细胞外基质与子宫内膜异位症发生学的关系

子宫内膜异位症(EMs)发生学说研究较多，细胞外基质的粘附学说是EMs发生的新理论。细胞外基质的主要成分包括胶原、蛋白聚糖和糖蛋白；本文就其分类、特性、功能及与EMs发生、发展的关系作一综述。     

细胞外基质与子宫内膜异位症发生学的关系

子宫内膜异位症（EMs)发生学说研究较多，细胞外基质的粘附学说是EMs发生的新理论。细胞外基质的主要成分包括胶原、蛋白聚糖和糖蛋白；本文就基分类、特性、功能及与EMs发生、发展的关系作一综述。     

子宫内膜异位症体外组织学模型的构建

目的:分析子宫内膜与腹膜黏附的细胞学行为及分子生物学表现,探索子宫内膜组织培养条件及子宫内膜组织与腹膜组织黏附的培养条件。方法:对比观察气液面培养和培养基中培养对于子宫内膜组织及子宫内膜组织黏附腹膜的影响,子宫内膜黏附腹膜后分别于1h,6h,12h,24h,1h～6天收集标本用光镜观察子宫内膜与腹膜黏附发生的时间,黏附部位的细胞学行为。结果:子宫内膜组织气液平面培养较培养基中培养组织结构维持好,离体培养时间长;子宫内膜组织接种腹膜组织离体培养3d后能观察到子宫内膜基质细胞明显侵袭腹膜间皮层,黏附处大部分腹膜间皮层缺损,可以通过腺体和基质细胞与腹膜间皮面黏附。结论:子宫内膜组织与腹膜组织共培养于气液平面培养效果好。     

人子宫内膜细胞的体外纯化和培养

目的:旨在建立一套子宫内膜细胞体外培养和贮存传代的方法。方法:用胶原酶消化和铜网过筛法分离子宫内膜基质细胞和上皮细胞,进行单层培养。结果:子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗组化染色为阳性,腺上皮细胞可持续培养4-6周,传代2-3次;基质细胞可持续培养5-8周,传代4-6次。结论:建立了可体外培养贮存、传代的子宫内膜细胞,为进一步对其进行抗原组分研究奠定基础。     

人子宫内膜异位症异位腺上皮永生化细胞系的建立

目的:建立人子宫内膜异位症(EMs)的异位腺上皮永生化细胞系,为进一步深入研究EMs奠定基础。方法:取人EMs异位病灶组织进行原代培养,用质粒PCD2SV40T转染原代细胞,G418筛选14天后获得抗性克隆。将抗性克隆传代培养,用免疫细胞化学、RT-PCR、细胞计数、核型分析及裸鼠成瘤实验等对细胞系进行鉴定。结果:建立了一株传代超过50代的永生化细胞系,命名为hEM5B2。该细胞系具有腺上皮细胞形态,细胞角蛋白与波形蛋白阳性,抗成纤维细胞抗体阴性,雌激素受体α和β亚型(ER-α,ER-β)及孕激素受体(PR)阳性,细胞倍增时间64.8h。核型分析显示,染色体众数为78～123,为多倍体核型;观察1个月裸鼠成瘤实验显示未成瘤。结论:hEM5B2细胞系是一株人EMs异位腺上皮永生化细胞系,可作为细胞模型用于EMs的体外实验研究。     

基质金属蛋白酶与子宫内膜异位症

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类可降解细胞外基质和基底膜的蛋白水解酶类,它对胚胎发育、血管新生、子宫复旧、组织修复与重塑以及肿瘤的侵袭与转移等具有重要作用.对MMPs分类、生物活性、部分调节因素及与子宫内膜异位症发病之间的相关性作一综述.     

