人剪切修复基因XPD对肝癌细胞中p8/TTDA基因的调控作用

目的 探讨人剪切修复基因XPD对p8/TTDA基因的调控作用.方法 用pEGFP-N2/XPD重组质粒、pEGFP-N2空载质粒分别稳定转染人肝癌细胞SMMC-7721,并用具有相同遗传背景和代数的SMMC-7721细胞作为空白对照.用RT-PCR、Western blot法检测转染前后p8、XPD、p53、c-myc表达量的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖活力.结果 (1)RT-PCR检测示:p8 mRNA在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的,稳定转染野生型XPD后,p8 mRNA和XPD mRNA表达量明显增高(P<0.001).稳定转染重组质粒细胞组p53 mRNA表达量亦明显增高(P<0.05),c-myc mRNA表达量则明显下降(P<0.001).(2)Western blot法检测示:p8蛋白在人肝癌细胞SMMC-7721是低表达的.稳定转染野生型XPD后,p8蛋白、XPD蛋白、p53蛋白表达量明显增高(P<0.05),c-myc蛋白表达量则明显下降,差异有统计学意义(P<0.001).(3)MTT检测示:稳定转染重组质粒细胞组细胞增殖率明显减弱(P<0.001).结论 人剪切修复基因XPD可调控p8/TTDA基因的表达.野生型XPD转染后亦可上调p53表达,下调c-myc表达,从而在分子途径上抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡.     

聚酯型儿茶素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的:探讨聚酯型儿茶素对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及其机制。方法:应用MTT法、集落形成试验、同位素掺入试验、细胞内cAMP/cGMP浓度测定、原位杂交等方法进行检测。结果:50mg·L~(-1)聚酯型儿茶素对SMMC-7721细胞的生长、集落形成有明显的抑制作用;~3H-TdR、~3H-Leu掺入试验证明其可明显抑制细胞DNA和蛋白质合成;聚酯型儿茶素作用后,SMMC-7721细胞内cAMP及cGMP浓度明显增加,细胞的c-myc基因mRNA水平表达明显降低,而p53基因mRNA水平表达明显升高。结论:聚酯型儿茶素对肝癌SMMC-7721细胞的生长有明显的抑制作用,此作用与其抑制细胞DNA和蛋白质合成、升高细胞内cAMP浓度和抑制c-myc基因表达、增强p53基因表达有关。     

白毛藤多糖抑制人卵巢癌细胞增殖作用及其机制研究

目的：探讨白毛藤中多糖成分对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。方法：将不同浓度白毛藤多糖作用SKOV3细胞后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因mRNA表达量的变化,荧光显微镜检测细胞凋亡情况。结果：白毛藤多糖明显抑制SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制bcl-2表达,上调caspase-3表达。结论：白毛藤多糖能通过激活caspase-3、抑制bcl-2表达从而抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡达到抗癌的目的。     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中Ki67的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC-7721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0．05）,Ki67表达水平下调（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论EGCG可能通过增加细胞凋亡,抑制Ki67表达达到抗癌作用。     

白毛藤诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究白毛藤水提液抑制BGC-823细胞增殖及诱导其细胞凋亡情况及其机制。方法不同浓度白毛藤水提液作用于BGC-823细胞,荧光显微镜观察BGC-823细胞凋亡情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果白毛藤水提液具有抑制BGC-823细胞增殖活性,能诱导BGC-823细胞凋亡,上调Fas基因、降低Bcl-2基因mRNA的表达,实验组与对照组比较有显著性差异（P〈0.01）。结论白毛藤具有抑制胃癌细胞增殖活性,能促进BGC-823细胞凋亡,其机制可能与调控Fas基因、Bcl-2基因表达有关。     

中药抗癌灵对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的观察中药抗癌灵(Kangailing,Ka)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响并探讨其可能分子机制。方法提取、配制不同抗癌灵生药浓度,作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪法检测凋亡率,二步法免疫组化检测野生型P53、NF-кB P65和Bcl-2蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,Ka各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01或P<0.001),P53蛋白表达显著上升(P<0.001),NF-кB和Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.001)。结论Ka通过诱导细胞凋亡而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,其分子机制可能与上调野生型P53蛋白表达,下调NF-кB P65和Bcl-2蛋白表达有关。     

