分泌抗rHuIL－6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１０（－６）～１０（－８）。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６，敏感性为１００ｐｇ／ｍｌ。初步应用表明可用于临床标本的检测。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

APAAP免疫印迹技术对抗副流感病毒1，3型单克隆抗体识别抗原表位的研究

副流感病毒１，３型（ＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，３：ＰＩＶ＿１．３）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用免疫印迹技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）识别抗原表位特性。结果表明：ＰＩＶ＿１．３抗原经还原剂处理后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ５％～１５％梯度胶电泳，能分辨二十多条清晰的蛋白带。转印后采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物（ＡＰＡＡＰ）染色，本底浅，呈玫瑰红色带，优于ＨＲＰ染色结果。ＰＩＶ＿１的５株ＭｃＡｂ：ＩＣ＿５、ＩＨ＿６、ＩＨ＿２、ＩＣ＿１０、３Ｄ＿５分别与６８ｋＤ～５０ｋＤ、６８ｋＤ、５８ｋＤ～２７ｋＤ、５５ｋＤ～５０ｋＤ、５０ｋＤ对应ＰＩＶ＿１的蛋白质抗原表位起反应。ＰＩＶ＿３的６株ＭｃＡｂ：２Ａ＿１０、５Ｇ＿３、２Ｄ＿１１、２Ｅ＿１０、２Ｂ＿１２、４Ｆ＿１２与７０ｋＤ、６８ｋＤ、６０ｋＤ～５０ｋＤ、５５ｋｐ～４０ｋＤ、５５ｋＤ、４０ｋＤ对应的蛋白质抗原表位特异结合，说明ＰＩＶ＿１．３的１１株ＭｃＡｂ同对应抗原表位点的结合分布较广，有利于对ＰＩＶ＿１．３抗原的快速、敏感、特异检测。     

肿瘤碱性蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株抗人血清肿瘤碱性蛋白（Ｔｕｍｏｕｒｂａｓｉｃｐｒｏ－ｔｅｉｎ，ＴＢＰ）杂交瘤细胞株（１Ｃ３、４Ｆ４、５Ｆ４、３Ｇ９），并以制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ｉｇ亚类测定：均为ＩｇＧ２ａ，腹水效价为１×１０－６～１×１０－８。特异性测定：ＴＢＰＭｃＡｂ与ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ和Ａｌｂ无交叉反应。单抗相加试验证实：５Ｆ４、４Ｆ４和１Ｃ３为识别ＴＢＰ上同一抗原决定簇，３Ｇ９则为识别ＴＢＰ上另一抗原决定簇。分别利用单株和混合株ＭｃＡｂ标酶建立了可应用于人血清ＴＢＰ含量测定的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，并用于人血清ＴＢＰ含量测定。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

抗远缘链球菌OMZ176表面蛋白抗原（220kD）单克隆抗体的制备

采用远缘链球菌ＯＭＺ１７６（ｄ血清型）全菌细胞作抗原，通过免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选及亚克隆，最终获得抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６表面蛋白抗原（２２０ｋＤ）的单克隆抗体（Ｗｃ３Ａ６）。结果表明：ＭｃＡｂ的Ｉｇ及亚类鉴定为ＩｇＧ２ａ，ＥＬＩＳＡ效价１：８０００，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂ１－ｏｔｉｎｇ鉴定可见ＭｃＡｂ与２２０ｋＤ蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）有弱的     

抗内毒素单链抗体基因的构建、序列分析及表达

目的：构建抗内毒素（ＬＰＳ） 单链抗体基因, 并尝试其在Ｅ．ｃｏｌｉ 中的表达。方法： 采用ｌｉｎｋｅｒ Ｐｒｉｍ ｅｒ Ｍｉｘ ,按ＶＨｌｉｎｋｅｒＶＬ 的结构将鼠抗ＬＰＳ ｍ Ａｂ Ｃ３Ａ２ 的ＶＨ ,ＶＬ 基因拼接成单链抗体（ＳｃＦｖ） 基因;用ＰＥ３７３Ａ 型全自动ＤＮＡ序列分析仪测定其核苷酸序列。ＰＣＲ 扩增抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因并更换两端接头序列后,插入谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１ ;转染Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ ,以ＩＰＴＧ 诱导表达,ＳＤＳＰＡＧＥ 分析表达产物。结果：扩增出的ＳｃＦｖ基因长７３５ｂｐ , 序列分析表明,该序列完整、正确;ＳＤＳＰＡＧＥ 显示,转染入重组质粒ｐ４ＴＣ３Ａ２Ｆｖ 的ＪＭ１０９ 菌经诱导后,有相对分子质量（ Ｍｒ） 约为５２ ０００ 的外源蛋白表达。结论：成功地构建了鼠抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９中表达了ＧＳＴＳｃＦｖ 融合蛋白。     

