非小细胞肺癌中FHIT基因及HER2表达的意义及相关性研究

目的探讨在非小细胞肺癌中脆性组氨酸三联体（FHIT）基因及人类表皮生长因子受体2（HE如）表达与临床病理的关系，以及二者在非小细胞肺癌中的相关性。方法用免疫组化法检测50例肺癌组织及21例癌旁非肺癌组织的FHIT基因及HE如阳性表达率。结果肺癌组织中FHIT蛋白表达阳性率为30．00％，显著低于非肺癌组织的80．95％（P〈0．05），而且FHIT基因的表达与组织类型、淋巴结转移、TNM临床分期有关。肺癌中存在HE如的过度表达，表达率为56．00％，并与淋巴结转移、TNM分期相关。FHIT基因的表达与HE如存在负相关关系，相关系数（r）=-0．38。结论在肺癌的发生、浸润、转移病变阶段中存在FHIT的表达下调和HE如的过度表达，二者呈负相关。     

非小细胞肺癌中FHIT基因及HER2表达的意义及相关性研究

目的 探讨在非小细胞肺癌中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因及人类表皮生长因子受体2(HER2)表达与临床病理的关系,以及二者在非小细胞肺癌中的相关性.方法 用免疫组化法检测50例肺癌组织及21例癌旁非肺癌组织的FHIT基因及HER2阳性表达率.结果 肺癌组织中FHIT蛋白表达阳性率为30.00%,显著低于非肺癌组织的80.95%(P＜0.05),而且FHIT基因的表达与组织类型、淋巴结转移、TNM临床分期有关.肺癌中存在HER2的过度表达,表达率为56.00%,并与淋巴结转移、TNM分期相关.FHIT基因的表达与HER2存在负相关关系,相关系数(r)=-0.38.结论 在肺癌的发生、浸润、转移病变阶段中存在FHIT的表达下调和HER2的过度表达,二者呈负相关.     

FHIT mRNA表达与结直肠癌新辅助化疗疗效的相关性

目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)mRNA表达与结直肠癌新辅助化疗疗效的相关性。方法检测51例局部进展期结直肠癌患者术前FHITmRNA表达和细胞凋亡指数(AI),观察2个周期FOLFOX-4方案新辅助化疗后FHITmRNA和AI的变化。结果化疗后结直肠癌组织中AI为9.58±3.21,显著高于化疗前6.24±2.38,P<0.01;化疗前FHIT mRNA高表达患者化疗前后平均AI差值为4.57±1.13,显著高于FHIT mRNA低表达患者的2.74±0.45,P<0.01;化疗前后结直肠癌组织中FHITmRNA表达差异无统计学意义。结论新辅助化疗可明显促进结直肠癌细胞的凋亡,FHITmRNA的表达水平与新辅助化疗疗效具有显著的相关性,FHIT mRNA的表达水平有可能成为进展期结直肠癌化疗疗效的预测指标。     

FHIT和HIF-1α在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)和缺氧诱导因子(HIF-1α)在子宫内膜异位症中的表达。方法:应用免疫组化SP法检测30例子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜及30例同期单纯子宫肌瘤患者子宫内膜(对照组)中FHIT和HIF-1α的蛋白的表达。结果:FHIT在正常子宫内膜、在位子宫内膜、异位子宫内膜中的阳性表达率逐渐降低(χ2=28.865,P<0.000 1),在内异症r-AFS分期中比较,在位子宫内膜FHIT的表达差异无统计学意义(χ2=2.337,P=0.341);而异位内膜中的FHIT表达差异有统计学意义,Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期(χ2=6.816,P=0.019)。HIF-1α在正常子宫内膜、在位子宫内膜、异位子宫内膜中的阳性表达率逐渐升高(χ2=55.798,P=0.000),在内异症r-AFS分期中比较,HIF-1α在在位内膜和异位内膜的表达差异均无统计学意义(χ2=0.867,P=1.000;χ2=2.049,P=0.583);FHIT与HIF-1α在内异症中表达有相关性,FHIT与HIF-1α的表达水平在在位内膜中呈显著负相关(r=-0.443,P=0.014);FHIT与HIF-1α的表达水平在异位内膜中呈显著负相关(r=-0.462,P=0.010)。结论:FHIT与HIF-1α可能共同促进了内异症的发生、发展。     

不同温度热疗对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨不同温度热疗对体外培养肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响. 方法 采用水浴对肝癌HepG2细胞行43℃、46℃、48℃、50℃实验组和37℃对照组热疗,用倒置显微镜观察热疗后24 h的细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖水平,流式细胞仪测定细胞凋亡和坏死率. 结果 46℃、48℃、50℃与43℃、37℃比较,细胞增殖明显受抑制,24、48、72、96 h分别为54.9%、78.0%、82.0%、65.2%、80.3%、87.7%、72.3%、87.5%、91.0%、82.7%、91.3%、92.8%(P<0.05).而43℃细胞增殖抑制不明显(P>0.05).46℃组的细胞凋亡率最高为34.17%±1.75%,与其它各组之间差异有统计学意义(P<0.01),50℃组的细胞坏死率最高为57.36%±4.07%,各组之间差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 46℃及以上的热疗能够明显抑制HepG2细胞的增殖,引起明显的细胞凋亡与坏死.     