苦参素注射液联合顺铂对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其机制

目的 探讨苦参素注射液(matrine injection,MI)联合顺铂(cisplatin,DDP)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布,半定量RT-PCR法检测c-myc mRNA表达,二步法免疫组化检测c-Myc、P27和CyclinD1蛋白表达.结果 MI、DDP单独应用均对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制作用(P＜0.01或P＜0.05),联合用药具有协同效应.与单药组相比,联合用药组的细胞抑制率显著上升(P ＜0.0 5或P＜0.01),G0/G1期细胞比例显著升高(P＜0.05),S期细胞比例明显减少(P＜0.05),P27表达显著上升(P＜0.05),c-myc mR NA和蛋白、CyclinD1表达显著降低(P＜0.05).结论 MI联合DDP具有明显的协同抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,使细胞周期阻滞于G0/G1期,其机制可能与上调P27、下调c-myc基因和CyclinD1表达有关.     

三七提取液对SMMC-7721细胞Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:研究三七提取液体外抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及对凋亡调控基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:不同浓度的三七提取液作用于体外培养的SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞的抑制率;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;以蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax和蛋白水平的表达情况.结果:三七提取液对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,且具有明显的时间和剂量相关性.细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐步增高.三七提取液作用后细胞内Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平均升高,二者的变化趋势均呈一定的时间依赖关系.结论:三七提取液能够显著抑制人肝癌细胞增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bax的表达及下调Bcl-2的表达有关.     

蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响。方法 CCK-8法检测SMMC-7721细胞活力;DCFH-DA染色法检测SMMC-7721细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;荧光染色法观察SMMC-7721细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡率。结果 蟾酥注射液明显抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,作用24、48和72h后,半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.60±0.01、2.00±0.10和1.57±0.17μg/L;ROS检测结果显示不同浓度药物处理组细胞内ROS水平与对照组比较均明显升高(P=0.000);荧光染色观察到药物处理组细胞的绿色荧光随药物浓度增加而变强,红色荧光反而逐渐变弱;流式细胞术检测出SMMC-7721细胞经低、中、高浓度蟾酥注射液处理48h后,总凋亡率分别为17.33%±3.20%、25.60%±1.05%和35.76%±4.72%,与对照组比较,总凋亡率明显增加,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 蟾酥注射液能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并诱导7721细胞凋亡。该凋亡可能与蟾酥注射液引起SMMC-7721细胞ROS水平增加、线粒体损伤以及膜电位下降有关。     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

氧化苦参碱抑制SMMC-7721细胞增殖的研究

目的 研究不同浓度氧化苦参碱对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。方法SMMC-7721细胞经不同浓度氧化苦参碱处理后,用MTT法检测细胞生长和增殖,用流式细胞仪技术检测细胞DNA分布。结果氧化苦参碱浓度>2.5mg/ml,细胞毒作用较大;浓度在0.1～2.5mg/ml时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度<0.1mg/ml,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。氧化苦参碱作用后可增加G0/G1期细胞所占的百分比,阻止细胞进入S期。2.5mg/ml氧化苦参碱作用于SMMC-7721细胞3d,可观察到凋亡峰。结论 一定浓度的氧化苦参碱有抑制SMMC-7721细胞增殖的作用。     

丹皮酚增强顺铂对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用

目的探讨丹皮酚和顺铂联合应用对人肝癌细胞SMMC07721的增殖抑制作用。方法用不同浓度的丹皮酚、顺铂和两药联用处理人肝癌细胞SMMC-7721,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定药物在体外对人肝癌SMMC07721细胞的增殖抑制作用,应用两药相互作用指数（CDI）进行联合用药分析。结果丹皮酚（7．81-250mg／L）和顺铂（0．625～20mg／L）单独应用均对人肝癌SMMC-7721细胞有抑制作用,呈现剂量效应关系。丹皮酚与顺铂联合应用后对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制率明显大于单药,有显著的协同杀伤作用。结论丹皮酚与顺铂联合应用具有明显的协同抗肝癌细胞株SMMC-7721增殖的作用。     

原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用

目的探讨葡萄籽提取物原花青素（PA）对人肝癌细胞SMMC-7721细胞的诱导分化作用。方法用不同剂量的PA与SMMC27721细胞共同培养,以MTT法检测细胞增殖和PA对细胞增殖的抑制作用;镜下观察细胞形态改变;采用RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白mRNA表达,金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果 PA在20～60μg/ml的浓度范围均能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度的增加而增高（P〈0.05）,细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转,40μg/ml和60μg/ml的PA均可使细胞甲胎蛋白mRNA表达量明显下降,碱性磷酸酶活性明显升高。结论 PA对人肝癌SMMC27721细胞具有抗增殖和促分化作用。     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

