ATRA在卵巢癌细胞HO8910增殖中的作用

目的:探讨全反式维甲酸在人卵巢癌细胞生长和增殖中的作用机制.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910在体外进行培养,培养时添加不同浓度的全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA),作用24 h、48 h、72 h后,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析;采用RT-PCR法检测维甲酸α受体(retinoic acid receptorα,RARα)mRNA的表达.结果:不同浓度的全反式维甲酸对HO8910细胞生长均起到抑制作用(P＜0.05),并呈浓度和时间依赖关系;能够增加G1期细胞比例,同时降低S、G2/M期细胞比例(P＜0.05),细胞增殖指数PI(P＜0.05)降低;能够上调维甲酸α受体mRNA的表达(P＜0.05),从而抑制卵巢癌细胞增殖.结论:说明全反式维甲酸对卵巢癌细胞HO8910的增殖具有显著的抑制作用,其机制可能是通过上调维甲酸α受体mRNA的表达来实现的.     

1，25-二羟维生素 D3对白血病6T-CEM细胞株作用的体外研究

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2 D3]对人白血病6T-CEM细胞株凋亡及维生素D受体（VDR）蛋白表达的影响。方法在体外用不同浓度的1,25（OH）2 D3作用于6T-CEM。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色法（TUNEL）检测细胞晚期凋亡的变化,免疫细胞化学法检测VDR蛋白表达。结果不同浓度的1,25（OH）2 D3作用后可促进6T-CEM 细胞的凋亡,呈剂量和时间依赖性（P ＜0．05）。1,25（OH）2 D3作用前后6T-CEM细胞均表达VDR蛋白,药物作用后VDR蛋白表达上调。结论1,25（OH）2 D3在一定浓度范围内可诱导6T-CEM细胞凋亡,使VDR蛋白表达上调。     

1,25-二羟维生素D3及其类似物对免疫系统的调节作用

1,25-二羟维生素D3是维生素D的活性形式,是一种第二类固醇类激素,和维生素D受体（VDR）结合发挥作用。VDR是核受体超家族中的一员,这一核受体超家族还包括类固醇激素受体,甲状腺激素受体和维甲酸受体。1,25-二羟维生素D3调节钙磷代谢,控制细胞的增殖和分化,产生免疫调节作用。对1,25-二羟维生素D3及其类似物功能研究的进展和免疫调节机制的新认识,提示它们在治疗自身免疫性疾病和诱导同种异体移植耐受上可有广泛的应用。1,25-二羟维生素D3及其类似物除了直接作用于T细胞外,还通过各种机制调节抗原呈递细胞的表型和功能,尤其是树突细胞。体内和体外实验都已证明1,25-二羟维生素D3及其类似物诱导树突细胞获得致耐受性,这一特性可被用于人类自身免疫性疾病及同种异体移植排斥的治疗。作者就1,25-二羟维生素D3及其类似物功能研究的新进展和免疫调节机制的新认识作一综述。     

维甲酸和1，25二羟维生素D3对LoVo细胞株细胞周期的影响

【目的】观察全反式维甲酸 (ATRA)和 1,2 5 二羟维生素D3 对大肠癌细胞株LoVo细胞周期的影响。【方法】流式细胞术测定细胞周期的分布。【结果】ATAR和 1,2 5 二羟维生素D3 使LoVo阻止在G0 /G1期 ,未发现明显的亚G1峰。【结论】单独或联合使用ATRA和 1,2 5 二羟维生素D3 均具有诱导分化LoVo细胞的作用 ,这种诱导分化与细胞凋亡无关。     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

摘要：目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901 细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-α
mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞
仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果1,25(OH)2D3对胃癌
SGC-7901细胞增殖有抑制作用（P<0.05）,并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动
力学改变（F=9.81,P<0.05）。TNF-α mRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少（P<0.05）。结论1,25(OH)2D3可抑制胃癌
细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。
     

1,25-二羟维生素D3联合塞莱昔布对乳腺癌细胞株Hs578T生长及凋亡的影响

目的 研究1,25-二羟维生素D3[1.25(OH)2D3]联合塞莱昔布对乳腺癌细胞株Hs578T生长、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用四唑氮蓝比色(MTT)法检测细胞增生,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率.结果 1,25(OH)2D3及塞莱昔布均可抑制乳腺癌细胞增生,诱导细胞凋亡,呈时间与剂量依赖性.当联合塞莱昔布时抑瘤率较1,25(OH)2D3单药具有叠加作用,但低于塞莱昔布单药.10-8mol/L联合塞莱昔布组抑瘤率高于10-7mol/L联合塞莱昔布组.结论 1,25(OH)2D3及塞莱昔布可成为新一类乳腺癌预防、治疗药物.     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法:1,25-二羟维生素D3作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期。结果:1,25-二羟维生素D3作用后胃腺癌细胞生长受抑制,细胞集落形成率明显下降(P<0.05);处理48 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。结论:1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有抑制增殖、诱导分化作用。     

