知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷C对照品的制备与鉴定

目的:研究知母中知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷C对照品的制备方法,并对其进行鉴定。方法:采用大孔吸附树脂、硅胶色谱、Sephadex LH-20色谱、反相ODS色谱分离制备对照品,采用红外、质谱、核磁等波谱方法进行结构鉴定。结果:从知母中分离得到知母皂苷A-Ⅲ与知母皂苷C对照品,纯度均>98%。结论:本试验结果可为知母皂苷的新药开发提供物质基础。     

知母皂苷A Ⅲ对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究知母皂苷AⅢ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响。方法:体外培养HUVECs,分别以浓度为0、1、2、4、8μmol/L的知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h,通过MTT比色法检测细胞生长程度;倒置显微镜观察细胞形态。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:8μmol/L知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h可明显抑制HUVECs增殖,IC50分别为7.2、4.0、2.0μmol/L;随着知母皂苷AⅢ作用时间的延长和浓度的增加,HUVECs数目逐渐减少,细胞开始出现空泡、固缩现象;8μmol/L知母皂苷AⅢ作用于HUVECs,细胞凋亡率为(4.03±0.41)%。结论:知母皂苷AⅢ可明显抑制HUVECs的生长,并诱导部分细胞发生凋亡。     

HPLC法测定知母中知母皂苷BⅢ的含量

目的:建立 HPLC 法测定知母药材中知母皂苷 BⅢ含量。方法:采用 Agilent C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(26:74),检测波长为210 nm,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为33℃。结果:知母皂苷 BⅢ在18.4～172.5μg·mL~(-1)内呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.4%(n=6)。结论:本法可用于知母皂苷 BⅢ的定量分析。     

HPLC-ELSD同时测定知母药材中4种主要皂苷的含量

目的建立同时测定知母药材中4种主要皂苷成分的HPLC-ELSD方法。方法采用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以水(冰醋酸调节pH 3.3)(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,0～8 min,12%～23%B;8～25 min,23%B;25～35 min,23%～45%B;35～40 min,45%～95%B。蒸发光散射检测器漂移管温度55℃,以氮气为雾化气,压力为4.0 Bar。结果知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BII、知母皂苷A III浓度分别在42.10～252.6μg/ml(r=0.9993)、48.80～292.8μg/ml(r=0.999 1)、192.2～1 153μg/ml(r=0.999 7)、8.512～85.12μg/ml(r=0.998 5)的范围内呈良好的线性关系。4种成分精密度试验RSD<1%,48 h内稳定性RSD<1%,加样回收率为96.04%～102.8%。结论该含量测定方法简便,分离效果好,能同时测定知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BII和知母皂苷AIII 4种有效成分的含量,结果准确可靠。     

知母的皂苷成分

目的：研究知母的化学成分,寻找新的活性物质。方法：利用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱及高效液相色谱等手段进行分离,根据化合物的理化性质及光谱(IR,FAB-MS,ESI-MS,¹HNMR,¹³CNMR,DEPT,HMQC,HMBC,NOESY和ROESY)数据鉴定结构。结果：从中药知母分离得到两种甾体皂苷,确定其结构是：(5β,25S)-螺甾烷-3β,15α,23α-三醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(1)和(5β,25S)-螺甾烷-3β,23α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(2)。结论：1和2均是新化合物,分别命名为知母皂苷F和知母皂苷G。     

知母中的两种新呋甾皂苷

目的研究知母根茎的化学成分。方法采用水煎提取、大孔吸附树脂SP825柱色谱、反相C₁₈柱色谱等进行分离，并通过化学手段和光谱分析(FAB-MS，¹H NMR，13C NMR，¹H-¹H COSY)鉴定其化学结构。结果从知母根茎中分离得到6种甾体皂苷，分别鉴定为：(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷N，1)，知母皂苷E_l(2)，(25S)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-甲氧基-5β-呋甾-2β，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(知母皂苷O，3)，知母皂苷E₂(4)，(25R)-26-O-β-D-吡喃葡糖基-22-羟基-5α-呋甾-2α，3β，26-三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基-(1→2)-［β-D-吡喃木糖基-(1→3)］-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(purpureagitosid，5)，marcogenin-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-galactopyranoside (6)。结论化合物1和3为新化合物，命名为知母皂苷N和知母皂苷O，化合物5为首次从知母中分离得到。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量

