葛根芩连汤氯仿部位含量测定及对羧酸酯酶的抑制作用研究

目的:建立葛根芩连汤氯仿部位的多成分含量测定方法,并考察其抑制羧酸酯酶(CES2)的作用。方法:采用溶剂萃取法提取葛根芩连汤氯仿部位,以葛根素、小檗碱、黄芩苷、甘草苷4种指标性成分,采用超高效液相色谱(UPLC)对其进行含量测定;采用荧光素二乙酸酯(FD)为CES2的特异性荧光探针底物,在人肝微粒体(HLM)孵育体系中考察葛根芩连汤氯仿部位对CES2的抑制作用。结果:葛根芩连汤氯仿部位中指标性成分含量测定结果为:葛根素347 mg.g~(-1)、小檗碱1.65 mg.g~(-1)、黄芩苷14.9 mg.g~(-1)、甘草苷1.04 mg.g~(-1),该部位抑制CES2活性的IC_(50)为0.5 mg.mL~(-1)。结论:葛根芩连氯仿部位及其单体均对CES2具有较强的抑制作用,揭示葛根芩连汤有效部位可通过抑制羧酸酯酶以缓解伊立替康所致迟发型腹泻,为中药缓解其毒副作用的机制提供科学依据。     

羧酸酯酶与酯类药物代谢

［摘要］哺乳动物羧酸酯酶（Carboxylesterases, CESs, EC3.1.1.1）属于B族酯酶，组成一个多基因家族，其基因产物定位于多种组织的内质网中。CESs参与机体内源性和外源性化合物的水解代谢，并与其他代谢酶或运载体共同作用，极大地影响酯类药物的体内代谢。近年来对于CESs的研究逐步增多，人们将其分为5个亚族, 分别为CES1、CES2、CES3、CES4和CES5。人体内参与酯类药物代谢的CESs主要为hCE 1（人类CES1家族同工酶）和hCE 2（人类CES2家族同工酶）。此两种酶在组织分布和对酯类药物代谢特征上存在较大差异，如小肠上皮由于CES2表达会对部分酯类药物的口服吸收产生重要影响。因此在进行酯类药物尤其是酯类前药合成时，必须考虑该类药物的物理化学和生物学性质，结合体内CESs表达特征和活性综合评价才能获得成功。     

普鲁卡因胺经羧酸酯酶1对咪达普利代谢的影响

目的:研究普鲁卡因胺经羧酸酯酶1（CES1）影响咪达普利代谢的作用。方法:进行体外大鼠肝微粒体酶孵育实验,通过测定CES1特异性底物咪达普利的代谢产物咪达普利拉的含量,来研究普鲁卡因胺对CES1活性的影响;将12只SD大鼠随机分为两组,分别给予生理盐水和普鲁卡因胺(50mg·kg^-1),连续4 d,随后灌胃给予咪达普利(10mg·kg^-1),于给药后不同时间点采集血样,采用LC-MS/MS法测定血浆中咪达普利拉的含量,计算药动学参数,来研究普鲁卡因胺对咪达普利在大鼠体内代谢的影响。结果:在体外研究中,普鲁卡因胺对CES1的调节呈现剂量依赖型抑制特征。体内研究发现,普鲁卡因胺显著降低咪达普利拉AUC_0-24h,AUC_0-∞和C_max。结论:普鲁卡因胺显著抑制CES1的活性,从而抑制咪达普利拉的形成,对酯类前药代谢的研究有一定的意义。     

羧酸酯酶单核苷酸多态性与个体化药物治疗的研究进展

人类羧酸酯酶(carboxylesterases,CESs)属于丝氨酸酯酶超家族,在人体中主要包含羧酸酯酶1(CES1)和2(CES2)2种亚型。CES负责多种药物的代谢,如部分血小板凝集抑制剂、精神兴奋剂、抗肿瘤药等,由于CES的单核苷酸多态性(SNP)在人类基因组中广泛存在,其对药物代谢酶基因的表达和(或)酶活性的高低有着重要影响,从而最终影响着药物在体内的代谢过程。本文综述了CES1和CES2相关SNP所致酶活性的改变,以及由于其多态性导致代谢药物体内过程改变的相关药物基因组学研究,以期为临床治疗和研究提供参考。     

