Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用，探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞，通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用；利用[γ-^32P]ATP掺入外源性底物的方法，液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加，细胞内TPK、PKC活性升高；genistein使细胞增殖比明显下降，抑制细胞内TPK、PKC活性，且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖，genistein可有效阻滞此传导途径，从而抑制细胞增殖。     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制.方法以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著.结论bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖.     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

aFGF和Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及[Ca~(2 )]i的影响

目的 :探讨 a FGF及 TPK抑制剂 Genistein对 AGZY- 83A细胞内 PKC活性及游离 Ca2 浓度的影响。方法 :用不同浓度的 a FGF和 Genistein诱导 AGZY- 83A细胞 ,(γ- P32 ) - ATP标记的 Histone 为底物 ,液体闪烁测定PKC活性 ;Fura- 2 / AM负载荧光光度法测定细胞内游离 Ca2 浓度。结果 :a FGF诱导后 ,细胞内 PKC活性及 Ca2 浓度升高 ,且与 a FGF呈剂量依赖效应。Genistein抑制细胞内 PKC活性及 Ca2 浓度 ,也呈剂量依赖效应。Genistein对 a FGF诱导的 PKC活性抑制更显著。结论 :进一步证明 PKC和 Ca2 确是 TPK的下游信号分子。     

蛙皮素对胃癌细胞BGC-823的生长调控作用

目的:观察蛙皮素(BBS)对人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用,测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量、蛋白激酶C(PKC)活性及PKC亚型的表达,探讨受体后信息传导途径。方法:BGC-823细胞在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、5%CO2条件下培养,分别加入不同浓度的BBS,应用MTT法观察细胞的增殖程度;应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量;应用[γ-32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性;应用Westernblot方法分析PKC亚型α、β1、β2及ε的表达。结果:BBS能促进BGC-823细胞的生长,且与剂量呈正相关(r=0.747,P<0.05);BBS能促进细胞内cAMP的产生及PKC活性的增加,PKCα表达明显增加,而β1、β2及ε则无明显表达。结论:BBS对胃癌细胞BGC-823的生长、细胞内cAMP产生及PKC活性增加有重要作用。     

大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞系体外增殖和细胞周期的影响

目的观察大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖及细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法分别采用台盼蓝拒染法、流式细胞术,在不同条件下测定大豆黄酮对细胞增殖抑制率及细胞周期分布的影响。蛋白激酶C(PKC)活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞的体外增殖,作用24h可使MCF-7细胞的细胞周期阻滞于G2/M期和S期。细胞内PKC活性分析表明:大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为13.27μmol/L。结论大豆黄酮可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖,其作用机制可能与细胞周期G2/M期和S期阻滞及抑制PKC的活性有关。     

生长抑素对人胃癌细胞BGC-823生长的调控作用

目的观察生长抑素对人体分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用，测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量及蛋白激酶c（PKC）活性，探讨受体后信息传导途径。方法BGC-823细胞在合10％小牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5％CO2条件下培养，分别加入不同浓度的生长抑素，应用MTT法观察细胞的增殖程度。应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量，应用[γ-^32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性。结果生长抑素能抑制BGC-823细胞的生长，且与剂量呈正相关。生长抑素能抑制细胞PKC活性，而对细胞内cAMP生成无明显影响。结论1、生长抑素能抑制胃癌细胞BGC-823的生长。2、生长抑素可降低PKC活性，提示其受体后信息传递途径可能涉及DG-PKC系统。     

聚酯型儿茶素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的:探讨聚酯型儿茶素对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及其机制。方法:应用MTT法、集落形成试验、同位素掺入试验、细胞内cAMP/cGMP浓度测定、原位杂交等方法进行检测。结果:50mg·L~(-1)聚酯型儿茶素对SMMC-7721细胞的生长、集落形成有明显的抑制作用;~3H-TdR、~3H-Leu掺入试验证明其可明显抑制细胞DNA和蛋白质合成;聚酯型儿茶素作用后,SMMC-7721细胞内cAMP及cGMP浓度明显增加,细胞的c-myc基因mRNA水平表达明显降低,而p53基因mRNA水平表达明显升高。结论:聚酯型儿茶素对肝癌SMMC-7721细胞的生长有明显的抑制作用,此作用与其抑制细胞DNA和蛋白质合成、升高细胞内cAMP浓度和抑制c-myc基因表达、增强p53基因表达有关。     

木黄酮和雌激素对人垂体催乳素瘤细胞的作用

目的 :观察植物雌激素木黄酮和雌激素对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响 .方法 :将木黄酮(genistein ,GST)、β 雌二醇 (β E2 )作用于体外培养的人催乳素瘤细胞 ,测定MTT值及3 H TdR掺入量 ,流式细胞仪测定细胞周期 ,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况 .结果 :GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖 ,并存在着剂量效应 ,1× 10 -5mol·L-1GST可使G1期的细胞比例从对照组的 0 .5 5上升为0 .90 .β E2 以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖 ,并使G2期的细胞比例从对照组的 0 .16上升为 0 .4 2 .不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡 ,E2 对GST的促凋亡作用无明显影响 .雌激素受体阻断剂可阻断雌激素的作用 ,但对木黄酮的作用无影响 .结论 :木黄酮对培养催乳素瘤细胞的影响与雌激素的作用不同 ,木黄酮在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖 ,促进其凋亡 ,并不受雌激素受体阻断剂的影响 .     

腺病毒载体影响大鼠催乳素细胞增殖功能的机制初探

目的 探讨转染腺病毒载体对大鼠催乳素细胞增殖功能的影响及作用机制.方法 应用BrdU标记法检测转染腺病毒载体后大鼠垂体催乳素细胞的增殖功能,免疫荧光方法和荧光素酶报告基因分别检测转染腺病毒载体的催乳素细胞中磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和cAMP反应元件(CRE)的表达.Western blot方法检测腺病毒载体对垂体前叶细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 转染腺病毒载体的催乳素细胞组较未转染组增殖功能明显增强(P＜0.01),pCREB蛋白和CRE元件的表达均明显增加(P＜0.01),PCNA蛋白的表达亦明显增强(P＜0.01).结论 应用腺病毒载体转移基因将增加大鼠催乳素细胞的增殖功能,其细胞内信号转导机制可能与腺病毒载体诱导pCREB、PCNA蛋白的表达增强有关.     

胃泌素对人胃癌细胞BGC-823生长的影响和受体后信息传递

目的：观察胃泌素对人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用，测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量、蛋白激酶c（PKC）活性及PKC亚型的表达，探讨受体后信息传导途径。方法：应用MTT法观察细胞的增殖程度，放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量，[γ-^32P]ATP掺入外源性底物的方砖测定PKC活性，Western blot方法分析PKC亚型α，β1,β2及ε的表达。结果：胃泌素能促进BGC-823细胞的生长。且与剂量呈正相关（r=0．74，P〈0．05）；这种促生长作用被胃泌素受体拮抗剂丙谷胺拮抗。胃泌素能促进细胞PKC活性的增加，cAMP含量无明显变化；胃泌素使PKCα表达明显增加，PKCβ1、PKCβ2及PKCε无明显表达。结论：胃泌素促进胃癌细胞BGC-823生长的作用由相应的受体介导，其受体后信息传递途径可能涉及二酯酰甘油蛋白激酶C系统，PKCα在胃泌素的受体后信息传递中起重要作用。     

Ca~(2+)、cAMP、cGMP在硒化壳聚糖诱导的NB_4细胞凋亡中的作用

目的研究硒化壳聚糖对NB4细胞第二信使的影响,探讨其抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡的机制。方法流式细胞法观察药物对细胞内钙离子的影响;放免法检测药物对细胞内cAMP和cGMP含量的影响。结果硒化壳聚糖作用24h,NB4细胞内钙离子和cAMP含量明显升高,cGMP含量明显降低,cAMP/cGMP比值增大。结论硒化壳聚糖可通过升高细胞钙离子和cAMP含量,降低cGMP含量,增大cAMP/cGMP比值来抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡。     

肾上腺髓质素刺激成骨细胞增殖的机制

目的:探讨肾上腺髓质素 (adrenomedullin;ADM) 对培养成骨细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制. 方法:分离培养胎大鼠颅骨成骨细胞,经 ADM孵育,3H-胸腺嘧啶(3H-thymidine, 3 H-TdR)参入法测定DNA合成,放射免疫法测定细胞-环磷酸腺甙(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)含量,用底物蛋白磷酸法测定蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)活性.结果:随ADM浓度(10-12～10-8 mol*L-1)增加,成骨细胞3H-TdR参入呈线性增加(r=0.998,P<0.01).ADM使成骨细胞cAMP含量和PKA、PKC、MAPK活性增加(P<0.05或P<0.01).PKC和MAPK激酶抑制剂能阻断ADM刺激成骨细胞3H-TdR参入增加的作用,而PKA和P38MAPK抑制剂对此无影响.结论:ADM能够刺激成骨细胞增殖,激活PKC和MAPK/ERK(细胞外信号调节激酶extracellular signal-regulated kinase),是其主要的细胞内信号转导途径,PKA、P38MAPK途径可能与此无关.     

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

HL-60细胞内游离钙对环核苷酸水平的影响

目的 藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度（[C^2 ]i），观察其对急性白血病HL－60细胞内环核苷酸水平的影响。方法 在IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子氯素提高[C^2 ]i，比较[C^2 ]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的HL－60细胞内cAMP,cGMP水平的影响，cAMP,cGMP水平以环核苷酸的累积量表示。结果 [C^2 ]i升高可使静息和肾上腺素刺激水平的cAMP累积量明显降低，cGMP累只量无明显改变，[C^2 ]i升高对硒诱导分化后的HL－60细胞环核苷酸的影响同分化前一致。结论 [C^2 ]i升高能够降低HL－60细胞内cAMP水平，对cGMP水平无影响，这种作用不因细胞分化而改变。     

cAMP信号途径和基因表达调控

环腺苷酸(cAMP)是细胞内广泛存在的第二信使,其含量取决于影响其合成与降解的多种酶与蛋白质的活性.cAMP途径可通过调控转录因子来调节细胞的增殖、分化和凋亡.本文就cAMP信号途径以及该途径所影响的部分转录因子加以综述.     

cAMP信号途径和基因表达调控

环腺苷酸(cAMP)是细胞内广泛存在的第二信使，其含量取决于影响其合成与降解的多种酶与蚩白质的活性。cAMP途径可通过调控转录因子来调节细胞的增殖、分化和凋亡。本文就cAMP信号途径以及该途径所影响的部分转录因子加以综述。     

酸性成纤维细胞生长因子在卵巢癌中的表达及其信号传导途径

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)在卵巢癌发生发展中的作用及其信号传导机制。方法　应用逆转录 聚合酶链反应技术 (RT PCR)和Western印迹方法对 40例上皮性卵巢癌组织aFGF及其受体FGFR1的表达进行了分析 ;并以不同浓度的aFGF和酪氨酸蛋白激酶 (TPK)抑制剂 genistein诱导卵巢癌细胞株CAOV3细胞 ,利用 [γ 32 P]ATP掺入外源性底物的方法 ,液体闪烁测定蛋白激酶C(PKC)及细胞外信号调节激酶 (ERK)的活性。结果　aFGFmRNA和FGFR1mRNA在上皮性卵巢癌组织中的半定量检测结果分别为 0 981± 0 1 30和 1 0 4 7± 0 1 4 8,与正常卵巢、卵巢瘤样病变及卵巢良性肿瘤相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5) ,且在Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌中的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期 (P <0 0 5) ;Western印迹检测见上皮性卵巢癌组织中aFGF和FGFR1条带均深于正常卵巢组织 ;随着aFGF浓度的增加 ,CAOV3细胞PKC及ERK活性随之升高 ,与aFGF浓度呈剂量依赖效应 ;Genistein抑制细胞内PKC及ERK活性 ,与 genistein浓度亦呈剂量依赖效应。 结论　aFGF与上皮性卵巢癌的发生、发展、浸润呈正相关 ,其受体具有TPK活性 ,TPK激活后可进一步激活PKC和ERK ,进一步证明PKC及ERK确是TPK的下游信号分子     

鼻咽癌患者尿液中环-磷酸鸟甙与环-磷酸腺甙含量的测定

恶性肿瘤的一个主要特点就是失去控制的恶性增殖和分化不良,不少实验资料表明细胞的增殖和分化是受细胞内环-磷酸腺甙(cAMP)、环-磷酸鸟甙(cGMP)水平的强有力的控制。人体各种肿瘤与cAMP、cGMP水平的关系近年有报道。但就我们所知,目前国内外文献仍未见有鼻咽癌组织内和体液内cAMP,cGMP水平的报道。鼻咽癌上皮细胞的恶性增殖是否也可能与环核苷酸含量变化密切相关是值得研究的。为此,我们用放射免疫方法和竞争性蛋白结合方法对鼻咽癌患者尿液分别作了cGMP、cAMP测定,现将方法和结果报告如下。     

三羟基异黄酮对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及侵袭作用的影响

目的 观察5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及侵袭作用的影响,探讨其抗纤维化作用的机制.方法 以25、50、100μmol/L浓度Genistein处理体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,MTT法检测细胞增殖活性,3H-脯氨酸掺入法检测细胞胶原合成,Transwell小室趋化运动模型检测细胞侵袭能力.结果 Genistein作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成作用降低,细胞的侵袭能力显著下降.随着药物浓度增加,对细胞的这种抑制作用也增强.结论 Genistein具有体外抗瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化与侵袭的作用,可成为治疗病理性瘢痕及纤维化疾病的有效药物.