目的：应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC—ELSD）法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量。方法：采用C18色谱柱（4．6mmX250mm,5μm）;流速为0．9ml／min;乙腈-水（30：70）为流动相;ELSD漂移管温度为90℃;载气（M）流速为2．9SLPM／min。结果：栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ进样量分别在0．0618—1．2360μg（r=0．9992）、0．0476～0．9520μg（r=0．9997）和0．1842～3．6840μg（r=0．9993）时进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97．67％、98．18％和98．36％,RSD分别为1．09％、1．01％和0．98％（n=6）。结论：本方法测定结果准确、灵敏、重复性好。     

线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A对巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A(AMA)对巨噬细胞免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 AMA 0.0005,0.05,0.5,5和10 mg·L-1与RAW264.7巨噬细胞分别作用2,24和48 h后,WST-1法检测巨噬细胞增殖;AMA 0.0005,0.05和0.5 mg·L-1与RAW264.7作用2 h后,定量荧光法检测巨噬细胞产生活性氧水平、线粒体膜电位和对白色念珠菌的吞噬作用;Western蛋白印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)P38蛋白磷酸化水平;Griess法检测细胞培养上清一氧化氮含量。结果 AMA作用2 h对RAW264.7巨噬细胞增殖无明显影响,当作用时间延长到24和48 h后,可显著抑制RAW264.7巨噬细胞增殖(P<0.01)。AMA作用2 h可显著诱导RAW264.7巨噬细胞产生活性氧(P<0.01),降低线粒体膜电位(P<0.01)。AMA可增强RAW264.7巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能,显著降低脂多糖诱导的巨噬细胞炎症介质一氧化氮的产生(P<0.01)。AMA显著诱导MAPK P38磷酸化(P<0.01)。结论 AMA能够诱导RAW264.7巨噬细胞线粒体损伤,增强巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功用,降低脂多糖诱导的炎症反应,可能与激活MAPK P38磷酸化,进而激活MAPK信号转导通路有关。     

不同干燥加工方法对知母化学成分含量的影响

目的:揭示各种干燥加工方法对知母有效成分含量的影响。方法:分别采用晒干、阴干、烘干、远红外干燥、微波干燥的方法对知母进行干燥加工,以菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷为指标,通过高效液相色谱法(HPLC),分析各种干燥加工条件下知母中各类指标成分的含量变化情况。其中菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ采用高效液相蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)进行检测,用外标两点法对数方程计算含量,芒果苷、新芒果苷采用高效液相紫外检测法(HPLC-UV)检测。结果:采用烘干、远红外干燥、微波干燥方法加工后,知母菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷含量与晒干、阴干相比均有不同程度上升,新芒果苷含量与晒干、阴干相比有所下降。结论:从有效成分保存方面考虑,不同干燥方法的优劣顺序为微波干燥>远红外干燥>烘干>晒干≈阴干。     

基于网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌的作用机制

目的 通过网络药理学探讨知母皂苷A-Ⅲ抗鼻咽癌(NPC)的作用靶点及分子机制.方法 利用Swiss Target Prediction数据库获取知母皂苷A-Ⅲ作用靶点,通过GeneCards数据库检索NPC相关疾病靶点,将其与知母皂苷A-Ⅲ作用靶点映射,使用Cytoscape 3.6.1软件构建知母皂苷A-Ⅲ-鼻咽癌疾...     