利用人异位的子宫内膜细胞建立可视化子宫内膜异位症模型

目的：分别将不同浓度的在位及异位子宫内膜细胞注射到裸鼠的腹部皮下,观察各组异位病灶的形成并进行比较分析,拟建立一种对造模鼠创伤小,且可连续、动态观察的可视化子宫内膜异位症（EMs）模型。方法：收集20例EMs患者的在位子宫内膜组织和异位病灶子宫内膜组织,分别消化培养子宫内膜细胞。将在位及异位子宫内膜细胞分别以2.5×106/200 μL、5×106/200 μL和1×107/200 μL 3个浓度注射到裸鼠腹部皮下,观察并记录各组病灶开始出现的时间。在注射细胞后第5、10和15天分别计算各组病灶形成率和体积。第15天时取材,通过形态学分析和免疫组织化学方法鉴定病灶。通过比较,确定建立可视化EMs模型所需的最佳细胞种类、细胞浓度及病灶形成时间。结果：在裸鼠腹部皮下分别注射在位及异位子宫内膜细胞后均可成功形成可视化病灶。病理分析显示病灶中密集的间质细胞包绕着腺体,免疫组织化学鉴定显示病灶均由人子宫内膜细胞形成。各组病灶开始出现的时间差异均无统计学意义（F=0.230,P=0.942）。最佳注射细胞浓度为5×106/200 μL,建立模型最佳观察时间是注射细胞后第10天。注射5×106/200 μL浓度的细胞后在第10天时异位子宫内膜细胞组病灶发生率为100%,而在位子宫内膜细胞组病灶发生率为75%,2组之间差异有统计学意义（χ2=9.143,P=0.002）。结论：异位的子宫内膜细胞比在位子宫内膜细胞更适合建立可视化EMs模型。将5×106/200 μL异位子宫内膜细胞注射到裸鼠腹部皮下,在第10天时即可成功建立可视化EMs模型,成模率为100%,该病灶可以无创、连续、动态地观察,是研究腹壁EMs的理想模型。     

孕激素对体外培养的在位和异位子宫内膜基质细胞尿激酶纤溶酶原激活物及其抑制物分泌的影响

子宫内膜异位症（内异症）是生育期妇女最常见的妇科疾病之一，其发病机制不清，多数观点认为是由于经血中所含的子宫内膜细胞逆流进入腹腔，种植于卵巢和腹膜，并在该处继续生长和侵袭所致。已有研究显示，尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）及其抑制物1（PAI-1）参与子宫内膜细胞增殖、转移及侵袭生长的过程。另有研究指出，孕激素对子宫内膜基质细胞分泌PAI-1和尿激酶纤溶酶原激活物受体（uPAR）有促进作用。本研究采用酶联免疫方法，     

子宫内膜异位症子宫内膜细胞对鼠胚体外早期发育的影响

子宫内膜异位症（EMs,内异症）与妇女不育有着密切的关系,约有25％～40％的不孕妇女患内异症,而内异症患者中,不育症约占30％～40％。为探讨子宫内膜异位症患者的子宫内膜是否对胚胎的发育产生不利的影响,本实验将两细胞期鼠胚与内异症妇女子宫内膜细胞体外共培养,观察其对鼠胚早期发育的影响。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在子宫内膜异位症中的应用

子宫内膜碎片随经血逆流种植于腹腔是子宫内膜异位症的主要发病机制之一,内膜种植入腹膜及其它结缔组织的过程需要细胞外基质的降解,基质金属蛋白酶是降解过程中重要的蛋白酶类。近年发现,基质金属蛋白酶及其抑制在子宫内膜异位症的发生发展中具有重要作用。     

