黄连碱通过线粒体损伤及内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路导致L02细胞毒性

目的 研究黄连碱(coptisine)对正常人肝细胞L02的细胞毒性及作用机制,为临床安全用药提供参考.方法 分别以不同浓度黄连碱作用于L02细胞24 h,通过CCK-8法检测黄连碱对L02细胞存活率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内活性氧(ROS)含量的改变,激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体膜电位和细胞内钙离子水平的变化,Western印迹检测L02细胞内Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、细胞色素C(cytochrome C)、免疫球蛋白结合蛋白(BIP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)、激活转录因子4(ATF4)、真核生物启动因子2α(eIF2α)、caspase-12蛋白表达水平,探讨黄连碱细胞毒性的可能作用机制.结果 黄连碱能以浓度依赖方式抑制细胞存活,诱导L02细胞凋亡,可促使细胞内ROS大量蓄积,线粒体膜电位下降,细胞色素C、Bax蛋白表达量上升;同时,还可激活内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路,显著影响相关蛋白的表达,其中BIP、CHOP、ATF4蛋白表达量升高,PERK、eIF2α蛋白表达量下降,明显诱导细胞内钙离子含量升高,激活下游因子caspase-12、caspase-3蛋白表达.结论 黄连碱可通过线粒体途径和内质网应激(ERS)途径诱导L02肝细胞凋亡,其潜在的肝毒性风险及对中药黄连安全性的影响有待进一步研究.     

缺氧诱导乳鼠心肌细胞内质网应激的时效性观察

目的 研究不同缺氧时间心肌细胞内质网应激蛋白的表达变化,探讨内质网应激在心肌细胞凋亡中所起的作用.方法 将体外培养的乳鼠心肌细胞随机分为0h(对照组)及缺氧6、l2、18、24、30h组,缺氧组通入95％N,及5％ CO2混合气体进行不同缺氧时间处理,对照组在常氧状态下培养,不给予缺氧刺激.采用Western blotting检测内质网应激蛋白GRP78、CHOP及Caspase-12的表达变化,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 对照组GRP78蛋白有一定量的基础性表达,缺氧6h后蛋白表达呈上升趋势,缺氧12h时表达显著增加(P＜0.05),缺氧18h时表达至高峰,但随着缺氧时间延长(＞18h)GRP78表达呈下降趋势.缺氧12h内质网应激蛋白CHOP、Caspase-12蛋白开始表达,缺氧18～30h呈持续升高(P＜0.05).流式细胞术检测显示,缺氧12h即出现典型的细胞凋亡特征,缺氧18、24、30h组心肌细胞凋亡数量明显增多,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 内质网应激在心肌细胞缺氧不同时期发挥不同的作用.     

大鼠急性肾功能衰竭时肾小管上皮细胞Fas、FasL表达的意义

目的　探讨大鼠急性肾衰 (acuterenalfailure ,ARF)肾小管上皮细胞Fas、FasL表达与凋亡的关系及意义。方法　按 5ml/kg和 10ml/kg的剂量于Wistar大鼠后肢肌肉注射 5 0 %甘油诱导不同程度的ARF ,于1、3、6、12、2 4、4 8、96小时测定肾功能 ,并分别以免疫组化法和TUNEL、流式细胞仪 (FCM)、瑞氏染色检测肾小管上皮细胞Fas、FasL表达和凋亡。结果　甘油注射后肾小管上皮细胞凋亡和Fas、FasL表达上升 ,三者呈现出相似的剂量及时间依赖性 ,变化与肾损伤程度相关 ,且均以外髓及远端小管为主。结论　ARF中 ,肾小管上皮细胞Fas、FasL表达产生“兄弟相杀 (fratricide)”效应 ,导致凋亡的发生是肾小管上皮细胞丢失的重要途径 ,在ARF的发病机制中有重要意义 ;阻断肾小管上皮细胞凋亡是进一步提高ARF救治效果的希望所在     

