不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响.方法 采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布.结果 与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外堵养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且能明显降低G0/G1期细胞比例(P＜0.05),提高S期成骨细胞比例及增殖指数(P＜0.05).结论 骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖.     

骨疏康颗粒含药血清对成骨细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨骨疏康颗粒含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖及细胞周期分布的影响。方法采用酶消化法进行大鼠成骨细胞培养,制备骨疏康颗粒含药血清干预成骨细胞,以生理盐水大鼠血清作对照,运用MTT法、流式细胞术检测成骨细胞增殖情况及细胞周期分布。结果与同浓度生理盐水血清比较,骨疏康含药血清能不同程度地促进体外培养成骨细胞增殖,其中以20%骨疏康含药血清促增殖作用最显著,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,且能明显降低G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,提高S期成骨细胞比例及增殖指数（P〈0.05）。结论骨疏康含药血清能加速成骨细胞周期,促进成骨细胞增殖。     

华中五味子含药血清对成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞作MTT法细胞增殖测定、PNPP法ALP活性测定、以及茜素红染色矿化结节计数。结果:培养48h,10%、15%和培养72h,5%、10%华中五味子95%乙醇提取物血清组的细胞增殖速度比对照组快(P<0.01);培养48h,10%、15%和培养72h,10%华中五味子乙醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05和P<0.01);培养2周,矿化结节计数显示10%华中五味子乙醇提取物血清组多于对照组(P<0.01),华中五味子水提取物各血清组对成骨细胞增殖分化没有显著作用。结论:甘肃产华中五味子95%乙醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的：从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法：通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果：用5％和10％的血清培养第7天时三组的0D值均为最高，而20％的血清培养第5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论：骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果^[1]已经证实，骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度，改善生物力学性能，调节体内激素水平，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

小青龙汤整体给药和含药血清作用的比较研究

许多研究者设想用含药血清进行离体实验比以往直接将中药粗制剂加入离体反应系统更能反映中药在体内的作用情况 ,为了验证这一设想 ,本文对实验中发现的小青龙汤增强昆明小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能进行了整体给药与含药血清实验的比较 ,报告如下。1　材料1 1　动物　昆明小鼠 ,雄性 ,体重 18～ 2 2ｇ ,清洁级。由本校实验动物中心提供。合格证号 :医动字第 0 2 - 2 4 - 3号。1 2　试剂　小青龙汤 :麻黄、白芍、细辛、生姜、甘草、五味子、法半夏、桂枝和甘草 ,购自上海中医药大学众益达国药号 ;上述生药参考中国药典 95年版一部小青龙汤冲剂…     

扶正解毒方含药血清对人肺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究扶正解毒方含药血清对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的扶正解毒方含药血清,计算细胞抑制率、观察细胞形态学变化、检测细胞凋亡率。结果:MTT提示扶正解毒方含药血清对肺腺癌A549细胞具有特异性抑制效应并存在效应-剂量依赖关系;肺腺癌A549细胞随药物浓度增加及处理时间的延长细胞凋亡特征越明显;细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,存在效应-剂量、效应-时间依赖关系。结论:扶正解毒方含药血清可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

何首乌提取物及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的 探讨何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响.方法 分离、培养大鼠MSCs,分别加入何首乌多糖、二苯乙烯苷及何首乌含药血清72 h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况.结果 10-4 mol/L二苯乙烯苷及10%何首乌含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义(P<0.05),不同浓度的何首乌多糖对大鼠MSCs增殖影响不明显.结论 二苯乙烯苷及何首乌含药血清可促进大鼠MSCs增殖.     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的 :从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法 :通过体外分离和培养成骨细胞体系 ,运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果 :用 5 %和 10 %的血清培养第 7天时三组的OD值均为最高 ,而 2 0 %的血清培养第 5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论 :骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果〔1〕已经证实 ,骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度 ,改善生物力学性能 ,调节体内激素水平 ,具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

何首乌含药血清促进MSCs增殖的效应及机理研究

目的 探讨何首乌含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机理研究.方法 分离、培养大鼠MSCs,何首乌舍药血清诱导培养MSCs 72 h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中不同细胞因子mRNA表达;Real-time PCR检测SCF mRNA表达;Western blot检测SCF蛋白表达;ELISA法检测培养上清液SCF含量.结果 10%何首乌含药血清具有明显促进MSCs增殖的作用,并明显促进SCF mRNA表达及可溶性SCF蛋白的分泌.结论 10%何首乌含药血清具有促进MSCs增殖的作用,可能与其促进SCF mRNA表达、诱导MSCs分泌可溶性SCF蛋白增多有关.     