咪达普利在免疫性肝损伤大鼠体内的药动学特征

目的:探讨咪达普利在免疫性肝损伤大鼠体内的药动学特征。方法:采用腹腔注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立大鼠免疫性肝损伤模型。模型组和正常对照组分别灌胃给予咪达普利(10 mg·kg-1),于给药后不同时间点采血,采用LC-MS/MS法测定血浆中咪达普利代谢产物咪达普利拉的浓度,计算药动学参数。结果:与正常大鼠相比,免疫性肝损伤大鼠体内咪达普利拉的的AUC0-12h、AUC0-∞和Cmax显著降低(P<0.05)。结论:免疫性肝损伤状态下,咪达普利的水解代谢受到显著抑制,药动学发生明显改变,该作用可能与LPS抑制羧酸酯酶1(CES1)的活性相关。     

活性蛋白质组技术应用于中药活性分子靶点的研究进展

活性蛋白质组技术（ABPP）是越来越多的化学蛋白质组学方法之一,该技术利用小分子化学探针来探索化合物和靶点之间的相互作用机制。在中药活性成分分子靶点的鉴定中,ABPP技术具有高效、准确等优越性,目前已经利用该技术鉴定了许多中药活性成分的分子靶点。综述了ABPP技术在中药活性分子靶点中的应用,包括青蒿素、黄芩苷、穿心莲内酯、苏木酮、龙牙葱木皂苷、山楂酸、蟾毒内酯、毛兰素与荜茇宁等,为创新药物靶点的发现提供新的思路。     

反相高效液相色谱法测定喉舒宁片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

目的建立测定中药制剂喉舒宁片中活性成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的反相高效液相色谱分析方法。方法采用Waters Nova-Pak C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm),流动相为甲醇-水(44∶56),流速为1.0 mL.min-1,穿心莲内酯检测波长为225 nm,脱水穿心莲内酯检测波长为254 nm。结果 2种指标成分分离良好且无样品中杂质峰干扰,线性范围分别为4.83～72.45μg.mL-1(n=6)、8.70～87.00 g.mL-1(n=6),平均回收率分别为104.0%、101.1%,RSD<2.2%。结论方法简便快速、结果准确、重现性好,可以用于喉舒宁片的质量评价。     

羧酸酯酶1和2基因多态性在药物代谢中的研究进展

人类羧酸酯酶属于α/β水解酶家族,负责许多内源性和外源性化合物的水解,广泛位于药物代谢的主要组织,例如肝脏和小肠等。人羧酸酯酶主要有羧酸酯酶1(CES1)和2(CES2)。单核苷酸多态性(SNPs)对药物代谢酶的表达和(或)活性有重要的影响,这可能解释部分药物反应的个体差异。本篇综述主要介绍了由CES1和CES2单核苷酸多态性导致的CES酶多态性。对于含有酯键的药物,一些有意义的SNP可能影响CES酶的功能从而影响其药动学,进而对其药理和毒理作用发挥重要影响。     

HPLC同时测定穿心莲药材及其注射液中3种内酯类成分的含量

目的利用HPLC同时测定穿心莲药材及其注射液中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和新穿心莲内酯的含量。方法色谱柱为Shimadzu Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-水(53∶47)洗脱,流速:1 mL.min?1,柱温:25℃,检测波长225 nm处检测穿心莲内酯,检测波长205 nm处检测脱水穿心莲内酯与新穿心莲内酯。结果穿心莲药材及其注射液中3种内酯类成分能达到很好分离,线性关系良好(r≥0.999 5);平均加样回收率为99.6%~101.2%,RSD<3%。结论本方法灵敏、准确、可靠、重复性好,可用于穿心莲药材及其注射液的质量评价与3种内酯类成分的快速测定。     

槲皮素对兔体内维拉帕米及其主要代谢产物去甲维拉帕米药动学的影响

作者研究了从银杏中提取的29种成分体外对人肝微粒体5种主要细胞色素P450（CYP）同工酶CYPlA2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A活性的抑制作用。结果显示，三萜内酯类化合物银杏内酯A、B、C、J和白果内酯以及黄酮醇苷类成分对5种CYP同工酶活性仅有微弱的或无抑制作用；黄酮醇苷元山柰酚、槲皮素、芹菜苷元、4一羟基-甲基芹菜苷元、     

氯吡格雷和血管紧张素转换酶抑制剂前体药物间的相互作用

<正>研究背景及临床问题在临床上,每年有上百万患者联合使用氯吡格雷和血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI),但是两者之间潜在的相互作用较少被关注。不同的ACEI在药理学上存在差异,如赖诺普利和卡托普利为活性药物,而雷米普利、依那普利和培哚普利是无活性的前体药物,需要由羧酸酯酶1(carboxylesterase1,CES1)代谢为     

