曲古抑菌素A与5-氟尿嘧啶协同对肝癌细胞HepG2的抑制作用

[目的]研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与曲古抑菌素A(TSA)单独及联合应用对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,并初步探讨其与NF-κBp65和AKT表达的关系。[方法]以MTT法观察5-FU或(和)TSA对HepG2细胞生长的影响,Hoechst染色法分析细胞凋亡情况,Westernblot检测NF-κBp65和AKT蛋白表达水平的变化。[结果]与对照组相比,5-FU与TSA均可导致处理的细胞增殖速度减慢,且抑制效应随药物剂量的增加而增强,两药联合应用可明显增强其抑制作用,促进HepG2细胞凋亡,并降低NF-κBp65和AKT蛋白的表达(P﹤0.01)。[结论]TSA和5-FU联合应用可能通过协同调控下调NF-κBp65与AKT蛋白表达而抑制HepG2细胞的增殖。     

PPARγ的配体罗格列酮诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的] 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体罗格列酮(RSG)对肝癌细胞凋亡的影响.[方法] 体外培养人肝癌HepG2细胞,将HepG2细胞分为对照组和RSG不同浓度(25、50.100、200 μmol·L-1)加药组.应用流式细胞仪检测RSG不同浓度对肝癌细胞ItepG2凋亡率的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;实时荧光定量PCR方法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达变化;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax、PPARγ的蛋白表达. [结果] 流式细胞仪和荧光染色法显示RSG诱导肝癌HepG2细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;RSG干预后,Bcl-2的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达下调,Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达均上调. [结论] .RSG依赖激活PPARy能在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是通过下调抗凋亡基因Bcl-2表达以及上调促凋亡基因Bax而实现的,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点.     

PDCD5在大鼠心肌缺血-再灌注心律失常中的作用机制初探

[目的]初步探讨程序化细胞死亡因子5(programmed cell death5,PDCD5)在大鼠心肌缺血再灌注(Is-chemia reperfusion,I/R)损伤中的作用。[方法]采用冠脉结扎-再松开的方法建立大鼠心肌I/R模型;记录Ⅱ导联心电图,对心律失常进行评分;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测心肌PDCD5mRNA表达;Western blot法检测PDCD5蛋白表达。[结果]心肌I/R后,心肌细胞凋亡明显增加(P﹤0.01),心肌PDCD5mRNA及蛋白水平显著增高(P﹤0.01)。[结论]PDCD5基因参与了心肌I/R损伤后的心肌细胞凋亡过程,可能是I/R损伤心律失常发生的机制之一。     

抑制自噬基因Beclin 1的表达对耐药卵巢癌细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响及相关机制研究

[目的]观察抑制自噬基因Beclin1的表达对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响并探讨其中机制。[方法]利用脂质体将自噬基因Beclin1RNA干扰质粒pSUPER-Beclin1和对照质粒pSUPER-non分别转染耐药卵巢癌细胞A2780/DDP,筛选稳定表达株,检测顺铂作用下各组细胞(pSUPER-Beclin1组、pSUPER-non组和未转染组)生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)、自噬和凋亡率的变化。[结果]A2780/DDP细胞转染干扰质粒pSUPER-Be-clin1后,细胞内Beclin1蛋白的表达明显下降;比较3组细胞顺铂48hIC50,pSUPER-Beclin1转染组最低(P﹤0.01);对3组细胞自噬与凋亡水平的检测显示,抑制Beclin1蛋白表达,在顺铂作用下,细胞自噬水平明显下降,而凋亡细胞比例明显升高,凋亡蛋白Caspase-3的表达亦明显上调,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]抑制耐药细胞A2780/DDP自噬基因Beclin1的表达,可通过抑制自噬,增强凋亡提高耐药细胞对顺铂的敏感性。     

