1型糖尿病患者外周血调节性T细胞及CD4+效应性T细胞相关细胞因子的表达

目的 分析1型糖尿病调节性T细胞及CD4+效应性T细胞数和相关细胞因子IL-2、IL-10、IL-17和IFN-gamma mRNA的表达.方法 1型糖尿病患者45例、2型糖尿病患者(年龄≤45岁,病程≤5年,BMI≤30 kg/m2)37例、正常人35例.收集受试者临床资料和外周血样本.用流式细胞分析法检测Treg和CD4+ Teff细胞数,Real-time PCR法检测IL-2、IL-10、IL-17和IFN-gamma mRNA表达.结果 T1DM组Treg细胞/CD3+ CD4+细胞比例与IFN-gamma相对表达量呈负相关(rs=-0.678,P=0.001);Treg细胞/CD3+ CD4+细胞比例与IL-10表达量呈正相关(rs=0.773,P＜0.001).结论 T1DM中保护性因素和破坏性因素平衡打破,以IL-10和IFN-gamma失衡为重要表现.     

儿童1型糖尿病外周血Foxp3+调节T细胞和细胞因子变化及相关分析

目的 探讨初发儿童1型糖尿病(T1DM)外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+ Treg)及相关细胞因子的表达水平与自身抗体和胰岛细胞功能的关系.方法 45例儿童T1DM(T1DM组)患儿根据有无并发酮症酸中毒(DKA)和是否出现自身抗体分为DKA组、非DKA组、自身抗体阳性组、自身抗体阴性组,30例正常健康儿童作为对照组.采用流式细胞术检测外周血Foxp3+ Treg百分率,ELISA法检测血清IL-18、IL-10的表达水平,免疫印迹法(IB)检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素瘤相关蛋白2自身抗体(IA-2A)和胰岛素自身抗体(IAA);电化学发光法(ECLIA)检测血清空腹C肽(FC-P)水平.结果 T1DM组外周血Foxp3+ Treg百分率、血清IL-10水平和FCP含量明显低于正常对照组(P＜0.01),而血清IL-18水平则显著高于正常对照组(P＜0.01);DKA组、自身抗体阳性组外周血Foxp3+ Treg百分率和FCP含量明显低于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),血清IL-18水平则显著高于非DKA组和自身抗体阴性组(P＜0.01),IL-10在T1 DM各组间差异无统计学意义.T1DM组患者GADA、IA-2A和IAA的检出率明显高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,Foxp3+Treg百分率与IL-10、FC-P水平呈正相关,而与IL-18水平及自身抗体呈负相关;IL-18与自身抗体呈正相关,而与IL-10、FC-P呈负相关;IL-10水平与FC-P含量及胰岛自身抗体无明显相关性.结论 初发儿童1型糖尿病外周血Foxp3+ Treg百分率减低及相关细胞因子的表达水平失衡可能参与了儿童T1DM的发生和发展,并与自身抗体和胰岛细胞功能相关.     

胰岛β细胞凋亡与1型糖尿病

1型糖尿病是以胰岛β细胞破坏为特征的一种自身免疫性疾病,1型糖尿病的发生、发展与胰岛β细胞凋亡密切相关.并进一步对β细胞凋亡的调控因素及可能的作用途径进行了了解.了解凋亡的作用和在I型糖尿病发病机制中的调节机制,可提供防治这种疾病的新思路.     

抗氧化微量营养素对1型糖尿病大鼠Th2型细胞因子IL-4、IL-10表达的影响

目的:研究抗氧化微量营养素(antioxidantmicronutrients,AM)对1型糖尿病大鼠Th2型细胞因子IL4、IL10基因表达的影响,以探索改善胰岛功能,防止糖尿病发生与发展的营养学因素。方法:应用链脲佐菌素(STZ)小剂量、多次注射法诱导大鼠1型糖尿病模型。AMSe、VE、V、Cr通过饮食方法补充。外周血、脾脏淋巴细胞IL4、IL10基因表达检测应用流式细胞术。血糖及自由基代谢通过生化分析法完成。结果:补充AM组大鼠外周血及脾组织IL4、IL10阳性淋巴细胞百分比明显高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),其中Se+VE+V+Cr组升高更明显;糖尿病模型组IL4、IL10表达处于最低水平。补充AM各组较模型组明显增加了胰岛素分泌储备(P<0.05)。与模型组相比,AM补充各组血糖水平显著降低,GSHPx活力水平升高,MDA含量明显下降(P<0.05)。结论:AM最适剂量与组合不仅可以调节糖尿病大鼠胰岛素代谢、减轻氧化侵袭,而且通过上调IL4、IL10等Th2型细胞因子表达减轻胰岛损害。     

