利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原模拟表位

目的 利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3（desmoglein, Dsg3）模拟表位,加深对寻常型天疱疮发病机制的认识。方法 通过大肠杆菌表达Dsg3的胞外结构域1和2（extracellular domain, EC1-2） 和谷胱甘肽转移酶（GST）的融合蛋白,从寻常型天疱疮患者血清中纯化与EC1-2特异结合的多克隆抗体,对噬菌体随机线九肽库和环九肽库进行亲和筛选,阳性噬菌体展示肽经ELISA和竞争性ELISA验证。结果 经过两轮亲和筛选,与自身抗体结合的噬菌体明显富集,免疫筛查、验证后得到3个阳性噬菌体展示肽,ELISA检测显示它们与患者血清反应,而不与正常人血清反应,竞争性ELISA检测显示它们可以抑制寻常型天疱疮患者血清与重组蛋白EC1-2的结合。结论 利用噬菌体随机9肽库筛选到3个与寻常性天疱疮密切相关的模拟表位。     

系统性红斑狼疮患者可溶性肿瘤坏死因子受体及肿瘤坏死因子α水平的研究

目的：了解系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR)和肿瘤坏死因子α（TNFα）水平、两者的比值以及同临床 症状的关系。方法：采用双抗体夹心ELISA法检测血清和外周血单一核细胞（PBMC）培养上清液中TNFα、sTNFRI及sTNFRII水平,同时检测其它免疫项目。结果：①SLE患者血清中sTNFR I、sTNFR II、TNFα水平及sTNFR I/TNFα和sTNFR II／TNFα比值显著高于正常人对照组（P＜0.01）,sTNFR I与sTNFR I与sTNFR II之间呈显著正相关（r=0.88,P＜0.01）。②PBMC培养上清液中TNFα、sTNFR I及sTNFR II水平显著高于正常人对照组,且与血清中的TNFα和sTNFR II浓度呈显著正相关（r=0.58-0.73;P＜0.01）。③TNFα与感染有平行关系,而sTNFR II同临床症状评分呈相关（r值分别为0．69和0.75）。结论：SLE患者sTNFR、TNFα水平及sTNFR I及炎症方面发挥作用,sTNFR I及sTNFR II对于监测SLE疾病活动和严重程度明显优于抗dsDNA抗体等指标。     

抗α肿瘤坏死因子新靶点的进展

α肿瘤坏死因子是介导炎症反应和免疫反应的细胞因子,具有广泛的生物学活性。近年来,国内外抗α肿瘤坏死因子药物的研究进展迅速。从抑制α肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子前体生成、拮抗已经释放的肿瘤坏死因子作用方面简要介绍了目前研究的几个主要靶点及相关药物。     

肿瘤坏死因子-α及其受体在白癜风患者皮损中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及其受体(TNFR1)与白癜风发病的关系。方法采用SABC免疫组化法对18例进展期及20例稳定期白癜风患者皮损处TNF-α及TNFR1进行检测,并以20例正常人作对照。结果寻常型进展期白癜风皮损中TNF-α的表达较寻常型稳定期组显著增加(P<0.01),寻常型稳定期白癜风皮损中TNF-α的表达较正常对照组显著增加(P<0.001)。患者组与对照组TNFR1无显著性差异(P>0.05)。结论TNF-α可能参与寻常型白癜风发病的某一环节。     

肿瘤坏死因子α与银屑病

银屑病是一种慢性炎症性皮肤病,其发病机理至今尚未完全明确。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)是一种前炎症性细胞因子,研究发现其与银屑病的发病和治疗有密切联系。本文就近年来相关研究作一综述。     

从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位的研究进展

大部分功能重要的抗体都可以识别抗原的构象表位，而噬菌体肽库技术最大的应用前景就是可以得到模拟抗原表位结构和化学持征的小肽分子，通过这些模拟表位不仅可以寻找、发现血清中的持异抗体，用于研究疾病的病因与发病机制以及特异性地诊断疾病；而且还可以替代抗原诱导抗体产生，达列治疗疾病的目的；同时也为新药的开发提供了新思路。     

