磷脂酰肌醇-3-激酶p55γ-N末端24个氨基酸对体外培养HaCaT细胞增殖的影响

目的 观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用.方法 构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU/PI双掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,CFDA-SE(细胞增殖示踪荧光探针)标记法检测细胞增殖情况.结果 AD-N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程于G 0/G 1期,S期和G 2/M期细胞减少,AD-N24-GFP组各期细胞分布为:G 0/G 1期(84.18±1.73)%,S期(7.60±1.47)%,G 2/M期(8.22±1.33)%,而AD-GFP组各期细胞分布为:G 0/G 1期(61.14±2.76)%,S期(24.54±1.29)%,G 2/M期(14.32±1.61)%,空白对照组各期细胞分布为:G 0/G 1期(65.78±2.11)%,S期(22.22±1.92)%,G 2/M期(12.00±1.19)%,AD-N24-GFP组与AD-GFP组及空白对照组间G 0/G 1期和S期细胞比例的差异有显著性意义(P ＜0.05);BrdU阳性细胞比例显示:AD-N24-GFP组R2为:(5.89±1.33)%,AD-GFP组R2为:(27.09±2.61)%,空白对照组R2为:(24.91±2.04)%,提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的DNA合成;CFDA-SE检测显示AD-N24-GFP组增殖指数(PI)为:(33.60±2.52),AD-GFP组PI为:(52.47±4.41),空白对照组PI为:(55.29±7.61),提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的增殖.结论 在HaCaT细胞中过表达N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程,干预其细胞DNA合成,抑制其细胞增殖.     

HBx与microRNA-21在肝细胞肝癌中的相互作用及其机制研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因编码的X蛋白(HBx)与micro RNA21(mi R-21)在肝细胞癌Hep G2细胞中的作用。方法:选取人肝癌细胞株Hep G2细胞,随机分为Hep G2细胞组、GFP腺病毒组和HBx腺病毒组,其中GFP腺病毒组和HBx腺病毒组细胞分别感染GFP腺病毒和HBx腺病毒,采用流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测ER蛋白表达,RT-PCR检测HBx m RNA和mi R-21表达。结果:HBx腺病毒组HBx m RNA相对表达量为(0.805±0.030),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组细胞G1期比例为(34.24±2.10)%,明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而S期细胞比例为(56.80±2.09)%,明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组mi R-21表达为(1.892±0.038),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05),而ERα蛋白表达为(0.21±0.03),明显低于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05);HBx腺病毒组穿膜细胞数为(78.12±8.78),明显高于Hep G2细胞组和GFP腺病毒组(P0.05)。结论:HBx可促进肝癌细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与上调mi R-21表达和下调ER表达有关。     

穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用

目的 观察穿膜融合多肽TAT-N24对S180腹水瘤生长的抑制作用.方法 建立S180腹水瘤小鼠模型,以不同剂量TAT-N24腹腔内注射,观察TAT-N24对腹水瘤小鼠腹水生成的影响,流式细胞仪检测腹水瘤细胞细胞周期进程,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测TAT-N24对细胞DNA合成的影响,验证TAT-N24的抗肿瘤作用. 结果腹水测量结果显示,模型对照组腹水为(8.3±2.3)mL,实验组分别为:TAT-N24 5 μL组(3.2±1.2)mL,TAT-N24 20 μL组(2.7±1.0)mL,TAT-N24 100 μL组(1.3±0.2)mL;结果提示给予腹腔注射TAT-N24能显著抑制腹水的生成(P＜0.05);BrdU/PI双掺入法检测细胞DNA合成结果显示,对照组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(25.86±3.54)%,而给予TAT-N24高剂量(100 μL)组BrdU阳性细胞数占总细胞比例为(5.91±0.57)%,2组间差异有统计学意义(P＜0.01);对照组动物腹水瘤细胞中G0/G1期细胞为(63.88±4.01)%,S期和G2/M期细胞分别为(23.93±2.91)%和(12.19±1.62)%,而TAT-N24高剂量组动物腹水瘤细胞G0/G1期细胞增加至(83.71±1.53)%,S期和G2/M期细胞分别为(7.56±1.40)%和(8.72±0.73)%,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 融合多肽TAT-N24能有效抑制S180腹水瘤小鼠的腹水生成,阻滞腹水瘤细胞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成.     

过氧化氢诱导同步化HepG2细胞DNA损伤和凋亡的敏感时相研究

目的:探讨过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞的DNA损伤和凋亡效应在细胞周期不同时相的敏感性.方法:利用胸腺嘧啶核苷(TdR)阻断肝癌HepG2细胞于G1期末后,去除胸苷,培养不同时间,分别得到同步化的G1期、S期和G2/M期细胞,150 μmol/L的H2O2处理12 h,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定细胞的DNA损伤;将各期细胞用200 μmol/L的H2O2处理,采用流式细胞术测定细胞凋亡.同时实验设立未同步化和正常对照组.结果:①分别获得 88.6%的G1期细胞、78.1%的S期细胞、66.8%的G2/M期细胞.② SCGE结果显示,同步化于S期和G2/M期细胞的DNA尾长明显增长,尾部DNA百分比含量和尾矩明显增加,其中S期细胞效应最为显著.③凋亡检测结果显示,同步化各组细胞的凋亡率明显高于未同步化组,以S期最为显著.结论:H2O2诱导HepG2细胞DNA损伤和细胞凋亡在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导S期细胞的DNA损伤和凋亡.     

