噬细胞经1 mmol/L ATP孵育5s,以诱发P2X7受体门控离子通道电流,分别经1～1 000μmol/L异丙酚孵育4 min后记录电流峰值,计算异丙酚抑制P2X7受体门控离子通道电流峰值的IC_(50).结果 异丙酚可抑制LPS诱导的IL-1β的释放,其IC_(50)为(24±3)μmol/L.异丙酚可抑制P2X7受体门控离子通道电流峰值,其IC_(50)为(33±5)μmol/L.LPS可上调胞内IL-1β前体蛋白表达(P<0.01),而3～100μmol/L异丙酚可抑制LPS介导的胞内IL-1β前体蛋白表达上调.结论 异丙酚抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞IL-1β的释放可能与抑制P2X7受体的活化和胞内IL-1β前体蛋白的合成有关.     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

异氟醚减少离体鼠肝缺氧-复氧损伤

目的研究不同浓度异氟醚对离体鼠肝缺氧-复氧损伤的影响.方法将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林氏碳酸氢盐缓冲液恒压灌流（有氧状态用1.2kPa,缺氧状态用0.2kPa）,维持生理pH值和温度,实时监测灌流液中乳酸脱氢酶（LDH）变化.不同浓度异氟醚随混合气带入人工肺.用细胞色素C还原法测非循环灌流中氧自由基（O2^-）产量.结果（1）异氟醚对基础状态下离体肝LDH释放无明显影响,而对缺氧-复氧后离体肝LDH释放呈剂量依赖性抑制作用.（2）2 MAC异氟醚可明显抑制肝复氧后O2^-产生.结论异氟醚抑制了复氧后LDH升高与抑制复氧即刻O2^-产生密切相关,异氟醚可能通过减少细胞外氧应激,从而保护肝脏免受损伤.     

P物质对高糖孵育心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的：探讨P物质预处理对高糖孵育大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响。方法：分离新生SD大乳鼠心脏为细胞悬液接种于细胞培养板,分别用正常糖和高糖培养基进行孵育,72h后将细胞随机分为5组,分别为正常对照组,高糖对照组,另外三组进行缺氧／复氧（A／R）处理：高糖A／R组,高糖SP＋A／R组和高糖SP＋D—SP＋A／R组。复氧后分别测定细胞凋亡率、缺氧液和复氧液中caspase-3活性以及LDH释放量。结果：高糖和缺氧／复氧均可引起细胞凋亡率增高,缺氧液和复氧液中CasPase-3活性以及LDH释放量均显著升高：SP可降低上述各项指标,且该作用可被NK-1受体拮抗剂（D-SP）逆转。结论：高糖孵育可造成心肌细胞损伤,缺氧／复氧可加剧高糖孵育的大鼠心肌细胞损伤．SP预处理可显著减轻该损伤,且该作用可能由NK-1受体介导。     

异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子生成的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子(ONOO-)生成的影响.方法 培养至活细胞计数大于95%的人脐静脉内皮细胞,随机分为7组(n=5),对照组(C组)不给予任何处理;LOS0.1组、LPS1组和LPS10组分别加入内毒素(LPS)至终浓度为0.1、1和10 μg/ml,于37℃5%CO2培养箱中孵育6 h;P4+LPS10组和P40+LPS10组预先加入异丙酚至终浓度为4、40μg/ml,I40+LPS10组预先加入脂质溶剂Introlipid至终浓度为40 μg/ml,于37℃ 5%CO2培养箱中孵育30 min,再分别加入LPS至终浓度为10μg/ml,于培养箱中继续孵育6 h.孵育6 h时,测定细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放率;采用免疫组化法和Western blot法测定硝基酪氨酸蛋白(NT)表达.结果 与C组比较,其余各组细胞活力降低,内皮细胞NT表达上调,LPS1组、LPS10组、I40+LPS10组、P4+LPS10组和P40+LPS10组LDH释放率升高(P<0.01);与LPS0.1组比较,LPS1组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),LPS10组细胞活力降低,LDH释放率升高,内皮细胞NT表达上调(P<0.01);与LPS10组比较,I40+LPS10组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),P4+LPS10组和P40+LPS10组细胞活力升高,LDH释放率降低,内皮细胞NT表达下调(P<0.01).结论 异丙酚可通过抑制ONOO'-的生成,减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤.     

