乙型肝炎病毒准种对干扰素治疗慢性乙型肝炎的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)准种与慢性乙型肝炎病人(CHB)对干扰素(IFN)应答的关系。方法在接受IFN治疗的病人中，选择以PCR加RFLP方法测定为A^1896或T^1762-A^1764突变株感染者各5例，应用克隆加限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测A^1896和T^1762-A^1764突变，以了解每位病人的准种池中这两种突变株的比例与IFN应答之间的关系。结果在PCR检测为T^1762-A^1764突变株感染者中，3例应答者均为检出A^1896突变株，1例非应答者也如此，另1例非应答者A^1896突变株占40％。在PCR检测为A^1896突变株感染者中，2例应答者的A^1896突变株在准种池中的比例(70％和88％)低于另2例对IFN无应答者(均为100％)，其中1例50％克隆为T^1762-A^1764突变株；另1例非应答者A^1896突变株和T^1762-A^1764突变株比例分别为60％和30％。结论HBV准种分析可以更准确地反映突变与CHB病人对IFN应答之间的关系。T^1762-A^1764突变株在准种池中的比例愈高者对IFN应答率愈良好；A^1896突变株情况似乎正相反。     

慢性乙型肝炎C基因启动子1762/1764双位点和前C区1896位点变异的检测

目的了解慢性乙型肝炎病毒C基因启动子1762/1764双位点变异和前C区1896位点变异的情况以及对血清学的影响,并观察出现1762/1764双位点变异后拉米夫定治疗疗效.方法采用微板核酸杂交-ELISA方法和PCR法检测162例慢性乙型肝炎C区基因启动子1762/1764双位点变异和前C区1896位点变异,35例慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定抗病毒治疗,观察肝功能、HBV复制指标、病毒变异等变化.结果慢性轻型乙肝,慢性中、重型乙肝和肝硬化3组1762/1764双位点变异率分别为14.9%,40.7%和39.0%,1896位点变异率分别为11.9%,40.7%和65.9%;HBeAg＋和HBeAg-2组1762/1764变异率分别为31.1%和28.4%,1896变异率分别为5.4%和60.2%;10例出现1762/1764双位点变异的患者接受拉米夫定治疗12月末,2例复发,并检测出变异株和YMDD变异,其中1例发展为重型肝炎并死亡;24月末,4例复发,并检测出变异株.结论HBV CP1762/1764变异与病情轻重有一定关系,不能完全中止HBeAg的复制,不同于前C区1896位点对血清学的影响;拉米夫定治疗可以抑制变异株,但随着疗程的延长,变异株又会重新出现.     

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764 双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的:研究乙型肝炎病毒前-C区G1896A突变和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗的影响。 方法:采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前-C、基本C区启动子区进行检测。 结果:①前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性(P>0.05);②G1896A突变在发生YMDD变异和未发生YMDD变异的患者间差异有显著性(P<0.05),发生YMDD变异的患者很少伴有G1896A突变率低(9%);③出现治疗中病毒学反弹的患者YMDD变异增加,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性(P<0.05)。 结论:前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响;在G1896A突变株YMDD变异减少;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子T1762A1764 联合突变的临床意义

目的:研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)T^1762A^1764联合突变情况及其临床意义。方法:采用聚合酶链反应(PCR)与限制性长度片段多态性分析(RFLP)相结合，检测130例乙型肝炎患者BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变。结果：HBeAg( )和HBeAb( )两组患者中BCP T^1762A^1764联合突变率的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者(Chronic hepatitis B，CHB)40．0％和85．7％，无症状携带者(Asymptomatic carrier，ASC)22．2％和65．0％，献血员为5％。BCP T^1762A^1764双点联合突变组HBV-DNA≥10^5 cps／ml检出例数81例(96．4％)，非突变组HBV-DNA≥10^5 cps／ml检出例数25例(54．3％)。结论：BCP T^1762A^1764联合突变与乙型肝炎的发生、发展以及预后有关，可能是CHB与ASC患者HBeAg(-)的原因之一，可促进乙肝病毒繁殖。对慢性乙型肝炎患者检测HBV BCP T^1762A^1764联合突变有一定的临床意义。     

乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变及其临床意义

目的探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区基因突变方法的临床价值及前C区/BCP区基因突变的临床意义。方法应用基因芯片技术检测95例慢性乙型肝炎患者的HBV前C区G1896A(nt1896G→A)、A1814C(nt1814A→C)及HBV C基因启动子(BCP)T1762A、G1764A(nt1762A→T、nt1764G→A)四位点突变,同时检测血清HBV DNA含量及ALT、AST水平。结果95份血清标本中,有91份分别检测到了HBV前C区/BCP区基因突变,阳性率95.8%,其中61896A突变33例(36.3%),A1762T G1764A联合突变64例(70.3%),G1896A A1762T G1764A联合突变22例(24.2%),未检测到A1814C突变毒株。抗-HBe阳性的慢性乙肝患者HBV前C区/BCP区突变率较HBeAg阳性的患者明显增高。G1896A突变后血清ALT水平与未变异组比较有显著性差异(P<0.05),而其他各组的肝功能无显著变化。G1896A A1762T G1764A联合突变后,血清HBV DNA水平较未变异组降低(P<0.05),其他各组间则无显著变化。结论应用基因芯片法测定HBV特定变异位点,可一次同时检测多个突变位点,具有一定的临床应用价值。HBV前C区/BCP区突变对血清HBVDNA水平和肝功能有一定的影响。     

慢性乙型肝炎患者IFN治疗与HBV DNA前C区变异关系的研究

目的：通过检测慢性乙型肝炎患者干扰素（IFN）治疗前后HBVDNA前C区1896位变异,探讨其与IFN治疗之间的关系。方法：采用PCR—RFLP法检测慢性乙型肝炎患者前C区1896位变异,观察IFN治疗前后变异株的变化及IFN疗效。结果：200例慢性乙型肝炎患者IFN治疗前变异株检出率为19％,IFN治疗后未检出新出现的变异株;变异株、野毒株感染的慢性乙型肝炎患者IFN治疗有效率分别为60％与50％,均显著高于对照组（P=0．007,P〈0．001）,变异株、野毒株感染的慢性乙型肝炎患者IFN治疗有效率比较无差异（P〉0．05）。结论：IFN治疗无诱导前C区1896位变异的作用;干扰素治疗变异株病毒感染的慢性乙型肝炎有效,其近期疗效与野毒株感染的慢性乙型肝炎基本相同。     

乙型肝炎病毒核心启动子的T1762A1764变异与干扰素疗效的关系

目的为探讨乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(CP)区域T1762A1764变异对干扰素治疗疗效的影响。方法41例HBeAg阳性、HBVDNA阳性及ALT升高的慢性乙型肝炎(CHB)患者给予干扰素治疗,在治疗前后均应用聚合酶链反应(PCR)技术并对其产物直接测序分析,并定期检测肝功能及HBVDNA。结果治疗前41例CHB患者中有22例存在T1762A1764变异,占54%。干扰素治疗6个月后,HBVDNA阴转率在T1762A1764变异株感染患者中显著高于野生株感染的患者(64%vs37%,P<0.01);HBeAg阴转率在变异株感染患者中显著高于野生株感染的患者(55%vs42%,P<0.05);两组ALT复常率差异无显著性(54%vs46%,P>0.05)。在野生株治疗有效的6例患者中有1例患者出现T1762A1764变异株。结论CP区域T1762A1764变异可提高干扰素治疗疗效,干扰素治疗可能会增加T1762A1764变异的机会。     

乙型肝炎病毒前C区1896点突变的检测

目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区1896点突变的临床意义。方法：利用PCR-ELISA技术检测38倒HBeAg阴性而HBV DNA阳性的乙型肝炎病毒感染者HBV前C区1896点突变。结果：38例HBeAg阴性而HBV DNA阳性的乙型肝炎病毒感染者检出28例HBV前C区1896变异病毒株，检出率为73．7％。结论：临床HBeAg阴性，HBV DNA阳性感染者多数为HBV l896变异病毒株感染，这些感染者具有传染性，故HBeAg阴性不能作为排除HBV复制和传染性的唯一指标。     