小檗碱对非肥胖性糖尿病小鼠1型糖尿病的预防作用

目的探讨小檗碱对非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病的影响及其可能的分子机制。方法40只4周龄NOD雌性小鼠随机分为小檗碱干预组(Ber,20只)和生理盐水对照组(NS,20),监测血糖,记录糖尿病发病率,40周后处死小鼠,分别应用Western blot方法与real time PCR方法检测两组小鼠胰腺内Fas、iNOS、bcl-2、SOD蛋白与mRNA的表达水平。结果小檗碱干预组NOD小鼠1型糖尿病发生率较对照组明显降低(4/20,20%;18/20,90%),平均发病时间也明显延缓。与对照组相比,小檗碱干预组NOD小鼠胰腺组织Fas、iNOS的蛋白与mRNA表达水平明显下调,Bcl-2、SOD的蛋白与mRNA表达水平明显上调,P0.05。结论小檗碱预防NOD鼠糖尿病的发生可能与上调胰腺组织Fas、iNOS的蛋白表达,下调Bcl-2、SOD的蛋白表达相关。     

Th1、Th2T细胞及其细胞因子在自身免疫性糖尿病中的作用

Ⅰ型糖尿病是T细胞介导的自身免疫性疾病,Th细胞亚群在疾病的发生过程中起了一定的作用。其中致病性免疫过程是由T细胞亚群Th1介导的,而TH2细胞亚群则是介导保护性免疫反应的。Th1型细胞因子(IL-2.IFN)通过直接促进细胞凋亡和/或上调选择性粘附分子的表达,以及Th1细胞因子可促进自身反应性T细胞在胰腺的浸润,二者均导致β细胞的破坏;Th1细胞介导的针对谷氨酸脱羧酶(GAD)的自身免疫反应增强,并通过分子内和分子间传导的机制转导至其他β细胞。Th1和Th2亚群实质上是机体在特异性抗原刺激下,Th细胞发生相对优势转化的结果。Th细胞的优势转化具有可塑性,对Th1或Th2型细胞因子或抗细胞因子单抗的研究,将为临床上自身免疫性糖尿病的治疗开辟新的途径。     

细胞因子及细胞凋亡与糖尿病性腺轴损伤关系探讨

众所周知 ,生殖功能障碍是糖尿病的一项重要临床表现。近年来 ,细胞因子及细胞凋亡在其发病机制中的重要作用已成为研究热点 ,本文将对与其密切相关的细胞因子、细胞凋亡基因的产生、定位、表达及其作用做一综述     

细胞凋亡在自身免疫发病机制中的作用

细胞凋亡是正常Ｔ细胞和Ｂ细胞分化和稳定的重要机制，近年来，越来越多的研究表明细胞凋亡在自身免疫病的发病机制中起重要作用。Ｆａｓ／ＦａｓＬ途径介导的细胞凋亡的抑制是产生自身反应性Ｔ细胞和自身抗体的主要原因。ＤＮＡ低甲基化也会抑制细胞凋亡，导致自身反应性Ｂ细胞的增殖。细胞凋亡的抑制能引起细胞因子的异常分泌，异常的细胞因子谱反过来抑制细胞凋亡，使得Ｂ细胞和Ｔ细胞等免疫细胞自我耐受发生破坏和自身抗体大量产生，对机体形成损伤。本文试就近年来这一方面的研究进展作一综述。     

胰岛β细胞凋亡与Ⅰ型糖尿病

1型糖尿病是以胰岛β细胞破坏为特征的一种自身免疫性疾病,1型糖尿病的发生、发展与胰岛β细胞凋亡密切相关.并进一步对β细胞凋亡的调控因素及可能的作用途径进行了了解.了解凋亡的作用和在I型糖尿病发病机制中的调节机制,可提供防治这种疾病的新思路.     

