心阳片通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片调节心肌细胞自噬改善心力衰竭(Heart failure,HF)小鼠心功能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,心阳片低、中、高剂量组(455、910、1820 mg·kg^-1)及3-甲基腺嘌呤组(15 mg·kg^-1,腹腔注射给药),每组8只;采用主动脉弓缩窄术复制HF小鼠模型;按上述剂量灌胃给药,灌胃体积为8 mL·kg^-1,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能:小鼠左心室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);采用q PCR法检测小鼠心脏组织HF生物标记物B型钠尿肽(BNP)mRNA的表达;采用Western Blot法检测小鼠心肌细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BⅡ/Ⅰ的表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF、LVFS显著降低(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较,心阳片低、中、高剂量组及3-甲基腺嘌呤组小鼠的LVEF、LVFS显著升高(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过抑制心肌细胞过度自噬改善HF小鼠的心功能。     

心阳片通过调节RAGE 介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片通过调节晚期糖基化终产物受体（RAGE）介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作 用。方法将60 只C57BL/6J 小鼠随机分为6 组,分别为假手术组、模型组、3-甲基腺嘌呤组（自噬抑制剂, 15 mg·kg-1）以及心阳片低、中、高剂量组（455、910、1 820 mg·kg-1）,每组10 只;另将10 只经基因型鉴定确 认为RAGE-/-的小鼠作为RAGE 敲除组。采用主动脉弓缩窄术（TAC）建立压力负荷性心力衰竭小鼠模型。模型 复制成功后,按上述剂量对心阳片各剂量组小鼠进行灌胃给药,3-甲基腺嘌呤组进行腹腔注射给药,其余组 别灌胃等容积生理盐水,每天给药1 次,连续4 周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能,采集小鼠左室射血分 数（LVEF）及左室短轴缩短率（LVFS）;使用Masson 染色观察小鼠心肌组织纤维化程度;采用蛋白免疫印迹法 （Western Blot）检测小鼠心脏左室心肌组织中的RAGE 蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BII/I 的表达情况。 结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF 及LVFS 明显降低（P＜0.05）,心肌纤维化面积明显增加（P＜ 0.05）,RAGE 蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BII/I 的表达明显上调（P＜0.05）;与模型组比较,RAGE 敲除 组、3-甲基腺嘌呤组及心阳片低、中、高剂量组小鼠的LVEF 和LVFS 明显升高（P＜0.05）,心肌纤维化面积 明显减少（P＜0.05）,RAGE、Beclin-1、LC3BII/I 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。结论心阳片可能通过调节 RAGE 介导的自噬,从而改善心力衰竭小鼠的心功能。     

心阳片通过抑制NLRP3炎性小体保护慢性心力衰竭肾脏炎性损伤的作用及机制研究

目的:观察慢性心力衰竭(CHF)对肾脏炎性损伤和纤维化影响及心阳片的干预作用.方法:随机将60只C57BL/6J小鼠分为假手术组、模型组、中药低、中、高剂量组、阳性对照组,通过主动脉缩窄术建立CHF模型小鼠,造模后中药低、中、高剂量组给予心阳片对应剂量灌胃,阳性对照组给予培哚普利灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌...     

心肌细胞自噬在慢性心力衰竭中的作用及中医药的干预研究

自噬是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体内进行消化降解的过程,在慢性心力衰竭的发生、发展中起到重要的调控作用,是治疗心衰的新靶点,中医药对心脏功能的保护作用可以通过干预自噬途径实现。本文重点讨论心肌细胞自噬在心衰中的作用,自噬的调控机制,中医药干预心肌自噬的机制和应用前景,探索中医药治疗慢性心力衰竭的新思路。     

活血解毒中药配伍抑制心肌细胞自噬改善大鼠冠脉无复流的作用机制研究

目的 探讨活血解毒中药配伍改善大鼠冠脉无复流所致心肌损伤的作用机制.方法 选择96只8～10周龄SPF级雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、冠脉无复流模型组、阳性药对照组、活血解毒中药低、中、高剂量组.假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,阳性药物组给予等体积阿司匹林灌胃,活血解毒中药低、中、高剂量组给予相应剂量...     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心功能及心肌细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及肿瘤抑制蛋白p53、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:将SD大鼠分为空白组(11只)、模型组(8只)、自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组(8只)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(9只)和艾灸组(9只)。采用腹腔隔日注射盐酸多柔比星(DOX)制备CHF大鼠模型。RAPA组予RAPA灌胃(2 mg/kg);3-MA组予3-MA腹腔注射(15 mg/kg);艾灸组予艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴,20 min/次。以上干预均每日1次,1周5次,连续3周。观察大鼠的一般情况和行为体征,并记录全心质量指数(HW/BW);心功能测量仪检测大鼠心率(HR)、心输出量(CO);酶联免疫吸附法检测血清N末端脑钠素前体(NT-pro BNP)含量;蛋白免疫印迹法检测心肌组织p53、mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠HR、HW/BW、NT-pro BNP含量、p53表达水平显著增高(P<0.01),CO、p-mTOR/mTOR显著降低(P<0.0...     