替米沙坦和胰岛素对糖尿病大鼠睾丸内质网应激和沉默信息调节因子1表达的影响

目的 观察替米沙坦和胰岛素对1型糖尿病大鼠睾丸组织内质网应激和沉默信息调节因子1(Sirt1)表达的影响,探讨替米沙坦和胰岛素对糖尿病大鼠睾丸的保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病对照组(B组)、糖尿病胰岛素治疗组(C组)和糖尿病替米沙坦治疗组(D组),每组8只.B、C、D组用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型,C组大鼠每日皮下注射精蛋白锌胰岛素,D组每日给予替米沙坦灌胃.于实验第8周末留取标本,测定并计算睾丸重量及睾丸指数、精子数量及活动率,测定睾酮水平及睾丸组织中CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP-78)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12(caspase-12)、Sirt1 mRNA的表达水平.结果 与A组比较,B组糖尿病大鼠睾酮水平、睾丸重量、精子数量及活动率明显降低(P＜0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).经胰岛素治疗后,C组大鼠血清睾酮、睾丸睾酮、睾丸重量、精子数量及活动率较B组明显升高(P＜0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平较B组明显降低(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平较B组明显升高(P＜0.05).替米沙坦治疗后,D组大鼠精子数量、精子活动率较B组明显升高(P＜0.05),血清睾酮、睾丸睾酮、睾丸重量与B组比较无明显变化(P＞0.05),睾丸组织CHOP、GRP-78、caspase-12 mRNA表达水平均较B组明显降低(P＜0.05),Sirt1 mRNA表达水平较B组明显升高(P＜0.05).4组大鼠睾丸指数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 替米沙坦和胰岛素通过下调内质网应激水平、上调Sirt1表达对糖尿病大鼠睾丸组织产生保护作用.     

内质网应激在缺血性脑卒中中的作用及机制

内质网应激（ERS）是继细胞死亡受体通路、线粒体通路后的第三大细胞凋亡通路,主要由氧化应激、钙失衡及炎症反应所引起。适度的内质网应激能维持细胞稳态,但过强或长时间的应激,会导致细胞凋亡。研究表明,很多疾病与ERS有关,如动脉粥样硬化、肿瘤、神经系统退行性病变等。本文简要综述ERS在缺血性脑卒中中的作用及机制。     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系

目的观察人脑急性创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及其与caspase-3基因表达的关系。方法术中采集12例重型颅脑损伤患者挫裂伤脑组织和脑叶切除组织标本15个，分别应用凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等检测神经细胞凋亡的变化，采用免疫组织化学技术检测caspase-3蛋白的表达，并借助caspase-3荧光分析试剂盒检测caspase-3蛋白酶活性的变化。结果12个挫裂伤脑组织标本中10个透射电镜发现有散在分布、数量不等的凋亡神经细胞；TUNEL染色11个出现阳性凋亡神经细胞；5个DNA出现凋亡特异性的“梯状”电泳带；9个出现caspase-3蛋白超表达；11个caspase-3蛋白酶活性明显增高；凋亡出现时间从伤后4h直到216h，高峰在23-72h。结论急性创伤性脑损伤患者存在神经细胞凋亡，并且具有时间和空间依赖性。caspase-3的超表达与激活参与了人脑创伤性脑损伤后的细胞凋亡过程。     

小檗碱对果糖诱导人肾小管细胞内质网应激PERK凋亡通路的影响

目的 探讨小檗碱对果糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)于含10%胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,然后随机分为正常组(C组)、果糖组(F组,含25mmol/L果糖培养液)、小檗碱组(B组,25mmol/L果糖+10μmol/L小檗碱)和TUDCA组(T组,25mmol/L果糖+2μmol/L TUDCA培养液).培养24h后收集细胞,Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP蛋白表达水平及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核启始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平,流式细胞仪检测各组细胞周期情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 与C组比较,F组GRP78、CHOP蛋白表达水平上调,同时p-PERK、p-eIF2α水平明显上升(P<0.05);与F组比较,B组、T组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平均明显下降(P<0.05);T组与B组GRP78、CHOP、p-PERK、p-eIF2α表达水平比较无明显差异.与C组比较,F组HK-2细胞活力明显降低,细胞凋亡指数明显升高(P<0.05);与F组比较,B组和T组肾小管上皮细胞活力明显增加,细胞凋亡指数明显下降(P<0.05);T组B组细胞活力指数、细胞凋亡率比较无明显差异.结论 持续采用果糖培养HK-2细胞可激活细胞内PERK通路,引起内质网应激的发生,小檗碱能够抑制果糖诱导的PERK和eIF2α的磷酸化,下调GRP78、CHOP表达,从而调控PERK通路缓解细胞周期阻滞现象,降低细胞凋亡率.     