1,25二羟维生素D3靶控VDRE-ERα表达载体对MDA-MB-231细胞周期的影响

目的探讨1,25二羟维生素D1靶控的雌激素受体α表达载体（VDRE—Tk—ERα）对雌激素受体阴性的MDA—MB-231乳腺癌细胞周期进程的影响及其机制。方法利用MTT法检测1,25二羟维生素D,联合他莫两芬对转染VDRE—Tk—ERα表达载体的MDA—MB-231细胞增殖能力的影响,通过流式细胞仪法检测1,25二羟维生素D,联合他莫西芬对转染该表达质粒的MDA—MB-231细胞周期相的分布。用RT—PCR、Westernblot和免疫沉淀法检测细胞Rh及其磷酸化水平、CyclinD1、CDK4的表达以及CyclinD1／CDK4激酶复合物的结合力变化。结果1,25二羟维生素D,联合他莫西芬能够有效抑制转染该质粒的MDA—MB-231细胞的增殖活性并将其细胞周期进程阻遏于G0／G1期。与此同时,CyclinD．的表达则显著降低,其与CDK4的结合力亦显著降低。Rb的表达虽无显著变化,但其磷酸化水平显著下降。结论1,25二羟维生素D3可通过靶控MDA—MB-231细胞内外源性雌激素受体α的表达进而对G．／S期相关分子的表达和活性进行调控从而阻止雌激素受体α阴性的乳腺癌细胞的周期进程并恢复对他莫两芬的化疗敏感性。     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-αmRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 1,25(OH)2D3对胃癌SGC-7901细胞增殖有抑制作用(P<0.05),并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动力学改变(F=9.81,P<0.05)。TNF-αmRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可抑制胃癌细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。     

1,25（OH）2D3抑制高糖致大鼠肾脏系膜细胞肥大的机制研究

目的 观察1,25（OH）2D3能否抑制高糖导致的大鼠肾小球系膜细胞（RMC）肥大,并探讨其可能的作用机制.方法 将体外培养的RMC分为正常对照组、等渗对照组、高糖组、单纯1,25（OH）2D3组、等渗＋1,25（OH）2D3组及高糖＋1,25 （OH）2D3组.1,25（OH）2D3浓度为10-2mol/L,培养48 h,检测各组细胞总蛋白/细胞数比值,流式细胞仪检测各组前向角光强度（FSC）,并采用Western blot检测各组维生素D受体（VDR）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核蛋白S6激酶（p70S6K）、延长因子4E结合蛋白（4EBP1）的表达情况.结果 高糖＋1,25（OH）2D3组与高糖组比较,FSC降低（530.7±15.6 vs.509.0±35.0,P＜ 0.05）、总蛋白/细胞数比值降低（41.5±1.7 vs.49.9±1.1,P＜0.05）;Western blot半定量灰度分析显示,高糖组较正常对照组VDR下调,mTOR及p70S6K的蛋白水平上调（P＜0.05）;高糖＋1,25（OH）2D3组较高糖组mTOR及p70S6K的蛋白水平均下调（P＜0.05）.结论 1,25（OH）2D3可逆转高糖导致的RMC肥大,其机制可能是通过抑制mTOR及其下游信号通路,减少了蛋白质的合成.     

全反式维甲酸、1,25二羟维生素D3对白血病细胞株SHI-1中几种糖基转移酶mRNA表达的影响

目的探讨在全反式维甲酸（ATRA）、1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]的作用下,白血病细胞株SHI-1中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAcTs）和某些N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnTs）表达的变化。方法应用RT-PCR法研究在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3作用下,白血病细胞株SHI-1中ppGalNAcTs、GnTs表达的变化。结果在SHI-1细胞株中,随着1,25-（OH）2D3浓度（10^-8～10-^6mol/L）的增加,ppGalNAcT1和T2表达增加,T3表达没有变化,T4表达减少;加入ATRA（10^-8～10^-6mol/L）后,细胞株中ppGalNAcT2、β6GnTV、O-GnT表达量升高。结论白血病细胞株SHI-1ppGalNAcTs各型表达水平不同;在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3的作用下,白血病细胞株SHI-1中各型ppGalNAcTs表达变化也不同。在SHI-1细胞株加入ATRA后细胞中β2GnTI、β6GnTV发生显著变化。ppGal-NAcT1、ppGalNAcT2、GnTs与白血病细胞株的分化可能有一定关系。     

