杏丁对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的 观察杏丁对过氧化氢 (H2O2) 诱导肾小管上皮细胞(NRK52E)凋亡的抑制作用及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成:对照组,H2O2(400μmol/L),杏丁+ H2O2组,杏丁组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预,采用H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡模型,用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并采用 RT-PCR 检测Survivin mRNA表达.结果 杏丁可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,并降低细胞凋亡率,增加Survivin mRNA表达.结论 杏丁显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,其抗细胞凋亡作用可能与其增加Survivin表达活化有关.     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的]研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法]传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200μg/m L),每组设3个复孔。将细胞置于37℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果]24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20μg/m L细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

人参皂苷Rg1对尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷的单体成分Rg1对尿蛋白(Upro)诱导的肾小管上皮细胞HK2凋亡的作用及机制.方法:体外培养的HK2细胞,用MTT法选择尿蛋白诱导HK2细胞凋亡的适合浓度,将肾小管上皮细胞HK2分为对照组、模型组、Rg1+Upro组、肝细胞生长因子(HGF) +Upro组,检测线粒体膜电位(JC-1)及Rg1的干预作用.结果:一定浓度的尿蛋白能够诱导HK2细胞凋亡,而人参皂苷Rg1能稳定HK2细胞的线粒体膜电位,显著抑制尿蛋白诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论:肾小管上皮细胞凋亡是尿蛋白损伤的一种重要形式,人参皂苷Rg1可以稳定细胞线粒体膜电位,从而抑制尿蛋白诱导细胞凋亡而起到肾小管上皮细胞的保护作用.     

银杏叶提取物EGB761对高胆固醇家兔肝质量和形态的影响

[目的]观察银杏叶提取物(EGB761)对高胆固醇家兔肝质量和形态的影响.[方法]参照D.Larry Sparks等方法复制高胆同醇血症家兔模型.采用50 mg/(kg·d)EGB761灌胃3周,以辛伐他汀5mg/(kg·d)作为阳性对照药.评价肝体指数,观察肝脏的形态学变化.[结果] EGB761可以有效降低肝体指数(P<0.01),与阳性药辛伐他汀疗效相比无显著性差异(P>O.05);大体和镜下形态学观察发现EGB761可以有效的改变脂肪变性肝脏的大体形态和组织学形态.[结论]EGB761可以有效防治高胆同醇血症所致脂肪肝的发生.     

和厚朴酚对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨中药厚朴活性成分和厚朴酚对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法：人晶状体上皮细胞（SRA01-04）用50μmol/L的过氧化氢诱导凋亡,同时加入不同浓度（0、5、10、20μmol/L）的和厚朴酚,用MTS法检测细胞增殖活性,用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时荧光定量PCR以及Western-blot法分析caspase3、caspase9和bcl-2的表达。结果：过氧化氢能明显诱导人晶状体上皮细胞凋亡（58.66%±7.36vs2.84%±0.49%,P〈0.01）,促进caspase3和caspase9在基因转录水平和蛋白水平的表达;和厚朴酚能剂量依赖性拮抗过氧化氢对人晶状体上皮细胞的增殖抑制作用以及凋亡诱导作用,抑制caspase3、caspase9的表达和活性,促进bcl-2的表达。结论：和厚朴酚对氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡具有保护作用,提示可能对白内障的发生具有潜在的防治作用。     

茵陈对阿霉素诱导的NRK-52e细胞凋亡的保护作用研究

目的 探究茵陈水提物冻干粉(freeze-dried powder of Artemisia Capillaris Thunb. water extract, WAC)对阿霉素(adriamycin, ADR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52e)损伤的保护作用。方法 ADR(1μg·mL^-1)体外诱导NRK-52e损伤,通过加入不同质量浓度的WAC(1、2、4 mg·mL^-1)作用后,分别采用形态学观察、细胞增殖毒性检测法(CCK-8法)检测WAC对细胞的保护作用,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法以及蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞凋亡的表达水平。结果 与空白组比较,给予ADR干预后,NRK-52e细胞数目明显减少,间隙明显增大,形态皱缩变形,同时漂浮在培养液中的损伤细胞明显增加,细胞活性明显降低(P<0.01),TUNEL法检测凋亡率明显增加(P<0.01),能诱导相关凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达明显降低(P<0.01)、Cleaved Caspase-3/Caspase-3显...     