皮肤肿瘤患者血清肿瘤坏死因子-α活性检测

本文采用生物学活性方法,测定23例良性皮肤病和19例皮肤癌以及15例健康对照组血清TNFα,并对5例皮肤癌患者进行动态观察。其结果,皮肤良性肿瘤和皮肤癌患者血清TNTα水平显著高于健康对照组(P<0.01)。5例皮肤癌患者,经治疗后TNFα水平明显下降。     

肿瘤坏死因子α与系统性红斑狼疮

肿瘤坏死因子α是自身免疫反应的重要效应因子。对肿瘤坏死因子α及其受体p55、p75水平,外周血单个核细胞产生肿瘤坏死因子α的能力、肿瘤坏死因子α的基因表达及多态性等与系统性红斑狼疮的关系做了简要综述。     

肿瘤坏死因子α在扁平苔藓皮损中的表达

肿瘤坏死因子α(TNF-α)属于前炎性细胞因子,能调节机体多种细胞的增殖和分化,介导炎症反应,参与免疫调节、免疫病理和组织修复过程。本研究采用免疫组化方法观察了TNF-α在扁平苔藓皮损中的表达,探讨其在扁平苔藓中的作用。     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度重组TNF-α（0、1、5、10、25、50、100 ng/ml）、姜黄素20 μmol/L对HaCaT细胞增殖的影响。蛋白印迹实验检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞PCNA、 Notch-1 的蛋白表达。使用Annexin-V/PI试剂盒在流式细胞仪上检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞早期凋亡情况。结果 TNF-α呈浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖基本达到最大,20 μmol/L姜黄素有效抑制25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞无明显促凋亡作用,而20 μmol/L姜黄素有效促进HaCaT细胞发生凋亡,并可激发25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的凋亡诱导作用。 结论 姜黄素可激发TNF-α对HaCaT细胞的促凋亡作用,同时抑制TNF-α对HaCaT细胞促增殖作用。     

天然抗角蛋白自身抗体识别的角蛋白模拟表位的研究

目的 探索利用天然抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)淘筛噬菌体递呈的随机肽库,获得在体内具有功能活性的角蛋白模拟表位方法。方法 用角蛋白亲和层析柱从正常人混合血清中分离并纯化AK auto Ab,然后进行生物素标记;用生物素化的AK auto Ab对噬菌体递呈的随机15肽库进行3轮淘洗并进行ELISA检测;挑取23个阳性克隆进行DNA测序,分析所获数据并进行竞争实验。结果 DNA测序分析表明,AK auto Ab特异识别3个抗原表位区:SLSPMPTTNRR、PPLIPIPLRTM和TTPRPPMRIMLPRIT,其中SLSPMPTTNRR可能含有优势表位;携有这些短肽的噬菌体可与AK auto Ab特异结合,角蛋白可阻断这种特异的结合反应。结论 利用噬菌体随机肽库技术成功地获得了AK auto Ab所识别的角蛋白模拟表位。     

银屑病患者白介素6和肿瘤坏死因子α的测定

用生物活性测定法对４９例寻常型银屑病患者和２０例正常人外周血单一核细胞（ＰＢＭＣ）体外产生白介素６（ＩＬ６）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的能力及其血清水平进行了测定，并对其相关性进行了分析。结果：患者ＰＢＭＣ产生ＩＬ６、ＴＮＦα的能力及其血清水平均高于正常人；ＰＢＭＣ产生ＩＬ６、ＴＮＦα的能力与其血清水平呈正相关；血清ＩＬ６与ＴＮＦα水平呈正相关。提示：患者的细胞免疫功能存在失调；血清ＩＬ６、ＴＮＦα水平升高可能与ＰＢＭＣ产生ＩＬ６、ＴＮＦα能力增强有关；ＩＬ６、ＴＮＦα在银屑病发病中可能存在协同作用。     