COX-2抑制剂NS-398对肝癌HepG2细胞凋亡蛋白Bcl-2和Caspase 3表达的影响

目的探讨选择性环氧合酶2(COX-2)抑制在肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法用选择性COX-2抑制剂NS-398处理HepG2细胞,流式细胞术测定细胞凋亡和半胱氨酸酶3(Caspase3)活性变化;Western blotting法检测不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase3表达变化。结果流式细胞术显示NS-398(0、100、200、300、400μmol/L)作用HepG2细胞24h后,对照组未见凋亡峰,各试验组(100、200、300、400μmol/L)出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%、(60.22±2.03)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01),不同浓度NS-398处理后Bcl-2表达下降,Caspase3表达增加,随着NS-398处理浓度的增加,表达活性Caspase3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%、(63.40±0.69)%,呈明显剂量依赖性(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过下调Bcl-2蛋白表达活化Caspase3,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,COX-2抑制也许可作为新的肝癌的治疗方法。     

柠檬酸镱诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用及蛋白质表达变化研究

目的 研究稀土配合物柠檬酸镱([YbCit2]3-)诱导人肝癌HepG2细胞株凋亡的作用及其机制.方法 用DMEM培养基培养人肝癌细胞株HepG2细胞,以DMEM无血清培养细胞为对照组,以0.01～5.00 mmol/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,应用四噻唑蓝(MTT)法检测[YbCit2]3-对HepG2细胞生长的影响;以2.00 mmoL/L[YbCit2]3-无血清培养基培养组为处理组,Hoechst 33258染色法考察[YbCit2]3-对细胞的作用,采用差异蛋白质组学及H2O2、线粒体膜电位检测的方法研究[YbCit2]3-对HepG2细胞作用的可能机制.结果 2.00～5.00 mmol/L浓度范围内处理72 h,[YbCit2]3-能抑制HepG2细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)值为(2.46 ±0.23)mmol/L.2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理HepG2细胞48、72 h,Hoechst 33258染色检测表明其作用是诱导HepG2细胞凋亡.HepG2细胞经2.00 mmol/L[YbCit2]3-处理72 h后,通过双向电泳分离和质谱鉴定,鉴定出14个差异表达蛋白质点,包括丝切蛋白1、过氧化物氧化还原酶6、S100钙结合蛋白A6、蛋白酶26s非ATP酶亚基13亚型3等在细胞中分别参与抗凋亡、氧化还原、细胞增殖、蛋白降解等过程的蛋白质.2.00 mmol/L[YbCit2]3-分别作用HepG2细胞24、48 h后,细胞线粒体膜电位检测红绿荧光比值对照组为2.45 ±0.28,24 h组为1.56 ±0.23,48 h组为1.16 ±0.18,与对照组比,差异具有统计学意义(F=23.97,P=0.001);胞内H2O2检测荧光强度对照组为20.00 ±2.08,24 h组为40.00 ±5.50,48 h组为48.00±2.03,与对照组相比,差异具有统计学意义(F=48.40,P=0.000),表明[YbCit2]3-作用后线粒体膜电位下降,H2O2产生增加.结论 [YbCit2]3-可通过调节胞内氧化应激水平和线粒体凋亡途径诱导HepG2癌细胞凋亡.     

Caspase-3与生精细胞凋亡关系的研究

[目的]探讨Caspase-3与男性原发不育患者睾丸生精细胞凋亡的关系。[方法]采用TUNEL及免疫组化技术,观察168例男性原发不育患者的睾丸组织中生殖细胞凋亡指数和Caspase-3蛋白表达的阳性率。[结果]与正常睾丸生精细胞对比,男性原发不育患者生精细胞凋亡指数明显升高(P﹤0.05)。不育组Caspase-3蛋白的阳性率为(14.13±1.94)%,正常组为(2.41±0.98)%,二者比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]生精细胞的凋亡相关基因Caspase-3过高表达与男性原发不育密切相关。     

caspase-3和caspase-9在甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导肝癌细胞SMMC7721细胞凋亡中的影响

