长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

LINC00982在肺腺癌中的表达及功能研究

目的:探讨LINC00982在肺腺癌中的表达及功能研究。方法:采用在线数据库分析LINC00982在肺腺癌组织中的表达情况,并分析LINC00982与肺腺癌患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的关系。采用A549细胞构建体外模型,并构建LINC00982过表达和正常表达模型。并采用CCK-8实验、Transwell侵袭和转移实验观察细胞的增殖、侵袭和转移情况。结果:与空白对照组相比,LINC00982过表达组的LINC00982相对表达量更高(P<0.05),LINC00982过表达组24、28 hOD值更低(均P<0.05),LINC00982过表达组的细胞侵袭率、迁移率更低(均P<0.05);LINC00982在肺腺癌患者组织中表达降低(P<0.05);LINC00982表达对肺腺癌患者的OS有统计学差异,且LINC00982低表达患者预后生存期更短(P<0.05),对DFS无统计学差异(P>0.05)。结论:LINC00982的表达降低可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而这种促进作用在LINC00982过表达模型中被抑制。临床早期可通过...     

钩吻总碱对肺腺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 以人肺腺癌细胞（A549、SPCA1）为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱（TAG）研究其抗肿瘤作用。方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG,利用薄层色谱法鉴定TAG的提取,通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态,采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡,碘化丙啶单染法检测细胞周期,Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG。Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0 μg/mL,由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150 μg/mL,且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少。CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖（P <0.05）。Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂;流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加,检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G₂/M期;Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调,Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加,通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡（P <0.05）。结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

RAB5A对人肺腺癌细胞系粘附能力的影响

目的：研究RAB5A基因转染后对肺腺癌粘附能力的影响。方法：采用细胞粘附能力测定,观察转染前后细胞系粘附能力的改变。结果：转染PAB5A正义表达载体的AG2Y83－α细胞系粘附能力增强,转染反义重组质粒的Anip9n3细胞系粘附能力明显减弱。结论：RAB5A在人肺腺癌转移特性的形成中具有重要的作用。     

GPRC5A基因在肺腺癌中的表达及临床意义

目的了解G蛋白偶联受体C型家族5A（GPRC5A）基因在肺腺癌组织及癌旁正常组织中的表达,并探讨其临床意义。方法分别采用Real-timePCR和Westernblot法检测25例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5AmRNA和蛋白表达水平。应用免疫组化法检测93例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A蛋白的表达情况,并分析GPRC5A蛋白的表达与临床病理特征及预后的关系。结果25例肺腺癌组织中GPRC5AmRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织（均P＜0.05）。93例肺腺癌中GPRC5A蛋白低表达率为55.9％,均表达在胞质和胞膜中。GPRC5A蛋白的表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关（均P＜0.05）,而与性别、年龄、肿瘤大小均无关（均P＞0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示,GPRC5A高表达的患者3年生存率为73.7%,高于低表达患者的39.4%,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论GPRC5A在肺腺癌组织中低表达,其低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关,可作为估计生存率的独立指标。     

GPC5过表达对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞生物学功能的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响?方法:采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞中的CICs微球,通过定量分析检测微球大小,流式细胞术检测CD133阳性细胞比率,Matrigel和Tanswell小室检测细胞侵袭迁移能力,Western blot检测上皮细胞间质化相关蛋白表达?结果:与对照组相比,过表达GPC5后A549细胞中CICs微球形成数目明显减少,体积变小,CD133阳性率明显下降(P < 0.05);细胞侵袭?迁移能力显著降低(P < 0.05);E-cadherin的蛋白表达明显上调,Vimentin?N-cadherin的表达显著被抑制(P < 0.05)?结论:GPC5过表达能够抑制肺腺癌细胞株A549中CICs的发生?侵袭和迁移,调控上皮细胞间质化相关蛋白表达?     