M13-IN5重组噬菌体的构建与鉴定及其对沙眼衣原体的作用研究

目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用。方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体。利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性。利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位（PFU）/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组（未感染衣原体的Hela细胞）。Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达。在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011 PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组。感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体。两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验。结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pIII融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05 × 1011 PFU/ml。CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63 ± 0.01、3.55 ± 0.02、3.70 ± 0.01,组间差异无统计学意义（F = 12.0,P > 0.05）。共聚焦显微镜定位显示,噬菌体荧光与衣原体包涵体荧光存在重叠;衣原体感染后36、72 h,M13-IN5噬菌体组和M13噬菌体组包涵体数目较对照组减少（均P < 0.05）,且M13-IN5噬菌体组包涵体数目较M13噬菌体组有明显降低（P < 0.05）;衣原体感染后48、60 h,M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组与对照组包涵体数目差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 构建的M13-IN5重组噬菌体具有生物学活性,且能够成功表达IN5环蛋白;体外实验中,该噬菌体能进入衣原体包涵体内,且能明显抑制沙眼衣原体感染。     

肿瘤坏死因子抑制剂治疗银屑病临床安全性评价

近年来肿瘤坏死因子抑制剂被逐渐应用于治疗银屑病,虽然临床上取得了较好的疗效,然而也观察到了各种不良反应。这些肿瘤坏死因子抑制剂的不良反应包括注射(部位)反应、感染、肿瘤、自身免疫和脱髓鞘性病。注射(部位)反应最容易控制,极少因此终止治疗;用药前进行筛查、密切监视和随访,可以有效减少和防止感染的发生;尚需要进一步的研究来评价使用肿瘤坏死因子抑制剂是否增加发生肿瘤的危险性,脱髓鞘性病和肿瘤坏死因子抑制剂的关系还不清楚。运用肿瘤坏死因子抑制剂治疗银屑病耐受性较好,显示出良好的疗效/风险评估价值。     

系统性红斑狼疮患者B淋巴细胞刺激因子及其受体BAFF-R的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体BAFF—R（属于肿瘤坏死因子家族的B细胞活化因子受体）的表达情况。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及免疫印迹法（westem blot）分别检测28例SLE活动期患者及24例SLE稳定期患者PBMC中BLyS与BAFF—RmRNA及蛋白的表达水平，并以21例健康志愿者作对照；同时将两者mRNA及蛋白的表达水平与SLE疾病活动程度进行相关分析。结果 SLE活动期、稳定期患者PBMC中BLyS与BAFF—R mRNA及蛋白的表达水平均明显高于正常人（P〈0．01），活动期患者的表达高于稳定期患者（P〈0．01）；BLyS mRNA及蛋白的表达与狼疮活动指数（SLEDAI）呈显著正相关（P〈0．01），BAFF—R mRNA及蛋白的表达与SLEDAI无明显相关性（P〉0．05）。结论 BLyS及其受体BAFF—R可能参与了SLE的发病机制。     

大疱性类天疱疮患者噬菌体抗体库的构建及抗BP180-NC16A抗体筛选

目的构建噬菌体抗体库并筛选抗BP180-NC16A抗体。方法以大疱性类天疱疮(BP)患者外周血淋巴细胞为基因来源,扩增多样性的轻链和重链Fd段基因,构建Fab段表面展示的噬菌体抗体库,用BP180分子的NC16A片段为抗原对抗体库进行筛选并对筛选得到的抗体用ELISA,W estern b lot和免疫荧光等方法进行鉴定。结果经过轻、重链基因的重组和转化,获得了库容为5×107的噬菌体抗体库。以BP180-NC16A抗原进行"亲和吸附—洗脱—扩增"淘筛,获得2株特异性抗体。结论利用噬菌体抗体库技术成功制备了抗BP180抗体,为深入研究BP自身抗体、探讨新的治疗策略奠定了基础。     