[目的]观察甘氨鹅脱氧胆酸钠(glycochenodeoxycholate,GCDCA)诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡过程中caspase3,9活性变化,探讨GCDCA诱导肝癌细胞凋亡的机制。[方法]体外培养SMMC7721细胞,GCDCA为处理因素,Annexin V—FITC/PI双染色法结合流式细胞技术仪检测细胞凋亡率,比色法测定caspase3,9活性。[结果]200μmol/L的GCDCA处理SMMC7721细胞24h,48h,72h后,其细胞凋亡率明显增加;caspase3,9活性表达水平明显升高,并与GCDCA呈浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]GCDCA可明显诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡,caspase3,9参与GCDCA诱导SMMC7721细胞凋亡调控。     

皮肤鳞状细胞癌中FHIT基因启动子甲基化与FHIT蛋白表达的临床意义

[目的]检测皮肤鳞状细胞癌中FHIT基因的异常甲基化及其表达情况,探讨其异常甲基化与皮肤鳞状细胞癌发生的相关机制及其与临床病理分型的关系。[方法]采用甲基化特异性PCR应方法,测定32例皮肤鳞状细胞癌组织标本FHIT基因启动子甲基化情况,免疫组织化学方法检测其蛋白表达情况。[结果]32例病变癌组织中,有17例发生了甲基化,阳性率为53.1%;皮肤鳞状细胞癌及正常皮肤组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为43.75%(14/32)和100%(20/20),FHIT基因的甲基化与其蛋白的表达和病变组织的组织学分级、淋巴结转移状况均有一定的关联(P﹤0.01)。[结论]FHIT基因的甲基化可能参与疾病的发生发展,且与其临床病理有一定关系,是影响皮肤鳞状细胞癌预后的重要因素之一。     

赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（cox-2）抑制剂赛莱西布（celecoxib）对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其COX-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3（clasepase-3）蛋白质的表达及活性的影响。结果12．5，25，50μmol／L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高。与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布明显抑制HepG2细胞cox-2活性。与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论赛莱西布可通过cox-2通路和easpase3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。     

裙带菜多糖对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用的研究

[目的]观察裙带菜多糖(PUP)对食管癌细胞TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制。[方法]以食管癌细胞TE-13作为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;在电子透镜下观察PUP对TE-13超微凋亡结构的影响;流式细胞技术检测其周期分布和凋亡率;RT-PCR法检测PUP对TE-13细胞中凋亡相关基因Survivin表达的影响。[结果]PUP对食管癌细胞TE-13有显著增殖抑制效应,作用时间越长,在一定范围内的PUP浓度越大,抑制效应越强。PUP作用48h时半数抑制浓度(IC50)为52.17μg/ml。25、50、100μg/ml的PUP作用48h后,TE-13均发生凋亡形态的变化;100μg/ml PUP处理72h后,凋亡率为52.19%;周期分布显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示PUP能降低食管癌细胞中Survivin mRNA的表达。[结论]PUP在体外显著抑制食管癌细胞TE-13的增殖,其机制与PUP诱导食管癌周期阻滞和下调Survivin mRNA的表达有关。     

阻塞性黄疸大鼠胃黏膜损害中的细胞信号传导

[目的]探讨Toll样受体4(TLR4)介导的信号传导在阻塞性黄疸大鼠模型胃黏膜损害中的作用。[方法]将48只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、胆总管结扎1d(E1)、3d(E3)、7d(E7)和14d(E14)组,每组8只,胆总管结扎组双重结扎胆总管建立阻塞性黄疸模型(OJ)。用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对胃黏膜组织细胞中Toll样受体4(TLR4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA做定量分析。[结果]E1组与E3组间TLR4和TNF-αmRNA的表达差异无统计学意义(P﹥0.05),E7组的表达高于E1、E3、对照组和假手术组(P﹤0.05),E14组的表达高于其余各组(P﹤0.05)。假手术组、对照组、E1、E3组间差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]阻塞性黄疸时,TLR4介导的信号传导在胃黏膜损害中起了重要作用。     

