安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c-Jun激活区结合蛋白1(JAB1)蛋白表达变化,探讨安定-氯胺酮对其表达变化的影响.方法 将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组,即对照组、严重烧伤组、安定-氯胺酮组和严重烧伤后安定-氯胺酮处理组,以20%～30%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型,肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg给予麻醉.收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白,运用Western blotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化.结果 在严重烧伤后30min,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低(P<0.05),于6h时达到最低(P<0.01),严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平.然而,严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义.结论 严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调.     

安定-氯胺酮麻醉对严重烧伤小鼠肺组织糖皮质激素受体表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠肺组织糖皮质激素受体(GR)表达的变化,并探讨安定-氯胺酮麻醉对其表达变化的影响.方法 70只成年健康昆明小鼠,随机分为健康对照组、烧伤组、烧伤后麻醉组,20%～30%体表总面积Ⅲ度烧伤作为烧伤模型,烧伤后麻醉组在小鼠严重烧伤后立即肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg进行麻醉.应用Western blot技术检测各组小鼠肺组织GR蛋白表达水平.结果 在严重烧伤后30min,小鼠肺组织中GR蛋白表达水平就已经开始降低,12h后逐渐恢复至正常水平.而烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠肺组织GR蛋白表达水平均无明显变化.结论 严重烧伤可引起小鼠肺组织GR表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制GR表达水平下调,结果提示安定-氯胺酮麻醉可能部分改善严重烧伤诱发的应激状态,这可能与抑制GR表达水平下调有关.     

烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的变化及安定-氯胺酮的影响

目的　研究烧伤小鼠 2 4h内肝组织糖皮质激素受体 (GR)时相变化特点 ,初步探讨安定 氯胺酮麻醉对创伤应激的调控作用。方法　将 80只BALB/C小鼠随机分为正常对照组、麻醉对照组、烧伤组、预处理组 (麻醉后 15min烧伤 )及后处理组 (烧伤后 15min麻醉 )。烧伤组给予背部Ⅲ°15 %～ 2 0 %烧伤 ,伤后 2 ,4,6 ,12 ,2 4h取血和肝脏 ;麻醉对照组、预处理组及后处理组均采用安定 氯胺酮麻醉 ,烧伤或麻醉后 4h取血和肝脏。测定血清皮质酮浓度 ,采用Westernblot在蛋白水平测定肝组织GR。结果　烧伤后小鼠血清皮质酮浓度明显升高 ,4h达到高峰 ;肝组织GR明显降低 ,6h降至最低。安定 氯胺酮麻醉明显抑制烧伤应激引起的血清皮质酮和肝组织GR的变化 ,甚至烧伤后麻醉 ,也有同样的作用。结论　烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高 ,其受体在蛋白水平显著降低。安定 氯胺酮麻醉对其具有抑制作用。     

安定-氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期三种炎性细胞因子影响

目的研究安定-氯胺酮麻醉对烧伤小鼠早期炎性细胞因子的影响,初步探讨其对创伤应激早期炎症反应的调节作用.方法雄性BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、烧伤对照组、麻醉对照组、预处理组(麻醉后15 min烧伤)及后处理组(烧伤后15 min麻醉).麻醉采用安定-氯胺酮麻醉,背部15%～20% Ⅲ度烧伤.烧伤后4 h测定血清TNF-α、IL-1β、IL-10浓度.结果烧伤后血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平均比正常对照组显著增高;预处理组与后处理组血清TNF-α、IL-1β、IL-10的浓度明显低于烧伤对照组;预处理组除IL-10明显高于正常对照组以外,其余均与正常对照组相差不明显,而后处理组只有TNF-α水平与正常对照组相差不显著,其余都显著高于正常对照组;血清中IL-1β后处理组明显高于预处理组,而TNF-α、IL-10的水平两组相差不显著.结论安定-氯胺酮麻醉对严重创伤后炎性细胞因子的表达和释放有一定抑制作用,甚至在严重创伤后使用也有部分作用.     