白癜风患者血清白介素、肿瘤坏死因子α及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子检测

目的 探讨白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等在白癜风患者血清中的变化。方法 采用放射免疫分析法测定50例白癜风患者血清细胞因子水平,并用20例正常人作对照。结果 局限性、泛发性白癜风患者血清IL-6、GM-CSF水平及泛发性患者血清IL-1β水平均显著高于对照组。节段型患者血清细胞因子水平与对照组比较差异无显著性。局限性、泛发性患者血清GM-CSF水平及泛发性患者血清IL-6水平进展期显著高于稳定期。结论 IL-6和GM-CSF在非节段型白癜风自身免疫机制中可能起一定作用。     

肿瘤坏死因子拮抗剂治疗重症三氯乙烯药疹样皮炎

【摘要】 目的 观察肿瘤坏死因子拮抗剂在重症三氯乙烯药疹样皮炎治疗中的作用。 方法 5例以皮疹、发热、浅表淋巴结肿大和肝、肾损害为主要表现的重症三氯乙烯药疹样皮炎患者,在判断无肿瘤、结核及重症感染后,3例采用肿瘤坏死因子拮抗剂25 mg皮下注射,每周2次,联合糖皮质激素治疗;2例单独使用肿瘤坏死因子拮抗剂治疗。 结果 肿瘤坏死因子拮抗剂联合糖皮质激素治疗的3例患者体温在1周内降至正常,住院期间未发生感染、急性肝功能衰竭等,出院时皮疹消退,口腔、外阴等黏膜恢复正常,肝肾功能正常,平均住院时间36 d。单独使用肿瘤坏死因子拮抗剂的2例患者均治愈,临床疗效与联合糖皮质激素治疗的患者无明显差别,治疗后28周测得血清肿瘤坏死因子α水平降至正常。 结论 在重症三氯乙烯药疹样皮炎的治疗过程中尽早、足量使用肿瘤坏死因子拮抗剂有益于快速控制病情。     

天疱疮患者血清细胞因子的检测及其与病情的相关性

目的 研究天疱疮患者血清细胞因子的动态变化及其与病情严重程度的相关性.方法 用双抗体夹心ELISA方法检测31例急性发病期和治疗后缓解的天疱疮患者以及15例正常人对照血清白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性IL-2受体(sIL-2R)水平,并以间接免疫荧光法检测患者血清抗体滴度,同时用烧伤面积九分法记录皮损面积.结果 天疱疮患者急性发病期IL-10水平低于正常人(P<0.05),且与皮损面积呈负相关(r=-0.25,P<0.05);sIL-2R和IFN-γ水平高于正常人(P<0.05),且与皮损面积呈正相关(分别为r=0.60,P<0.05;r=0.41,P<0.05);天疱疮抗体滴度与皮损面积无相关性(P>0.05).结论 天疱疮发病中存在细胞因子的异常,IL-10、sIL-2R和IFN-γ水平与病情严重程度有明显的相关性,其水平的检测可用于监控疾病的严重程度并指导临床治疗.     

尼莫地平加依达拉奉治疗高血压脑出血的临床分析

目的初步探讨尼莫地平加依达拉奉在急性脑出血治疗中的临床疗效。方法50例急性脑出血患者随机分为常规治疗组（对照组）和尼莫地平加依达拉奉治疗方案的药物组进行治疗,并于入院后第7、14、21d分别进行血肿体积、水肿容积测量和临床神经功能缺损程度评分（NDS）,以及肿瘤坏死因子-α（TNF—α）和神经元特异性烯醇酶（NSE）比较。结果入院后第14、21d药物组血肿体积、水肿容积、TNF—α和NSE浓度明显低于常规治疗组（均P〈0．05）;入院后第21d药物组NDS评分显著低于对照组（P〈0．05）。随着病程的延长2组TNF-α和NSE在血浆中含量逐渐下降,与脑水肿的严重程度密切相关。结论尼莫地平加依达拉奉治疗方案是一种治疗急性脑出血有效、安全的方法;血浆中TNF-α和NSE浓度测定可能作为脑出血疗效评估的客观指标。