一种适合序列分析的快速重组质粒DNA制备法

应用阳离子去垢剂十六烷基三甲基溴化铵沉淀重组质粒ＤＮＡ，得到的ＤＮＡ制剂纯度高，可直接用于双股ＤＮＡ序列分析，本法省时，ＤＮＡ序列分析重复性好。     

一种快速简便的PCR检测恶性疟原虫方法的建立

作者建立了一种简便快速的PCR检测恶性疟原虫的方法。参照国外最新报道设计合成了一对引物扩增恶性疟原虫特异的重复序列,扩增片段206 bp,引物序列如下:A: CGCTACATATCTAGTTGCCAGACB: CGTGTACCATACATCCTACCAAC 方法:取冻存的西双版纳流行区疟疾患者外周     

丝状真菌脱氧核糖核酸片段快速扩增法

目的：用聚合酶链反应(PCR)法扩增丝状真菌中脱氧核糖核酸(DNA)片段。方法：将菌丝液氮研磨成粉状后溶于三羟甲基氨甲烷缓冲液(TE)，煮沸15～20min后，用上清做模板扩增DNA片段，然后将PCR产物作琼脂糖电泳，把含有目的片段的胶切下后溶于TE，做第2次PCR的模板，PCR后琼脂糖凝胶电泳。结果：获得大量目的DNA片段。结论：此方法从丝状真菌中扩增DNA片段，是一种既经济又方便可行的方法，大大提高了工作效率，其效果显著。     

介绍一种简便、快速的回收DNA片段的方法

我们采用国产 DF-17型电洗脱槽回收了限制性内切酶酶切的 DNA 片段,证明该方法是一种简便、快速、可靠的回收核酸片段的方法.回收的 DNA 片段可进一步用于 DNA 克隆、探针标记和 DNA 分析.     

介绍一种简便、快速的回收DNA片段的方法

我们采用国产DF－17型电洗脱槽回收了限制性内酶酶切的DNA片段，证明该方法是一种简便、快速、可靠的回收核酸片段的方法。回收的DNA片段可进一步用于DNA克隆、探针标记和DNA分析。     

血清乙肝病毒DNA的快速提取及定量 PCR测定中应用的探讨

目的寻找简单、快速地提取血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA并能应用于定量PCP,测定的方法.方法使用碱裂解法、酚氯仿法和煮沸裂解法同时提取血清HBV DNA,比较荧光定量PCP测定的重复性和测定值的差异.结果碱裂解法所得HBV DNA量高于酚氯仿法和煮沸裂解法(P＜0.05),并且碱裂解法所得结果的重复性好于酚氯仿法和煮沸裂解法(CV分别为0.21,0.28和0.33).结论碱裂解法提取HBV DNA简单、快速,适用于HBV DNA荧光定量测定.     

应用嵌套式PCR法检测结核杆菌DNA

应用嵌套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）法检测结核菌ＤＮＡ，所用内、外两对寡核苷酸引物衍生于３７．７ｕ（３８ｋＤａ）蛋白抗原ｂ的编码（Ｐａｂ）ＤＮＡ序列。对６种抗酸分枝杆菌和１０种非分枝杆菌ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色证实，只有人型结核杆菌、牛型结核杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）出现３２２ｂｐ特异扩增带，而其他菌种未见此种扩增。第１步和第２步ＰＣＲ分别检测到的最低限量为１０ｐｇ和１０ｆｇ的靶ＤＮＡ。采用此法检测７２份临床标本，结果显示：该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便的优点，尤适用于肺内外结核的早期诊断。     

聚合酶链反应对结核杆菌DNA重复序列的检测

本文用聚合酶链反应(PCR)检测结核杆菌(TB)DNA,在TB染色体DNA中的一个片段多次重复出现,将此片段作为靶DNA,用PCR技术进行扩增。引物的DNA核苷酸序列为5’CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG3’和5’CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG3’在反应中用94℃变性,68℃退火延伸,43个循环可将1fgTBDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其特异性产物,此产物在作为对照的其他细菌中不能检出,加入100ng人基因组DNA对检测效果无影响。本方法为快速、敏感、特异地检测临床标本中的TB打下了基础。     