严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达变化的实验研究

目的 研究严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达及核转位的变化.方法 以SRC-3基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前、烧伤后1、6、12 h肝脏GR表达及核转位的变化,同时提取致伤前、致伤后1 h以及6 h血清标本,观察炎性细胞因子TNF-α及抗炎细胞因子IL-10的变化.结果 野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR 1 h即显著下降,6 h仍明显低于正常,12 h有所恢复.而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR无明显变化,野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏GR核转位均增加,但SRC-3基因敲除小鼠GR核转位增加更为显著;两组致伤后炎性细胞因子TNF-α均升高,但野生型小鼠升高更为显著,而实验组抗炎细胞因子IL-10的升幅大于对照组.结论 严重烧伤对野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠肝脏GR的影响具有明显的差异,SRC-3的缺失可能减轻了严重创伤早期对GR功能的抑制作用.     

小鼠严重颅脑撞击伤早期咪唑安定-氯胺酮对肝脏GR与海马NR1变化的影响

目的 研究小鼠闭合性严重颅脑损伤(TBI)后肝脏糖皮质激素受体(GR)、海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NR)蛋白功能亚单位1(NR1)蛋白水平变化及其与血清TNF-α、IL-1β变化的关系,以及应用咪唑安定-氯胺酮干预后的变化.方法 利用BIM-Ⅲ型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤后将其随机分为5组,即假致伤组(J组)、致伤对照组(N组)、致伤后氯胺酮治疗组(K组)、致伤后咪唑安定治疗组(M组)、致伤后复合用药治疗组(F组).于致伤后30 min及2、8、24、48、72 h采用Western blot免疫印迹法检测大脑皮质和肝脏GR蛋白水平变化,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血清中TNF-α、IL-1β含量.结果 肝脏GR蛋白表达在致伤2 h开始降低,8 h呈现恢复趋势,72 h仍未完全正常;海马NR1蛋白表达在致伤后2 h开始明显降低,24 h基本恢复,72 h明显增加;应用咪唑安定-氯胺酮干预后可明显降低GR、NR1蛋白表达的这种变化趋势;外周血中TNF-α、IL-1β含量致伤后明显升高,均具有两个峰值特征,应用咪唑安定-氯胺酮干预后可明显降低二者的升高.结论 严重TBI后存在糖皮质激素抵抗,NR激活可能是其中一个重要原因.咪唑安定、氯胺酮能明显抑制HPA轴的兴奋性,改善糖皮质激素抵抗,调控应激反应.其作用机制除直接抑制炎性细胞因子释放外,还可能有中枢性的作用机制,其中之一可能与调节NR1蛋白表达有关.     

颈交感神经阻滞调节放烧复合伤小鼠巨噬细胞GR的表达及细胞因子分泌的影响

目的 探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic ganglia block, SB)在放烧复合伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用.方法 TBSA 15%Ⅲ度烧伤合并5 Gy放射损伤小鼠分为单纯放烧复合伤组、放烧复合伤后单侧颈部SB治疗组、放烧复合伤后双侧颈部SB治疗组,另设正常对照组,每组8只,比较各组巨噬细胞GR水平及巨噬细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的差异.结果 单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞GR蛋白水平均显著高于放烧复合伤组(P＜0.01),单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的作用均显著低于放烧复合伤组(P＜0.05).放烧复合伤后颈部单侧SB组与双侧SB组间巨噬细胞GR蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达释放无明显差异(P＞0.05).结论 单侧或双侧颈部SB均可改善放烧复合伤巨噬细胞GR功能,抑制其过度分泌炎性细胞因子.     

颈交感神经阻滞对小鼠烧伤早期肝组织核因子-κB及其辅活化子的影响

目的 观察颈交感神经阻滞(sympathetic block, SB)对烧伤小鼠早期炎症介质核因子-κB(NF-κB)及其辅活化子的影响,初步探讨SB在严重创伤中治疗作用的分子机制.方法 将雄性昆明小鼠分为正常对照组、烧伤对照组、LSB组(烧伤后使用利多卡因进行SB治疗)、RSB组(烧伤后使用罗哌卡因进行SB治疗),每组5只.烧伤为TBSA 15%～20%Ⅲ度.烧伤后6 h采用Western blotting测定肝组织NF-κB P65、类固醇受体辅活化子-3(SRC-3)的蛋白表达及核转位.结果 烧伤对照组肝组织NF-κB P65、SRC-3蛋白表达水平及核转位显著增加;与烧伤对照组相比,LSB组NF-κB P65蛋白表达无显著变化,SRC-3蛋白表达及NF-κB P65、SRC-3核转位显著下调;RSB组NF-κB P65、SRC-3蛋白表达及核转位均显著低于烧伤对照组,且比LSB组下调更明显.结论 烧伤早期(6 h)NF-κB及其辅活化子SRC-3蛋白表达水平及核转位显著上调,SB在严重创伤中的治疗作用可能是通过抑制NF-κB功能活性,降低炎症反应程度而实现的.     