基于黄酮类成分含量构成特征和体外抗病毒活性的不同产地黄芩的质-效评价研究

目的:评价黄芩道地药材与非道地药材中主要黄酮类成分含量构成特征及其抗病毒活性,以探讨黄芩药材的质-效关系及药效物质基础。方法:制备8批不同产地黄芩(S1~S8)的水提物冻干粉,采用超高效液相色谱法测定水提物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等4种黄酮类成分的含量并计算其含量构成比。按不同产地黄芩的黄酮类成分含量构成比,制备上述4种成分混合物作为对应的黄酮类成分模拟样品(E1~E8)。以利巴韦林为阳性对照,采用MTT法和细胞病变程度法,考察8批黄芩水提物样品及其对应的模拟样品对人喉癌细胞Hep-2的半数有毒浓度(TD50)和对呼吸道合胞病毒(RSV)的半数抑制浓度(IC50),并计算治疗指数(TI)。采用SPSS 17.0软件对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量与其抗RSV活性(IC50值)进行Pearson相关性分析。结果:样品S4(产地为河北承德)的黄芩苷、汉黄芩苷含量最高,样品S6(产地为内蒙古-2)的黄芩素、汉黄芩素含量最高;上述4种成分含量最低的分别为样品S6、S6、S7(产地为北京)、S4。样品S4中黄酮苷类成分含量较高,相应的苷元类成分含量较低,其黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量构成比为1∶0.224∶0.111∶0.013;样品S6中黄酮苷类成分含量较低,相应的苷元类成分含量较高,上述4种成分的含量构成比为1∶0.241∶0.713∶0.106。不同产地黄芩水提物对Hep-2细胞的TC50均高于50μg/mL,对RSV的IC50为11.11~51.74μg/m L,TI为1.86~5.20;其对应的黄酮类成分模拟样品的TC50为23.11~52.23μg/mL,对RSV的IC50为4.87~14.61μg/mL,TI为1.85~4.75。道地产区(河北承德)黄芩(S4)的水提物及其对应模拟样品(E4)的抗RSV作用最强。相关性分析显示,4种黄酮类成分的含量与其抗病毒活性的相关系数均小于0.5,两者无显著相关性。结论:当黄芩中4种主要黄酮类成分的含量构成比为1∶0.224∶0.111∶0.013时,其对RSV的抑制作用较强。道地产区黄芩样品具有较优的黄酮类成分构成特征,该特征可能是道地药材发挥最佳抗病毒疗效的重要物质基础。     

HPLC法同时测定复方双花片中10个成分的含量

目的:采用高效液相色谱(HPLC)技术,建立同时测定复方双花片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯10个成分含量的方法。方法:复方双花片样品用50%甲醇水超声提取,采用Agilent Zorbax SB-C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱分析,流动相为乙腈-0.15%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,进样量10μL,检测波长327 nm(检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸)和226 nm(检测连翘苷、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯)。结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯质量浓度分别在4.071～40.71μg·mL^-1(r...     

喜炎平注射液在儿科的应用进展

喜炎平注射液为中药制剂,主要成分是穿心莲内酯总酯磺化物,其药理作用有以下几点:(1)抗病毒:对腺病毒Ⅲ(ADV3)、流感病毒甲I、流感病毒甲Ⅱ、流感减毒甲Ⅲ、呼吸道道合胞病毒(RSV)等,(体外试验)有灭活作用;(2)     

固态穿心莲内酯的降解

穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Wall.ex Nees.主要活性成分是穿心莲内酯(1)及其衍生物脱氧穿心莲内酯(2)、新穿心莲内酯(3)和14脱氧-11,12-二脱氢穿心莲内酯(4)等三萜内酯。该植物地上部分干粉在干燥环境中贮存一年以上,其总内酯含量减少26％。作者研究了穿心莲内酯在高温条件下的稳定性和可能的主要降解途径。     

8种五味子木脂素类化合物对羧酸酯酶2的抑制作用

目的考察8种五味子木脂素类化合物体外对羧酸酯酶2(CES2)活性的抑制作用,并对CES2强抑制剂进行草药-药物相互作用(HDI)风险预估。方法采用荧光素二乙酸酯(FD)作为CES2的特异性荧光探针底物,加入人肝微粒体(HLM),将8种五味子来源的化合物单体五味子甲素、五味子酚、五味子酯戊、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛J、戈米辛G和戈米辛O,分别与FD在37℃条件下共同孵育10 min,以DMSO作为对照,荧光酶标仪测定孵育液中FD代谢产物荧光素的生成量,计算残余活性及半数抑制浓度(IC_(50)),进一步进行体内的HDI风险预估。结果五味子甲素和五味子酚在100μmol·L~(-1)浓度下可使CES2残余活性分别降至DMSO对照组的14.5%和15.3%(P<0.01),其IC_(50)为8.06和8.91μmol·L~(-1),其余6种木脂素对CES2抑制作用较弱;HDI风险预测结果表明,五味子甲素或五味子酚与CES2底物共用时,引起药物暴露水平分别增加11.24倍和0.40倍。结论五味子甲素和五味子酚对CES2具有强抑制作用,联合使用五味子相关中药制剂时,需要警惕HDI风险的发生,防止出现血药浓度大幅增加而诱发药物不良反应。     