FHIT蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生发展中的表达及意义

目的:探讨子宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈鳞癌组织中FHIT蛋白的异常表达及意义。方法:采用免疫组化Powervision法检测40例正常宫颈组织、50例CIN及41例宫颈浸润鳞癌标本中FHIT蛋白的表达情况。结果:①FHIT蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的低表达率分别为7.50%、34.00%、68.29%,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。②FHIT蛋白在CINⅠ及CINⅡ～Ⅲ中的低表达率分别为12.50%和44.12%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。③FHIT蛋白在宫颈鳞癌不同临床分期中的低表达率分别为58.82%和100.00%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。④FHIT蛋白在伴有淋巴结转移者与无淋巴结转移者中的低表达率分别为87.50%和52.00%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:①FHIT蛋白在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌中随着宫颈病变的进展其阳性表达呈明显减少趋势,提示FHIT可作为临床监测CIN转归的分子生物学指标。②FHIT蛋白的表达与宫颈鳞癌、淋巴结转移及临床分期相关,提示它可作为预测宫颈鳞癌患者预后的参考依据。     

叶酸对脆性组氨酸三联体基因表达的影响及对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨叶酸对脆性组氨酸三联体（FHIT）基因DNA甲基化、mRNA与蛋白表达以及宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 采取体外细胞实验方法,对两种宫颈癌细胞C33A（HPV阴性）与CaSk（iHPV16阳性）进行不同浓度叶酸干预,用活细胞计数和流式细胞术分别测定宫颈癌细胞的增殖和凋亡情况,采用甲基化特异性PCR（MSP）法测定FHIT基因启动子区CpG 甲基化状态,利用 Western blot 和 Real-time PCR 方法分别检测 FHIT 基因蛋白和 mRNA 的表达水平。结果 不同浓度叶酸对两种宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。随着叶酸浓度增加,抑制增殖率逐渐上升（C33A：r＝0.98,P<0.001;CaSki：r＝0.98,P<0.001）,细胞凋亡率升高（C33A：r＝0.98,P<0.001;CaSki：r＝0.99,P<0.001）。C33A与CaSki两种细胞在叶酸浓度为1 μg/ml和10 μg/ml时均呈现FHIT基因DNA甲基化阳性,100 μg/ml和250 μg/ml显示为部分阳性,500 μg/ml和1 000 μg/ml时均呈甲基化阴性。不同叶酸浓度组与对照组相比,两种细胞FHIT 基因的 mRNA 和蛋白相对表达量的差异均有统计学意义,随叶酸浓度的升高,FHIT mRNA（C33A：r＝0.96,P<0.001;CaSki：r＝0.94,P<0.001）及蛋白（C33A：r＝0.96,P<0.001;CaSki：r＝0.97,P<0.001）的表达量均呈上升趋势。结论 较高浓度叶酸可降低 FHIT 抑癌基因的 DNA 甲基化水平,逆转其在转录和功能水平的异常表达,对抑制宫颈癌细胞增殖、促进凋亡具有不可忽视的作用。     

FHIT基因与宫颈癌研究的新进展

脆性组氨酸三联体基因定位于人3号染色体短臂(3p14.2)上,许多研究表明其表达改变与人类多种肿瘤疾病关系密切。其失活机制主要表现为启动子区域CPG岛甲基化、缺失及异常转录,其抑癌作用可能与细胞凋亡、细胞周期阻滞二腺苷三磷酸水解酶等有关。脆性组氨酸三联体基因在宫颈癌早期即有频繁缺失和异常表达,提示该基因在宫颈癌的发生发展中起关键作用。该文重点综述有关脆性组氨酸三联体基因的分子生物学研究新进展以及在宫颈癌诊治方面的意义。     

裙带菜多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:检测裙带菜多糖(UPPS)对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡和抗肿瘤作用的关系。方法:采用MTT法、流式细胞术检测UPPS对HepG-2细胞生长的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用;采用免疫细胞化学染色,观察Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果:UPPS能抑制HepG-2细胞增殖,明显高于对照组(P<0.01)。诱导细胞凋亡作用发生在UPPS处理24～48h;UPPS处理HepG-2细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:UPPS对HepG-2的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的,可能与Bcl-2和Bax表达水平的变化有关。     