莱菔硫烷对人膀胱癌细胞生长的影响及机制研究

目的:研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对人膀胱癌细胞生长的影响及作用机制。方法:以人膀胱癌细胞系T24细胞为离体研究对象,通过AO/EB荧光染色观察SFN诱导T24细胞凋亡核形态改变;采用流式细胞仪检测SFN对T24细胞周期的影响;RT-PCR法和Westernblot法检验SFN在mRNA和蛋白水平上对TrxR表达的影响。结果:(1)10μmol/L和20μmol/LSFN作用T24细胞24h和48h后,荧光显微镜下可见细胞核碎裂和凋亡小体的出现。(2)流式细胞仪检测可见,SFN能使T24细胞周期阻滞于G0/G1期,20μmol/LSFN作用48h后,在G0/G1峰之前出现凋亡峰。(3)RT-PCR结果:10μmol/LSFN作用T24细胞4h,10h,24h,TrxRmRNA表达有所增加,20μmol莱菔硫烷作用10h,24h后,TrxRmRNA表达明显增加。(4)Westernblot分析表明,10μmol/LSFN作用T24细胞24h和20μmol/LSFN作用T24细胞8h和24h后,TrxR蛋白表达有明显增加。结论:SFN能抑制T24细胞的生长,诱导T24细胞凋亡并使其细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制与诱导TrxR的转录和翻译水平有关。     

飞燕草素葡萄糖苷抑制人血管内皮细胞凋亡的作用及机制研究

目的观察飞燕草素葡萄糖苷(Dp)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探索相关分子机制。方法 CCK-8等试剂盒分别检测不同浓度的Dp(25、50、100、200μmol/L)对oxLDL诱导的细胞活力、MDA和LDH生成的影响;激光共聚焦显微镜检测Dp对oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位和线粒体膜通道孔开放状态的影响;流式细胞仪检测不同浓度的Dp对oxLDL诱导的细胞凋亡的影响;Western blot法检测Dp对oxLDL诱导的bcl-2及bax蛋白表达水平的影响。结果 Dp能明显抑制oxLDL诱导的EA.hy926细胞活力降低,及MDA和LDH生成增加,并呈浓度依赖关系;与oxLDL处理组比较,不同浓度的Dp预处理细胞2 h后,总凋亡细胞百分比显著降低(P<0.05);Dp能明显抑制oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位下降和线粒体膜通道孔开放,并能明显抑制oxLDL诱导的细胞内bcl-2蛋白表达水平降低及bax蛋白表达水平增高。结论 Dp可能通过线粒体途径抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡发生。     

槲皮素上调三磷酸腺苷结合盒式转运体A1表达干预泡沫细胞的形成

目的观察槲皮素对巨噬细胞泡沫化和三磷酸腺苷结合盒式转运体Al(ABCAl)表达的影响,探讨槲皮素抗动脉粥样硬化机制。方法体外培养RAW264.7细胞,与l00mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育48h建立泡沫细胞模型,不同浓度(20、40和80μmol/L)槲皮素预处理进行干预,油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,免疫荧光及免疫印迹法检测ABCAl蛋白的表达变化。结果模型组细胞内红色脂滴明显增多,给予槲皮素后细胞内脂滴减少,以40、80μmol/L槲皮素作用更为明显;模型组荧光较对照组增强,随槲皮素剂量增加,荧光加进一步增强;模型组ABCAl表达较对照组增加,而槲皮素预处理后,进一步上调ABCAl表达,且其表达强度随槲皮素作用浓度的增加而增强。结论槲皮素能上调ABCAl的表达,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成。     