枳术颗粒多指标成分含量测定及化学计量学分析

目的:建立高效液相色谱法同时测定枳术颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、川陈皮素、白术内酯Ⅲ7个指标性成分的含量,同时结合化学计量学分析为其质量评价提供参考依据。方法:采用Waters Symmetry C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长220 nm(白术内酯Ⅲ)、280 nm(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素)和332 nm(川陈皮素),柱温30℃,进样体积10μL。采用统计分析软件对含量测定结果进行聚类分析、主成分分析与正交偏最小二乘法判别。结果:24批枳术颗粒中各成分分离度较好,在考察的线性范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系(r>0.999 9),平均回收率在87.6%～114.3%。24批枳术颗粒存在一定差异,筛选出4个差异性成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和柚皮素。24批枳术颗粒供试样品中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、川陈皮素、白术内酯Ⅲ的含量依次为0.378 4～1.380...     

穿心莲生长过程中内酯类成分的积累动态及其相关性研究

目的建立穿心莲药材中内酯类成分的HPLC测定方法,对穿心莲生长过程中内酯成分的积累动态进行研究,探讨内酯成分的积累与其他性状之间的相关性。方法以YileteODS C18柱(5μm,4.6mm×250mm);甲醇-水(18:82)为流动相,梯度洗脱,226nm为检测波长,进行穿心莲内酯类成分的HPLC分析,以spss13.0统计软件进行相关性评价。结果按照上述方法,对其中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进行了定量分析,以SPSS13.0统计软件分析了穿心莲内酯类成分的含量之间及其与其他性状之间的相关性。通过分析,发现不同生长时期的穿心莲内酯含量变化较大,在初期增长最快,初花期(生长150d左右)达到最高,脱水穿心莲内酯含量的变化规律不明显,积累缓慢;相关性分析表明,穿心莲内酯的含量与叶片的数量、植株高度、乙醇浸出物、叶片干重和植株干重以及生长发育时期具有显著的相关性,而脱水穿心莲内酯与这些性状之间无明显的相关性。结论穿心莲内酯类成分的HPLC分析方法分离度好、准确性高,适宜于穿心莲药材的内酯类成分的含量测定。     

超高效液相色谱-飞行时间质谱联用分析柏芩清火颗粒中的化学成分(Ⅱ)

目的分析柏芩清火颗粒中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-TOF-MS)方法分析。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),流速为0.35 mL.min-1。ESI-MS检测采用正离子模式,以检测生物碱等成分。通过与组方的单味药对比判断色谱峰的来源药材,然后通过与来源药材化学成分进行精确分子量的对比进行化合物的鉴定。结果对柏芩清火颗粒中来源于黄柏、黄芩、黄连等5味药材中的13个化合物进行了鉴定,包括黄柏碱、小檗碱等3个生物碱,黄芩苷、汉黄芩苷等6个黄酮类成分,仙鹤草内酯和关黄柏内酯A 2个内酯类成分,1个三萜皂苷类成分甘草酸及1个酚酸类成分3-O-阿魏酰奎宁酸。结论在中药复杂成分的研究中,质谱的不同检测模式可以互相补充,使复方制剂的成分得到更完整地体现。     

基于HPLC多指标成分定量控制和化学计量学的小儿抗痫胶囊质量评价研究

目的建立小儿抗痫胶囊中天麻素、对羟基苯甲醇、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的HPLC多指标成分定量控制方法,并采用化学计量学对不同药品生产企业小儿抗痫胶囊质量进行综合评价。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈–0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长分别为220 nm(检测天麻素、对羟基苯甲醇)、280 nm(检测洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷);体积流量0.8 mL/min;柱温25℃;进样量10μL。采用统计软件对小儿抗痫胶囊中8种成分质量分数进行聚类分析和主成分分析。结果天麻素、对羟基苯甲醇、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在各自线性范围内均呈良好的线性关系;加样回收率96.89%～100.10%,RSD值0.81%～1.77%;聚类分析和主成分分析结果显示,同一药品生产企业的产品质量较为稳定,不同企业间的样品质量存在一定差异。结论该方法操作简单,结果准确,重现性好,为评价小儿抗痫胶囊的质量提供了参考依据。