斑蝥酸钠诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的观察斑蝥酸钠体外对人胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法应用MTT法及流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞的生长和凋亡的影响。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24 h均可使人胃癌BGC823细胞生长明显抑制(P<0.01),并出现典型的凋亡峰,细胞增殖阻滞于G1期。结论斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞生长有抑制作用,可诱导胃癌细胞凋亡。      

过表达PDCD5对人胃癌BGC823细胞增殖活性的影响

目的通过体外实验研究过表达程序性细胞死亡5(PDCD5)因子对人胃癌BGC823细胞增殖抑制和顺铂敏感性的影响,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗胃癌的可行性。方法采用MTT法检测顺铂对实验组(过表达PDCD5)、阴性对照组(转染空载体)和BGC823细胞组的增殖抑制作用,荧光观察吖啶橙染色的各组细胞形态学变化,流式细胞仪检测顺铂对咅组细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果顺铂对BGCS23细胞的生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,48 h顺铂抑制实验组、阴性对照组和BGC823细胞组的IC50分别为(14.25±1.68)、(20.85±2.01)和(22.03±1.85)μmol/L,实验组显著低于BGC823细胞组和阴性对照组(t=2.765,2.903;P0.05);16μmol/L顺铂作用实验组细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征,将细胞阻滞在G2/M期;实验组G2/M期细胞[(42.98±2.34)%]显著高于BGC823细胞组[(23.96±1.51)%]和阴性对照组[(2497±1.82)%],差异具有统计学意义(F=77.45d,P0.05);实验组G0/G1期细胞[(31.13±2.01)%]较BGC823细胞[(49.53±2.87)%]和阴性对照组[(47.58±1.86)%]显著下降(F=98.973,P0.05)。结论过表达PDCD5因子可以增强BGC823细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。     

抗癌活性肽对人肿瘤细胞株增殖的影响及其机理探讨

目的:探讨由山羊内脏提取制备的抗癌活性肽(Anti -cancer active peptide,ACBP)对人胃癌细胞株BGC - 823、MGC - 803、人鼻咽癌细胞株CNE增殖的影响及作用机理.方法:应用MTT法和流式细胞术观察不同剂量ACBP在不同时间对体外培养的BGC - 823、MGC - 803及CNE细胞增殖的影响,并对细胞周期及凋亡进行了检测.结果:MTT结果显示ACBP对BGC - 823、MGC - 803及CNE的增殖有抑制作用且呈现剂量依赖效应,在ACBP 20ug/mL时,对三种细胞株的抑制率分别达到38.3％、29.79％和42.02％ (P ＜0.01)).流式细胞术检测细胞周期结果显示,3种对照组细胞大部分处于G0/G1期和S期,培养24h后,S期细胞数开始减少,G0/G1期细胞数增加,48h和72h后呈现显著性变化(P＜0.01).流式细胞术检测细胞凋亡结果显示ACBP作用早期,凋亡细胞(AV+/PI -)增多,在48h和72h后更加明显.结论:ACBP对分化不同的胃癌细胞BGC - 823、MGC - 803及鼻咽癌CNE细胞的增殖有抑制作用,其作用机制可能为诱导细胞凋亡,抑制DNA合成.     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

莪术不同品种含药血清对人胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及核质比的影响

目的 探讨莪术3个不同品种蓬莪术、广莪术和温莪术含药血清对人胃癌细胞BGC823增殖、凋亡及核质比的影响,为临床治疗胃癌及中药抗肿瘤复方中莪术药材的品种选择提供实验依据.方法 体外培养人胃癌细胞BGC823,加入高、中、低剂量莪术不同品种含药血清,倒置相差显微镜下观察各组细胞形态.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞BGC823增殖抑制状况,流式细胞仪检测胃癌细胞BGC823凋亡,应用Image.pro.pius.5软件分析了各药物含药血清对胃癌细胞BGC823核质比的作用.结果 与阴性对照组比较,温莪术大小剂量、广莪术大中剂量及蓬莪术中剂量含药血清在加药后48 h都能抑制胃癌BGC823细胞增殖(P＜0.05),抑制率以温莪术大剂量最高(P＜0.01).温莪术对BGC823的凋亡抑制作用较高,与阴性对照组相比有显著性差异(P＜0.05);温莪术大剂量含药血清组对胃癌BGC823核质比的作用较大,细胞出现核固缩,核质比较阴性对照组明显变小.结论 蓬莪术、广莪术和温莪术含药血清均能明显抑制胃癌BGC823细胞增殖及凋亡,温莪术大剂量含药血清组对胃癌BGC823核质比的作用较大.莪术品种用于治疗胃癌时建议选用温莪术.     