内质网应激和Ca2+超载在热打击诱导的肺微血管内皮细胞损伤中的作用与机制

目的 研究内质网应激和Ca2+超载在热打击诱导的肺微血管内皮细胞(PMVECs)损伤中的作用及其可能的机制.方法 建立PMVECs温度梯度热打击模型.对照组细胞始终置于标准37℃、5%CO2细胞培养箱孵育,热打击组细胞分别置于39、41、43℃细胞培养箱中热打击2h,热打击后继续在37℃、5%CO2细胞培养箱孵育6h;另取细胞在43℃热打击前分别以20μmol/L钙离子抑制剂BAPTA-AM和50μmol/L环孢霉素A(CsA)预处理,后续处理同43℃热打击组细胞.Western blotting检测磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化的真核生物翻译起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白表达;流式检测细胞内Ca2+、线粒体膜电位以及线粒体通透性转换孔的变化;Caspase活性试剂盒检测caspase-3变化以反映细胞凋亡情况;Millicell-ERS细胞电阻仪测定细胞的跨上皮细胞电阻(TER)以了解细胞通透性的改变.结果 随着热打击温度的增高(41~43℃),PMVECs内p-PERK、p-eIF2α以及ATF4、GRP78蛋白表达增强,细胞内Ca2+水平增高,线粒体通透性转换孔开放,线粒体膜电位下降,细胞通透性增加,凋亡增多,且在43℃热打击组最为明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).使用Ca2+抑制剂预处理细胞可以促使PMVECs线粒体通透性转换孔、膜电位以及细胞通透性恢复,减少凋亡的发生;使用线粒体保护剂预处理细胞并不能减轻PMVECs的Ca2+释放,但可促进细胞通透性恢复以及减少凋亡发生.结论 热打击可激活PMVECs的内质网应激反应,并诱导细胞内Ca2+超载介导的细胞和线粒体损伤,这可能是中暑导致内皮细胞损伤的重要机制之一.     

Ghrelin对急性心肌梗死大鼠心功能的影响及其机制研究

目的探讨Ghrelin对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠心功能的影响及其可能机制。方法成年雄性SD大鼠18只,结扎冠状动脉前降支建立AMI模型。于建模后第4天,将存活的14只大鼠随机分为模型组(AMI+NS组,n=7)和处理组(AMI+Ghrelin组,n=7),处理组按100μg/kg皮下注射Ghrelin,2次/d,间隔12h,共2周,模型组按100μg/kg皮下注射生理盐水(NS)。另设假手术组(n=8)。2周后,超声心动图(UCG)检测大鼠心功能,ELISA法检测血清LDH、CK-MB含量,HE染色观察心肌组织形态学变化,Western blotting检测内质网应激(ERS)标志物GRP-78、CHOP蛋白表达。结果成功建立AMI大鼠模型。与假手术组比较,UCG提示模型组大鼠心功能明显下降(P<0.05),HE染色可见组织疏松、水肿较明显,血清LDH、CK-MB明显升高(P<0.05),Western blotting检测显示GRP-78、CHOP蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,处理组心功能明显改善,组织疏松、水肿明显减轻,血清LDH、CK-MB降低(P<0.05),GRP-78、CHOP蛋白表达下降(P<0.05)。结论 Ghrelin可能通过抑制ERS途径改善AMI引起的心肌损伤,从而改善心功能。     