大麻素受体2在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用

目的 评价大麻素受体2(CB2受体)在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将小胶质细胞随机分为4组:对照组(C组)细胞常规培养26h;小胶质细胞损伤组(Ⅰ组)细胞于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24h;CB2受体特异性激动剂AM1241组细胞于含2 μmol/L AM1241的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24 h;CB2受体特异性拮抗剂AM630组细胞含2 μmol/L AM630的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24h.测定细胞活力和LDH释放量,观察细胞形态学.结果 与C组比较,Ⅰ组、AM1241组和AM630组细胞活力降低,LDH释放量增加(P＜0.05);与Ⅰ组比较,AM1241组细胞活力升高,LDH释放量减少(P＜0.05),AM630组细胞活力和LDH释放量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 谷氨酸通过抑制CB2受体的功能诱发小胶质细胞损伤.     

缺氧后处理和二氮嗪后处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时钙网蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧后处理和二氮嗪后处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时钙网蛋白(CRT)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠,4～5月龄,分离心肌细胞,培养18 h后,随机分为6组(n=8):对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、缺氧后处理组(HP组)和二氮嗪后处理组(DP组).C组细胞于5%CO2培养箱内继续培养2 h;HR组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;HP组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后复氧3 min,缺氧3 min,重复3次,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;DP组细胞于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧45 min,然后给予50 μmol/L二氮嗪处理10 min,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h.测定心肌细胞caspase-3活性、CRT表达和游离钙离子浓度.结果 与C组比较,其余各组caspase-3活性升高,HP组和DP组CRT表达上调,HR组游离钙离子浓度升高(P＜0.05或0.01);与HR组比较,HP组和DP组caspase-3活性降低,CRT表达上调,游离钙离子浓度降低(P＜0.01).结论 缺氧后处理和二氮嗪后处理可上调CRT的表达,减轻细胞内钙超载,减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响

目的 探讨硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响.方法 实验一成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,采用Langendorff装置建立离体心脏灌注模型.取离体灌注模型制备成功的心脏40个,随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和硫氢化钠1、10、100 μmol/L后处理组(SP1组、SP10组、SP100组).平衡灌注20 min后,C组继续灌注K-H液100 min;IR组灌注ST.Thomas停跳液10 ml/kg后停灌40 min,恢复K-H液灌注60 min;SP1组、SP10组、SP100组全心缺血40 min,于再灌注前灌注含1、10、100 μmol/L硫氢化钠的K-H液2 min,然后恢复K-H液灌注60 min.于平衡灌注末和再灌注60 min时,记录左室发展压(LVDP)、左心室发展压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室发展压最大下降速率(-dp/dtmax).实验二成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,分离心肌细胞,加入培养皿中,放入95%O2-5%CO2培养箱中培养4 h.取64皿细胞,随机分为4组(n=16):对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、硫化氢后处理组(SP组)和缺氧后处理组(HP组).C组继续于95%O2-5%CO2培养箱中培养2 h;HR组于95%N3-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;SP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,加入硫氢化钠10μmol/L孵育2 min,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;HP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后复氧3 min,缺氧3 min,重复3次,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h.测定线粒体膜电位和F-肌动蛋白的表达.结果 实验一与C组比较,再灌注60 min时IR组LVDP和±dp/dp/dtmax降低(P＜0.05),SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax升高(P＜0.05);SP1组、SP10组和SP100组间LVDP和±dp/dtmax比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验二与C组比较,HR组和HP组线粒体膜电位降低,HR组、SP组和HP组F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);与HR组比较,SP组和HP组线粒体膜电位升高,F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);SP组和HP组间线粒体膜电位和F-肌动蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论硫化氢后处理可改善大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能,与其稳定心肌细胞线粒体膜电位和促进F-肌动蛋白聚集有关.     

Nrf2/NLRP3信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用

目的评价核因子E2相关因子2/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/NLRP3)信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用。方法原代培养孕16～18 d Wistar大鼠胎鼠海马神经元7 d, 采用随机数字表法分为4组(n=42):对照组(C组)正常培养;氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)氧糖剥夺1 h后复糖复氧;丙泊酚后处理组(P组)复糖复氧即刻加入丙泊酚(终浓度1.2 μg/ml)孵育2 h, 更换为正常培养液;Nrf2 siRNA(-)转染组(N组)原代神经元培养第3天行携带Nrf2基因敲除的慢病毒转染, 24 h后更换为正常培养液, 第7天进行模型制备及丙泊酚后处理。于继续培养24 h时收集细胞, 采用流式细胞术检测神经元凋亡率, RT-PCR法检测Nrf2和NLRP3 mRNA表达, Western blot法检测Nrf2和NLRP3表达, ELISA法测定TNF-α、IL-6和IL-1β浓度;试剂盒法检测还原性谷胱甘肽(GSH)、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与C组比较, O组和P组神经元凋亡率升高, TNF-α、IL-6和IL-1β浓...     