亚硒酸钠对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及hTERT表达的影响

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株生长、凋亡和hTERT表达的作用及相关机制。方法用含不同浓度亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24、48、72、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901细胞形态的影响;MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞细胞的凋亡的影响;链霉亲和素-生物素-酶复合物(SABC)免疫细胞化学法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERT蛋白表达的影响。结果 (1)MTT法结果显示:用亚硒酸钠培养SGC-7901细胞株24,48,72,96h后,随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h后当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L时,与对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01),48、96h后各浓度亚硒酸钠组与正常对照组比其吸光度值均明显降低(P<0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长抑制率逐渐增加。(2)流式细胞仪检测结果显示:亚硒酸钠可促进SGC-7901细胞发生细胞凋亡。5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组比正常对照组凋亡率明显升高(P<0.01)。(3)免疫细胞化学法检测结果显示:亚硒酸钠可降低SGC-7901细胞中hTERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5、8μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),48h时0.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),72h时2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠组与对照组比MOD明显降低(P<0.01),96h时实验组与对照组比较MOD均明显降低(P<0.01)。结论亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

p27kip1基因转移抑制大鼠胶质瘤生长的实验研究

[目的]探讨重组腺病毒介导的人突变型p27kip1基因（Ad-p27kip1）表达对大鼠神经胶质瘤移植瘤生长的抑制作用。[方法]建立大鼠胶质瘤移植瘤模型,随机分成3组：Ad-p27组、Ad-LacZ组、PBS组。Ad-p27组给予腺病毒介导的人p27 kip1基因（Ad-p27kip1）瘤内注射,另2组分别给予Ad-LacZ和PBS瘤内注射,观察对肿瘤生长的抑制情况,并用免疫荧光法检测P27和CyclinD1的表达;原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况。[结果]给予Ad-p27kip1基因治疗的实验组大鼠肿瘤生长受到明显抑制;在颅内肿瘤模型组给予Ad-p27治疗的大鼠生存时间明显延长;免疫荧光染色显示移植瘤P27表达明显增强,CyclinD1的表达受到抑制。Ad-p27组细胞凋亡显著多于Ad-LacZ组和PBS组。[结论]腺病毒介导的人p27基因（Ad-p27kip1）对大鼠胶质瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制是增强p27表达、抑制CyclinD1的表达、诱导胶质瘤细胞凋亡。     

叶黄素对人肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机制研究

目的研究叶黄素对人肝癌细胞的抑制作用并探讨其可能机制。方法以HepG2人肝癌细胞株和L02正常人肝细胞株为研究对象,设叶黄素低、中、高剂量组(20、40、80 mol/L)和溶剂对照组。常规细胞培养后进行细胞计数、MTT法测定细胞存活率、DCFH-DA法测定ROS活性、HPLC法测定ATP含量、RT-PCR测定Bax mRNA及p53mRNA表达水平。结果 HepG2细胞经叶黄素干预处理后,低、中、高剂量组的细胞存活率显著降低(P<0.05),并且随干预时间的增加而持续降低,ROS水平和ATP含量显著降低(P<0.05);高剂量组的Bax mRNA表达和中、高剂量组的p53 mRNA表达显著增加(P<0.05)。而L02细胞经叶黄素干预处理后,细胞存活率和ATP含量均无显著性变化。结论叶黄素能抑制人肝癌细胞的生长,其机制可能与叶黄素清除细胞内ROS、抑制肝癌细胞ATP生成及上调凋亡基因Bax和p53 mRNA的表达有关。[营养学报,2012,34(4):332-335]     

癌宁对人胃腺癌细胞SGC—7901细胞因子及Fas基因表达的影响

目的：探索癌宁对体外人胃癌细胞基因及细胞因子表达的影响。方法：采用流式细胞术,对中药复方癌宁诱导胃癌细胞凋亡机制进行研究。结果：顺铂、癌宁组与空白对照比较,TGF－β1、Fas和Fas-L基因表达产物含量显著增高（P＜0．01）。结论：癌宁对人胃癌细胞的诱导凋亡作用与其对抑癌基因及细胞因子表达的改变有关。