人参皂苷Rh2对人黑色素瘤A375—S2细胞的促凋亡作用

目的;研究人参皂苷G－Rh2诱导人黑色素肿瘤细胞A375－S2凋亡的分子生物学机制。方法：用结晶紫染色的方法测定细胞的死亡率。用置显微镜观察细胞形态学的变化。用琼脂糖凝胶电泳检测核酸片断。用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果：G－Rh2抑制A375－S2细胞增殖并在20μmol/L可以诱导A375－S2细胞产生凋亡,Caspase抑制剂z-VAD-fmk(caspase家族）,z-DEVD-fmk(caspase-3)或z-IETD-fmk(caspase-8)能部分抑制细胞凋亡,但是Ac-YVAD-cmk(caspase-1)不能抑制A375－S2细胞凋亡。结论：GRh2在体外抑制A375－S2细胞的增殖,通过细胞形态学和核酸片断分析,G－Rh2能够诱导A375－S2细胞产生凋亡。这种作用是通过细胞内caspase一类半胱氨酸蛋白酶进行传导的,G－Rh2对A375－S2细胞的周期没有影响。     

西陵知母中甾体皂苷的分离与鉴定

目的:从新鲜西陵知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge.)根茎中分离出有生理活性的化学成分—甾体皂苷。方法:用柱色谱法分离纯化,通过理化方法及光谱分析(UV,IR,¹HNMR,¹³CNMR,EI-MS,ESI-MS,HMBC,HMQC)鉴定化学结构。结果:从新鲜西陵知母根茎的乙醇提取物中分离得到西陵知母皂苷A与B,其化学结构分别为萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1→2)-O-β-D-半乳糖苷和萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-葡糖基(1→3)-O-β-D-葡糖基(1→2)-O-β-D-半乳糖苷。结论:西陵皂苷B为一新化合物。     

知母皂苷及其苷元对动物模型β肾上腺素受体的调整作用

目的;观察知母提取物矢母皂苷及其苷元对动物模型病理性升高的β肾上腺本的调整作用,同时观察ＳＡＲ对家兔氢化可的松模型血清皮质醇含量以及正常小鼠以及正常小鼠和甲亢大鼠糖皮质激素受体密度的影响,旨在探讨两种提取物调整β肾上腺素受体的调整作用及其机制。方法：（１）观察ＴＩＭ对甲亢大鼠模型脑组织β肾上腺素受体的调整作用;（２）观察ＳＡＲ对家兔氢考模型外周淋巴细胞β受体的调整作用;（３）观察ＳＡＲ对家兔氢考模     

星点设计-效应面法优化知母盐制的炮制工艺

目的采用星点设计-效应面法以进一步优化盐制知母的炮制工艺,保证临床疗效。方法以具有降血糖作用的活性成分知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A-Ⅲ、芒果苷的总含量为指标。以加盐量、炒炙时间、炒炙温度为考察因素,采用星点设计-效应面法(CCD)优选炮制条件,并进行预测分析。结果最优炮制工艺为加盐量3g,炒炙12min,炒炙温度为150℃。结论本次实验使用盐制知母,并采用星点设计-效应面法优化知母的盐炙工艺,并且预测性良好。     

百合知母总皂苷镇静催眠的药效学研究

目的:评价百合知母汤、百合皂苷、知母皂苷及百合知母总皂苷提取物镇静催眠药理作用。方法:观察百合知母汤水煎液,百合皂苷,知母皂苷,百合知母药材(1∶1)提取、富集的百合知母总皂苷对小鼠自主活动、戊巴比妥钠阈下剂量引起小鼠睡眠个数、戊巴比妥钠引起小鼠睡眠潜伏期、睡眠时间的影响。结果:百合知母总皂苷能显著减少小鼠自主活动次数,延长戊巴比妥钠引起小鼠睡眠时间,但对入睡潜伏期无明显影响。其余各受试药物可明显减少小鼠活动次数或站立次数,能明显延长睡眠时间,但未能增加戊巴比妥钠阈下剂量引起小鼠睡眠个数。结论:百合知母总皂苷具有显著的镇静催眠作用,呈现剂量依赖性。经大孔树脂工艺优化处理所得百合知母总皂苷提取物可用于百合知母汤的剂型开发。     