PEP-1-血红素加氧酶-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨PEP-1-血红素加氧酶(HO)-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 构建含人HO-1基因的原核表达质粒pETl5b-PEP1-hHO-1,质粒转化后诱导目的 蛋白PEP-1-HO-1表达.用含15%胎牛血清高糖DMEM培养基培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=4):正常对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)细胞缺氧22 h,复氧8 h;低浓度融合蛋白组(L-HO组)缺氧前用终浓度为1.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞;高浓度融合蛋白组(H-HO组)缺氧前即刻用终浓度为2.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞.复氧结束后收集细胞及培养液上清,采用2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸比色法检测细胞MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性.结果 与C组比较,H/R组、L-HO组、H-HO组心肌细胞SOD活性降低,MDA含量升高,培养液LDH活性升高(P＜0.05);与H/R组比较,L-HO组和H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05);与L-HO组比较,H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05).结论 PEP-1-HO-1融合蛋白转导入大鼠H9c2心肌细胞可减轻细胞缺氧复氧损伤.     

吗啡预处理对小鼠海马脑片氧-糖缺失/恢复时CaMKⅡ和NMDA受体的影响

目的 评价吗啡预处理对小鼠海马脑片氧-糖缺失，恢复时钙，钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）膜转位及N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体磷酸化的影响。方法成年BALB／C小鼠，体重18-22g，雌雄不拘。每次将5只小鼠同批断头取脑，制备海马脑片，随机分为5组：正常对照组（Ⅰ组）、氧．糖缺失，恢复组（Ⅱ组）、吗啡预处理组（Ⅲ组）、纳络酮＋吗啡预处理组（Ⅳ组）及纳络酮预处理组（Ⅴ组）。Ⅰ组脑片正常体外培养，假操作换液。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠海马脑片分别作相应预处理30min，间隔30min。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组建立小鼠海马脑片体外缺血再灌注损伤模型，分别氧-糖缺失20min，氧-糖恢复2h。各组于氧．糖缺失前即刻（T0）、氧-糖缺失20min（T1）、氧-糖恢复1h（T2）和2h（T3）取若干脑片匀浆、超声粉碎、离心，分离胞浆蛋白和膜相关蛋白；部分脑片分离总蛋白，Western blot检测CaMKⅡα蛋白表达量以及NMDA受体NR1亚单位的磷酸化。结果 海马脑片在T1、T2．T3时，CaMKⅡα膜相关蛋白含量增多。同时胞浆蛋白含量减少（P〈0．05）；T2、T3时，NMDA受体NR1亚单位磷酸化水平增高（P〈0．05）；而吗啡预处理明显地抑制上述CaMKⅡα膜转位及NMDA受体NR1亚单位磷酸化（P〈0．05）。纳络酮完全阻断吗啡预处理对CaMKⅡα膜转位及NR1磷酸化的抑制作用（P〈0．05）。CaMKⅡα总蛋白表达水平未见明显变化。结论 CaMKⅡ膜转位的抑制及NMDA受体磷酸化的抑制在吗啡预处理对小鼠海马脑片缺血再灌注的脑保护作用机制中起重要作用。     