淫羊藿总黄酮含药血清对成骨细胞增殖、分化的影响

目的:研究淫羊藿总黄酮含药血清对体外培养成骨细胞增殖与分化功能的影响,进一步揭示淫羊藿"补肾壮阳,益精健骨"的作用机制。方法:采用中药血清药理学方法制备含淫羊藿总黄酮大鼠血清;用多次酶消化法体外培养成骨细胞;将含淫羊藿总黄酮大鼠血清(SRAT)以2.5%,5%,10%三种质量浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,研究它们对细胞增殖与分化成熟的影响。细胞增殖采用MTT法进行分析;细胞分化并于培养第4、8、12、16天检测碱性磷酸酶活性(组织化学法)、Ⅰ-型胶原(Co-l)的表达(免疫组化法)和矿化结节(组织化学法)。结果:2.5%和5%SRAT表现出强烈的刺激细胞增殖活性并显著提高碱性磷酸酶活性、矿化结节数和Ⅰ-型胶原表达。结论:淫羊藿总黄酮代谢产物强烈刺激成骨细胞的增殖并促进其分化成熟,说明淫羊藿总黄酮代谢产物具有促进骨形成活性。     

芦丁含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化成熟的影响

目的 研究芦丁含药血清(Serum of rats administered Rutin,SR)对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 ①取出生24 h 内的Wistar 大鼠颅骨,采用酶解法分离获得成骨细胞,培养于含10%类标准胎牛血清(...     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

毛鸡骨草含药血清体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的:观察毛鸡骨草(Abrus mollis)含药血清体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采取中药血清药理实验方法,以HepG2.2.15细胞为研究模型,将毛鸡骨草含药血清加入HepG2.2.15细胞培养液中培养,分别在72 h和144 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞株表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBV DNA复制的影响。结果:毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的表达和HBV DNA复制都有不同程度的抑制,以给药剂量为30 g·kg-1·d-1的毛鸡骨草含药血清组作用144 h对HBsAg的抑制率和对HBV DNA复制的抑制率最明显,抑制率分别为34.4%和41.7%。结论:毛鸡骨草在体外有一定的抗HBV作用。     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:研究以不同炮制品入药的青娥丸含药血清对人成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。观察盐炙品及生品青娥丸含药血清对人成骨细胞功能的影响,探讨青娥丸对骨质疏松症的治疗机制,阐述应用盐炙品配伍入药的必要性。方法:以绝经后妇女股骨松质骨分离得到的成骨细胞为研究对象,制备以补骨脂和杜仲生品及盐炙品配伍入药的青娥丸,给予大鼠生品及盐炙品青娥丸水提液ig(10mL·kg-1),给药持续7d,第7天采集大鼠血液制备含药血清。实验分为空白组、空白血清组、青娥丸含药血清组、盐青娥丸含药血清组。采用MTT法检测各组含药血清对人成骨细胞增殖的影响;同时测量成骨细胞碱性磷酸酶活性来评价各组含药血清对人成骨细胞分化的作用;采用细胞钙茜素红染色方法对给予含药血清处理的人成骨细胞进行染色,观察对人成骨细胞矿化的影响。结果:与同浓度空白血清比较,青娥丸的生品和盐炙品的含药血清均有促进成骨细胞增殖的作用(P<0.05),且含药血清浓度相同时,青娥丸盐炙品含药血清促进成骨细胞增殖的作用优于生品含药血清(P<0.05);青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞分化的作用(P<0.05),且盐炙品的作用要优于生品(P<0.01);空白血清对成骨细胞的矿化无显著的作用,而青娥丸生品及盐炙品含药血清具有促进成骨细胞矿化结节形成的作用,且盐炙品的作用要优于生品。结论:青娥丸能提高成骨细胞增殖、分化及矿化活性,其对于骨质疏松症的治疗作用与其能显著提高成骨细胞功能有关,且盐炙品入药的青娥丸效果较好。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

刺五加提取物含药血清抗肿瘤作用的研究

研究超滤膜对刺五加水煎液分离药效部位及抗肿瘤的活性。采用含药血清方法处理培养的小鼠肿瘤细胞HT29,U937和A549,观察肿瘤抑制作用同给药量和给药时间的关系。结果显示,5～80g/kg含药血清对各肿瘤株细胞均有明显抑制作用,且与剂量成正相关。药物血清在不同时间对各肿瘤株细胞均有明显抑制作用,与药物剂量成正相关。提示超滤膜分离的刺五加水煎液药效部位在体外有抗肿瘤活性。     

健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的:探讨健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法:①应用MTT法检测健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用;②运用TUNEL法和AnnexinV/PI法检测LoVo细胞的凋亡率。结果:①健脾化瘀方含药血清高浓度(20%)可抑制LoVo细胞的增殖(P<0.01);②健脾化瘀方含药血清作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡。结论:健脾化瘀方含药血清能抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,并诱导细胞凋亡。