知母中知母皂苷BⅡ的TLC鉴别及HPLC法含量测定

目的:建立知母药材中知母皂苷BⅡ的 TLC 鉴别及 HPLC 含量测定方法。方法:TLC 法,展开剂:氯仿-甲醇-水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,显色剂:10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。HPLC 法,色谱柱:HiQ-sil C_(18)(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水(53:47),流速:0.8 mL·min~(-1),检测:蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度:100℃,气体流速:2.6L·min~(-1)。结果:3批药材中知母皂苷 BⅡ成分的 TLC 分离效果均较好,HPLC 法测得知母皂苷 BⅡ的平均回收率为97.7%,RSD 为1.8%。结论:该方法准确可靠,可用于知母药材质量控制。     

三七总皂苷对B16黑色素瘤生长及转移的作用

目的观察三七总皂苷（PNS）对B16黑色素瘤生长及转移的作用,及其对B16黑色素瘤表达缝隙连接蛋白Connexin32的影响。方法实验采用B16黑色素瘤自发性肺转移模型,来观察PNS对B16黑色素瘤生长及转移的影响。免疫组织化学检测Connexin32在黑色素瘤原发灶的表达情况。结果（1）PNS对黑色素瘤生长有较好的抑制作用,其中PNS高剂量组抑瘤率可达50．85％。（2）与模型组相比PNS中、高剂量组能有效抑制黑色素瘤的肺转移,转移灶数量与对照组相比有明显减少。（3）免疫组织化学检测,发现PNS各用药组均能增强黑色素瘤原发灶细胞膜上Connexin32的表达。结论PNS能够抑制B16黑色素瘤的生长和转移,并能有效增强肿瘤细胞膜上Connexin32的表达。     

知母皂苷对谷氨酸致老年性痴呆模型小鼠的作用

目的：研究知母皂苷对谷氨酸所致痴呆模型小鼠学习记忆能力、脑内胆胺类递质和海马内pAPP阳性神经元的影响，以期探讨知母皂苷抗老年性痴呆的作用机制。方法：用谷氨酸致老年性痴呆模型小鼠为实验对象，以其学习记忆能力、脑内胆胺类递质含量、背海马和齿状回内β-APP阳性神经元的数量为指标，全面考察知母皂苷抗老年性痴呆的作用。结果：知母皂苷（100，200mg&#183;kg^-1，ig），能明显对抗老年性痴呆模型小鼠学习记忆能力的下降，增加脑内胆胺类递质的含量，抑制背海马和齿状回内β-APP阳性神经元的生成。结论：知母皂苷对谷氨酸所致的老年性痴呆有明显的改善作用。     

知母皂苷成分的药理活性及作用机制研究进展

知母作为传统中药,皂苷是其主要成分之一,具有广泛的活性和药理作用。近几年的文献报道,知母具有抗肿瘤、抗老年痴呆、改善学习记忆能力、抗凝血、抗血栓、降血糖、降血脂、抗抑郁、降血压等药理活性。从抗肿瘤作用,对中枢神经系统、心血管系统、内分泌系统的影响4个方面综述知母皂苷类成分的药理作用,为知母的进一步开发提供重要的依据。     

知母总皂苷对Aβ_(1-42)引起的老年大鼠学习记忆能力及海马炎症反应的影响

目的观察知母总皂苷(SAaB)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)引起的老年大鼠学习记忆能力改善作用及其对海马炎症反应的影响。方法脑室注射Aβ1-42后第2天进行Morris水迷宫训练,连续训练5 d,在第6天进行空间探索实验,训练期间继续给药,记录逃避潜伏期及各象限游泳时间;Nissl染色观察海马CA1区锥体神经元改变及免疫组织化学染色观察胶原纤维酸性蛋白(GFAP)改变;Western blot检测GFAP表达水平改变。结果Aβ1-42组大鼠出现明显的空间学习障碍,表现为逃避潜伏期较对照组明显延长,在原平台象限游泳时间占总游泳时间的百分比明显降低;海马CA1区锥体神经元的排列较对照组不整齐且稀疏;GFAP阳性细胞数明显增多,染色增强,突起增多并延长。GFAP蛋白表达明显增加。SAaB可明显抑制Aβ1-42引起的这些变化,呈明显剂量依赖性。结论 SAaB能够明显的改善Aβ1-42引起的老年大鼠学习记忆能力障碍及海马神经元损伤。