1,25-（OH）2D3对1型糖尿病小鼠主要脏器的保护作用

目的研究1,25-（OH）2D3对1型糖尿病（T1DM）小鼠的作用及可能机制。方法 40 mg/kg STZ腹腔注射C57BL/6小鼠连续5 d建立T1DM模型,5μg/kg 1,25-（OH）2D3隔日腹腔注射,监测血糖、体质量、饮水及饲料消耗,分析各脏器的病理及超微结构。结果 1,25-（OH）2D3治疗14 d后,T1DM小鼠的血糖、饮食、饮水量显著下降（均P〈0.05）;1,25-（OH）2D3可减轻胰岛炎症状及各脏器的超微结构病变,诱导淋巴细胞的凋亡,并在胰腺中可见典型自噬现象。结论 1,25-（OH）2D3可诱导胰腺细胞的自噬,同时诱导淋巴细胞凋亡,从而减轻T1DM症状。     

1,25二羟维生素D3联合塞来昔布抑制乳腺癌生长及VEGF表达研究

目的 研究1,25二羟维生素[1,25（OH）2D3]联合塞来昔布对裸鼠人乳腺癌模型中肿瘤细胞增殖与血管内皮生长因子（VEGF）的影响.方法 54只裸鼠人乳腺癌模型（HS578T）随机分成9组,A组：生理盐水组（0.2 ml/只）;B组：阿霉素组（1.75 mg/kg,5 d）;C组：塞莱昔布组（30 mg/kg）;D组：低剂量1,25（OH）2D3组（0.4 μg/kg）;E组：中等剂量1,25（OH）2D3组（0.8 μg/kg）;F组：高剂量1,25（OH）2D3组（1.6 μg/kg）.G组：塞莱昔布（30 mg/kg）联合低剂量1,25（OH）2D3（0.4 μg/kg）组;H组：塞莱昔布（30 mg/kg）联合中等剂量1,25（OH）2D3（0.8 μg/kg）组;I组：塞莱昔布（30 mg/kg）联合高剂量1,25（OH）2D3（1.6 μg/kg）.观察肿瘤大小,计算抑瘤率,免疫组化方法检测VEGF、环氧化酶-2（COX-2）、维生素受体（VDR）.结果 1,25（OH）2D3、塞莱昔布均能抑制裸鼠乳腺癌转移瘤肿瘤生长,两者联合显著提高对裸鼠转移瘤的抑制率.A组、B组、C组、D组、E组、F组、G组、H组、I组肿瘤体积分别为：（1 756.52±254.80）、（563.63±100.65）、（1 000.10±180.07）、（1 175.47±91.27）、（1 107.63±209.18）、（980.74±163.22）、（927.27±172.54）、（881.81±127.22）和（636.36±109.42）mm3.各组瘤体抑瘤率分别为69.52%、44.80%、36.04%、39.71%、46.62%、49.51%、53.23%和65.32%,各剂量组与A组差异有统计学意义（P〈0.05）,两药联合组较两药各自单药组均明显提高抑瘤作用.1,25（OH）2D3对VEGF的表达有抑制作用;对VDR的表达也有上调作用（P〈0.05）;塞莱昔布对VEGF、COX-2表达明显抑制（P〈0.05）;两药联合明显抑制VEGF、COX-2的表达（P〈0.05）,且抑制作用较单药得以增强,两药联合可以明显上调VDR的表达（P〈0.05）.结论 1,25（OH）2D3可抑制裸鼠乳腺癌的生长,作用呈剂量依耐性,联合塞莱昔布可增强抑制作用,两药联合增加了对血管内皮生长因子的抑制作用,1,25（OH）2D3联合塞来昔布的协同作用可能意味着新的临床治疗策略.     

1,25(OH)_2D_3联合顺铂对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp_2/P27蛋白表达的影响

的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与顺铂联合对人卵巢癌细胞株HO8910的增殖抑制情况,并测定二者作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)及肿瘤抑制基因p27的蛋白表达情况,进一步探讨它们的作用机制.方法 用四唑盐(MTT)比色法测定1,25(OH)2D3、顺铂及二者联合对HO8910细胞株作用后细胞增殖情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫细胞化学染色检测Skp2及P27蛋白表达情况.结果 与对照组(未用药)相比,1,25(OH)2D3和顺铂作用下细胞吸光度(OD)减少,细胞增殖受到抑制(P<0.01),二者联用时此作用增强,二者作用下G0/G1期细胞增多,Skp2表达减少、P27蛋白表达增多(P<0.01).结论 1,25(OH)2D3有加强顺铂抑制肿瘤细胞增殖的作用,二者均可能通过下调Skpz表达、上调P27蛋白表达,从而抑制癌细胞增殖.     