酒精对慢性乙型肝炎患者乙肝病毒多位点基因突变影响研究

目的：探讨酒精对HBV DNA多位点基因变异的影响,为慢性乙型肝炎的临床诊断和治疗提供依据。方法:选取45例慢性乙肝患者为研究对象,分为嗜酒组和非嗜酒组,采用DNA芯片技术, 检测HBV DNA前C区1896及1814位点、BCP区1762及1764位点、P区528及552位点的基因变异。结果:嗜酒组在BCP区1762 、1764位点的变异率明显高于非嗜酒组(P均＜0.05)。在前C区1896、1814位点,P区528、552位点变异率差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论:酒精可导致乙肝病毒BCP区1762 、1764位点发生基因突变,BCP区基因变异可促进HBV在人体内的复制表达,加重慢性乙型肝炎患者的病情。     

肝脏疾病进展与乙型肝炎病毒前 C／C 区突变

目的：研究慢性乙型肝炎患者前C/C区突变位点与肝脏疾病进展的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR及直接测序法检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎30例、HBeAg阳性慢性乙型肝炎20例,分析前C/C区变异位点与患者病情进展的相关性。结果肝硬化组前C/C区变异位点T1762/A1764、A1896发生率（86.3％,54.5％）明显高于慢性肝炎组（32.1％,35.7％）,差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。慢性肝炎组与肝硬化组HBV载量差异无统计学意义（ P ＞0.05）;HBeAg阴性患者T1762/A1764,T1766/A1768,A1896变异位点发生率较HBeAg阳性患者显著增高（ P ＜0.05）。结论 T1762/A1764,A1896突变率的增加会促使肝脏疾病进展至肝硬化;HBeAg阴患者T1762/A1764,T1766/A1768,A1896变异位点的频率增加会促进肝脏疾病的进展。     

南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点

目的探讨南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点.方法随机选择2004年3月～2005年3月南京地区HBV-DNA阳性（荧光PCR）的HBV感染者220例.采用多对型特异性引物PCR法检测HBV基因型,采用特异性引物PCR法检测HBV前C区1896变异株和野生株.结果 HBV感染者中基因型B 71例,基因型C 146例,基因型D 1例,B/C混合型1例,A/B混合型1例,未发现基因型A、E、F存在.有163例HBV感染者发生了前C区1896变异,变异株检出率（单纯变异株/混合变异株）为74.1%.基因型B 78.9%发生了前C区1896变异,基因型C有66.4%发生了C区1896变异,两组比较,差别有显著性意义 （χ2=4.56,P＜0.05）.结论南京地区存在HBV基因B、C、D及B＋C和 A＋B混合型,以B、C型为优势基因型,未发现A、F、E基因型;HBV基因型B前C区1896的变异率较HBV基因型C高.     

慢性HBV感染患者bcp/pc区点突变模式、pres区缺失及其临床意义

目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的 DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。结果 Bcp/pc区点突变包括nt1753、nt1762、nt1764、nt1776、nt1803、nt1846、nt1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1%及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。     

治疗基线乙型肝炎病毒BCP区和PC区变异对拉米夫定耐药预测的探讨

目的探讨慢性乙型肝炎患者治疗基线乙型肝炎病毒(HBV)BCP区和PC区基因变异对拉米夫定耐药的影响。方法收集接受拉米夫定(100mg/片)初治2年内耐药的26例(耐药组)和2年内无耐药的16例(对照组)慢性乙型肝炎患者治疗基线的血清标本,采用型特异性多引物对巢式PCR法检测HBV基因型,用PCR产物直接测序技术检测治疗基线HBV的BCP区、PC区和P区变异位点,对发生频率较高的两组位点变异进行统计学分析。结果两组病人无1例发生P区rt204/180变异;在HBV BCP/PC区突变中,耐药组与对照组在点突变A1762T(38.48%vs 68.75%,P>0.05)、G1764A(26.92%vs50.00%,P>0.05)和G1896A(19.23%vs 18.75%,P>0.05)差异无统计学意义;对照组在点突变C1799G(43.75%vs 0,P<0.05)、T1802C(18.75%vs 0,P<0.05)、G1838A(25.00%vs 0,P<0.05)、A1846C(37.50%vs 0,P<0.05)、C1856T(31.25%vs 0,P<0.05)、G1888A(25.00%vs 0,P<0.05)明显高于耐药组。结论治疗基线HBV BCP区的A1762T/G1764A变异和PC区的G1896A变异对拉米夫定的2年疗效影响不大;治疗基线HBV BCP区的C1799G、T1802C、G1838A、A1846C的变异和PC区的C1856T、G1888A的变异可能是接受拉米夫定初始治疗获得长期维持应答的预测因素之一。     