马兜铃内酰胺I对肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:了解马兜铃内酰胺I(AL-I)是否导致肾小管上皮细胞损伤.方法:以体外细胞培养的人类近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为研究对象,以马兜铃酸I(AA-I)为阳性对照,采用LDH释放试验检测AL-I的直接细胞损伤作用;用相差显微镜、电子显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞仪分析细胞DNA含量以及细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)表达水平,以了解细胞凋亡情况;采用ELISA法检测细胞培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白(FN)以及促纤维化细胞因子转化生长因子β1(TGF β1)的分泌水平.结果:AL-I(2.5～20 mg·L-1)具有浓度依赖的直接细胞损伤作用;细胞形态、DNA含量及PS表达水平分析表明,AL-I在上述浓度范围内能够导致HK-2细胞凋亡,并能够导致HK-2细胞分泌TGF β1及FN.与AA-I的作用进行比较发现:在相同浓度情况下,AL-I的直接细胞毒作用强于AA-I,但其导致细胞凋亡、TGF β1及FN分泌的能力弱于AA-I.结论:马兜铃酸的代谢产物AL-I能够造成肾小管上皮细胞的损伤,作用与AA-I相似.尽管其致损伤作用较AA-I弱,但仍有可能是含马兜铃酸中药导致肾脏损伤及其纤维化过程的毒性成分之一.     

白藜芦醇通过激活PI3K/Akt通路抑制高糖致肾小管上皮细胞凋亡的研究

目的:白藜芦醇对高糖作用下肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激介导的凋亡影响及作用机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞,高糖作用于肾小管上皮细胞诱导其凋亡,设置空白对照组、模型组(30 mmol·L~(-1)高糖处理)、不同浓度(5、10μmol·L~(-1))白藜芦醇组,LY294002(PI3K抑制剂)组(10μmol·L~(-1))。使用MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1检测线粒体膜电位(MMP);DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western-blot法检测各组细胞色素C(CYT-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及Akt的磷酸化情况。结果:与空白对照组相比高糖损伤组能够显著降低肾小管上皮细胞的活力,增加细胞中ROS的含量和凋亡率,LDH(细胞外)、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低线粒体膜电位,增加了CYT-C、Caspase-3的表达,而p-Akt/Akt表达降低(P0.01)。不同浓度白藜芦醇(起效剂量5μmol·L~(-1),高剂量10μmol·L~(-1))和高糖同时作用肾小管上皮细胞时,细胞存活率逐渐上升,ROS含量及凋亡率逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,线粒体膜电位提升,CYT-C、Caspase-3表达显著下降,p-Akt/Akt表达增加(P0.01)。LY294002(PI3K抑制剂)组上述指标的检测结果与白藜芦醇组相反。结论:白藜芦醇可能部分通过激活PI3K/Akt通路抑制氧化应激及其诱导的凋亡,从而对肾小管上皮细胞发挥保护作用。     

制大黄-川芎“药对”抑制造影剂肾病大鼠肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制研究

目的研究制大黄-川芎“药对”抑制造影剂。肾病（CIN）大鼠。肾小管上皮细胞凋亡信号通路的机制。方法将32只雄性sD大鼠分为正常组（A组）、模型组（B组）、药对组（C组）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组（D组）。C组于造模前7天每日灌胃“药对”水煎液,D组造模前3天每日腹腔注射NAC（150μg／g）。B、C、D3组按照文献方法制备CIN模型。造模后24h处死大鼠,测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;HE染色观察肾脏病理改变,Western印迹检测肾组织p-p38MAPK、Bcl-2及Bax表达。结果与A组比较,B、C、D组大鼠血清肌酐、尿素氮均明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,出现肾间质水肿、肾小管上皮细胞胞浆空泡样变,p-p38MAPK、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。与B组比较,C、D组血清肌酐、尿素氮明显降低（P〈0．05）,肾脏病理改变显著减轻,p-p38MAPK、Bax蛋白表达下降,而Bcl-2表达增加（P〈0．01）。结论p38MAPK通路活化参与了CIN大鼠急性。肾损伤过程,且制大黄-川芎“药对”能通过抑制该通路活化保护CIN大鼠肾功能。     