小鼠子宫内膜原代上皮细胞及间质细胞的优化分离和培养

目的:建立一种获得高纯度、高活性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞的优化分离和体外培养的方法,提供研究子宫内膜相关疾病的理想体外模型.方法:双酶消化、过滤、离心法分离和培养小鼠子宫内膜上皮细胞和间质细胞.用光镜观察培养细胞;双重免疫荧光标记法检测上皮细胞角蛋白(CK)和间质细胞波形蛋白(Vim)的表达;MTT法测定间质细胞的生长曲线.结果:培养24h,小鼠子宫内膜上皮细胞呈多边形、铺路石样生长,CK免疫荧光阳性,纯度达95％以上.正常原代小鼠子宫内膜上皮细胞不能传代,培养5～6天后细胞逐渐走向衰老.间质细胞呈长梭形、漩涡状生长,Vim免疫荧光阳性,纯度达95％以上.原代间质细胞可有限传代,3代内细胞形态无改变.传代间质细胞第3～6天为细胞对数生长期,生长曲线呈“S”形,倍增时间约为56.97h.结论:双酶消化、过滤、离心法可获得高纯度、高活性的具有典型的生物学细胞特性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞.     

子宫内膜异位症腹膜红色病变组织块细胞培养法

目的:探索组织块细胞培养方法构建子宫内膜异位症(内异症)腹膜红色病变的细胞体外模型。方法:采用组织块培养法共培养12例腹膜红色病灶,同时以酶消化共培养法对2例在位子宫内膜进行细胞培养作为实验对照。进行抗角蛋白和波形蛋白以及抗Flt-1、KDR抗体的细胞免疫化学检测。结果:12份标本中8份培养成功,每75m l体积的培养瓶可得到(2~5)×106个腺细胞及间质细胞,与酶消化培养法子宫内膜组织细胞的形态相似,经细胞免疫化学验证细胞成分并进行了初步细胞学实验研究。结论:腹膜红色病变组织的组织块培养法可作为内异症早期病变的细胞体外模型之一。     

人子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞永生化细胞系的建立及鉴定

目的建立人子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）患者在位内膜间质细胞永生化细胞系。方法将原代培养的EMs患者在位内膜间质细胞转染质粒PCD2SV40T,G418筛选并进行单克隆细胞挑选,采用核型分析、免疫细胞化学、RT-PCR、裸鼠成瘤实验等方法对传代培养后的抗性单克隆细胞进行鉴定。结果首次建立了EMs患者在位内膜间质细胞永生化细胞系hEM15A,该细胞系具有子宫内膜间质细胞特征,可连续传代,表现为正常二倍体核型,未观察到致瘤性。结论 hEM15A细胞系易获得、培养难度小、细胞均一性高、存活时间长,可成为EMs的研究工作中实用的体外模型。     

子宫内膜异位症影响体外受精—胚胎移植的具体环节探讨

目的　探讨子宫内膜异位症 (内异症 )对体外受精 -胚胎移植 (IVF ET)的影响。方法　回顾性分析85例输卵管因素不孕的患者 (A组 ,12 3个周期 )、18例卵巢子宫内膜异位囊肿的患者 (B组 ,2 5个周期 )和 16例无卵巢子宫内膜异位囊肿的内异症患者 (C组 ,2 0个周期 )的获卵数、受精率、卵裂率、胚胎种植率和临床妊娠率等情况。结果　B组的获卵数为 (7 1± 5 9)个 ,非常显著地少于A组的 (11 6± 8 4)个和C组的 (12 1± 7 8)个 ,P <0 0 1;B组和C组的受精率分别为 6 9 5 %和 70 3% ,均显著地低于A组的 77 5 % ,P <0 0 5 ;A、B、C三组的卵裂率、子宫内膜的厚度与类型、胚胎种植率和临床妊娠率均无显著差别。结论　子宫内膜异位囊肿影响卵巢对超排卵的反应 ,内异症影响卵子的受精 ,但不影响受精卵的分裂、子宫内膜容受力、胚胎种植率和临床妊娠率。     

中期因子在重度子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织中的表达及其临床意义

目的探讨中期因子（MK）蛋白在重度子宫内膜异位症（内异症）患者异位和在位内膜组织中的表达变化及其临床意义.方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法,检测41例重度内异症患者（研究组）的异位内膜和在位内膜组织及32例子宫肌瘤患者（对照组）的内膜组织中MK蛋白表达和微血管密度（MVD）.结果研究组异位内膜组织中MK蛋白的阳性表达率为29%（12/41）,在位内膜组织中MK蛋白的阳性表达率为63%（26/41）,对照组内膜组织中MK蛋白的阳性表达率为22%（7/32）,研究组在位内膜组织中MK蛋白阳性表达率与异位内膜组织及对照组内膜组织比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）,而且两组MK蛋白的阳性表达率与MVD呈正相关关系（r=0.637,P＜0.05）.结论MK蛋白在重度内异症患者的在位内膜过度表达,且与内膜血管生成密切相关.在位内膜中MK蛋白的表达变化可能与重度内异症的发生、发展有关.     