血清1，25-（OH）2VitD3与钙磷水平在COPD中的临床意义

目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平变化及其与肺功能、体重指数（BMI）的相关性,探讨其与病情严重程度及预后的关系。方法：随机选取COPD患者、健康对照者各30例,分别测定COPD急性加重期、稳定期及对照组的血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平,并测定肺功能（FEV1、FEV1／FVC）及BMI等指标。结果：COPD患者急性加重期、稳定期血清1,25-（OH）2VitD3及钙磷水平较对照组明显降低,其中各组血清1,25-（OH）2VitD3、钙水平差别有统计学意义（P〈0．01）,而血清磷水平于急性加重期和稳定期、急性加重期和对照组比较差别有统计学意义（P〈0．01）;急性加重期和对照组中,血清1,25-（OH）2VitD3水平与BMI、肺功能指标成正相关,血清钙水平与BMI成正相关。结论：COPD患者不论急性加重期还是稳定期血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平均较对照组明显降低,并和病情严重程度相关,影响预后,对临床治疗有一定指导意义。     

1α,25-（OH）2D3对大鼠成骨细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究1a,25-（OH）2D3对SD大鼠成骨细胞增殖及相关蛋白的表达的影响。方法采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期,RT-PCR和Westernblotting分别检测细胞G。期调节蛋白细胞周期素D1（cyclinD1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）、p21mRNA和蛋白的表达。结果与0nmol·L-1组比较,各1d,25-（OH）2D3干预组细胞周期发生改变,G0／G1期细胞数递减,而S＋G2/M期细胞比例升高,PI增加,差异显著（P〈0．05）;且1a,25-（OH）2D3可诱导细胞cyclinDl、CDK4mRNA及蛋白表达和下调p21（P〈0．05）。结论置1d,25-（OH）2D3可上调cyclinD1、CDK4表达和抑制负性调节因子p21,调节相关蛋白表达以促进成骨细胞增殖。     

纠正继发性甲状旁腺功能亢进对维持性血液透析患者心脏结构和功能的影响

目的探讨应用活性维生素D3纠正继发性甲状旁腺功能亢进（SHPT）对维持性血液透析（MHD）患者心脏结构和功能的影响。方法56例MHD患者均符合SHPT诊断标准,采用低钙透析液稳定透析3个月以上,随机分为A组（29例）和B组（27例）,测定血钙（Ca）、磷（P）、甲状旁腺素（iPTH）。A组每日午饭中嚼服碳酸钙600mg,B组在此基础上服用活性维生素D3,2～3μg／周,分2～3次于透析后当晚口服,二组连续用药12个月,当Ca〉10．2mg／dl或Ca×P≥55mg2／dl2调节药物剂量。分别于实验开始前及6个月、12个月行心脏多普勒超声检查。结果于实验6个月、12个月后,B组iPTH平均值较A组下降明显（P〈0．05,P〈0．01）。心脏结构和功能比较,治疗前左室肥厚（LVH）、射血分数（EF）,舒张早期和舒张晚期二尖瓣口最大血流速度之比（E／A）等指标二组之间羔异无统计学意义（P〉0．05）,治疗6个月、12个月后,A组上速各指标无明显变化（P〉0．05,P〉0．05）,B组随治疗时间的延长上述指标明显好转,差异有统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）。结论活性维生素D3不仅可以减轻MHD患者SHPT,而且有助于改善SHPT患者的心脏结构和功能。     

哮喘儿血清1，25-二羟维生素D3与IL-10水平及肺功能的相关性研究

目的通过探讨哮喘患儿血清1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25（OH）2D2]与白细胞介素-10浓度（interleukin-10,IL-10）及肺功能的关系,为治疗哮喘患儿提供临床理论依据。方法设36例健康体检儿童为对照组,92例确诊为哮喘的患儿为哮喘组,根据病情程度分为间歇状态（12例）、轻度持续（18例）、中度持续（33例）、重度持续（29例）4个级别;用酶联免疫分析（ELIsA）法检测两组血清中1,25（OH）2D2和IL-10的含量;哮喘组肺功能的评价指标为呼气峰流速（PEF）和第1秒用力呼气容积（FEV1）。结果哮喘组血清中1,25（0H）2D2和IL-10的含量均显著低于对照组（均P〈O．05）;除间歇状态级与轻度持续级患儿在1,25（0H）2D3、IL-10和PEF指标比较差异无统计学意义外,1,25（0H）2D3、IL-IO和PEF、FEV-在不同程度的哮喘（轻度持续、中度持续、重度持续）之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;1,25（OH）2D3与IL-10、PEF和FEV1均呈正相关（P〈0．05）。结论哮喘患儿血清1,25（0H）2D3和IL-10水平较健康儿童低,1,25（OH）2D3可以促进IL-10水平提高,改善肺功能。     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.