急性一氧化碳中毒小鼠脑海马细胞凋亡及bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达

目的研究急性一氧化碳中毒(ACOP)后脑海马细胞凋亡和bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达的变化。方法雄性昆明小鼠56只随机分为7组(对照组、ACOP后1h,6h,12h,24h,3d,7d组),每组8只,对照组暴露于空气中,中毒组暴露于一氧化碳(CO)气体中,于相应时间点断头取脑。采用TUNEL、免疫组化法和流式细胞仪观察ACOP后细胞凋亡和caspase-3、bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果ACOP后3d小鼠脑海马凋亡细胞明显增加(P<0.05),第7天达最高(P<0.01);caspase-3蛋白在ACOP后1h表达增加,第3天达到高峰,第7天降至正常;bcl-2蛋白在中毒后1h海马区表达增多,24h达到高峰,第7天大致正常;Bax蛋白在CO中毒1h表达增多,24h达高峰,第7天大致正常。结论ACOP后小鼠脑海马出现迟发的神经元凋亡及凋亡相关因子表达,细胞凋亡可能参与了ACOP迟发脑病的发病机制。     

细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染HepG2细胞,采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C（cyt C）的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少,Bax和胞质cyt C表达明显增加;未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带,转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带。结论RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质,激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡。     

急性心肌梗死大鼠心肌caspase-12表达变化的研究

目的观察大鼠急性心肌梗死后不同时间点caspase-12表达的变化,探讨内质网应激途径在心肌梗死后心肌细胞凋亡中的作用。方法 80只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=40)和心肌梗死组(n=40),每组再进一步分为1、6、12、24h亚组(n=10)。心肌梗死组结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎。分别于结扎后1、6、12、24h采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blotting检测caspase-12的表达。结果 TUNEL结果显示:假手术1、6、12、24h亚组间心肌细胞凋亡指数(AI)(分别为1.40%±0.96%、1.47%±0.85%、1.56%±0.93%、1.72%±1.13%)无统计学差异(P>0.05),心肌梗死后1、6、12、24h亚组AI(分别为6.20%±2.15%、10.87%±2.84%、20.82%±3.80%、45.44%±9.22%)与假手术组比较明显升高,且心肌梗死各亚组间差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示:假手术1、6、12、24h亚组caspase-12蛋白的表达(分别为0.056±0.011、0.063±0.013、0.068±0.013、0.075±0.017)无统计学差异(P>0.05),心肌梗死后1、6、12、24h亚组caspase-12蛋白的表达(分别为0.085±0.008、0.116±0.004、0.150±0.013、0.219±0.018)与假手术组比较均明显升高,且随心肌梗死延长表达逐渐增加(P<0.05)。Caspase-12表达与细胞凋亡变化规律一致。结论心肌梗死后凋亡细胞数和caspase-12蛋白表达逐渐增强,提示内质网通路可能参与了心肌梗死后心肌细胞凋亡的调控。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤中Ire1α、caspase-12的表达与细胞凋亡

目的 观察在大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中Ire1α与caspase-12的表达变化规律及其与神经细胞凋亡的关系. 方法 健康成年SD大鼠55只,用随机数字表法分为2组:(1)脊髓压迫缺血再灌注组(手术组,50只大鼠),每个时相点10只,采用自制压迫装置制备脊髓压迫缺血再灌注模型;(2)假手术对照组(手术组,5只大鼠),只做全椎板切除不做脊髓压迫.用TUNEL、免疫组化、Western blot和免疫荧光标记等方法 ,分别于缺血再灌注后1,4,8,16和24 h检测压迫段脊髓组织中细胞凋亡以及lre1α,caspase-12的表达变化情况. 结果 细胞凋亡数量随着缺血再灌注时间的延长而增加.手术组Ire1α、caspase-12的阳性细胞数及蛋白量于再灌注1 h开始增加,16 h达峰值,24 h开始减少,但仍然高于假手术对照组(P＜0.05). 结论 Ire1α与caspase-12共同参与了内质网应激介导的神经细胞凋亡.     