黄葵和银杏叶提取物对实验性肾病综合征的疗效比较及机理探讨

目的观察黄葵和银杏叶提取物(ECB761)对实验性肾病综合征的疗效,并探讨可能机理。方法按体重将大鼠随机分为正常组、模型组、模型 EGB761组、模型 黄葵组；正常组一次性注射生理盐水,其余各组一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)制成微小病变型肾病综合征(MCNS)模型；两治疗组于造模2周后开始用药,各组每2周测定24 h尿蛋白,实验8周末测定血清TP、Alb、总SOD、MDA含量；肾组织作光镜、电镜检查。结果(1)两治疗组尿蛋白量下降幅度均显著大于模型组(P＜0．01)；(2)实验8周末,两治疗组血清TP、Alb升高幅度均显著大于模型组(P＜0．01和P＜0．05)。(3)两治疗组总SOD水平均显著高于模型组(P＜0．01),MDA显著低于模型组。结论黄葵和EGB761能显著降低MCNS模型大鼠的蛋白尿；其减轻尿蛋白的作用与清除氧自由基有关。     

EGB761对铜和高脂诱导的AD家兔模型抗氧化功能的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对铜和高脂诱导的AD家兔模型血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)水平的影响。[方法]参照D.Larry Sparks等人的方法,采用铜和高脂饮食复制家兔AD模型,利用50 mg/(kg.d)EGB761灌胃3周后,检测血清SOD、MDA、GSH-PX水平。[结果]模型组家兔血清SOD、MDA和GSH-PX水平均明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。EGB761组血清SOD、GSH-PX、MDA水平均明显下降,与模型组比其差异具有统计学意义(P0.05);EGB761组与对照组相比,SOD水平呈下降趋势,GSH-PX水平呈上升趋势,但其差异不具有统计学意义(P0.05)。[结论]铜和高脂诱导的AD家兔模型体内存在明显的过氧化损伤,EGB761对其具有一定的保护作用。     

银杏叶提取物的紫外谱线组图谱的研究

采用指纹谱线组合技术测绘银杏叶提取物(EGB761)的紫外谱线组图谱,具有特征性强、重现性好的优点,可应用于中药原药材、提取物以及制剂的真伪鉴别与质量控制。初步确定EGB761的标准紫外谱线组为:λmax(nm):水溶液(C=0.02 mg/ml)265.00±1.00,201.00±1.00;无水乙醇溶液(C=0.02 mg/ml)267.00±1.00,210.00±1.00;氯仿溶液(C=0.4 mg/ml)241.00±1.00;石油醚溶液(C=0.4 mg/ml)211.00±1.00。     

银杏叶提取物对高胆固醇家兔模型过氧化损伤的影响

目的观察银杏叶提取物(EGB761)对高胆固醇家兔模型血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法参照D.Larry Sparks等的方法,复制高胆固醇血症家兔模型,利用50 mg/(kg.d)EGB761灌胃3周后,检测血清SOD、MDA、GSH-Px水平。结果模型组家兔血清SOD、MDA和GSH-Px水平均明显升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,EGB761组血清SOD、GSH-Px、MDA水平均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,EGB761组血清MDA水平与GSH-Px水平均明显升高(P<0.05);SOD水平呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论高胆固醇血症家兔模型体内存在明显的过氧化损伤,EGB761对高胆固醇血症引起的过氧化损伤具有一定的保护作用。     