安定-氯胺酮对烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的影响

目的：研究安定－氯胺酮复合麻醉对伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的影响，初步探讨其对创伤应激的调节作用。方法：雄性BALB／c小鼠，随机分为正常对照组、烧伤对照组、麻醉对照组、预处理组及后处理组。麻醉采用安定－氯胺酮复合麻醉，背部15％－20％Ⅲ度烧伤。烧伤后4h测定血清皮质酮浓度，用Western blotting在蛋白质水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果：烧伤对照组血清皮质酮浓度明显升高，肝组织糖皮质激素受体明显降低。预处理组与后处理组血清皮质酮浓度均低于烧伤对照组，肝组织糖皮质激素受体与正常对照组相差不明显，预处理组与后处理组相关不显著。结论：烧伤应激引起小鼠血清皮质酮明显升高，其受体在蛋白质水平明显降低。安定－氯胺酮复合麻醉对其具有一定的调节作用。     

氯胺酮对烧伤早期小鼠肝应激相关蛋白IFIT1和JAB1表达的影响

目的:观察小鼠应激相关蛋白IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)和JAB1(c-Jun activation domain-binding protein1)在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响,初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制.方法:将15只健康C57/129小鼠随机分为3组(n=5),正常对照组、烧伤组、烧伤+氯胺酮组.采用TBSA 15-20%Ⅲ度小鼠烧伤模型;氯胺酮10 mg/ks,肌肉注射,烧伤15 min给予.分别于烧伤后4 h脱臼处死,取肝.采用免疫印迹法(Westem blot)观察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况.取正常对照组肝组织作病理切片,行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位.结果:烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高(P<0.01).烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低(P<0.01):氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低(P<0.01),氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低(P<0.05)、较烧伤组显著升高(P<0.05).免疫组织化学方法显示,IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性,JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性.结论:烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JAB1表达降低.氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达,增高JAB1表达;氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症(Systemic inflamma-tory response syndrome SIRS)中发挥作用.     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.     

NMDA受体对烫伤应激大鼠海马糖皮质激素受体基因表达的影响

目的：观察烫伤应激后海马糖皮质激素受体（GR）基因表达的变化，探讨N－甲基－D－天冬氨酸（N－methyl-D-aspartate,NMDA）受体在这种变化中的作用。方法：利用RT－PCR技术，检测烫伤前腹腔注射NMDA受体拮抗剂MK－801及激动剂NMDA对烫伤应激后2h GR mRNA水平的影响。结果：烫伤应激后2h海马GR mRNA水平明显降低（P＜0．01）；应激前腹腔注射MK－801使烫伤后降低的GR mRNA水平明显恢复（P＜0．01），注射NMDA使其进一步降低（P＜0．05），注射生理盐水无明显变化。结论：NMDA受体介导了烫伤应激导致的海马GR转录水平基因表达的下降。     