重度低温诱导大鼠肾脏内质网应激通路活化研究

目的 观察轻度及重度低温条件下大鼠肾脏组织内质网应激 (endoplasmic reticulum stress ,ERS)通路相关分子表达及凋亡情况。方法 成年雄性SD大鼠,24只,随机分为3组,每组8只。分别为对照组（C组）,轻度低温组（MH组）和重度低温组（SH组）。利用低温水槽浸泡身体后将体温降低至目标体温后维持约60 min。术后复温12 h后,利用Western Blot实验观察各组的热休克蛋白70（heat?shock?protein 70,HSP70）,冷诱导RNA结合蛋白（Cold-inducible RNA-binding protein,CIRP）的表达变化及ERS通路相关分子蛋白激酶R样内质网激酶（PRKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）、肌醇需求酶1α（serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease inositol-requiring enzyme 1,IRE-1α）和免疫球蛋白重链结合蛋白（the immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip）的活化情况,利用Western Blot和免疫组化方法观察ERS诱导凋亡分子C/EBP同源蛋白（the C/EBP Homologous Protein,CHOP）的表达以及分布。结果 和对照组比较,术后12 h,HSP70和CIRP均有不同程度上调。HSP70在MH组和SH组上调均较显著,CIRP蛋白在SH组上调更加显著。术后12 h,p-PERK和p-IRE-1均出现明显上调,Bip活化,提示ERS通路激活。重度低温组肾脏可观察到CHOP蛋白表达上调,进一步用免疫组化方法可以观察到CHOP主要表达在肾小管区域。结论 轻度及重度低温会诱导大鼠肾脏ERS通路活化,重度低温可诱导CHOP蛋白表达上调。     

缬沙坦抑制内质网应激对糖尿病肾损害大鼠足细胞的保护作用

 目的 探讨缬沙坦对糖尿病肾损害大鼠肾脏足细胞凋亡及内质网应激标志性蛋白GRP78、caspase12表达的影响。方法 将雄性SD大鼠随机分为正常对照组和实验组。实验组大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,然后随机将其分为模型组和缬沙坦组,正常对照组和模型组1次/d给予反渗水灌胃,缬沙坦组1次/d给予缬沙坦(8 mg/kg)灌胃,时间为6周。对nephrin、GRP78、caspase12表达水平进行分析,同时观察血糖、血尿素氮、肌酐、24 h尿蛋白定量等指标。结果 建模第6周,模型组大鼠肾脏较正常对照组凋亡细胞数明显增多,模型组GRP78(6.75±0.65)及caspase12(11.51±0.32)表达较正常对照组GRP78(1.57±0.39)、caspase12(2.66±0.57)增强(P＜0.05),模型组nephrin(2.29±0.15)较正常对照组(5.71±0.53)表达减少(P＜0.05)。缬沙坦组较模型组凋亡细胞数减少,GRP78(3.14±1.00)、caspase12(8.08±2.48)表达减弱(P＜0.05),nephrin(3.35±0.40)表达减少较轻(P＜0.05)。结论 缬沙坦通过减缓内质网应激并可能通过抑制内质网特有的caspase12凋亡途径,减少足细胞的凋亡,从而发挥对糖尿病肾病的保护作用。
     

急性肾功能衰竭时肾小管上皮细胞bcl-2表达的意义

目的 探讨急性肾功能衰竭（acute renal failure,ARF)中肾小管上皮细胞bcl-2表达与细胞凋亡的关系及其意义。方法 50％甘油分别按5ml/kg、10ml/kg注射于Wistar大鼠后肢肌肉,造成不同程度的ARF,随后在1、6、12、24、48、96小时测定肾功能,并以免疫组化法检测肾小管上皮细胞bcl-2表达,以TUNEL、FCM及瑞氏染色法检测肾小管上皮 细胞的凋亡。结果 甘油注射后肾小管上皮细胞bcl-2表达上升,与凋 亡的发生呈现出相似的剂量及时间依赖性,且区域相近,均以外髓及远端小管为主。结论 ARF中,肾小管上皮细胞bcl-2表达与凋亡密切相关,是创伤后机体启动的重要的抗损伤机制。     

实验性脑出血神经细胞caspase-3,bcl-2表达的研究

目的:探讨实验性脑出血神经元caspase-3,bcl-2蛋白的表达情况.方法:60只Wistar大鼠随机分为3组,实验组(48只)采用尾状核注射自体血脑出血模型,对照组(6只)为生理盐水组,正常组6只.实验组分别于术后3、6、12 h,1、2、3、5、7 d后处死,共8个时间点.采用HE染色,免疫组化技术检测血肿周围神经元caspase-3,bcl-2蛋白的表达.结果:出血灶形成后3 h出现caspase-3阳性细胞,6 h开始逐渐升高,3 d达高峰,之后逐渐降低;3 h开始有Bcl-2阳性细胞表达,6 h之后逐渐增多,2 d达高峰,随后表达降低.结论:实验性脑出血后有神经细胞凋亡,并且与caspase-3,bcl-2蛋白表达有关.     