曲古抑菌素A与5-氟尿嘧啶协同对肝癌细胞HepG2的抑制作用

[目的]研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与曲古抑菌素A(TSA)单独及联合应用对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,并初步探讨其与NF-κBp65和AKT表达的关系。[方法]以MTT法观察5-FU或(和)TSA对HepG2细胞生长的影响,Hoechst染色法分析细胞凋亡情况,Westernblot检测NF-κBp65和AKT蛋白表达水平的变化。[结果]与对照组相比,5-FU与TSA均可导致处理的细胞增殖速度减慢,且抑制效应随药物剂量的增加而增强,两药联合应用可明显增强其抑制作用,促进HepG2细胞凋亡,并降低NF-κBp65和AKT蛋白的表达(P﹤0.01)。[结论]TSA和5-FU联合应用可能通过协同调控下调NF-κBp65与AKT蛋白表达而抑制HepG2细胞的增殖。     

二氧化硒诱导的正常肝细胞株及肝癌细胞株的凋亡

目的 :　研究中毒剂量二氧化硒 ( Se O2 )对正常肝细胞 HL- 770 2及肝癌细胞 SMMC-772 1的影响。方法 :　用流式细胞术观察不同浓度硒对两种细胞的损伤作用及对两种细胞 Bcl- 2 ,P5 3蛋白表达的影响。结果 :　 30 μmol/L的硒作用 48h可以明显抑制正常肝细胞株 HL- 770 2及肝癌细胞株 SMMC- 772 1的增生与活力 ,诱导两种细胞的凋亡 ,且两种细胞伴随着不同程度的 Bcl-2蛋白的下调及 P5 3蛋白的上调。结论 :　中毒剂量的 Se O2 诱导正常肝细胞 HL- 770 2和肝癌细胞 SMMC- 772 1的凋亡 ,且这种诱导凋亡作用是无选择性的 ,但两种细胞调亡的机制有一定区别。     

植酸对人肝癌细胞株HepG_2细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法以体外培养人肝癌细胞株HepG2为研究对象,应用流式细胞仪检测不同浓度IP6作用24h后对HepG2周期的影响;以免疫细胞化学法检测IP6对细胞周期相关蛋白cyclinD1、Rb、P27表达的影响;RT-PCR法检测IP6对HepG2细胞cyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果经IP6作用处理的HepG2细胞的细胞周期发生G1期阻滞。免疫细胞化学结果显示:与对照组比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1蛋白的表达(F=225.02,q=15.20-25.35,P<0.05),上调Rb(F=63.31,q=2.77-13.06,P<0.05)、P27蛋白的表达(F=254.75,q=4.71-25.71,P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组相比,各IP6浓度组均能抑制cyclinD1(F=672.34,q=16.41-41.99,P<0.05)和CDK4 mRNA(F=108.35,q=5.32-16.27,P<0.05)的表达。结论 IP6对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用。其机制可能是IP6降低cyclinD1、CDK4水平,上调Rb、P27蛋白的水平而作用于G1-S限制点,使HepG2细胞周期发生G1期阻滞,从而起到抑制细胞增殖的作用。     

三联脆组基因在外阴癌和外阴尖锐湿疣中的表达

目的：探讨三联脆组（FHIT）基因在外阴癌和外阴尖锐湿疣中的表达及其意义.方法：应用免疫组化SP法检测30例外阴鳞癌、30例外阴尖锐湿疠、15例正常外阴皮肤组织中FHIT蛋白的表达情况.结果：FHIT蛋白在正常外阴上皮、外阴尖锐湿疣、外阴鳞癌中的阳性表达率分别为100%.（15/15）、53.33%（16/30）和20%（6/30）,外阴尖锐湿疣和外阴鳞癌中FHIT蛋白的阳性表达率较正常外阴上皮明显降低（P＜0.05）,外阴鳞癌中FHIT蛋白的低表达与外阴癌的组织分化和临床分期均无关系（P＞0.05）.结论：1.FHIT基因异常表达与外阴鳞癌的发生发展有关.2.外阴尖锐湿疣可能是外阴鳞癌的前期病变.     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

COX-2及凋亡基因表达在二十二碳六烯酸抑制人胰腺癌细胞体外增殖中的变化

目的研究COX-2和凋亡相关基因Bcl-2、Bax在二十二碳六烯酸(DHA)抑制人胰腺癌细胞体外增殖中表达的变化,探讨DHA抑制肿瘤细胞的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、流式细胞技术对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及肿瘤相关蛋白COX-2和凋亡基因Bcl-2、Bax进行分析。结果DHA能以时间-剂量依赖关系抑制人胰腺癌细胞增殖,同时诱导细胞凋亡。DHA对正常人成纤维细胞的增殖无明显影响。流式细胞仪检测显示:G0-G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降。DHA作用24h后,胰腺癌细胞的COX-2、Bcl-2、Bax蛋白表达下降。结论DHA下凋COX-2、Bcl-2、Bax的表达可能是其抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制之一。     