耐受性树突状细胞过继转移建立1型糖尿病小鼠感染性免疫耐受

目的探讨耐受性树突状细胞(DC)过继转移,在T1DM模型小鼠体内建立感染性免疫耐受的方法和机制。方法在链脲佐菌素(STZ)所致1型糖尿病模型(type 1 diabetes mellitus,T1DM)内采用胰岛素与IFA混合乳剂皮下注射的方式诱导免疫耐受。体外分离和纯化耐受性树突状细胞。另取BALB/c小鼠,通过体内腹腔注射STZ,尾静脉注射T1DM发病小鼠脾脏T淋巴细胞(DTL),诱导T1DM。同时将不同来源DC经腹腔注射入模型小鼠体内。每周测定血糖,第4周时处死动物,取胰腺进行病理组织学检查。MTF法测定小鼠脾淋巴细胞增殖反应,采用流式细胞术检测CIM~ CD25~ 调节性T细胞。结果采用2次小剂量STZ加DTL联合注射的方式可在小鼠体内建立以胰腺β细胞炎性破坏为主要病理特征的T1DM。通过过继转移免疫耐受性DC,可明显降低糖尿病高血糖以及小鼠脾淋巴细胞增殖能力,与模型对照组差异有统计学意义(P<0.01);组织病理检查发现胰岛内炎症细胞浸润减少,组织结构完整;FACS显示CD4~ CD25~ T细胞亚群比例显著升高。结论过继转移耐受性DC可以在次一级T1DM模型内诱导感染性免疫耐受并防止T1DM的发生,其机制与促进体内CD4~ CD25~ T细胞亚群产生相关。     

2型登革病毒诱导ED25细胞凋亡及死亡受体的表达变化

目的： 观察2型登革病毒（dengue virus type 2，DV2）感染ED25（人肝静脉内皮细胞）诱导细胞凋亡及胞膜死亡受体TRAILR、TNFR、Fas表达水平的改变，并探讨其意义。方法: 用 DV2感染ED25细胞，流式细胞技术检测ED25细胞感染前、后凋亡变化及胞膜死亡受体TRAILR1-4、TNFR1-2、Fas的表达。结果: 病毒感染后ED25细胞凋亡增加，感染前细胞凋亡数约5.7%±1.2%，而感染后细胞凋亡数约27.3%±1.6%，P<0.05；病毒感染后细胞Fas表达百分比增加，感染前为44.3%±2.2%,而感染后为63.0%±2.3%，P<0.05;而TRAILR1-4、TNFR1-2表达水平甚低，感染前后无明显改变。结论: 2型登革病毒感染可以诱导肝静脉内皮细胞ED25细胞凋亡，其中死亡受体Fas表达增高，提示DV2可能通过调节Fas/FasL的表达诱导细胞凋亡，有利于进一步研究登革病毒感染引起肝脏器官损伤。     

1型糖尿病小鼠体内树突状细胞亚群变化的初步研究北大核心CSCD

目的探讨1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus, T1DM）发病过程中外周免疫器官DC亚群的改变。方法以尾静脉注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方式制备糖尿病小鼠模型。在STZ处理后的不同时间,检测小鼠体重变化和血糖水平;制备脾脏和淋巴结单细胞,通过流式细胞术检测DC亚群、中性粒细胞、单核细胞、CD4＋Foxp3＋调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）的比例。结果STZ处理可导致小鼠体重减轻、血糖升高。在STZ处理后10 d,T1DM小鼠脾脏和淋巴结中DC各亚群、中性粒细胞和单核细胞的比例均未发生显著改变;STZ处理后30 d和60 d,T1DM小鼠脾脏体积明显减少,DC各亚群的比例较正常小鼠降低,中性粒细胞和单核细胞的比例则上调;而在淋巴结中,DC各亚群、中性粒细胞和单核细胞的比例较正常对照均显著下调。同时,与正常对照相比,淋巴结中的CD4＋Foxp3＋Treg比例明显上调,但在脾脏中无明显变化。结论在STZ诱导的小鼠糖尿病模型中,DC亚群及其他炎症细胞在脾脏和淋巴结中发生明显改变,反映了T细胞的变化,提示DC亚群在T1DM发病中起重要作用。     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。     

睾丸局部感染时Leydig细胞IL-1、IL-6、TGF-β和Fas、FasL转录水平的变化

目的：研究Leydig细胞在抗感染中的免疫调节作用。方法：以溶脲脲原体（UU）直接注入大鼠膀胱拟上行性感染的途径，制备大鼠睾丸感染的动物模型，分别在UU感染的1周、2周、3周处死大鼠，分离取得睾丸组织，观察组织的病理变化，并分离获得高纯度的Leydig细胞，抽提总RNA，用RT-PCR方法比较UU感染组与正常对照组之间IL-1、IL-6、TGF-β和Fas、FasL mRNA表达的差异。结果：与正常对照组相比，UU感染的大鼠睾丸组织发生明显的病理改变，IL-1、IL-6、TGF-β均升高，Fas表达下降、FasL表达升高。结论：大鼠Leydig细胞在抗感染免疫中，可通过改变IL-1、IL-6、TGF-β和Fas、FasL转录表达格局来发挥抗UU的免疫调节作用。     