血管内皮细胞生长因子受体KKR胞外配基结合区单？…

目的 研制能封闭血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）受体ＫＤＲ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）?探讨其抑制ＶＥＧＦ诱导的体内外活性。方法 以原核表达的ＫＤＲⅠ￣Ⅳ区融合蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术制备抗ＫＤＲⅠ￣Ⅳ的ＭｃＡｂ，并用免疫双扩、ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性，用ＶＥＧＦ刺激内皮细胞增殖及鸡胚血管形成实验检测该抗 的中和活性。结果 通过筛选和鉴定获得了２株ＫＤＲⅠ     

抗远缘链或菌OMZ176表面蛋白抗原（220kD）单克隆抗体的制备

采用远缘链球菌ＯＭＺ１７６（ｄ血清型）全菌细胞作抗原，通过免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选及亚克隆，最终获得抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６表面蛋白抗原（２２０ｋＤ）的单克隆抗体（ＷＣ３Ａ６）。结果表明：ＭｃＡｂ的Ｉｇ及亚类鉴定为ＪｇＧ２ａ，ＥＬＩＳＡ效价１：８０００，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ鉴定可见ＭｃＡｂ与２２０ｋＤ蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）有弱的交叉反应（ＯＤ值＝０．２３）。     

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（Ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（Ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（Ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡ     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

人肺癌单克隆抗体3D3重链可变区cDNA克隆及序列测定

人肺癌单克隆抗体３Ｄ３重链可变区ｃＤＮＡ克隆及序列测定史依仁颜江华郭先健白雪峰单克隆抗体（ＭｃＡｂ）在科研及影像诊断等领域应用十分广泛，鼠源性单克隆抗体，对人是异种抗原，使其在人类疾病治疗方面的应用受到限制。利用基因重组技术，可构建各种重组抗体基因，...     

抗人M和N型GPA特异性单克隆抗体的制备和鉴定

目的：为了建立“血型糖蛋白Ａ（Ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ Ａ,ＧＰＡ）突变分析”技术。方法：采用杂交瘤技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,结果：获得３株分泌抗ＧＰＡ特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系,这３株ＭｃＡｂ均属于ＩｇＧ２ａ亚类,Ｋａｐｐａ型轻链,其中２株特异笥抗Ｍ型ＧＰＡ,另外１株特异性抗Ｎ型ＧＰＡ。３株ＭｃＡｂ所针对的抗原决定簇位于ＧＰＡ多钛链Ｎ末端第１－３９位氨基酸之内,抗体与其结合依赖糖链的完整性     

MOLECULAR CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF THE IMMUNOGLOBULIN LIGHT CHAIN VARIABLE REGION GENE OF A MURINE ANTI-HUMAN C1-INH IgG

获得抗体的可变区基因是由鼠源性ＭｃＡｂ制备重组抗体的前提，本实验合成与轻链可变区（ＶＬ）ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出Ｆ７ＶＬ的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两端进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＬｃＤＮＡ是由３０３个碱基组成，编码１０１个氨基酸残基。由国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现：Ｆ７ＶＬ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因特征，同源性为６０％～８０％。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＬ基因推导的氨基酸序列应归属于小鼠Ｉｇ的ＶＬ基因ＩＶ亚组，是由Ｖｋ－Ｊｋ１重排产生。ＣＤＲ３含有９个氨基酸残基，其中含３个不相同氨基酸残基，ＶＬ大多数的氨基酸变化集中在ＦＲ１和ＣＤＲ１区，Ｆ７ＶＬ符合ＩｇＶＬ氨基酸残基变化的基本特征。Ｃｙｓ２３和Ｃｙｓ８８残基位于Ｆ７ＶＬＣＤＲ１和ＣＤＲ３的起始点，与二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＬ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下了良好的基础。     