HBV BCP区1762/1764和1896突变位点检测新技术研究

目的：利用错配扩增和荧光PCR原理,建立一种针对HBV BCP区1762/1764和前C区1896突变位点的新型检测方法---错配扩增突变分析PCR法（MAMA-PCR）,并对该方法进行临床评价。方法：a）MAMA-PCR突变检测方法性能评估：以野生和突变性阳性参考品作为模板检测3次,分析该方法稳定性;将突变型和野生型质控品梯度比例混合,分析该方法检测混合感染的检测效率。b）测序法、商品化试剂盒与本方法同时检测样本并对MAMA-PCR方法做出评价。结果：MAMA-PCR 3次检测重复性良好,CV值均小于5%,且可稳定检出含1%突变含量的混合样本。132例HBV样本中,1762/1764双突变位点测序法检出67例,ARMS-PCR试剂盒检出69例,MAMA-PCR检出69例,突变检出率分别为50.8%、52.3%和52.3%;1896突变测序法检出39例,ARMS-PCR试剂盒检出41例,MAMA-PCR检出42例,突变检出率分别为29.5%、31.1%和31.8%。结论：MAMA-PCR 检测方法性能稳定,突变检出率高于测序法,与商用试剂盒基本一致,可用于临床乙肝患者 BCP区1762/1764双突变和前C区1896突变位点的快速检测。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C基因序列分析

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区及前C(Pre C)区基因的变异情况,并且分析其发生频率、分布规律及其与临床病情的关系.方法 应用套式PCR扩增nt1660-1935的HBV DNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及Pre-C区基因的变异情况.结果 130例乙型肝炎患者标本中,BCP区nt1762/nt1764发生双突变者75例(57.69%),Pre-C区nt1896发生突变者20例(15.38%),并且这两种突变在重型肝炎组(75.00%)及肝硬化组(72.22%)所占比例均明显高于慢性肝炎组(52.56%);此外,在BCP区及Pre-C/C区还发现了一些突变频率较高的其他突变位点(如nt1753,nt1766,nt1846,nt1899,nt1915),其中nt1753突变仅发生于有nt1762/1764双突变的患者,与重型肝炎及肝硬化的发生有一定关系;在BCP区有4处核苷酸突变共存者10例,其中重型肝炎组(12.50%)及肝硬化组(13.88%)所占比例明显高于慢性肝炎组(5.12%).结论 HBV BCP区nt1762/nt1764双突变和Pre-C区nt1896突变与肝炎的活动、重型化及肝硬化的发生有关;BCP区其他位点的突变共存对肝炎病情的进展也有重要影响.     