Effect of gonadotropins on human endometrial stromal cell proliferation in vitro

It has long been known that endometrial regeneration and proliferation is regulated by sex steroids, cytokines and various growth factors. The mechanisms responsible for such organized growth are still under investigation. Human chorionic gonadotropin/luteinizing hormone (hCG/LH) receptors have been found to be localized in human endometrium by immunocytochemistry. Gonadotropins have been widely used for hyperstimulation during in vitro fertilization (IVF) procedures; however, the direct effect of gonadotropin on the endometrium has not been adequately investigated yet. This study attempted to define the effect of gonadotropins on the proliferation of human endometrial stromal cells in vitro. Human endometrial stromal cells were obtained from hysterectomy specimens and cultured in serum-containing media for up to 72 h. The effects of adding 7.5, 15, 30, 150 mIU/ml of human menopausal gonadotropin (hMG) and follicle stimulating hormone (FSH), and 10, 100, 1,000, 10,000 mIU/ml of hCG on cumulative [³H]-thymidine incorporation in endometrial stromal cells were assessed. This study demonstrated that FSH and hMG induced significant inhibition in [³H]-thymidine uptake at all concentrations, respectively (P<0.05). In contrast to the above two hormones, hCG exerted inhibitory effect at concentrations of 1,000 and 10,000 mIU/ml (P<0.05). There was no evidence of dose-response correlations in all three gonadotropin experiments. These data imply that gonadotropins at the concentrations studied inhibit the proliferation of human endometrial stromal cells, at least, in short-term culture in vitro. Accordingly, we cannot negate the possibility that administered gonadotropin during ovarian hyperstimulation may directly influence the proliferation of human endometrial cells. Received: 24 September 2001 / Accepted: 18 December 2001     

Three-dimensional in vitro culture of endometrial explants mimics the early stages of endometriosis

OBJECTIVE: To reproduce the earliest phases of endometriosis using a new in vitro model in which cells from a cultured endometrial fragment can proliferate, invade, reconstitute new endometrial-like tissue, and generate blood vessels. DESIGN: Experimental in vitro study. SETTING: A hospital-based academic research institute. PATIENT(S): Five normal ovulating women undergoing surgery for various benign gynecological indications. INTERVENTION(S): Endometrial samples obtained from the fundus of the uterine cavity were placed in a three-dimensional fibrin matrix culture system. MAIN OUTCOME MEASURE(S): Degree of proliferation of stromal cells and invasion of the fibrin matrix, gland, and stroma formation, vessel sprouting, and immunohistochemical characterization of various cellular components. RESULT(S): During the first week of culture, an endometrial cell outgrowth was observed from the original fragments in 120 of 144 wells (83.3%). Subsequently, cell outgrowths could be quantified in 132 (91.6%), 129 (89.5%), and 127 (88.1%) of the wells after 15, 60, and 90 days, respectively. An invasion of the matrix by the human endometrial cells led to the formation of tubular structures that coalesced into tissue, architecturally resembling endometrium and in which the glands were immunohistochemically positive for cytokeratin. New capillaries, immunohistochemically positive for CD31 and vimentin, sprouted from the endometrial outgrowths at the beginning of the fifth week of culture. CONCLUSION(S): These data show that cells from endometrial explants can proliferate and invade a fibrin matrix in vitro generating new glands, stroma, and vessels consistent with endometriosis. The three-dimensional fibrin matrix used in the present study provides an opportunity to observe the earliest biological events of endometriosis in a quantifiable way.     