PCR-SSP快速HLA-DR基因分型法的建立及临床初步应用

采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）方法，对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２３例临床血标本ＤＮＡ进行ＨＬＡＤＲ基因分型，扩增条件为９４℃，３０ｓ，５８℃，３０ｓ共３０个循环，对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示，符合率为１００％，无假阳性及假阴性，提示本方法快速、准确，适合于临床应用     

介绍一种简易、快速提取和纯化质粒的方法

我们报告一种简单、快速提取和纯化质粒的方法。经过细菌培养、质粒扩增制备出清亮裂解液,经酚处理后,用Sephacryl S—1000凝胶过滤层析除去了菌体RNA。制备出的高纯度质粒DNA可用于限制内切酶等分析与应用。     

PCR法快速筛选重组克隆方法的改进

①目的　以PCR法在菌液中快速筛选重组克隆。②方法　提取小鼠巨噬细胞总RNA ,反转录PCR(RT PCR)获得肿瘤坏死因子 α(TNF α)基因片段 ,TA克隆连接质粒载体、转化大肠杆菌JM10 9。在大肠杆菌培养中的不同时间取样测定大肠杆菌A60 0 值及计数。以不同数量的大肠杆菌为模板进行系列PCR扩增 ,获得适宜PCR扩增条件的大肠杆菌数。③结果　以菌液为模板进行PCR能够快速筛选重组体 ,大肠杆菌模板数在 12 5～ 2 5 0个范围内 ,PCR对阳性克隆的扩增可获得良好结果 ;获得常规培养条件下转化大肠杆菌的生长曲线 ,A60 0 值与大肠杆菌计数间存在显著正相关 (r=0 .93,P <0 .0 0 1)。④结论　通过测定大肠杆菌培养液A60 0 值推算大肠杆菌数量 ,以适宜的大肠杆菌模板行PCR法筛选重组克隆 ,快速准确并方便下游操作     

聚合酶链式反应结合寡核苷酸探针产前基因诊断β-地中海贫血

用聚合酶链式反应体外选择性扩增β-珠蛋白基因的两个片段后,经与~(32)P中标记的寡核苷酸探针进行斑点印迹杂交及放射自显影检测,对3例具有β-地中海贫血(地贫)纯合子风险胎儿进行了产前基因诊断,查明1例为β-地贫杂合子β~(17(A—T))/β~A;另2例分别为β~(17(A—T))/β~(-28(A—G))和β_(71-72(+A))/β_(41-42(-4bp))的复合杂合子。     

同一细胞DNA和RNA同时分别提取的简便方法

本文探讨并建立了从同一细胞中同时提取细胞核DNA和细胞浆RNA的方法。经紫外分光光度仪扫描,生化测定以及电泳等方法的鉴定表明:提取的核酸无论从量还是从质上均可满足对DNA和RNA的各种实验研究。此法简便稳定,是从同一细胞中分别提取DNA和RNA的理想方法。     

应用聚合酶链反应制备HBV DNA生物素探针

通过聚合酶链反应将Bio-11-duTP掺入扩增的HBV DNA中,制备了长度为120bp的生物素探针,可检测到0.1pg的HBV DNA。PCR际记法简便迅速,特异性强,所用DNA量少且无需分离纯化,其标记探针得率高,活性强。     