氧合血红蛋白诱导脑微血管内皮细胞凋亡中半胱天冬酶3和细胞色素C的变化

目的:探讨氧合血红蛋白(oxyhemoglobin,OxyHb)诱导体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMvECs)凋亡的可能机制. 方法:将原代培养的大鼠BMvECs分别与10 μmol/L和100 μmol/L的OxyHb共孵育,在孵育后6、12和24 h分别以流式细胞术、荧光分光光度计法和Western 印迹检测线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,ΔΨm)、半胱天冬酶3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的表达水平. 结果:经10 μmol/L和100 μmol/L OxyHb刺激6～24 h后,与对照组相比,OxyHb能显著降低血管内皮细胞ΔΨm,而增强Cyt-C和caspase-3的表达,并呈刺激时间和刺激浓度依赖性.与10 μmol/L OxyHb分别孵育6、12和24 h,caspase-3的活性分别为0.103±0.010,0.126±0.010和0.234±0.031,而在OxyHb 100 μmol/L组,其6、12和24 h caspase-3的活性分别为0.154±0.012,0.205±0.020和0.302±0.015. 结论:ΔΨm的下降、caspase-3的激活以及Cyt-C的释放可能是OxyHb诱导BMvECs凋亡的重要机制.     

内质网应激通路抑制剂Salubrinal增强人头颈部鳞癌细胞的放射敏感性

目的 观察内质网应激通路抑制剂Salubrinal增强人头颈部鳞癌细胞放射敏感性的作用。方法 采用Western blot法检测人头颈部鳞癌细胞系（KB、Fadu、Detroit 562）射线照射后不同时间点（0、20 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h）内质网应激通路核心蛋白-葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达情况;对3种细胞系设立空白对照组和ERS通路抑制剂组（sal组）,同样方法检测GRP78的表达;集落克隆形成法检测3种细胞系不同剂量照射（0、2、4和6 Gy）对10 mmol/L Salburinal处理后不同时间（12、24、36 h）细胞存活分数的影响。结果 Western blot结果显示,照射后20 min~1 h,3种头颈部鳞癌细胞GRP78蛋白表达增加,照射后3 h达到高峰,与0 min组比较,差异有统计学意义（t=12.72、13.37、18.31,P<0.05）。采用Salubrinal处理细胞后,sal组与空白对照组比较,GRP78的表达下调,差异有统计学意义（t=14.25、5.34、3.12,P<0.05）。集落克隆形成实验结果提示,Salubrinal增强射线抑制细胞增殖,3种细胞加药12 h的放射增敏比分别为1.16、1.05和1.06。结论 内质网应激通路抑制剂Salubrinal增强人头颈部鳞癌细胞放射敏感性。     

培哚普利对心肌梗死大鼠内质网应激分子GRP78和Caspase-12表达的影响

目的探讨培哚普利改善心功能的作用与内质网应激反应(ERS)的关系。方法通过结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,将24h内存活大鼠随机分为模型组(n=8)和培哚普利组(n=8),另设假手术组作为对照(n=8)。术后第2天起培哚普利组以2mg/(kg.d)培哚普利灌胃给药,模型组和假手术组按体重给予等量生理盐水,每天1次,持续4周。采用超声心动图检测左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(LVEF)以及短轴缩短率(FS)等指标。免疫组织化学或Western blotting检测内质网应激相关蛋白GRP78和Caspase-12的表达水平。结果与假手术组相比,心肌梗死4周后,模型组LVEDD和LVESD明显升高,LVEF和FS明显下降,内质网应激相关蛋白GRP78和Caspase-12表达增加,培哚普利明显缓解了上述指标的变化。结论培哚普利改善心功能的作用可能是通过降低GRP78和Caspase-12的表达,阻断ERS途径实现的。