适配子介导转运在肿瘤靶向治疗中的研究进展

适配子是生物分子的单链寡核苷酸配体,通过指数富集的配体系统进化技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选获得。本文从连接方式、治疗靶点、疗效、优缺点多个方面对适配子介导转运在靶向肿瘤化疗、核酸治疗、光动力疗法和光热疗法中的研究进展进行概述。指出以适配体靶向肿瘤的递送系统在肿瘤相关靶向治疗中发展迅速,但仍面临许多挑战。筛选更多靶点的高亲和力适配子,改进适配子与其他治疗药物的结合模式,改善药物的药代动力学是目前工作的重点。     

核酸适配子及其筛选进展

随着对单链DNA/RNA的不断研究,人们发现这些单链的寡核苷酸序列具有特殊的三维结构,能高亲和力和高特异性地结合各类靶标.根据单链DNA/RNA的这一性质.人们应用指数富集配体的系统进化技术在体外进行数轮筛选和扩增到特异性高、亲和性强的寡核苷酸序列,即核酸适配子,也称为适配子.基于适配子的化学结构和特点.稳定性的不断提高和筛选的方法不断改进,适配子被广泛运用于早期临床诊断和治疗等生物医学研究领域,并不断取得进展.本文就适配子技术及其筛选进展作一综述.     

核酸适配子在疾病诊断研究中的应用

核酸适配子是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)
技术从单链随机寡核苷酸文库中筛选得到的单链寡核苷酸配体,其与靶标的结合具有高特异性及高亲和力等优点,
使其能广泛地应用于疾病诊断研究。适配子在生化检测、新肿瘤标志物发现、分子成像、病原微生物检测等领域的
研究应用中均有报道,并显示出良好的应用前景。     

鼻咽癌核酸适配子的筛选及鉴定

目的利用指数富集的配套系统进化技术(SELEX)筛选人类疱疹病毒(EB病毒)阳性鼻咽癌细胞核酸适配子。方法体外合成长度为78个核苷酸的随机DNA文库,通过SELEX技术,以正常鼻咽上皮细胞为靶标进行消减筛选,以EB病毒阳性低分化鼻咽癌细胞为靶标进行10轮的筛选,克隆、测序,并对适配子进行鉴定。结果流式细胞仪检测亚文库与靶细胞的结合能力随着筛选轮数的增加荧光强度增强。聚类分析显示,适配子可以分为3个家族,1、2家族具有保守序列。结论初步建立EB病毒阳性鼻咽癌细胞适配子库,筛选到具有亲和力和特异性的核酸适配子。     

基于SCI的适配子研究文献计量分析

以科学引文索引（SCI）数据库1995-2012年收录的适配子研究文献为统计源,采用文献计量分析方法,定量分析了适配子研究文献的年代、国家（地区）、作者、学科、来源出版物以及高引频次论文的分布特点,并通过对中国作者论文的关键词词频的分析,揭示了当前国内适配子研究领域的热点。     

适配子治疗获得性免疫缺陷综合征的研究进展

适配子(aptamer)是在体外人工合成的具有特定3级结构的单链DNA或RNA分子,从随机寡核苷酸文库中通过配体指数富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential Enrichment,SELEX)筛选出来,能与靶分子以高亲和力、高特异性结合。由于适配子和靶分子结合后可阻断靶分子的生物学活性,与相应抗体分子相比,适配子具有许多优越性,如分子量小、易于修饰、无免疫原性等,因而在各种疾病的治疗中具有广阔的应用前景。文中就适配子治疗人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)的研究进展作一综述,以深入研究适配子对病原体感染的治疗作用。     

癌胚抗原特异性寡核苷酸适配子的体外筛选及其意义

目的:通过体外筛选获得癌胚抗原(CEA)特异性适配子,为高表达CEA肿瘤的靶向奠定基础。方法:构建长度为81 bp的随机ssDNA文库,体外筛选、富集CEA特异性适配子,通过配体介导的靶蛋白纯化实验检测经筛选的适配子与纯化蛋白结合;提取LS174T细胞总蛋白,免疫共沉淀检测经筛选的适配子与细胞总蛋白的结合。结果:经体外7轮筛选富集及筛选条件的优化,配体介导的靶标分离实验证实了筛选出的适配子与纯化CEA蛋白的结合;免疫沉淀及Westem blot证实了其识别并特异性结合天然状态的CEA。结论:经过体外7轮筛选,证实了所获得的CEA适配子可特异性地与纯化CEA和天然状态的CEA蛋白结合,为后续高表达的CEA肿瘤的靶向诊断和治疗奠定了初步的实验基础。     

适配子型压电石英晶体传感器探针固定方法的研究

目的 比较金膜表面两种探针固定法的优劣,选择适配子型压电传感器探针固定的最佳方法.方法 用巯基固定法及生物素-亲和素固定法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,对不同浓度IgE引起的频率变化进行检测.结果 与巯基法相比,生物素-亲和素法固定探针压电传感器频率下降更为明显,检出限低,线性范围宽,0.1～2.5 mg/L浓度范围内IgE浓度与频率变化呈明显的线性相关,相关系数0.994 5.结论 在压电基因传感器探针固定中效果良好的巯基法在适配子探针固定中并不适用,生物素-亲和素法在适配子压电传感器探针固定中有明显优势.     