白英水提物对胃癌细胞凋亡与Notch1信号通路的影响

目的：观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响。方法：常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中Notch1、caspase-9基因表达。结果：与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多（P〈0.05）,Notch1基因表达呈显著性的下降（P〈0.05）、caspase-9基因表达有明显的上调（P〈0.05）,并随白英浓度增加而加强。结论：白英水提物能下调人胃癌SGC-7901细胞中Notch1信号蛋白表达和促进细胞凋亡,这可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。     

5-FU、HCPT诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的观察两种传统抗癌药5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,从细胞凋亡的角度探讨其抗癌机制,为它们的临床应用提供实验依据。方法用不同浓度的5-FU(2.5、5、7.5、15、25 mg/L)和HCPT(0.25、0.5、1、1.5、2 mg/L)分别干预人肝癌SMMC-7721细胞生长,采用倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电镜和DNA凝胶电泳方法观察培养不同时间(12、24、48、72 h)人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,并比较两种药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果。结果5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,产生最高凋亡率的作用时间均为48 h,最佳浓度分别为7.5、1 mg/L,最高凋亡率分别为38.7%、42.6%,5-FU、HCPT两种药物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,小剂量的5-FU、HCPT有望作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗。     

雷公藤甲素增强5-FU对肝癌细胞SMMC7721诱导凋亡作用的实验研究

目的 观察雷公藤甲素(triptolide,TPL)、5-FU对肝癌细胞SMMC 7721增殖及凋亡的影响;探讨TPL能否增强5-FU对SMMC 7721细胞的诱导凋亡作用.方法 SMMC 7721细胞置于RPMI-1640培养液+10%胎牛血清中培养;MTT法测定5-FU、TPL对SMMC 7721细胞的增殖抑制效果...     

扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

目的 探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用.方法 MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响;Elisa法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)生成;流式细胞法检测扶正消瘤汤对人肝瘤细胞SMMC-7721凋亡的影响;免疫组化法测定bcl-2和bax表达.结果 扶正消瘤汤100 μg/ml、50μg/ml剂量组在12～84 h对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,24～48h对SMMC-7721细胞TNF-α生成均有明显的促进作用,对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用,并随浓度和时间(24～72h)的增加凋亡率增加,活细胞减少;扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用,浓度越大上调越明显.扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用,其中高剂量组与模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 扶正消瘤汤对肿瘤的治疗作用的机制可能与促进TNF-α生成有关,并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关.     

外源性神经节苷脂GM_3对人肝癌细胞生长的抑制作用

为了解神经节苷脂（ＧＭ_３）是通过何种途径来调节细胞生长的。运用ＲＮＡ和蛋白质含量的测定及免疫组化法，结果发现：ＧＭ_３（１０ｍｇ／Ｌ）可明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞增殖，抑制率达到２８．８１％；同时能降低细胞内平均ＲＮＡ和蛋白质含量，以ＧＭ_３处理细胞３ｄ时最为明显。ＧＭ_３能使ｃ－ｆｏｓ蛋白量在短时间内剧增，ＧＭ_３处理３０ｍｉｎ时增加了２．８５倍；而ｃ－ｍｙｃ蛋白量在短时间内明显减少，ＧＭ_３处理４５ｍｉｎ时抑制率达到８１．３１％。以上结果提示ＣＭ_３抑制细胞增殖可能与抑制ＲＮＡ、蛋白质合成及影响某些癌蛋白的表达有关。     

猫人参注射液体外抗肝癌实验研究

目的:观察单味猫人参注射液在体外对肝癌细胞的抑制作用.方法:噻唑蓝还原法(MTT法)检测猫人参注射液对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721、小鼠肝癌细胞株H22、大鼠肝癌细胞株CBRH-7919的生长抑制作用.结果:体外实验结果表明:250mg/ml浓度猫人参注射液对H22、CBRH-7919、SMMC-7721肝癌细胞株均有抑制作用,抑制率分别63.68%、41.51%、32.92%,IC50分别为:107.70mg/ml、519.49mg/ml、667.56mg/ml;在24h,48h,72h三个时相,对小鼠H22肝癌细胞的生长抑制作用存在较明显的时效关系,在72h内16.88mg/ml～250mg/ml浓度内药物浓度与抑制作用有正相关趋势,其相关系数为0.91.结论:猫人参注射液对不同肝癌细胞株有一定的抑制作用.