不良结局家族聚集性乙型肝炎病毒感染者HBV基因型/亚型及前C/C启动子区变异特征分析

目的:分析不良结局家族聚集性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者HBV基因亚型和前C/C启动子(Corepromoter,CP)区变异特征。方法:选择101名不良结局家族聚集性HBV感染者为实验组,92名无明显家族聚集性的慢性HBV感染者作对照,用巢氏PCR及直接测序法检测基因亚型及前C/CP区变异位点,比较实验组和对照组的不同基因亚型构成比率及前C/CP区核苷酸变异频率,分析实验组HBV基因亚型及热点变异与临床疾病谱的关系。结果:在实验组和对照组中,Ba均为优势基因亚型,其次为C2、C1亚型,仅在实验组检测出1例Bj亚型。C基因型在实验组中构成比率显著高于对照组(P<0.01);实验组83.3%(5/6)感染C1基因亚型的患者发生肝硬化和(或)肝癌(Liver cirrhosis/hepatocellular carcinoma,LC/HCC),明显高于Ba(29.9%,P<0.01)和C2亚型(11.8%,P<0.01);各位点变异频率在2组中无明显差异(P>0.05);实验组17个位点发生变异,其中A1752、A1775、G1899位点变异在无症状HBV携带者(Asymptomatic carriers,ASC)、慢性乙型肝炎(Chronic hepatitisB,CHB)、慢性重型乙型肝炎(Chronic severe hepatitis B,CSHB)及LC/HCC组间分布差异均无统计学意义(P>0.05);随着病情加重,T1753、A1762、G1764、A1846、G1896位点变异率在ASC、CHB、CSHB和LC/HCC组中呈逐渐增加的趋势。LC/HCC组A1762T/G1764A双突变率及A1762T/G1764A/1896A三联变异率显著高于ASC组(P<0.01)。结论:本地区,不良结局家族聚集性HBV感染者C基因型患者构成比率增加,C1基因亚型及前C/CP区多个位点变异可能与慢性HBV感染者不良结局相关。     

慢性乙肝BCP区(1762/1764)双位点变异对肝癌发病率影响

目的探讨慢性乙肝BCP区(1762/1764)双位点变异对肝癌发病率的影响。方法对1012例慢性乙肝和肝硬化的患者(肝癌患者除外),根据A1762T与G1764A变异检测结果分为观察组和对照组,双变异者为观察组,无变异者为对照组,追踪观察后继发生肝癌情况,计算两组的肝癌发病率并进行统计学分析。结果观察组的肝癌发病率为873.7/10万人,对照组为146.4/10万人,经统计学分析观察组的肝癌发病率明显高于对照组(P0.05)。结论 BCP区(1762/1764)双位点变异的患者肝癌发病率增高,对该类人群应加强肝癌的筛查。     

HBV前C／BCP区变异对HBeAg阳性慢乙肝患者干扰素治疗早期应答的影响

目的：研究HBV DNA前C区1896位变异,BCP区1762/1764位变异与干扰素α治疗应答的关系。方法以41例接受干扰素治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者为研究对象。治疗前取患者外周血清,采用PCR 技术扩增前C区、BCP区,并测序分析。同时监测治疗0、12、24周患者外周血ALT、HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平。结果①PC/BCP区变异（突变型,non-WT）患者HBeAg转阴率（ n＝13,72．2％）高于未发生PC/BCP变异（野生型,WT）患者（n＝4,28．8％）（P＝0．014）;②突变组HBsAg降低（ n＝5,56．7％）、HBVDNA转阴（n＝8,53．5％）,完全应答（ n ＝5,62．5％）,野生组 HBsAg 降低（ n ＝6,43．3％）、HBV DNA 转阴（ n ＝7,46．7％）,完全应答（n＝3,37．5％）,2组间无明显差异。结论突变型患者HBeAg转阴率高于野生型患者。     

变异株与野毒株慢性乙型肝炎干扰素治疗疗效比较

干扰素(IFN-α)是慢性乙型肝炎抗病毒治疗的有效药物,但关于IFN治疗由变异株病毒或野毒株病毒感染的慢性乙型肝炎的疗效何者更优尚无定论。本文根据轻度慢性乙型肝炎患者前C区1896位的变异情况分为变异株组和野毒株组,比较两组采用IFN治疗的临床疗效。1资料与方法1.1临床资料19     

HBV多基因位点变异与肝细胞癌相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒前C区和C基因启动子基因变异与肝细胞癌发生的关系。方法采用实时荧光PCR检测29例慢性乙型肝炎（CHB）,27例乙型肝炎肝硬化（LC）,26例HBV相关肝细胞癌（HCC）患者血清HBV前C区G1896A和BCP区A1762T／G1764A的变异情况。结果HCC组和LC组前c区G1896A和BCP区A1762T／G1764A变异率均显著高于CHB组（P≤0．005）,HCC组和LC组间无显著差异（P〉0．05）。结论乙型肝炎病毒C基因启动子和前c区基因变异与肝细胞癌、肝硬化的发生密切相关。