治疗用抗人T淋巴细胞McAb（WuT3）功能试验方法的研究

为评价治疗用抗人Ｔ淋巴细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用，进行了兔皮内移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）的研究。对试验方法的有关因素：如胎牛血清（ＦＣＳ）和环磷酰胺对ＧＶＨＲ的影响，淋巴细胞浓度和局部反应大小的关系，以及反应出现高峰的时间等进行了观察。建立和稳定了试验方法，并用此方法对ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用进行了对比。结果表明，两种ＭｃＡｂ均可抑制ＧＶＨＲ，并对ＷｕＴ３和ＷｕＴ４两种ＭｃＡｂ联合应用的效果进行了初步探讨。     

人肝癌细胞GHC－3表面抗原性质的研究

以人肝庙细胞株ＧＨＣ－３细胞为抗原，免疫制备获得抗人肝癌细胞膜单克隆抗体ＨＬＭ＿３（ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ）．应用ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ研究分析肝瘤细胞表面抗原性质及其对ＧＨＣ－３细胞的生物效应，结果表明：ＨＬＭ＿３－ＭｃＡｂ可抑制已铺展的ＧＨＣ－３细胞生长；辣根过氧化物酶结合法探测受ＭｃＡｂ作用的细胞ＣｏｎＡ受体和ｒａｓ瘤基因产物ｐ２１．反应均明显减弱；交叉－阻断测试抗原及ＣｏｎＡ受体发现，无论是细胞先与ＭｃＡｂ结合后再与ＣｏｎＡ反应，抑或先与ＣｏｎＡ反应后再与ＭｃＡｂ结合，都显示ＧＨＣ－３细胞的膜抗原与腹表面的ＣｏｎＡ受体有密切关系。进一步作糖化学分析，从高效薄层色谱（ＨＰＴＬＣ）区带和扫描初步显示为不完全分化的中性糖脂。     

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．     

抗重组人肿瘤坏死因子—α单克隆抗体的研制及其初步应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术获得１０株抗重组人肿瘤坏死因子－α（ｒＨｕＴＮＦ－α）ＭｃＡｂ。７株ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１，２株为ＩｇＧ２ａ，１株为ＩｇＧ２ａ。１株ＭｃＡｂ与淋巴毒素（ＬＴ或ｒＨｕＴＮＦ－β）、ｒＨｕＩＬ－６和载体菌菌体蛋白均无交叉反应。其中７株ＭｃＡｂ具有中和活性，７株ＭｃＡｂ能识别天然的ＴＮＦ－α。Ｇ１１和Ｅ６ＭｃＡｂ应用ＡＢＣ法免疫组化染色肝病患者组织细胞片得到明确的阳性结果。用２株识别不     

应用DNA疫苗制备猪温病毒单克隆抗体的研究

猪瘟病毒（ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ, ＣＳＦＶ）是影响畜牧业最重要的病原体之一。单克隆抗体（ｍＡｂ）以其高度的特异性和敏感性而在ＣＳＦＶ的生物学特性研究与诊断中起着重要的作用。由于不易获得高质量的ＣＳＦＶ抗原,我国开展这项工作较晚,所建立的抗ＣＳＦＶ ｍＡｂ细胞株较少。这对于研究ＣＳＦＶ的生物学特性及流行病学调查来说,在数量上还很不够,仍需继续研制抗ＣＳＦＶ ｍＡｂ。 ＤＮＡ疫苗是９０年代出现的一种新型疫苗［１］。其特点是：基因免疫后,蛋白质抗原在宿主细胞内表达,其加工处…     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ …

采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量，发现ＡｎｇⅡ能明显促进ＶＳＭＣ中ｂＦＧＦ基因表达，而ｂＦＧＦ则能明显诱导ＡＣＥ活性和提高ＡｎｇⅡ释放，且ＳＨＲＶＳＭＣ的ｂＦＧＦ基因表达，ＡＣＥ活性和Ａ