白藜芦醇诱导胃癌BGC⁃823细胞凋亡的分子机制

目的：探究白藜芦醇对人胃癌细胞BGC823的作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测白藜芦醇对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术测定白藜芦醇对BGC823细胞凋亡、活性氧水平和线粒体膜电位的影响;Western blot法检测白藜芦醇对BGC823细胞cleaved caspase?3和cleaved caspase?9蛋白表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇对胃癌BGC823细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;31.25~500.00 μmol/L白藜芦醇作用24 h和48 h可诱导BGC823细胞凋亡,500 μmol/L作用24 h和48 h,细胞凋亡率分别达（40.42±2.64）%和（75.02±2.36）%。流式细胞术结果显示白藜芦醇作用24 h后可使BGC823细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）增多;与对照组相比,62.50~500.00 μmol/L白藜芦醇作用细胞24 h后,细胞出现了显著的线粒体膜电位降低（P < 0.05）;Western blot结果显示白藜芦醇以浓度依赖方式上调cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达。结论：白藜芦醇可以显著诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡与ROS增多、线粒体膜电位降低和调节cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达有关。     

白藜芦醇对胃腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇对胃癌细胞株增殖和凋亡的影响?方法:不同浓度白藜芦醇(0~150 μmol/L)作用人胃腺癌细胞株BGC823(低分化)和SGC7901(中分化),CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹检测凋亡相关蛋白survivin的表达?结果:白藜芦醇对胃癌细胞株增殖能力呈时间和浓度依赖性抑制,150 μmol/L白藜芦醇作用人胃癌细胞株BGC823和SGC7901 72 h后,早期和晚期凋亡细胞比率均明显增加,而survivin蛋白表达均明显下降(P < 0.05)?结论:白藜芦醇以浓度和时间依赖性模式抑制胃癌细胞的增殖能力和活性,诱导胃癌细胞株BGC823和SGC7901发生凋亡,其机制可能与下调survivin蛋白的表达有关?     

白头翁诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的研究中药白头翁对诱导胃癌BGC823细胞株凋亡过程的影响作用,探讨白头翁抗肿瘤的可能机制。方法以体外培养的胃癌BGC823细胞株为研究对象,MTI＇法检测不同浓度白头翁对BGC823细胞活性的影响,采用流式细胞术检测不同浓度白头翁作用胃癌BGC823细胞24h后细胞凋亡率。结果白头翁对BGC823细胞活性的抑制呈浓度依赖性,白头翁抑制BGC823细胞增殖可能由于其诱导胃癌细胞凋亡所致。结论白头翁能诱导胃癌BGC823细胞株发生细胞凋亡,有望成为胃癌的辅助治疗药物。     

蛋白酶体抑制剂DCI对胃癌细胞增殖的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂3,4-二氯异香豆素（DCI）对人胃癌细胞系BGC823体外增殖和凋亡的影响。方法：将DCI加入BGC823胃癌细胞,采用MTT法检测细胞的生长抑制效应,Annexin Ⅴ/PI法及电镜观察DCI对细胞凋亡的诱导作用。结果：DCI可明显抑制BGC823细胞体外增殖,随着DIC浓度的增加和处理时间的延长,细胞凋亡率增加;流式细胞术显示DCI可诱导胃癌细胞早期凋亡,细胞被阻滞在G1期;电镜观察发现,经DCI处理后的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征。结论：DCI可抑制人胃癌BGC823细胞增殖并促进其凋亡。     