快速检测TOX、CMV IgG抗体的适配子型SPR传感器微阵列的初步构建

目的初步构建弓形虫(toxoplasma gondii,TOX)、巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)IgG抗体的适配子型SPR传感器微阵列的快速检测方法。方法采用SELEX技术筛选TOX、CMV IgG的适配子,并将其整合于SPR生物传感器实时在线分析系统,通过在传感器表面固定探针分子,对溶液中的TOX、CMV IgG进行杂交检测,并进一步研究该检测方法的稳定性与线性检范围。结果该新型快速检测方法能够实现对TOX、CMV IgG的实时检测,检测系统稳定性良好,八通道间检测时互不影响,线性检测范围为20～300μmol/L。结论该实验建立的快速检测方法,具有稳定性好等优点,SPR传感器技术结合适配子技术在临床诊断工作中有着广阔的应用前景。     

Ras蛋白适配子体外电转染人大隐静脉平滑肌细胞的初步研究

目的:采用电穿孔方法,介导Ras蛋白ssDNA适配子体外转染人大隐静脉平滑肌细胞,探讨外源性DNA转染血管平滑肌细胞的最适电转条件.方法:体外培养3-8代人大隐静脉平滑肌细胞,选择方波、1个脉冲、不同的电压及脉冲时间,应用电穿孔仪将Cy3标记的Ras蛋白ssDNA适配子转染至平滑肌细胞.采用CCK-8法观察细胞存活率,以及倒置荧光显微镜观察适配子转染效率.结果:细胞在电压160 V、脉冲时间15 ms时,细胞存活率最高,为(96.17±2.60)％;电压280 V、脉冲时间 25 ms时,细胞存活率最低,为(30.04±2.58)％.细胞存活率随着电压的增大、脉冲时间的延长而降低.电压200 V以下,转染率随电压增大、脉冲时间延长而升高,并于电压为200 V、脉冲时间为25 ms时,转染率到达峰值,为(84.41±5.16)％.但是,电压大于200 V时,转染率却随电压增大、脉冲时间延长而降低,电压为280 V、脉冲时间为25 ms时,转染率降至最低,为(24.54±7.07)％.电压200V、脉冲时间20 ms时,可获得最适转染效率及细胞存活率.结论:在方波,1个脉冲,适当的电压、脉冲时间下,电穿孔法转染血管平滑肌细胞可快速、简便地获得较高的转染效率及细胞存活率.电穿孔法是研究原代、化学法难转染平滑肌细胞生物学行为较为理想的转染方法.     

适配子修饰去细胞瓣支架促进再内皮化

摘要:目的 研究将适配子固定在去细胞瓣支架表面加速瓣膜再内皮化的作用。方法 制备3组主动脉瓣膜支架:去细胞瓣组、适配子固定的去细胞瓣组(适配子组)、戊二醛交联的去细胞瓣组(戊二醛组)。用流式细胞仪检测适配子与内皮祖细胞的结合效率;荧光显微镜检测适配子在去细胞瓣表面的固定;通过混合培养粘附实验检测内皮祖细胞在支架上的粘附和增殖能力。结果 适配子与内皮祖细胞的结合实验显示适配子对内皮祖细胞具有特异性;荧光显微镜显示适配子被固定于去细胞瓣支架上;细胞培养实验显示适配子组支架上粘附的内皮祖细胞数量高于其余两组支架并且增殖较快。结论 适配子能够促进内皮祖细胞在去细胞瓣支架上的特异性粘附和增殖,从而促进再内皮化。     

大鼠骨髓间充质干细胞特异性核酸适配子的筛选和鉴定

目的 利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子,并对核酸适配子与大鼠BMSCs的结合方式及能力进行鉴定.方法 利用SELEX技术,以分离获取的大鼠BMSCs为靶点,从构建的核酸文库中最大程度富集与BMSCs特异性结合的核酸序列,流式细胞术检测文库富集的特...     

SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子方法的建立

目的 建立SELEX筛选LPS的适配子方法,为后续大规模筛选奠定基础.方法 在成功构建含40个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库的基础上,优化了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件;同时对液相筛选与固液相筛选两种方法进行比较,确定最优的筛选方法并进行4轮筛选.结果 确定了扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应的最佳条件,采用液相筛选方法经过4轮筛选,随机单链DNA(ssDNA)文库与内毒素(LPS)的结合率明显上升,CPM值与初始库相比差异有统计学意义.结论 建立了SELEX筛选LPS寡核苷酸适配子的筛选方法.     