痰简易处理法结合巢式PCR在检测结核杆菌中的应用

作者对106例结核性痰标本采用简易处理法（TET煮沸法）后，再用聚合酶链反应（PCR）检测，阳性率（44．3％）与酚／氯仿抽提法（46．2％）相近（X2＝0．076，P＞0．05），巢式PCR（nested－PCR）阳性率（72．6％）则显著高于PCR（X2＝17．485，P＜0．01），这种差异在涂片和培养均阴性的标本中尤为明显。巢式PCR扩增人结核菌DNA，其敏感性（50fg）为PCR的100倍，但不影响其特异性。21例非结核性痰标本经PCR和巢式PCR检测均为阴性。因而我们认为，TET煮沸法作为痰PCR前处理简易有效，对含菌量较小的标本有必要结合巢式PCR，以提高结核杆菌阳性诊断率。     

顺序特异引物聚合酶链反应技术HLA－DR1，DR51组的基因快速分型

采用快速基因分型技术对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ１、ＤＲ５１组准确分型，为临床选择理想配型的供受者提供依据。根据核苷酸序列合成系列特异引物，借助ＰＣＲ技术，建立顺序特异引物聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ）快速基因分型方法，对６９例肾移植供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ１５、ＤＲ１６和ＤＲ１０分型，同时与血清学方法对比研究。分型结果采用限制性内切酶分析和寡核苷酸探针杂交证实。结果：６９例供受者ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组ＰＣＲ－ＳＳＰ分型均获成功，无假阳性和假阴性，总耗时５ｈ，分型结果经酶切分析和探针杂交证实符合。血清学分型耗时２４ｈ，误差率达３２．４％。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ１、ＤＲ５１组基因分型，具有快速、精确的特点，适合于临床应用。     

宫颈癌高危人群HPV16及18感染检测方法的建立

①目的　建立宫颈癌高危人群人乳头状瘤病毒 (HPV) 1 6及 1 8感染的检测方法。②方法　对HPV1 6及 1 8E6 /E7基因序列进行序列比较分析 ,根据二者的共享序列设计通用引物 ,进行外侧扩增 ;在通用引物扩增序列之间分别设计HPV1 6和 1 8的特异性引物 ,分别进行半套式PCR扩增 ,以检测并鉴定女性宫颈分泌物中HPV1 6及 1 8的感染。对该方法的敏感度和特异度进行了测定 ,并用该法对 31例宫颈癌病人和 1 1 3例对照组妇女宫颈分泌物进行了检测。③结果　PCR扩增后HPV1 6、HPV1 8分别有 341、4 30bp和 1 0 9、4 73bp的带产生。该反应体系最低可检测浓度为 3μg/L。用该方法对人类基因组DNA、人类巨细胞病毒 (HCMV)和大肠埃希菌DNA以及其他型别的HPV进行检测 ,均未见假阳性结果产生。宫颈癌病人HPV1 6的感染率为 6 7.7% ,HPV1 8的感染率为 1 9.4 % ,明显高于对照组 (χ2 =31 .5 2、6 .2 6 ,P <0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　HPV1 6、HPV1 8感染与宫颈癌的发生密切相关。本研究建立的方法具有特异度和敏感度高、简便、快速等特点 ,可推广应用于临床检测。     

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

①目的探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。②方法收取病人痰液、肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。③结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫包囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性（ｕ＝６．６３８，Ｐ＜０．０５）。尿毒症、肺癌、血液病和肺部炎症病人卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率分别为３７．５％，６１．５％，５０．０％和２０．８％，差异有显著性（χ２＝９．０１，Ｐ＜０．０５）。痰液、肺组织和支气管灌洗液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡＰＣＲ的检出率分别为２８．６％，６１．９％和７７．８％，差异有极显著意义（χ２＝１２．３０，Ｐ＜０．０１）。吉氏染色法检测出的１０份卡氏肺孢子虫包囊阳性标本，ＰＣＲ检测皆为阳性；５７份阴性标本，ＰＣＲ检测出１５份为阳性。４份结核标本ＰＣＲ检测皆为阴性。④结论ＰＣＲ技术检测肺组织和支气管灌洗液标本中的卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，具有较高的敏感性和特异性