糖皮质激素受体在缺血再灌注肾损伤中的作用

目的 探究糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)在缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)诱导的小鼠肾损伤过程中的变化及作用。方法 使用微血管夹夹闭小鼠左侧肾蒂45 min诱导小鼠缺血再灌注肾损伤模型,分别于第5、15、30和80天收集小鼠血液,通过试剂盒检测血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和血肌酐(serum creatinine, Scr)的浓度。采用过碘酸希夫染色法(periodic acid-Schiff staining, PAS)和苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)观察肾组织炎性细胞浸润情况;通过免疫荧光(immunofluorescence, IF)法检测肾损伤分子-1(kidney injury molecular-1, Kim-1)、炎症细胞标志物F4/80和CD3的表达变化;通过实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、IF和蛋白质印迹技术(Western blotting, WB)检测GR的表达。选取8周龄雌性小鼠肾脏单侧IR后进行腹腔注射米非司酮(mifepristone, MF, 50 mg·kg^-1·d^-1),检测实验组和对照组的BUN和Scr浓度,IF检测Kim-1和F4/80的蛋白水平。结果 与未处理组相比,小鼠缺血再灌注肾损伤后,第5天小鼠血清BUN升高4.9倍,Scr升高8.3倍;RT-qPCR结果显示,IR组小鼠炎症分子的mRNA较未处理空白组升高3~5倍,GR的mRNA较空白组下降3.5倍。IF和WB结果显示,GR的蛋白质水平显著下调;IR处理的同时,注射MF阻断GR后,BUN和Scr较注射玉米油的对照组均增高,表明阻断GR会导致IR后肾功能损伤加重,IF结果显示Kim-1和F4/80表达明显升高,说明炎性反应增强,肾损伤加重。结论 GR的表达和IR诱导肾损伤存在显著的相关性,同时阻断GR会进一步加重IR诱导的肾损伤。     

病毒性面瘫小鼠脾脏糖皮质激素受体表达的研究

目的建立1型单纯疱疹病毒(HSV-1)致小鼠面瘫的模型,探讨糖皮质激素受体(GR)在面瘫小鼠脾脏中的表达。方法选择4周龄Balb/c雄性小鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组及实验组。实验组小鼠用搔刮法接种病毒于左耳耳郭后,对照组接种生理盐水。分别于面瘫后不同时间点取脾脏,采用real-time PCR、westernblot、免疫组织化学技术检测小鼠脾脏中糖皮质激素受体的表达变化规律。结果实验组GR mRNA及蛋白于面瘫后24 h达最低值,与生理盐水对照组及空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),之后逐渐升高,于3 d达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),之后又逐渐降低,7 d时与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学显示在实验组小鼠脾脏中可见GR阳性细胞。结论 GR在HSV-1致病毒性面瘫小鼠脾脏中的表达呈现先降低后增高,再恢复至对照水平的表达规律。提示小鼠病毒性面瘫后,脾脏中GR呈规律性的表达变化,可能在面瘫的发生发展过程中发挥一定的作用。     

颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响

目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。     

大鼠肺泡巨噬细胞Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1表达变化及其调节糖皮质激素受体功能的研究

目的：在模拟大鼠肺泡巨噬细胞炎症合并糖皮质激素治疗的条件下，阐明Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1（BAG-1）的表达变化及其对糖皮质激素受体（GR）功能的调节作用。方法：Western blot检测脂多糖（LPS）和地塞米松（Dex）作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1表达变化；免疫共沉淀法检测核蛋白中BAG-1与GR相互结合作用；相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果：LPS和Dex作用后，细胞总蛋白中BAG-1L表达增加，BAG-1S表达无变化；核蛋白中只能检测到BAG-1L，表达量在LPS作用24h内逐渐增加；细胞核内BAG-1L与GR在LPS和Dex作用后存在着相互结合，同时GR转录激活活性逐渐降低，其变化与核蛋白中BAG-1L表达变化呈负相关。结论：LPS和Dex作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1L表达增加，与GR结合后共同转核，并抑制GR活性。该机制可能是感染条件下糖皮质激素抵抗的重要因素。     

严重烧伤后胃黏膜细胞胞液中糖皮质激素受体与胃黏膜电位差的相关性研究

目的了解严重烧伤后胃黏膜细胞胞液中糖皮质激素受体变化与胃黏膜电位差之间的关系.方法观察了大鼠严重烧伤后不同时期胃黏膜细胞胞液糖皮质激素受体的动态变化及胃黏膜电位差变化情况.结果严重烧伤后3 h胃黏膜组织皮质醇含量明显升高,12 h达高峰,而胃黏膜细胞胞浆内糖皮质激素逐受体的最大结合容量(R0)显著下降,平衡解离常数(KD值)明显增大,伤后12,24h胃黏膜电位差亦显著下降.结论糖皮质激素受体水平降低是严重烧伤后急性胃黏膜屏障功能受损的重要原因之一.