鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因序列的测定

目的： EB病毒 (Epstein-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如 LMP1基因）。 BamHI A区右向框 0（ BamHI A rightward fram0, BARF0）是在鼻咽癌 (Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个 EB病毒基因,对其变异性的研究尚未见报道,本研究是为了明确广东鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因的序列及其变异。方法：应用 PCR技术从 20例鼻咽癌组织中,扩增 EBV基因 BARF0,并对它们的序列进行测定。结果：与标准株 B95-8相比,鼻咽癌组织中 EBV-BARF0均有 4个位点发生突变： 160473（ G→ T）、 160545（ C→ T）、 160701（ C→ A）、 160707（ G→ C）,并导致相应的氨基酸的改变： 2（ Ala→ Ser）、 26（ Leu→ Phe）、 78（ Arg→ Ser）、 80（ Ala→ Pro）。结论：由于 EBV的 BARF0基因在鼻咽癌细胞株及活检组织中 100％表达,在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达,本研究首次报道鼻咽癌组织中 EBV-BARF0的序列分析,与 B95-8相比存在变异,并导致了蛋白质的一级结构的改变,推测该基因很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。     

唾液中EB病毒抗体检出用于早诊鼻咽癌的研究

目的：建立在唾液标本中检出 EB病毒 IgA抗体的方法,以快速、特异诊断鼻咽癌。方法：人工合成 EBV-DNA酶及 EA-D多肽片段,分别作为捕捉抗原,采用 ELISA法检测鼻咽癌患者和健康人血清及唾液中 IgA/ EBV-DNA酶和 EA-D抗体。结果：通过检出 O.D值,经统计学处理,选出鼻咽癌诊断阈值为：血清 O.D值≥ 0.3,唾液 O.D值≥ 0.45（ DNA酶与 EA-D两者阈值一致）。鼻咽癌与健康者两组间 DNA酶与 EA-D的 IgA滴度均为 P< 0.0001,有非常显著性差异,与病理确诊相比,阳性符合率为 72.6％～ 77.3％。结论：证实 EBV合成肽链作为捕捉抗原,唾液为标本,用 ELISA法是可行的,方法简便,重复性好,价廉,但诊断符合率需进一步提高。     

鼻咽癌细胞SUNE中EBV—LMP1基因对上皮细胞增殖的影响

目的 研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响,探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法 用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测ＬＭＰ１的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果 被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,ＭＴＴ吸收能力增强,ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论 ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细     

EBV—VCA/IgA抗体水平与低发区鼻咽癌临床预后关系的探讨

病例来自哈尔滨医科大学第三临床医学院1984～1987年间确诊的黑龙江省籍病人106例。放疗前进行了EBV—VCA/IgA抗体检测,追踪观察其抗体水平与临床预后的关系。结果,抗体滴度高的患者易复发,五年生存率低。而抗体阴性或弱阳性者(≤1:10)、五年生存率高,差别均有显著意义。另外,44例病人放疗前后抗体滴度对比其中40例放疗后抗体滴度下降1～5个滴度,仅有4例维持原水平,有显著性差别。该结果提示,EBV—VCA/Ig抗体水平与北方低发区NPC病人的临床预后有关。该指标的检测可作为临床判断预后辅助项目。     

中国北方鼻咽癌病人癌组织中EBV基因组的检测

目的从分子生物学角度为低发区鼻咽癌(NPC)寻找一种鉴别诊断方法.方法用PCR方法检测了37例NPC组织中Epstein-Barr病毒(EBV)基因组存在情况.结果A型EBV的检出率(28/37)明显高于B型EBV(3/37),10%的未分化癌检出A型EBV.结论PCR分析显示北方NPC病人EBV感染的优势型是A型,低分化及未分化癌与A型EBV关系密切,因此,PCR检测A型EBV用于原发隐匿而有颈部淋巴结转移灶的NPC与非NPC的鉴别上具有实用价值.     