NDV感染体外诱导胃癌细胞BGC—823的凋亡

目的：研究新城疫病毒在体外抗胃癌细胞尖性及其与细胞凋亡的关系。方法：应用倒置显微镜观察细胞形态、MTT法测NDV在体外对BGC－823的抑制和杀伤作用，同时用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡情况及细胞分裂周期各时象的变化。结果：NDV在体外可使BGC－823胃癌细胞形成明显的细胞病变效应、细胞生长抑制及细胞凋亡，且细胞凋亡率与感染时间呈正相关。G2、S期细胞减少，增殖指数（PI）降低，与阴性对照组比较有显著性差异（P＜0.01)。结论：NDV具有显著的抗BGC－823胃癌细胞活性。     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的利用R NA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组)。构建针对EGFR基因的s和R NA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用R T-PCR和Western blot检测EGFR在mRNA和蛋白水平的变化;WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化。实验重复3次。结果成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mR NA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6%和75.2%。shR NA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F=0.326,P>0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P<0.001),有统计学意义。EGFR shR NA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体。结论靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点。     

细胞黏附肽抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡作用

目的:　研究细胞黏附肽（RGD）对人胃癌BGC823细胞生长增殖的影响,探讨RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法:　将体外培养的 BGC823细胞分为12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^-1RGD处理组和对照组,RGD处理BGC823细胞24、48、和72 h后,MTT法检测不同浓度RGD作用不同时间对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,分别利用光镜、透射电镜、免疫组织化学法、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片段方法观察凋亡细胞的形态学变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果:　MTT检测,RGD各剂量组在作用24、48和72 h时, BGC823细胞的抑制率均高于对照组（P<0.01）,且随着RGD浓度增加BGC823细胞的抑制率增加;50.0 mg·L^-1　RGD处理BGC823细胞48 h后,光镜下显示,细胞体积变小,胞核深染,胞浆发红,出现很多的凋亡细胞;透射电镜显示,细胞表面微绒毛消失,异染色质趋边凝聚、聚集在核膜上,形成新月形帽状结构,甚至核膜消失,细胞核碎裂,可见凋亡小体。流式细胞术检测,BGC823细胞发生凋亡,且凋亡峰随着浓度的增加而增高;电泳结果显示,BGC823细胞内的DNA片段断裂为大小不等的小片段,呈现出很清晰的梯状降解条带;免疫组织化学染色结果显示,50.0 mg·L^-1RGD处理BGC823细胞48 h后 Survivin的表达量较对照组明显减少,经图像分析检测,实验组平均灰度值
高于对照组(P< 0.01）,提示实验组细胞发生凋亡。结论: RGD通过诱导BGC823细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增殖,其RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过线粒体引发这一途径。     

LncRNA-MEG3 对胃癌生物学特性 及铂类化疗敏感性的研究

目的 探讨LncRNA-MEG3 对胃癌增殖、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响。方法 以人正 常胃黏膜上皮细胞GES1 作为对照细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌MKN28、 SGC7901、AGS 及BGC823 细胞中LncRNA-MEG3 的表达;将过表达MEG3 的质粒转染BGC823 细胞作为 pcDNA3.1-MEG3 组,转染空白质粒的阴性对照作为pcDNA3.1 组,同时设置Control 组;将BGC823 细胞 分为pcDNA3.1 组、pcDNA3.1-MEG3 组、顺铂组及pcDNA3.1-MEG3+ 顺铂组。qRT-PCR 检测转染48 h 后细胞中LncRNA-MEG3 的表达;pcDNA3.1-MEG3、顺铂单独或共同处理BGC823 细胞,细胞计数试剂 盒法及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blotting 检测STAT3、磷酸化的信号转导与转录因 子3（p-STAT3）、Cyclin D1 和Bcl-2 的表达。结果 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 的表达均低于GES1 细胞 （P <0.05）;4 组LncRNA-MEG3 相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;pcDNA3.1-MEG3 组和顺 铂组Cyclin D1、Bcl-2 及p-STAT3 的蛋白表达低于pcDNA3.1 组（P <0.05）,细胞凋亡率高于pcDNA3.1 组 （P <0.05）。结论 胃癌细胞中LncRNA-MEG3 表达降低,过表达LncRNA-MEG3 可降低胃癌细胞活力并诱 导细胞凋亡,增加顺铂的化疗敏感性,其机制与下调STAT3 信号通路有关。     