吗啡预处理减轻小鼠海马神经元氧-糖缺失/恢复损伤的影响因素

目的 探讨吗啡预处理减轻小鼠海马神经元氧-糖缺失/恢复损伤的影响因素(剂量和作用时间窗).方法 急性分离小鼠海马组织,制备脑片,行4部分实验,实验Ⅰ:应用吗啡0.1、0.3、0.5、1.0、3.0、10.0 μmol/L孵育脑片30 min,再常规培养30 min,缺氧无糖20 min,复氧复糖2 h.实验Ⅱ:应用吗啡3.0 μmol/L孵育脑片5、15、30、45、60 min,再常规培养30 min,缺氧无糖20 min,复氧复糖2 h.实验Ⅲ:应用吗啡3.0 μmol/L孵育脑片30 min,再常规培养即刻、5、15、30、60、120 min时行缺氧无糖20 min,复氧复糖2 h.实验Ⅳ:应用蛋白激酶C(PKC)非特异性抑制剂白屈菜赤碱10 μmol/L、选择性新奇型PKCε(nPKCε)抑制剂εVI.2 2 μmol/L、特异性钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂AIP 2 μmol/L、N.甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体特异性阻断剂MK-801 10 μmol/L孵育脑片30 min,再与吗啡3.0 μmol,L共同孵育30 min,常规培养30 min,缺氧无糖20 min,复氧复糖2 h.计算神经元存活率.结果 与氧-糖缺失/恢复组比较,吗啡0.5、1.0、3.0、10.0 μmol/L预处理组、吗啡预处理15、30、45、60 min组、吗啡预处理后常规培养即刻、5、15、30、60 min组神经元存活率升高(P<0.05).PKC、nPKGt、CaMKⅡ抑制剂和NMDA受体阻断剂可部分抑制吗啡预处理升高神经元存活率的作用.结论 有效减轻小鼠海马神经元氧-糖缺失,恢复损伤的吗啡预处理方式为:浓度0.5～1.0 μmol/L,持续时间15～60 min,间隔时间小于60 min;其保护作用可能部分依赖于PKC、nPKCε、CaMKⅡ的活化和NMDA受体的激活.     

活性氧在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用

目的 评价活性氧(ROS)在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,符合标准的40片海马脑片随机分为4组(n=10):氧糖缺失组(OGD组)、4%七氟醚预处理组(Sevo组)、ROS清除剂组(MPG组)和4%七氟醚预处理+ROS清除剂组(SM组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区缺氧期间和复氧1 h期间的顺向群锋电位(OPS);采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TYC)染色定量比色法分析脑片损伤程度.结果 与OGD组相比,Sevo组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率均升高,组织损伤百分率降低(P<0.01);与Sevo组相比,MPG组和SM组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率降低,组织损伤百分率升高(P相似文献   

吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖时PKCε膜转位的影响

目的 探讨吗啡预处理对小鼠海马脑片氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)时蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位的影响.方法 成年近交系BALB/C小鼠40只,体重18～22 g,雌雄不拘,制备海马脑片,将脑片置入无糖无氧的人工脑脊液中,培养20 min后再置于正常人工脑脊液(nACSF)中培养(复氧复糖)2h,以建立小鼠海马脑片OGD/R模型.脑片随机分为5组(n=40),对照组(C组):在nACSF中培养4 h;吗啡预处理组(M组):在含吗啡3μmol/L的nACSF中孵育30 min后用nACSF洗脱,随后制备OGD/R模型;纳洛酮+吗啡预处理组(N+M组):在含纳洛酮50 μmol/L的nACSF中孵育30 min后,加入吗啡至3 μmol/L,孵育30 min,随后制备OGD/R模型;纳洛酮组(N组):在含纳洛酮50μmol/L的nACSF中孵育1h,随后制备OGD/R模型;OGD/R组:制备OGD/R模型.于脑片OGD/R期间测定PKCε膜转位情况和神经元存活情况.结果 与C组比较,其余各组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05或0.01);与OGD/R组比较,M组神经元存活率升高,膜相关蛋白中PKCε表达下调,胞溶蛋白中PKCε表达上调(P＜0.05),N+M组和N组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,N+M组神经元存活率降低,膜相关蛋白中PKCε表达上调,胞溶蛋白中PKCε表达下调(P＜0.05).结论 吗啡预处理诱导小鼠海马脑片缺血耐受的机制可能与抑制PKCε膜转位有关.     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