亚硒酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及hTERT表达的影响

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株生长、凋亡和hTERT表达的作用及相关机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24、48、72、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901细胞形态的影响;MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞细胞的凋亡的影响;链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)免疫细胞化学法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERT蛋白表达的影响。结果 (1)MTT法结果显示:用亚硒酸钠培养SGC-7901细胞株24,48,72,96h后,随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h后当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L时,与对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01),48、96h后各浓度亚硒酸钠组与正常对照组比其吸光度值均明显降低(P<0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长抑制率逐渐增加。(2)流式细胞仪检测结果显示:亚硒酸钠可促进SGC-7901细胞发生细胞凋亡。5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组比正常对照组凋亡率明显升高(P<0.01)。(3)免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可降低SGC-7901细胞中hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5、8μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),48h时0.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),72h时2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),96h时实验组与对照组比较MOD均明显降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

海兔素对人乳腺癌细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察海兔素(aplysin)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用,以及对二甲基苯蒽(DMBA)诱导乳腺癌大鼠肿瘤组织中VEGF表达的抑制作用。方法用MTT法和ELISA法分别检测海兔素对MCF-7细胞增殖及VEGF表达的影响。用免疫组织化学法检测海兔素对DMBA诱导的大鼠乳腺癌组织中VEGF的影响。结果海兔素体外对MCF-7细胞有明显的增殖抑制作用,并伴随VEGF表达水平下降。体内可有效抑制大鼠乳腺癌组织中VEGF的表达,且与海兔素浓度有关。结论海兔素体外对MCF-7细胞具有明显的细胞毒作用并能抑制其VEGF的表达,体内可有效抑制乳腺癌组织中VEGF的表达。     

靶向Survivin的shRNA表达载体的构建和对宫颈癌Caski细胞Survivin表达的影响

[目的]探讨RNA干扰对Caski细胞Survivin基因表达的抑制作用. [方法]构建针对Survivin基因编码区和非编码区的两对短发夹状RNA真核表达载体,分别命名为pGenSurl、pGenSur2.以脂质体介导的转染方法将其导入宫颈癌Caski细胞株,采用荧光定量RT-PCR和western blot检测转染后24、48、72 h Survivin基因mRNA和蛋白质表达水平. [结果]成功构建Survivin基因shRNA真核表达载体pGenSur1、pGenSur2.与野生型Caski细胞、阴性对照相比,Caski/pGenSur1细胞和Caski/pGenSur2细胞中Survivin mRNA和蛋白表达随着干扰时间增加有显著性减少(P<0.01),72h到达最低值,mRNA抑制效率分别达到63.3%±1.44%和79.7%±2.12%,蛋白抑制效率达到64.2%±2.02%和79.4%±1.77%. [结论]靶向Survivin的shRNA质粒载体均可显著抑制宫颈癌Caski细胞内源Survivin的mRNA和蛋白的表达(P<0.01).     

微囊藻毒素-LR对睾丸支持细胞活性及凋亡基因表达的影响

[目的]研究微囊藻毒素-LR对睾丸支持细胞活性的影响及其对细胞凋亡相关基因表达的影响. [方法]分离纯化大鼠睾丸支持细胞,用低剂量(0～500×10-3 μg/ml)和高剂量(1～20 μg/ml)微囊藻度素-LR染毒细胞,细胞培养24 h、48 h和72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和中性红吸收(NR)实验检测微囊藻毒素-LR对支持细胞活性的影响;将纯化后的部分睾丸支持细胞接种于6孔板中,给予不同剂量的微囊藻毒素-LR (0,1,10μg/ml),于24h和48 h后提取细胞总RNA,RT-PCR方法检测细胞中凋亡相关基因P53、bax和bcl-2表达水平.[结果]低剂量(0～500×10-3 μg/ml)微囊藻毒素-LR作用于支持细胞24、48、72 h,细胞活性增强.高剂量微囊藻毒素-LR(10和20μg/ml)作用24、48 h,细胞活性显著降低.时闻效应实验结果显示随着暴露时间的延长细胞活性降低.细胞暴露于1 μg/ml微囊藻毒素-LR后与对照组细胞相比较P53和bcl-2 mRNA水平相对表达量增加,bax表达量降低.暴露予10 μg/ml微囊藻毒素-LR后P53和bax mRNA水平相对表达增加,bcl-2表达降低.[结论]低剂量的微囊藻毒素-LR对 细胞具有兴奋效应,随着剂量的增高及暴露时间的延长微囊藻毒素-LR能够明显抑制细胞活性.同时微囊藻毒素-LR可通过P53、bax和bcl-2基因的表达影响睾丸支持细胞的凋亡.