CDKL1在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)在肺腺癌（LUAD）中的表达及其对LUAD细胞增殖、侵袭和迁移能力等细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用TCGA数据库分析CDKL1基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析CDKL1基因表达水平与LUAD患者预后的关系;收集78例行手术切除的LUAD组织和对应癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹（western blotting）法检测LUAD组织和癌旁组织中CDKL1 mRNA和蛋白的表达水平,并分析CDKL1表达水平与LUAD患者临床病理特征的关系。体外培养LUAD细胞系NCI-H1975,并将CDKL1过表达质粒及其空载质粒转染至NCI-H1975细胞中,分别为空白对照（blank）组、空载（Vector）组和CDKL1过表达（oe-CDKL1）组。然后采用细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）和BrdU法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力变化;Western blotting法检测细胞凋亡蛋...     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响

目的:探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响.方法:以人肺腺癌细胞系A549为研究对象,用MTT法筛选最佳PDT参数.实验分为对照组(不进行PDT)和PDT组,在PDT 24 h后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、TUNEL标记法测定细胞凋亡指数(AI).结果:血卟啉衍生物(HPD)浓度10 mg/L、激光剂量10 J/cm2是PDT对A549细胞杀伤作用的最佳条件.当激光剂量均为10 J/cm2时,采取6组不同的功率时间组合测得的D492值无统计学差异.在最佳PDT条件下,琼脂糖电泳结果可见PDT组产生了特征性的DNA梯形条带;流式细胞术检测显示PDT组发生了G0/G1期生长停顿,凋亡率为(18.443±7.122)%,显著高于对照组的(0.301±0.361)%(P<0.01);TUNEL标记法也证实该组可见明显的棕黄色凋亡细胞,AI为(18.480±9.555)%,明显高于对照组的(0.880±0.944)%(P<0.01).结论:PDT通过诱导凋亡对体外培养的A549细胞产生杀伤作用.     

肺腺癌与细支气管肺泡癌细胞增殖和凋亡能力的差异

目的　探讨肺腺癌与细支气管肺泡癌细胞增殖和凋亡能力的差异。方法　流式细胞术检测 2 4例肺腺癌、13例细支气管肺泡癌的增殖指数 (PI)与总S期细胞比例 (SPF) ,TUNEL法检测凋亡指数 (AI) ,免疫组化检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的表达。结果　肺腺癌的PI值为 19.3± 6.9,细支气管肺泡癌的PI值为 12 .1±5 .4,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;肺腺癌的AI值为 2 .3± 1.7,细支气管肺泡癌的AI值为 9.3± 2 .0 ,差异有显著性 (P<0 .0 1) ;细胞周期蛋白D1在肺腺癌的表达率为 5 8.3 % (14 2 4) ,在细支气管肺泡癌的表达率为 2 3 .1% (3 13 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　细支气管肺泡癌的增殖能力较肺腺癌弱 ,而凋亡能力较之强 ,因此生长较缓慢 ,恶性度低于肺腺癌 ,应与后者区别对待     

PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子( PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析 A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/ L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF 浓度的增加,PEDF 对 A549细胞的增殖抑制率递增(P <0.05);相同PEDF 浓度(80、160、320、640 nmol/ L)情况下,除了80、160 nmol/ L PEDF 作用24 h 和48 h 的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF 作用时间的延长,PEDF 对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P <0.05)。上述不同浓度的PEDF 处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF 浓度的升高呈递增趋势(P <0.05)。结论摇PEDF 在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF 抑制细胞增殖作用可能和PEDF 浓度及作用时间有关,PEDF 诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF 浓度有一定关系。     

Effects of paclitaxel on cell proliferation and apoptosis and its mechanism in human lung adenocarcinoma A549 cells

INTRODUCTION Primary bronchogenic carcinoma is one of thecommonest malignancy tumors in the world.The incidence and mortality rate are rising in recent30 years. Adenocarcinoma accounts for about 25%of all primary bronchogenic carcinomas, the curativerate is not ideal by traditional chemotherapy and ra-diotherapy[1-4]. Paclitaxel is a extensive anti-cancerdrug whose mechanism is anti-microtubules and sta-bilizes cell microtubules specially, and has also beenused widely in ovarian cancer, b…     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义