养心康片通过Akt/AMPK-mTOR通路对心肌梗死后心力衰竭模型兔心肌细胞自噬的影响

目的观察养心康片通过Akt/AMPK-mTOR通路对心肌梗死后心力衰竭模型兔心肌细胞自噬的影响。方法对实验兔应用结扎冠脉的方法建立心肌梗死后心力衰竭兔模型,随机分为模型组、养心康组、AMPK抑制剂组、Akt抑制剂组和mTOR抑制剂组。并另取不造模的兔设立空白对照组。每组5只,共30只。造模后第3天开始分别给予相应的处理措施,共4周。观察养心康片对模型兔心肌beclin 1、LC3蛋白表达,心肌beclin 1和Atg5 mRNA的表达的影响,电镜检测各组心肌细胞超微结构。结果养心康组的beclin 1 mRNA的表达量、beclin 1蛋白表达量较模型组、mTOR抑制剂组降低(P<0.05或P<0.01),较空白对照组、AMPK抑制剂组升高(P<0.05或P<0.01);养心康组的LC3-Ⅱ/LC3-I比值较模型组、mTOR抑制剂组降低(P<0.05),较空白对照组、AMPK抑制剂组升高(P<0.05)。养心康组的Atg5 mRNA表达量较模型组降低(P<0.05),较空白对照组、AMPK抑制剂组升高(P<0.05或P<0.01)。电镜结果显示养心康组的自噬体、自噬体溶酶体数量较模型组、Akt抑制剂组和mTOR抑制剂组降低减少,较AMPK抑制剂组增多。结论养心康片可通过干预Akt/AMPK-mTOR通路调控心肌细胞自噬水平,改善心肌梗死后心衰模型的心肌细胞超微结构。     

丹酚酸B通过调控自噬改善UUO小鼠肾纤维化

目的:探讨丹酚酸B调控自噬改善肾纤维化的作用机制。方法:60只小鼠随机分为6组:假手术组、模型组、醋酸泼尼松(20 mg/kg)阳性对照组及丹酚酸B低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,除假手术组外各组均采用单侧输尿管梗阻(UUO)的方法建立小鼠肾纤维化模型。自造模当天各组给予相应药物,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。术后第7天处死小鼠取肾取血,测定血清肌酐和尿素氮,HE染色和Masson染色观察肾脏组织病理变化及纤维化程度,免疫组化法观察肾间质Vimentin的表达,蛋白免疫印记法检测α-SMA及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1、mTOR的表达。结果:与模型比较,丹酚酸B可降低UUO小鼠血肌酐和尿素氮水平,HE染色和Masson染色结果显示肾组织病理损伤减轻,胶原纤维沉积减少。免疫组织化学法和Western Blot结果表明丹酚酸B可使UUO小鼠肾组织中纤维化标记蛋白Vimentin、α-SMA表达下调,而自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达上调,且mTOR表达下调。结论:丹酚酸B能改善UUO模型小鼠肾纤维化,其作用机制可能与激活肾组织自噬有关。     

黄芪甲苷促进乳鼠心肌细胞自噬及抑制缺血诱导的心肌细胞凋亡作用研究

目的 观察黄芪甲苷(AS)对缺血模型诱导的乳鼠心肌细胞自噬的影响,探讨黄芪甲苷的心肌保护作用及机制。方法 建立乳鼠心肌缺血的细胞损伤模型,采用分子生物学及免疫细胞化学法观察心肌细胞在缺血模型及黄芪甲苷处理后的自噬与细胞损伤变化。结果 心肌细胞的自体吞噬程序会被缺血刺激激活,缺血可致心肌细胞死亡。黄芪甲苷可明显恢复缺血处理诱导的心肌细胞损伤,10,20 μmol·L-1的黄芪甲苷分别使细胞活性恢复至80 %及85 %(均P＜0.05),使凋亡细胞数目降低至正常对照组的2.6倍及1.8倍(均P＜0.05),且呈现出剂量依赖效应。同时,黄芪甲苷可促进自噬蛋白(LC3)的表达;10,20 μmol·L-1的黄芪甲苷分别使细胞LC3升高至正常对照组的1.5倍及1.7倍(均P＜0.05)。结论 黄芪甲苷可恢复缺血降低的心肌细胞活性,降低缺血诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与促进缺血诱导的心肌细胞自噬相关。     