三种TNF家族细胞因子对I型糖尿病相关胰岛β细胞株CM的作用

目的：研究三种TNF细胞因子家族成员TRAIL、FasL、LIGHT对糖尿病相关胰岛β细胞株CM的作用。方法：利用Annexin V-FTTC法及流式细胞仪技术分析CM对3种能引起Apoptosis的TNF家族成员RTAIL、FasL、LIGHT的敏感性。结果：CM对TRAIL极为敏感，用5ng/ml TRAIL与CM细胞孵育4h就能引起CM细胞产生明显的凋亡，而对FasL、LIGHT不敏感。结论：CM对RTAIL十分敏感，TRAIL有可能在I型糖尿病致病中起作用，是否起到关键作用，有待进一步研究。     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

2型糖尿病患者尿TGF-β1、Ⅳ-C排泄率变化与糖尿病肾病关系的探讨

目的:探讨2型糖尿病(DM)患者尿TGF-β1、Ⅳ胶原(Ⅳ-C)含量的变化及其临床意义.方法:61例2型DM患者根据尿白蛋白排泄率(UAER)分为正常白蛋白尿组(Ⅰ)、微量白蛋白尿组(Ⅱ)和大量白蛋白尿组(Ⅲ),分别检测各组患者尿TGF-β1和Ⅳ-C的含量,并与30例正常对照组((NC)进行比较.结果:糖尿病各组患者尿TGF-β1和Ⅳ-C含量显著高于正常对照组(p＜0.05),且随着UAER增加其水平亦呈逐年递增趋势,组间比较差异显著(p＜0.01).相关分析表明,尿TGF-β1与尿Ⅳ-C、UAER及尿α1-m之间呈显著正相关(p＜0.01).结论:TGF-β1和Ⅳ-C在糖尿病肾病(DN)的发生发展中起着重要作用.测定DM患者尿TGF-β1和Ⅳ-C的含量,不仅可作为诊断DN早期肾损害较敏感的指标,还将有助于监测、判断DN的病程进展.     

细胞因子对肾癌细胞株786-0、GRC-1 Fas、FasL表达的调节及其意义

目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其FasL功能。结果 :1 IFNγ、IFNα均能显著上调 786 0、GRC 1细胞的Fas表达 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,并促进FasAb诱导的凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。 2 TNFα、IFNα能分别上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达。IFNγ能显著上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达(P<0 0 1,P <0 0 1) ,并促进JurkatT细胞凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :IFNγ、IFNα可增强肾癌细胞株的Fas表达 ,并促进FasAb介导的凋亡。但其亦能上调肾癌细胞FasL表达并增强其对淋巴细胞的攻击作用。     

TH1型／TH2型细胞因子与妊娠的免疫调节

妊娠时期母体通过复杂细胞的因子网络对妊娠各个生理过程，包括着床，胚胎生长发育以及分娩进行免疫调节，大量临床与实践研究表明，母全在妊娠时，ＴＨ２型细胞因子参与的体液免疫起主要作用，而由ＴＨ１型细胞因子参与细胞免疫则受抑制。近年来，许多学者就ＴＨ１型／ＴＨ２型细胞因子对妊娠的作用与机制做了大量的研究，并推测ＴＨ１细胞因子不利于妊娠，ＴＨ２型细胞因子抑制ＴＨ１型细胞因子的产生，利于妊娠。     

实验性消化道溃疡i—IEL的TH1型细胞因子mRNA水平变化

肠上皮间淋巴细胞 (ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｙｍ ｐｈｏｃｙｔｅｓ ,ｉ ＩＥＬ)是存在于肠上皮细胞间的一种特殊Ｔ淋巴细胞 ,小鼠约一半以上的ｉ ＩＥＬ在消化道粘膜局部分化成熟 ,为ＴＣＲγδＣＤ8αα表型 ,与经胸腺分化成熟的普通Ｔ细胞在细胞表型和抗原识别等方面有明显不同。在生理条件下 ,ｉ ＩＥＬ可分泌ＴＨ1型细胞因子并具有细胞毒作用 ,在维护消化道粘膜的完整性中可能发挥重要作用。为阐明ｉ ＩＥＬ在消化道溃疡发生、发展中的作用 ,本文研究了水浸限制刺激诱发的消化道溃疡模型中 ,小鼠ｉ ＩＥ…