氨基胍对大鼠急性肺栓塞后肺组织细胞凋亡的影响

目的　观察氨基胍对大鼠急性肺栓塞后肺组织细胞凋亡的影响。方法　将大鼠随机分为对照组、模型组、治疗(AG)组,采用改良的导管方法将体外已凝的大鼠血栓注入右心房制备大鼠急性肺栓塞模型。AG组于制成肺栓塞后立即腹腔注射氨基胍,模型组给等容量的生理盐水,对照组只通过导管注入血清。于肺栓塞后1h放血处死大鼠,迅速取肺组织,流式细胞仪(FCM)测定肺组织细胞凋亡率,免疫组化法检测Caspase - 3蛋白的表达。结果　肺栓塞后,肺组织细胞凋亡率明显上升,Caspase - 3蛋白表达阳性细胞明显增多,给予氨基胍后细胞凋亡率明显下降,Caspase- 3蛋白表达阳性细胞数明显减少。结论　氨基胍可降低急性肺栓塞后肺组织细胞凋亡率及Caspase - 3蛋白表达,对急性肺栓塞大鼠有保护作用。     

六神丸逆转灯盏细辛抑制MCF-7细胞凋亡作用的实验研究

目的观察六神丸与灯盏细辛注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的作用,并从细胞凋亡角度探讨其相互作用机制。方法将六神丸含药血清及灯盏细辛注射液作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,检测其对细胞增殖的直接抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞凋亡及对Caspase-3表达的作用。结果六神丸含药血清对MCF-7细胞的增殖均有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为41.23%、36.93%、36.82%;灯盏细辛注射液对MCF-7细胞的增殖均亦有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为27.09%、19.40%、25.58%;两者合用作用增强,24、487、2 h生长抑制率分别为67.89%、65.57%、68.31%。流式细胞仪检测证明,灯盏细辛注射液可抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达,六神丸含药血清可促进MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达。两者合用,MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达较对照组增强,效果界于两者单用之间。结论六神丸可通过逆转灯盏细辛注射液抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3的表达而表现出促MCF-7细胞凋亡的作用。     

银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默病家兔模型ACAT1和LCAT mRNA表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对阿尔茨海默(AD)病家兔模型胆固醇酰基转移酶(ACAT1)和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)mRNA表达的影响。[方法]以2%高胆固醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立AD家兔模型。模型建立后,用50 mg/(kg.d)EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5 mg/(kg.d)辛伐他汀作为阳性药对照组。干预结束后,通过实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测海马卵磷脂-胆固醇酰基转移酶mRNA和胆固醇酰基转移酶1 mRNA的表达。[结果]银杏叶提取物EGB761可以下调ACAT1 mRNA的表达,不影响LCAT mRNA的表达。[结论]银杏叶提取物EGB761可下调AD家兔模型ACAT1 mRNA表达,对LCAT mRNA表达无调节作用。     

三七总皂苷干预糖尿病肾病大鼠氧化应激及足细胞凋亡机制的实验研究

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)干预链脲佐菌素(Streptozotozin,STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)氧化应激及足细胞凋亡机制。方法:体内实验:44只SD雄性大鼠,单侧肾切除1周后一次性腹腔注射55mg/kg STZ造模,造模后,按体质量随机分为正常组,模型组,厄贝沙坦组(IRB组),三七总皂苷组(PNS组),每2周测体质量、24h时尿蛋白定量,12周后处死,记录肾质量体质量比;检测血清TG、BUN、Scr、NO、MDA和SOD浓度;进行肾组织HE、mallory、masson、六胺银染色,观察肾组织病理变化并评分;免疫组化检测肾组织TGF-β1、Caspase-3蛋白表达;原位杂交检测肾组织TGF-β1 mRNA表达。体外实验:用RT-PCR检测PNS对高糖刺激下体外培养足细胞Caspase-3 mRNA表达的影响。结果:与模型组比较,PNS组第8、10、12周体质量显著增加(P<0.05),肾组织病理评分、肾重体重比、血清TG、BUN、Scr等指标明显改善(P<0.05),血清SOD活性增强(P<0.05),同时MDA含量减少(P<0.05),肾组织TGF-β1 mRNA、Caspase-3蛋白水平下调(P<0.05);体外培养PNS组足细胞Caspase-3 mRNA表达减少。结论:PNS可能通过抗氧化应激抑制足细胞凋亡而对STZ诱导的大鼠DN起到一定的保护作用。