鼻咽癌中EBV感染与某些基因产物表达的关系

目的　观察EB病毒RNA(Epstin Barrvirus ,EBV)、膜蛋白 (LMP 1)、c erbB 2、CyclinD1,bcl 2和p5 3蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,探讨其相互间关系及其在鼻咽癌发生发展中的作用。方法　采用原位分子杂交技术检测了 36例鼻咽癌组织中EBV编码的encodedsmallRNAs(EBERs)、用免疫组化技术检测LMP 1、CyclinD1、c erbB 2、bcl 2和 p5 3蛋白的表达。 结果　36例鼻咽癌组织中全部检出EBVRNAs ,阳性率为 10 0 % (36 /36 ) ,LMP14 4 .4 % (16 /36 ) ,CyclinD15 2 .8% (19/36 ) ,c erB 25 8.3% (2 1/36 ) ,bcl 2 4 4 .4 % (16 /36 ) ,p5 333.3% (12 /36 )。鼻咽癌组织中EB病毒感染与c erB 2、CyclinD1癌基因的表达、p5 3抑癌基因的失活之间有明显的关系。结论　鼻咽癌与EB病毒作为致瘤病毒激活癌基因蛋白的表达密切相关。鼻咽活检组织中有EBERs及LMP 1的检出 ,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。     

鼻咽癌高癌家系成员EB病毒VCA—IgA抗体水平分析

目的：探讨鼻咽癌高癌家系成员的ＥＢ病毒ＶＣＡ－ＩｇＡ抗体水平。方法：用免疫酶法分别检测高癌家系成员共４１６人和自然人群８７４人的ＶＣＡ－ＩｇＡ抗体。结果：高癌家系成员的ＶＣＡ－ＩｇＡ阳性率为２６．４４％（１１０／４１６）,明显高于自然人群的４．２３％（３７／８７４）。结论：鼻咽癌高癌家系成员中的高ＥＢ病毒感染率与鼻咽癌的高发病率相关。     

鼻咽癌发生发展过程中EBER1表达的研究

目的：探讨ＥＢＶ与鼻咽癌发生发展的关系及其病理学意义。方法：应用原位杂交技术检测５０例鼻咽癌石蜡切片组织中ＥＢＥＲ１的表达及分布状况。结果：正常鼻咽粘膜上皮及其单纯性增生、鳞状化生上皮ＥＢＥＲ１表达均阴性,鼻咽癌组织中表达率为９８％（４９／５０）,且在转移灶中不丢失。鼻咽异型增生上皮亦可表达ＥＢＥＲ１阳性信号（１６／２０）,结论：ＥＢＶ与鼻咽癌关系密切,ＥＢＶ可能在鼻咽上皮的恶性转化过程中起重要作用,鼻咽上皮的异型性改变尤其是ＥＢＥＲ１阳性者可认为是癌前病变,随访监测可能有利于早期发现鼻咽癌。     

Epstein—Barr病毒与鼻咽癌的研究进展

Epstein-Bars病毒(EBV)与鼻咽癌(NPC)的关系,目前研究进展很快,广泛地从流行病学、腌制食物、微量元素及中草药等方面研究,发现它们与EBV有密切联系。目前材料表明,EBV与NPC这种关系受到许多因素影响,其中之一就是激活EBV的物质,它存在于NPC高危地区的食品、环境和药物之中,本文就这几个方面叙述EBV与NPC的关系。     

血浆EBV DNA水平测定在监测鼻咽癌放疗后复发、转移中的临床意义

目的 探讨定量分析血浆EBV DNA水平在监测鼻咽癌复发、转移中的临床意义。方法 应用荧光定量PCR技术（real-time PCR）,检测360例根治放疗后鼻咽癌患者血浆EBV DNA水平,并与临床及影像学检查结果 比较。结果 360例患者中87例血浆EBV DNA检测阳性,273例阴性。在87例检出阳性者中,25例证实为临床复发,45例证实为远处转移,故其预测肿瘤进展阳性预测值为80%（70/87）。在273例血浆EBV DNA检测阴性患者中,共有17例复发和4例转移,故其阴性预测值为92%（252/273）。总计91例肿瘤进展患者中70例血浆EBV DNA阳性,其中复发42例,25例血浆EBV DNA阳性;转移49例,45例血浆EBVDNA阳性。269例临床缓解患者中17例血浆EBV DNA阳性,故其敏感性、特异性、假阳性率和假阴性率分别为77%（70/91）、94%（252/269）、6%（17/269）、23%（21/91）、90%（322/360）。复发患者、转移患者、肿瘤进展患者和临床缓解患者EBVDNA阳性率和中位拷贝数分别为：60%,4700 copies/ml;92%,425000 copies/ml;77%,38000 copies/ml;6%,〈500copies/ml。复发患者与转移患者比较、肿瘤进展患者与临床进展患者比较,血浆EBV DNA阳性率和中位拷贝数均有显著性差异。结论 血浆EBV DNA水平的检测是监测放疗后鼻咽癌患者转移、复发的有效指标。     