吸入不同浓度一氧化碳对大鼠脑死亡致肺损伤的影响

目的 评价吸入不同浓度一氧化碳(CO)对大鼠脑死亡(BD)致肺损伤的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组(n=8),假手术组(S组)向大鼠颅内置入Fogarty导管,吸入40%O2 150 min;BD组、C1组和C2组向大鼠颅内置入Fogarty导管,通过膨胀导管前端球囊诱导BD,膨胀球囊30 min后确认BD情况.发生BD后BD组吸入40%O2 120min,C1组和C2组分别吸入40%O2+0.025%CO和40%O2+0.050%CO混合气120 min.于麻醉前(基础状态)、吸入CO前即刻、吸入CO 30、60、90和120 min时采集动脉血样,进行动脉血气分析.吸入CO 120 min时采集动脉血样,测定血浆IL-6和TNF-α浓度;采集血样后,处死大鼠,取肺组织,测定髓过氧化物酶(MPO)活性;计算肺组织湿/干重比(W/D比),并进行肺组织损伤评分(LIS评分).结果 与S组比较,BD组、C1组和C2组PaO2/FiO2、BE和pH值降低,血浆IL-6和TNF-α的浓度、MPO活性、肺组织W/D比和LIS评分升高(P＜0.05);与BD组比较,C1组和C2组PaO2/FiO2、BE和pH值升高,血浆IL-6和TNF-α的浓度、MPO活性、肺组织W/D比和LIS评分降低(P＜0.05);与C1组比较,C2组血浆IL-6和TNF-α的浓度降低(P＜0.05),血气分析指标、MPO活性、肺组织W/D比和LIS评分差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吸入0.025%和0.050%CO减轻大鼠BD致肺损伤的效应无差异.     

N受体α4β2亚型在异氟醚抑制大鼠海马突触长时程增强中的作用

目的 评价海马神经元N受体α4β2亚型在异氟醚抑制大鼠海马突触长时程增强(LTP)中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,取海马组织,制备海马脑片.取70张脑片,随机分为10组(n=7):各组用正常人工脑脊液(aCSF)灌流海马脑片,记录稳定正常的细胞外群峰电位(PS)30 min,LTP组继续给予正常的aCSF灌流,其余各组分别用含异氟醚0.125 mmol/L(I1组)、0.25 mmol/L(I2组)、0.5 mmol/L(I3组)、地棘蛙素0.1 mmol/L(E1组)、1.0 μmol/L(E2组)、地棘蛙素0.1 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(E1+I2组)、地棘蛙素1.0 μmol/L+异氟醚0.25 mmol/L(E2+I2组)、双氢β-刺酮碱(DHβE)0.1μmol/L(D组)、DHβE0.1μmol/L+异氟醚0.125 mmol/L(D+I1组)的aCSF灌流.采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外PS 30 min后,施以高频强直刺激(HFS)15 min,诱发LTP,记录各组HFS结束后5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时的PS幅值.结果 与LTP组比较,I1.2.3组、D组、D+I1组、E1+I2组HFS后PS幅值降低,E1.2组HFS后PS幅值升高(P＜0.05),E2+I2组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05).与I1组比较,D+I1组HFS后PS幅值降低(P＜0.05).与I2组比较,E1+I2组、E2+I2组HFS后PS幅值升高(P＜0.01).结论 异氟醚通过拮抗海马神经元N受体α4β2亚型从而抑制了突触LTP的形成.     

七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2表达的影响:在体和离体实验

目的 通过在体和离体实验评价七氟醚预处理对小鼠心肌缺血再灌注时环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 在体实验健康成年小鼠54只,体重约250 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):对照组(C组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(SP组).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注的方法制备心肌缺血再灌注模型.SP组小鼠吸入2.0％七氟醚,15min/次,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理后90 min制备心肌缺血再灌注模型.再灌注6、9h时,取心肌组织分别采用Western blot法测定COX-2表达,采用分光光度法测定心肌caspase-3的活性.再灌注24h时测定左室舒张末压(LVEDP).细胞实验采用随机数字表法,将H9C2细胞随机分为3组,每组6皿:对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和七氟醚预处理组(SP组).H9C2细胞置于95％N2+ 5％CO2培养箱中孵育14 h后,置于95％O2+ 5％CO2培养箱中孵育3h,建立缺氧复氧模型.SP组H9C2细胞培养基中加入2.0 mmol/L七氟醚,每次孵育15 min,共3次,间隔15 min.七氟醚预处理结束后15 min建立缺氧复氧模型.复氧3h时采用Western blot法测定细胞COX-2的表达水平,采用比色法测定上清液和细胞裂解液LDH活性,计算LDH释放量.结果 在体实验:与C组比较,I/R组和SP组LVEDP升高,心肌组织caspase-3活性增强,COX-2表达上调(P＜0.01);与I/R组比较,SP组LVEDP降低,心肌组织caspase-3活性减弱,COX-2表达下调(P＜0.01).细胞实验结果:与C组比较,H/R组和SP组H9C2细胞COX-2表达上调,LDH释放量增加(P＜0.01);与H/R组比较,SP组H9C2细胞COX-2表达下调,LDH释放量减少(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可通过直接下调心肌COX-2的表达,抑制细胞凋亡减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤.