肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因CcL5mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病肾病（DN）大鼠和中药复方肾消康治疗组大鼠肾脏组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测CcL5mRNA在各组大鼠肾脏组织的表达水平。方法:（1）差异表达基因的筛选:实验大鼠分为空白组、模型组、治疗组。从肾脏组织中抽提mRNA,由纯化的总RNA合成双链cDNA,并将其纯化,以生物素标记cRNA合成,纯化和质控体外转录（IVT）产物,片断化cRNA,然后进行杂交、洗脱、染色、芯片扫描并用软件进行统计分析,筛选出差异表达数据。不同肾脏组织样本用灰度扫描图和杂交信号强度散点图表示。（2）荧光定量RT-PCR的检测: RNA样品反转录,荧光定量PCR反应。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的CcL5mRNA进行报告。糖尿病肾病模型组肾脏组织基因CcL5mRNA表达上调,中药复方肾消康治疗组肾脏组织基因CcL5mRNA表达下调。结论:CcL5mRNA在糖尿病状态下肾脏也有表达,并且表达上调,而中药复方肾消康可使其下调,这也是中药复方对糖尿病性肾组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Gna12表达的影响

[目的]观察中药复方肾消康对糖尿病。肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机制,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。[方法]本实验采用链脲佐菌素（STZ）加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT—PCR法做验证实验研究。[结果]鸟嘌呤核苷酸结合蛋白cd2（Gna12）,在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康中剂量组表达上调。[结论]应用Aflymetrix Rat2302．0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,Gna12是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT—PCR测序分析。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,Gna12表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Gna12表达上调,可见肾消康对Gna12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因ubiquitin mRNA表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨DN的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察多项指标,通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果泛素mRNA(ubiquitin mRNA)在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,ubiquitin mRNA基因是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一。糖尿病状态下,ubiquitin mRNA基因表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中ubiquitinm RNA表达下调。肾消康对ubiquitin mRNA基因表达具有良性调节作用。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Igfbp-3mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(Igfbp-3mRNA)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:仅对筛选出差异表达基因谱中的Igfbp3mRNA进行报道。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因Igfbp3mRNA表达下调,中药复方肾消康治疗组心肌组织基因Ig-fbp3mRNA表达上调。结论:Igfbp-3mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Aloxl2表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Aloxl2基因表达的影响,探讨糖尿病肾痛(DN)的发生与Alox 12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点.方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型.运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox 12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT - PCR法,观察Aloxl2基因表达的变化.结果:花生四烯酸12-脂加氧酶( Aloxl2),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调.结论:在糖尿痛肾损伤状态下,Aloxl2表达上调,与糖尿痛肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Aloxl2表达下调,可见肾消康对Aloxl2基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究.     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响

目的比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT—PCR技术定量检测溶质载体家族4阴离子交换体成员（Slc4a1mRNA）在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法差异表达基因的筛选;荧光定量RT—PCR的检测。结果糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因Slc4a1mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因Slc4a1mRNA表达上调。结论Slc4a1mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因Alox12表达的影响

目的:观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠肾脏Alox12基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发生与Alox12基因变化的相关性,筛选中药复方肾消康防治DN的药效作用靶点。方法:采用链脲佐菌素加高脂饮食的方法建立糖尿病大鼠肾脏损伤的模型。运用美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片,尤其是通过聚类分析寻找和糖尿病肾病有重要相关性的基因——Alox12基因是其中之一,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法,观察Alox12基因表达的变化。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶(Alox12),在糖尿病大鼠肾脏表达上调,肾消康治疗组表达下调。结论:在糖尿病肾损伤状态下,Alox12表达上调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中Alox12表达下调,可见肾消康对Alox12基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因eIF3s8表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果真核生物翻译起始因子3,8亚基(eIF3s8),在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康治疗组表达上调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,eIF3s8是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。这在国内外尚属首次。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,eIF3s8表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中eIF3s8表达上调,可见肾消康对eIF3s8基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因fgl2mRNA表达的影响

目的：比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Eve green实时荧光RT-PCR技术定量检测凝血酶原酶（fgl2mRNA）在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法：（1）差异表达基因的筛选;（2）荧光定量RT-PCR的检测。结果：本文仅对筛选出差异表达基因谱中的fgl2mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因fgl2mRNA表达上调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因fgl2mRNA表达下调。结论：fgl2mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达,并且表达上调,而中药复方糖心康可使其下调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因膜联蛋白A4 mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测膜联蛋白A4(annexin A4)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:本文仅对筛选出差异表达基因谱中的annexin A4 mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达上调。结论:annexin A4 mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。     

基于析因设计探讨六味地黄汤不同组方对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响

目的基于析因设计探讨六味地黄汤不同组方对5/6肾切除大鼠术后的影响及机制。方法80只SD大鼠分为假手术组、模型组(A2B2)和六味地黄汤原方组(A1B1)及其拆方纯补组(A1B2)、纯泄组(A2B1)。模型组予0.9%生理盐水(NS)灌胃,其余组予以上述中药煎液灌胃。8周后检测大鼠的肾功能改变、残存肾病理改变,分别用免疫组化和RT-PCR法检测残肾组织Jaggedl、Notchl、α-SMA、E-cadherin蛋白和mRNA表达。结果大鼠5/6肾切除术后出现肾纤维化,肾功能下降,经六味地黄汤及其组方干预后,肾纤维化程度和肾功能均得到改善,残肾组织Notch1、Jaggedl、α-SMA蛋白和mRNA水平表达下降,E-cadherin蛋白和mRNA水平表达(P<0.05)。其中六味地黄汤原方组改善肾功能效果最明显。结论六味地黄汤“三补”“三泄”在改善大鼠5/6肾切除术后出现肾纤维化方面具有显著的协同增效效应,这可能与抑制残肾组织Notch1/Jaggedl信号通路激活,下调α-SMA和上调E-cadherin表达有关。     

补肾中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨和肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨、肾组织同源异形盒基因5(Dlx5 mRNA)及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制、补肾中药复方的疗效机制及其与健脾、活血中药复方及骨疏康颗粒的比较。方法:肌肉注射地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组、阳性对照组。造模及灌胃给药9周。测定股骨骨密度,RT-PCR及Western Blot检测骨、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组股骨骨密度明显降低(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,补肾组及阳性对照组股骨骨密度明显升高(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显上调(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显下调(P0.01)。结论:骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达降低、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾中药复方可能通过上调骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达、下调肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

补肾中药对地塞米松诱导的骨质疏松大鼠肾组织TRPV5表达的影响

目的:通过观察补肾中药对地塞米松诱导的骨质疏松大鼠肾组织TRPV5 mRNA和蛋白表达的影响,探讨糖皮质激素性骨质疏松症(GIO)的病理机制,以及补肾中药的疗效机制。方法:地塞米松肌肉注射复制GIO大鼠模型,实验设正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组及骨疏康组。造模及给药9周后,采用实时定量PCR法及Western Blot法测定肾组织TRPV5 mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠骨密度明显降低(P<0.01),肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达均下降(P<0.01);与模型组比较,补肾组骨密度明显升高(P<0.01),TRPV5 mRNA与蛋白表达亦明显上调(P<0.01)。结论:补肾中药通过上调肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达而促进肾钙重吸收,达到治疗GIO的作用。     

苦瓜提纯液对糖尿病肾病大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨苦瓜对糖尿病肾病大鼠细胞外基质及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、组织抑制剂1（TIMP-1）基因表达的影响。方法将60例Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组、苦瓜组及洛汀新组，采用链脲佐菌素一次性腹腔内注射法诱导糖尿病模型，造模1、5周测定各组24h尿蛋白、肾功能及血糖，5周后取各组肾组织用RT—PCR技术检测MMP-9、TIMP-1的基因表达。结果模型组较对照组肾小球MMP-9、TIMP-1 mRNA表达增加，反映肾功能的各项生化指标水平升高。苦瓜组、洛汀新组较模型组MMP-9、TIMP-1 mRNA表达减少，肾功能有所改善。结论苦瓜对糖尿病大鼠肾结构功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-9、TIMP-1表达从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾脏骨桥蛋白表达的影响

 目的 观察吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组和造模组。链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠。造模成功的大鼠随机分为糖尿病组、吡格列酮3,15 mg·kg^-1·d^-1组。8周末测大鼠24 h尿微量白蛋白、血糖,血肌酐。HE染色观察肾组织形态,免疫组织化学法及逆转录-聚合酶链反应法分别测大鼠肾组织骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA的表达。结果 吡格列酮3 mg·kg^-1·d^-1组、吡格列酮15 mg·kg^-1·d^-1组血肌酐、微量白蛋白、肾质量/体质量较糖尿病组明显下降（P<0.05）。与糖尿病组比较,吡格列酮15 mg·kg^-1·d^-1组血糖明显降低（P<0.05）,吡格列酮3 mg·kg^-1·d^-1组血糖无明显改善,差异无统计学意义（P>0.05）。糖尿病组肾组织骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA表达水平较正常对照组明显升高（P<0.05）。吡格列酮3,15 mg·kg^-1·d^-1组肾组织骨桥蛋白、骨桥蛋白mRNA表达水平较糖尿病组均明显下降（P<0.05）。结论 糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达增加,提示骨桥蛋白可能参与糖尿病肾脏病变的发病过程。吡格列酮干预可以减少糖尿病大鼠尿微量白蛋白,对肾脏有保护作用。吡格列酮对肾脏的保护作用部分可能与吡格列酮抑制肾脏骨桥蛋白的表达有关。     

补肾益髓中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达的影响

目的观察糖皮质激素性骨质疏松症（GIOP）大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组。造模及灌胃给药9周。应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及WesternBlot检测肾组织OsterixmRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低（P〈0．01）、肾组织Osterix mRNA及蛋白表达明显升高（P〈0．01）;与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高（P〈0．01）、肾组织OsterixmRNA及蛋白表达明显下调（P〈0．01）。结论肾组织OsterixmRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过下调肾组织OsterixmRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

康泉方对大鼠前列腺组织碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 探讨补肾通络的康泉方对实验性大鼠前列腺组织碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）表达的影响。方法 采用大鼠去势后注射丙酸睾丸酮致前列腺增生法造模,同时灌胃中药康泉方30天后,取大鼠前列腺组织,采用免疫组化和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法分别检测各组前列腺腹叶组织bFGF表达。结果 与模型组比较,康泉高、中剂量组bFGF和bFGFmRNA表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,康泉低剂量组bFGF和bFGFmRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 康泉方能够降低实验性良性前列腺增生大鼠前列腺组织bFGF表达.     

PAI-1 mRNA在糖尿病大鼠肾脏的表达与通心络胶囊的干预作用研究

目的研究纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）在糖尿病大鼠肾皮质的表达和中药通心络胶囊对其的干预作用。方法将SD大鼠随机分为两组,一组经链尿佐菌素诱发的糖尿病模型（DM）组,另一组为血糖正常对照组（C）,两组均再随机分为DMl组、DM2组、Cl组、C2组,其中DM2组、C2组给予通心络治疗5周。治疗前后称体重、监测血糖,最后取肾脏称重,采用逆转录一多聚酶链式反应（RT-PCR）观测肾皮质PAI-1mRNA表达量。结果 DM组大鼠肾重/体重值及PAI-lmRNA表达明显高于C组（P〈0.01）,DM2组PAI-1mRNA表达低于DMl组,差异有统计学意义（P〈0.05）,肾皮质PAI-1mRNA表达量在C1与C2组间无统计学意义（P〉0.05）。结论 PAI-1mRNA在糖尿病大鼠肾皮质的表达增高,PAI-1增高参与糖尿病肾病的病理生理过程。中药通心络对糖尿病时PAI-1mRNA肾皮质的表达增高有下调作用。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。