GHSC-73对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察来源于海芒果种子的强心苷化合物β-D-glucosyl-(1-4)-α-L-thevetosides of 17β-digitoxigenin(GHSC-73)对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用MTT法检测不同浓度GHSC-73对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;采用流式细胞仪Propidium Iodide(PI)单标法检测GHSC-73对HepG2细胞周期进程的影响;Real-time RT-PCR检测S期相关基因在GHSC-73处理前后表达的变化.结果:GHSC-73可抑制HepG2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞24、48、72 h后,IC50分别为(5.18±0.21)、(0.37±0.08)、(1.66±0.16) μmol/L.与对照组相比,随着作用时间的延长,S期细胞百分比逐渐增多,而G0/G1期细胞百分比逐渐减少(P<0.05),G2/M期细胞百分比基本保持不变,表明GHSC-73阻滞HepG2细胞于S期.Real-time RT-PCR检测S期相关基因的结果显示:GHSC-73诱导后HepG2细胞GADD153、cyclin D1、p21基因表达上调,cyclin A2、 DHFR、TYMS基因表达下调.结论:GHSC-73可通过S期阻滞来抑制HepG2细胞增殖,其阻滞作用可能与GADD153、cyclin D1、 p21、 cyclin A2、DHFR和TYMS基因表达变化有关.     

PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期.     

PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期.     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及凋亡的影响

目的 研究甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定甜菜碱对HepG2的细胞毒作用;PI染色,流式细胞术观察甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 甜菜碱对HepG2细胞的IC50为0.5mol/L;甜菜碱使HepG2细胞G2/M期比例下降;甜菜碱作用于HepG2细胞24h后,3个不同剂量组(0.1、0.2、0.4mol/L)诱导细胞凋亡率分别为(7.5±0.9)%、(11.5±1.1)%、(33.9±1.2)%,48h后凋亡率为(13.4±1.9)%、(20.9±1.4)%、(67.8±1.8)%.结论 甜菜碱可抑制人肝癌细胞HepG2的生长,阻滞细胞进入G2/M期进而诱导细胞凋亡.     

人VIGILIN参与调控肝癌细胞H19和IGF2印记基因表达的研究

目的 探讨人高密度脂蛋白结合蛋白基因(VIGILIN)是否参与肝癌细胞在细胞周期中印记基因H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)表达的调控.方法 通过流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2细胞周期选择周期点,采用RT-PCR、RNA干扰、实时荧光定量RT-PCR检测各周期点VIGILIN、H19、IGF2基因表达.结果 ① HepG2细胞周期约为20 h;其中0～9 h、20～28 h约为S期,9～20 h、28～39 h约为G2/M、G1期,并选定6 h、20 h、43 h、60 h,分别代表S期中期、G1～S期、S期中期和G1期末; ②细胞周期同步化后加入血清,刺激VIGILIN转录,上调VIGILIN的表达,从G2/M至G1期,逐渐增加,G1期末达高峰,S期逐渐减少;与之相反,H19的表达,在S期逐渐增加,在G2/MG1期逐渐减少,在S期中期达到高峰.而IGF2的表达也增加但没有明显的周期性.H19与VIGILIN mRNA表达呈负相关(r=-0.6941,P<0.05).③用VIGILIN shRNA(pSIREN-VIG shRNA)重组载体转染HepG2细胞48 h后,相对于3个对照组(未转染组, 脂质体转染组和转染pSIREN-GFP shRNA组), 实验组VIGILIN mRNA的表达受到明显抑制,此时,IGF2 mRNA表达增加30.13%,H19 mRNA表达减少12.08%.结论 VIGILIN和H19 mRNA表达与细胞周期有关;VIGILIN参与调控H19、IGF2印记基因的表达.     

小分子干扰RNA下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用设计合成的SCD-1 siRNA转染人肝癌细胞HepG2细胞株,转染后细胞分为3组:空白对照组(未做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和SCD-1 siRNA组(SCD-1 siRNA转染)。采用反转录聚合酶链反应检测HepG2细胞SCD-1 mRNA的表达,噻唑蓝法检测HepG2细胞的增殖,用流式细胞术检测SCD-1 siRNA对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 SCD-1 siRNA组的SCD-1 mRNA表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);转染后24、48、72 h,SCD-1 siRNA组HepG2细胞增殖较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P<0.01);SCD-1siRNA组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);SCD-1 siRNA组HepG2细胞在合成前期(G0/G1期)的细胞比例明显高于空白对照组和阴性对照组,在合成期(S期)和合成后期(G2/M期)的细胞比例均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。空白对照组和阴性对照组HepG2细胞在SCD-1 mRNA表达、细胞增殖、细胞凋亡率及细胞周期方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA可通过下调HepG2细胞SCD-1基因的表达,抑制HepG2细胞的增殖,并促进其凋亡。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。