六种抗EB病毒抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的比较

目的:评估EBNA1-IgA,EBNA1-IgG,Zta-IgA,Zta-IgG,VCA-p18-IgA和VCA-p18-IgG六种酶联免疫吸附检测(ELISA)在血清学诊断鼻咽癌中的应用,探讨哪种ELISA组合更有功效.方法:收集85例治疗前鼻咽癌患者和132例健康成人血清.应用六种EB病毒特异性重组融合蛋白ELISA,检测血清抗EB病毒的抗体水平.采用灵敏度、特异度、优势比等参数来评估它们在诊断鼻咽癌中的效率.结果:单独采用一种检测时,Zta-IgG和EBNA1-IgA的灵敏度与特异度均可达0.8106以上.Zta-IgG/EBNA1-IgG和Zta-IgG/EBNA1-IgA两种检测双阳性的特异度提高至0.9621以上.Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA三种检测均阳性者,其特异度不仅可达0.9824,优势比也明显升高(分别为206.4242和196.5000).85例患者血清中无1例同时呈Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG阴性者.结论:临床血清学诊断鼻咽癌,首选Zta-IgG或EBNA1-IgA.同时检测两种ELISA,宜采用Zta-IgG/EBNA1-IgA或Zta-IgG/EBNA1-IgG.三种ELISA同时检测,可以提高特异度.推荐Zta-IgG/EBNA1-IgA/EBNA1-IgG或Zta-IgG/EBNA1-IgG/Zta-IgA三项.     

鼻咽癌患者血浆游离EBV/DNA的定量检测及其临床意义

目的:探讨血浆EBV/DNA定量分析,在鼻咽癌早期诊断、临床分期、预后判断和监测放疗后转移复发中的临床意义.方法:采用荧光定量PCR方法定量检测经病理确诊为鼻咽癌的120例初治、90例放疗后随诊患者,其中包括60例放疗后持续缓解,30例远处转移和局部复发患者的血浆EBV/DNA含量.结果:初治、远处转移和局部复发的鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA检出率分别为96.0%、95.0%和100%,显著高于治疗后持续缓解鼻咽癌患者、健康对照者和非鼻咽癌的肿瘤患者;初治鼻咽癌患者各TNM分期之间血浆EBV/DNA拷贝数有显著统计学差异,晚期患者(Ⅲ Ⅳ)期血浆EBV/DNA中位拷贝数显著高于早期患者(I Ⅱ)期;初治患者治疗后已出现局部和远处转移者.治疗前血浆EBV/DNA中位数显著高于尚未出现复发转移患者:初治患者治疗前血浆EBV/DNA≥40 000拷贝/ml与＜40 000拷贝/ml两个水平,患者22个月无复发生存率分别为46.1%和92.9%,有显著统计学差异;放疗后复发、转移鼻咽癌患者血浆EBV/DNA的中位拷贝数显著高于治疗后持续缓解患者.结论:采用荧光定量PCR方法检测鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA是一种敏感可靠的方法,对于鼻咽癌早期诊断、鉴别诊断、分期、判断预后、监测治疗后复发和远处转移具有重要的临床意义,有可能成为鼻咽癌的血清肿瘤标记物.     

EB病毒VCA/IgA、Rta/IgG及EBNA1/IgA抗体水平在鼻咽癌高发区不同人群中的分布

目的 观察分析鼻咽癌高发区中的鼻咽癌患者、非鼻咽癌头颈部相似疾病患者和健康体检人群中EB病毒VCA/IgA、Rta/IgG及EBNA1/IgA的抗体水平分布情况。方法 收集211例未经治疗的鼻咽癌患者、203例头颈部相似症状患者和210例健康体检者的血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测Rta/IgG和EBNA1/IgA。应用秩和检验、受试者工作特征(ROC)曲线、多分类logistic回归模型等方法对结果进行分析评价。结果 鼻咽癌组的VCA/IgA、Rta/IgG及EBNA1/IgA抗体水平均显著高于头颈部相似疾病组和健康对照组(P<0.001)。头颈部相似疾病组的Rta/IgG及VCA/IgA抗体水平也明显高于健康对照组(P<0.001)。以头颈部相似疾病组和健康体检组为分析人群,分别作相关抗体的ROC曲线,VCA/IgA 的ROC曲线下面积为0.565,Rta/IgG抗体的ROC曲线下面积为0.604,具有统计学意义(P<0.05)。综合年龄、性别和3种EB病毒抗体等因素的多分类logistic回归分析显示,鼻咽癌、头颈部相似疾病和健康体检者的预测准确率分别为95.3％、70.9％和55.2％。结论 在鼻咽癌高发区EB病毒VCA/IgA及Rta/IgG抗体水平在头颈部相似疾病人群和健康人群中存在一定差异,在鼻咽癌的人群筛查和临床诊断中可根据具体情况设定不同的抗体阳性临界值。     