目的初步探讨E-钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌细胞A549体外立体培养,同时进行普通平面培养,通过流式细胞技术、Western blot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期,E-钙粘素的表达,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性.结果①立体培养细胞存在E-钙粘素的高表达;②同平面培养比较,立体培养细胞出现细胞周期G1期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现,给予E-钙粘素阻滞剂SHE78-7后,两者差异明显缩小.结论 E-钙粘素介导的细胞-细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡,影响肺腺癌A549细胞对ADM的敏感性,在肿瘤群集耐药中发挥作用.     

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloids from tripterygium hypoglaucum hutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响.方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性.流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高.结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡.     

GPC3在卵巢透明细胞腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)在卵巢透明细胞腺癌中的表达及临床意义?方法:采用免疫组织化学方法分别检测83例卵巢癌组织(透明细胞腺癌45例?浆液性癌20例?黏液性癌18例)?20例浆液性囊腺瘤及20例正常卵巢组织中GPC3蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测38例卵巢癌组织(透明细胞腺癌20例?浆液性癌10例?黏液性癌8例)?5例浆液性囊腺瘤和5例正常卵巢组织中mRNA的表达情况,并分析GPC3与卵巢透明细胞腺癌临床病理学参数及预后的相关性?结果:①卵巢透明细胞腺癌中GPC3蛋白阳性表达率和mRNA表达量(82.2%;1.326 1 ± 0.493 6)均明显高于浆液性癌(20%;0.426 5 ± 0.029 4)?黏液性癌(5%;0.265 2 ± 0.103 9)?浆液性囊腺瘤(0%;0.141 3 ± 0.011 3)?正常卵巢组织(0%;0.291 4 ± 0.048 1),差异有统计学意义(P均 < 0.01);②GPC3蛋白阳性表达率及GPC3 mRNA表达量与卵巢透明细胞腺癌的临床分期有相关性,Ⅲ~Ⅳ期患者中的表达(100%;1.808 1 ± 0.265 7)显著高于Ⅰ~Ⅱ期患者(71.4%; 1.045 8 ± 0.403 6)(P值 < 0.01);③卵巢透明细胞腺癌铂类药物耐药患者GPC3蛋白阳性表达率及mRNA表达量(100%; 1.808 1 ± 0.265 7)均高于铂类药物敏感型患者(70.3%; 0.991 8 ± 0.330 3)(P < 0.05);④GPC3蛋白阳性表达率与卵巢透明细胞腺癌患者的预后相关,预后差的患者中阳性率及表达量高,差异有统计学意义(P < 0.05),Kaplan-Meier单因素生存分析亦显示GPC3蛋白为影响预后的因素(P=0.048);⑤卵巢透明细胞腺癌中GPC3蛋白阳性表达率和mRNA表达量与患者的淋巴结转移和远处器官转移无相关性(P > 0.05)?结论:GPC3在病理鉴别诊断中有重要意义,GPC3与卵巢透明细胞腺癌患者的临床分期和铂类耐药相关,提示其可能在卵巢透明细胞腺癌的发生发展起重要作用,有望成为卵巢透明细胞腺癌的预后指标和潜在治疗靶标?     

抑制survivin基因表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究survivin基因与肺腺癌的关系,探讨survivin对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法合成抑制survivin基因的siRNA,通过脂质体转染到肺腺癌A549细胞中,荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡指数,Western blot检测survivin编码表达的蛋白,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果抑制survivin在肺腺癌A549细胞中的表达后,能够抑制A549细胞增殖,诱导细胞的凋亡,survivin基因编码表达的蛋白明显减少。结论应用RNAi抑制survivin基因,可以抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin能作为治疗肺腺癌的一个潜在的基因靶点。     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。