SELEX技术及其应用的研究进展

SELEX技术近年来不断完善与发展，应用领域不断扩宽，筛选的适配子不断优化，使该技术在疾病的诊断、治疗及药物的开发等方面更具潜在价值。     

蛋白质组学在肿瘤研究中的应用进展

近年来人类基因组计划的完成将蛋白质组学的研究推到了生命科学的最前沿。蛋白质组学在肿瘤领域的应用研究也成为了现在的一个研究热点。本文综述了蛋白质组学的概念、特点、研究方法和在肿瘤研究中的应用及进展。     

利用细胞-指数式富集的配体系统进化技术筛选肿瘤细胞DNA适配子

目的建立一种通用的细胞-指数式富集的配体系统进化（Cell—SELEX）技术平台,用于筛选特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子。方法采用PCR法建立随机双链DNA（dsDNA）寡核苷酸文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库分离单链DNA（ssDNA）文库;以体外培养的肿瘤细胞作为正筛选的靶标,以相同组织来源的正常对照细胞作为负筛选的靶标,消减法进行Cell—SELEX筛选和PCR扩增以获取DNA适配子;流式细胞仪监测适配子的富集效率（亲和力）;采用常规分子生物学技术进行适西亡子的克隆、测序和序列分析。结果成功建立了ssDNA库,经过12轮Cell—SELEX筛选,获得了特异性结合于肿熘细胞的DNA适配子;挑选120个阳性克隆送测序,鉴定出21个适配子,采用NCBI网站提供的B]astn程序进行精确比对末发脱相似序列。结论本实验建立的技术平台可在较短时间内获取特异性结合于特定肿瘤细胞的DNA适配子。     

核酸适配体在肿瘤液体活检中的应用

肿瘤的液体活检（CTCs、ctDNA和外泌体）可以提供全面、动态的病理信息,对肿瘤的早期诊疗、疗效监测和复发监控有重要作用,但在检测的灵敏度和特异性方面需要改进。而核酸适配体具有独特的空间构象,易于合成,能够进行特定的修饰与组装,能够放大检测信号,因此核酸适配体在肿瘤液体活检的应用中具有广阔的前景。本文对核酸适配体在肿瘤液体活检中的应用作一综述。     

肿瘤坏死因子在肿瘤研究中的进展

<正>肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种多功能细胞因子,可以直接杀伤或抑制肿瘤细胞,在促进肿瘤发生、发展的过程中起到重要作用。1975年,Carswell首次报道经卡介苗注射或细菌内毒素感染的小鼠血清中含有一种可引起荷瘤动物的肿瘤组织出血坏死的物质,该物质对体外     

基因芯片技术在肿瘤研究中的应用

基因芯片又称DNA微阵列(DNA m icroarray)是近年发展起来的一项DNA分析技术,一般包括寡核苷酸芯片和cDNA芯片2种,其基本原理是在固相载体上按照特定的排列方式固定上大量已知的DNA片段,形成DNA微矩阵,将样品DNA/RNA通过PCR/RT-PCR扩增、体外转录等技术渗入荧光标记分子后,与位于芯片上的已知序列杂交,最后通过扫描仪及计算机进行综合分析,比较不同荧光在各点阵的强度,即可获得样品中大量基因表达的信息。基因芯片在一张微小的芯片上能够在同一时间内平行分析大量的基因,进行大量信息的筛选和检测分析。目前研究认为,肿瘤的发生和发展是一个多阶段、多基因参与的复杂过程。正常基因的突变、癌基因的异常激活以及肿瘤抑制基因的失活、基因本身的多效性和机体免疫因素,决定了肿瘤表型的表达与否[1]。基因芯片不仅为研究肿瘤发生发展过程中相关基因的激活和失活提供了强有力的工具,也为肿瘤的诊断和治疗提供了新的武器。1基因芯片用于寻找肿瘤相关基因用cDNA微阵列技术通过比较组织细胞基因的表达谱差异,可以发现新的可能致病基因或疾病相关基因。G ress等[2]从胰腺癌细胞株PATU、胰腺癌组织、慢性胰腺炎及对照胰腺组...     

基因芯片及其在肿瘤研究中的应用

基因芯片是近年来出现的分子生物学与微电子技术相结合的分析检测技术,具有可行性、高通量、微型化和自动化等特点,成为后基因组时代基因功能分析的最重要的技术之一。该技术不仅应用于新基因的发现和基因表达的研究,还被用于疾病的分子分型、病原体检测、物种基因型的鉴别、药物筛选和药理学研究等。本文就基因芯片制作原理、应用方法及在肿瘤病理研究、诊断、治疗中的应用进行综述。