光辉霉素A对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

目的观察光辉霉素A（MIT）对人低分化胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移的作用,以及对转录因子Sp1和乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）表达的影响,并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度的MIT作用于胃癌BGC823细胞,以Cell Counting Kit-8（CCK8）法测定对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定对细胞凋亡的影响;以细胞划痕法观察对细胞迁移能力的影响;以实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法定量测定细胞内Sp1和Hpa mRNA表达的变化。结果 MIT抑制胃癌BGC823细胞增殖的效应呈浓度和时间依赖性（P均〈0.05）;不同浓度（0、0.15、0.30、0.60μmol/L）的MIT作用于胃癌BGC823细胞24 h后,细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加,分别为（2.100±0.985）、（13.533±0.777）、（21.533±0.874）、（27.500±0.964）%,即MIT促进胃癌BGC823细胞的凋亡呈浓度依赖性（P〈0.05）;MIT对胃癌BGC823细胞迁移的抑制作用具有量效和时效性;胃癌BGC823细胞Sp1和Hpa mRNA表达量随MIT浓度的增加而降低（P均〈0.05）。结论 MIT对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、迁移影响可能通过抑制Sp1、Hpa的表达而实现。     

环孢素A对人胃癌BGC823细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关.     

不同pH值条件下多柔比星对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨在不同pH值培养条件下多柔比星(doxorubicin,ADM)对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡能力的影响及初步机制研究。 方法 采用细胞活性测定试剂盒(CCK-8)法检测不同pH值培养条件下多柔比星对胃癌细胞BGC823增殖活性的影响;应用Annexin V/PI双染法,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测p-AKT、BCL-2和NF-κB基因在胃癌细胞中的表达。 结果 ①ADM对胃癌BGC823细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为5.277 μg/mL,考虑化疗药物毒性及后续实验,ADM剂量选择该细胞株IC₅₀值1/4的浓度(即1.319 μg/mL)用于进行后续实验;②随着pH值升高,ADM对BGC823细胞增殖活性的抑制作用增强,当pH达到7.4时,抑制增殖作用最明显;③随着pH值升高,ADM对BGC823细胞凋亡水平明显增加,当pH达到7.4时,促凋亡作用最明显,再提高pH浓度,促凋亡作用能力不明显;④不同pH(pH 6.8～7.6)环境下,ADM处理后,随着pH升高,BCL-2、NF-κB和p-AKT基因表达水平明显降低。 结论 升高细胞外pH值能明显提高ADM对BGC823细胞抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的能力,这种与pH值相关的ADM抗肿瘤效果可能是通过抑制AKT的磷酸化,阻止NF-κB、Bcl-2等抗凋亡基因表达来实现的。      

单羧酸转运蛋白1抑制剂AZD3965对胃癌BCG-823细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究单羧酸转运蛋白1（MCT1）抑制剂AZD3965通过抑制肿瘤细胞MCT1对胃癌细胞BCG-823增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法:MTT法检测不同浓度AZD3965（0、20、40、80 μmol/L）对胃癌细胞的增殖抑制作用。通过倒置显微镜观察胃癌细胞BCG-823在不同浓度AZD3965（0、20、40、80 μmol/L）处理后细胞形态的改变。集落克隆形成实验观察AZD3965对胃癌细胞BCG-823集落形成能力的影响。PI单染流式细胞术检测AZD3965对胃癌细胞BCG-823细胞凋亡的影响。Western blotting检测AZD3965作用下MCT1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:经AZD3965作用后BCG-823细胞的生长受到抑制,且随着药物浓度和作用时间的增加,AZD3965对人胃癌细胞BCG-823的增殖抑制作用逐渐增强（P<0.01）。通过倒置显微镜观察不同浓度AZD3965（20、40、80 μmol/L）处理胃癌细胞后,相较空白对照组（0 μmol/L AZD3965）胃癌细胞数目明显减少,细胞发生皱缩破裂,细胞形态发生改变。集落克隆形成实验表明AZD3965对胃癌细胞BCG-823有增殖抑制作用。PI单染流式细胞术结果显示,20、40、80 μmol/L AZD3965处理BCG-823细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为（13.33±4.13）%、（22.53±2.97）%和（36.63±5.23）%,与空白对照组（0 μmol/L AZD3965）相比明显升高（P<0.01）。Western blotting结果显示,AZD3965可以下调BCG-823细胞中MCT1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。结论:AZD3965可通过抑制MCT1活性,并且激活Bax和抑制Bcl-2,从而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。