苯甲酸雌二醇对离体子宫内膜腺上皮细胞中热休克蛋白70及90表达的影响

目的探讨苯甲酸雌二醇对离体子宫内膜腺上皮细胞中热休克蛋白(HSP)70、90表达的影响。方法采用酶消化法,行原代子宫内膜腺上皮细胞培养。将培养的子宫内膜腺上皮细胞分为对照组(加入正常培养液)、苯甲酸雌二醇组、苯甲酸雌二醇+雌激素拮抗剂ICI182780组和ICI182780组,各组细胞分别作用6、12、18和24h。四甲基偶氮唑蓝还原法测定不同浓度的苯甲酸雌二醇及ICI182780对离体子宫内膜腺上皮细胞生长的影响,免疫组化法及图像分析法测定苯甲酸雌二醇和ICI182780对腺上皮细胞中HSP70、90表达的影响。结果苯甲酸雌二醇可刺激腺上皮细胞生长,细胞增殖率随着作用时间的延长和药物浓度升高而升高,浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,平均细胞增殖率分别为(170±9)%、(207±11)%、(231±12)%、(257±10)%,均明显高于上述各浓度苯甲酸雌二醇作用6h时的细胞增殖率[(117±13)%、(129±10)%、(146±10)%、(176±6)%],差异有统计学意义(P<0.05);浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,苯甲酸雌二醇+ICI182780组与苯甲酸雌二醇组比较,细胞平均增殖率均明显降低,分别为(137±4)%、(145±10)%、(151±9)%、(167±3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。苯甲酸雌二醇可刺激细胞中HSP90的表达,这种刺激作用同样存在药物浓度和作用时间依赖性,苯甲酸雌二醇浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L,作用24h时HSP90表达的相对不透光度分别为(64.8±10.7)%、(75.9±12.6)%、(80.4±8.2)%、(83.2±7.6)%,明显高于相同浓度、相同作用时间时对照组的(28.0±3.3)%、(29.0±5.6)%、(29.0±5.0)%和(30.0±6.4)%,差异也有统计学意义(P<0.05);浓度为10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的苯甲酸雌二醇作用24h时,苯甲酸雌二醇+ICI182780组与苯甲酸雌二醇组比较,腺上皮细胞中HSP90表达明显降低,分别为(28.2±2.1)%、(29.7±3.2)%、(35.0±4.7)%、(34.7±6.5)%。ICI182780不影响雌二醇对腺上皮细胞中HSP70表达的抑制作用。结论苯甲酸雌二醇对子宫内膜腺上皮细胞增殖及HSP90表达的影响是雌激素受体依赖性的,HSP90表达可能有助于苯甲酸雌二醇刺激腺上皮细胞增殖;苯甲酸雌二醇对HSP70表达的抑制作用是非雌激素受体依赖性的,HSP70表达可能对腺上皮细胞的损伤有保护作用。     

子宫内膜异位症影响体外受精-胚胎移植结局的初步探讨

目的　探讨子宫内膜异位症的严重程度对体外受精 胚胎移植 (IVF ET)各个环节的影响。方法　对1999年 1月至 2 0 0 2年 4月在中山大学附属第一医院 10 7例已明确分期的子宫内膜异位症不育患者共 139周期IVF ET与同期输卵管因素不育患者 139例进行的 139周期IVF ET的控制性超排卵 (COH)治疗、受精率、卵裂率、每周期胚胎植入率和临床妊娠率、流产率等进行回顾性对照分析。结果　中、重度子宫内膜异位症不育患者与对照组相比进行IVF治疗时使用促性腺激素的总量增加而获卵数减少。重度患者雌二醇 (E2 )峰值下降 ,流产率增加 ,差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。子宫内膜异位症不育患者IVF ET治疗时随着病情加重 ,卵巢对控制性超排卵的反应性下降 ,重度患者流产率增高。结论　子宫内膜异位症影响了卵子与胚胎的发育。