Rearranged Epstein-Barr Virus Genomes and Clonal Origin in Nasopharyngeal Carcinoma

Epstein-Barr virus (EBV) is known to be associated with two malignant diseases, nasopharyngeal carcinoma (NPC) and endemic Burkitt's lymphoma. In this study, the genomes of EBV in biopsy specimens from 4 NFC patients in Japan were analyzed using Southern blot hybridization. The NPC tissues of all examined cases contained rearranged EBV genomes whose Bam HI H fragments were larger than those of prototype EBV genomes. One of them had a Bam HI fragment containing contiguous sequences of Bam HI Y and H. A single-sized EBV DNA terminus was observed in these NPC tissues, implying the evolution of the carcinoma from a single EBV-infected cell.     

EB病毒微小RNA在鼻咽癌患者中表达的意义

目的研究探讨EB病毒微小RNA在鼻咽癌中的表达情况,以便于找到诊断和防治鼻咽癌的生物标志物。方法选取45例鼻咽癌患者和37例鼻咽炎患者为研究对象,借助实时荧光定量PCR技术并以miR-U6作为内参物,对上述疾病病灶中的EB病毒miRNAs(包括EBV-miR-BART4*和EBV-miR-BART18-3P)的表达情况进行研究分析。结果经统计分析可知,EB病毒的两种miRNAs在鼻咽炎组织中的表达数值分别是(28.43±3.16)和(26.73±3.08),而在鼻咽癌组织中的表达数值分别是(40.51±4.82)和(41.66±3.46),可见其在鼻咽癌组织中的表达水平明显高于鼻咽炎组织,两者具有显著的差异性(P<0.01)。结论 EB病毒微小RNAs可通过较显著的表达水平导致鼻咽癌的发病和病灶转移,因此可将其作为鼻咽癌诊断防治中潜在的生物分子标志物。     

鼻咽癌细胞bcl—2基因异常与EB病毒感染的关系

目的 研究鼻咽癌细胞bcl－2基因异常与EB病毒感染的关系。方法 采用半套式原位聚合酶链反应和免疫组织化学技术对41例鼻咽癌细胞中bcl－2基因重排、bcl－2蛋白表达率为82．92％（34／41）、LMP－1的阳必率为51．2％（21／41）,bcl－2基因异常（重排和蛋白异常表达）与LMP－1的阳性率无显著性差异（P＜0．05）,bcl－2／JH融合基因形成与bcl－2蛋白表达无显著性差异（P＜0．05）。结论 bcl－2基因在鼻咽癌发生过程中可能起一定作用。mbr和mcr区域同为bcl－2基因在鼻咽癌的2个重要断裂区;bcl－2基因重排可能不是引起bcl－2蛋白异常表达惟一原因;EBV感染对bcl－2基因重排和bcl－2蛋白过表达可能无影响。     

EB病毒感染及抗凋亡基因Bc1—2与鼻咽癌关系的研究

作者应用免疫组化ＳＰ法观察了４６例鼻咽癌组织中抗凋亡基因Ｂｃ１－２和ＥＢ病毒潜在膜蛋白（ＬＭＰ－１）的表达。结果显示ＬＭＰ－１的表达率为５２．２％，其中以低分化癌的阳性率较高（８２．６％）；Ｂｃ１－２蛋白在鼻咽癌中出现异常高表达（阳性率为８２．６％），Ｂｃ１－２的表达率与鼻咽癌组织学分级无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；Ｂｃ１－２表达与ＬＭＰ－１的阳性率无明显相关（Ｐ＞０．０５）。表明Ｂｃ１－２异常表达和ＥＢ病毒感染均可能与鼻咽癌发生有关。