阿托伐他汀钙改善心力衰竭患者心功能的作用

慢性心力衰竭（CHF）是大多数心血管疾病的最终归宿,也是最主要的死亡原因。导致心力衰竭的基本机制是心室重塑。他汀类药物已被证实可预防心脑血管病的发病和死亡,是心血管疾病最有效的治疗药物之一,也是目前心脑血管病防治中最常用的调脂药物。近年来发现,他汀类药物除具有调血脂作用外,还具有非调脂作用。本研究旨在观察阿托伐他汀钙治疗CHF的临床疗效。     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬功能的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及自噬相关蛋白LC3、p62表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组12只与造模组48只,采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF模型,将建模成功的大鼠随机均分为模型组、艾灸组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。艾灸组用艾条温和灸双侧肺俞心俞穴,每日1次,每次20min,治疗3周。3-MA组按15 mg/kg给予3-MA混悬液腹腔注射,每日1次,共3周。RAPA组按2mg/kg给予RAPA混悬液灌胃,每日1次,共3周。观察大鼠的一般情况及行为体征;心功能测量仪检测大鼠心率(HR)、心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升或下降速率(±dp/dtmax);HE染色法观察心肌病理变化;Western blot法检测心肌细胞自噬相关蛋白LC3及p62表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现肿胀、空泡,肌纤维断裂、溶解,排列紊乱;与模型组比较,艾灸组和3-MA组大鼠心肌细胞的数量正常,心肌纤维排列相对整齐,RAPA组心肌细胞出现肿胀、空泡,心肌纤维断裂、溶解,排列紊乱等状况。与正常组比较,模型组HR和LVEDP明显升高(P0.01),CO、LVSP及±dp/dtmax明显下降(P0.01),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),而p62表达明显下降(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和3-MA组HR和LVEDP明显下降(P0.05),CO、LVSP及±dp/dtmax明显升高(P0.05),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显降低(P0.01),p62表达明显升高(P0.01),而RAPA组LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),p62表达明显降低(P0.01)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低心肌细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ、升高p62蛋白表达水平,发挥类似于3-MA的自噬抑制作用,抑制心肌细胞过度自噬、减轻心肌损伤有关。     

养心康片调节自噬对慢性心力衰竭小鼠心肌纤维化的影响

目的:研究养心康片对心衰后小鼠心肌纤维化的影响,探讨其作用机制。方法:采用胸主动脉缩窄法(TAC)建立小鼠慢性心衰模型,建模成功后随机分为假手术组,模型组,3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(15 mg·kg~(-1)),养心康片高、中、低剂量组(1 170,585,390 mg·kg~(-1)),假手术组给予等体积蒸馏水灌胃。30 d后行心脏超声检查,收集血流动力学参数;通过心脏石蜡切片,马松(Masson)染色观察心肌细胞形态学变化及心肌纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin-1),溶酶体膜蛋白(LAMP)心肌自噬蛋白,Ⅰ型胶原酶(CollagenⅠ),Ⅲ型胶原酶(CollagenⅢ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)心肌纤维化标志性蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠左心射血分数(LVEF),短轴缩短分数(FS)明显降低(P 0. 05),左心室舒张末期内径(LVDd),左心室收缩末期内径(LVDs)明显增大(P 0. 05),心肌纤维化程度显著加重(P 0. 01),α-SMA,CollagenⅠ,CollagenⅢ心肌纤维化标志性蛋白,LAMP,LC3,Beclin-1自噬蛋白表达均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,3-MA组,养心康高、中剂量组心脏超声各项指标均显著改善(P 0. 05),心肌纤维化程度明显改善(P 0. 01),α-SMA,CollagenⅠ,CollagenⅢ,LAMP,LC3,Beclin-1表达明显降低(P 0. 05),低剂量组心功能、心肌纤维化及各项蛋白表达差异不明显。结论:养心康片可通过下调自噬减缓慢性心力衰竭小鼠心肌纤维化,改善心功能。     

黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

目的:探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。方法:将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组(1.44,2.88 g·kg^-1)共4组(n=15)。连续给药3 d,末次给药1 h,盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率;另取5只,术后12 h处死小鼠,收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察肝细胞凋亡指数(AI);蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),自噬效应蛋白1(Beclin1),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠12,24 h生存率明显降低,血清中炎症因子IL-6...     

艾灸对小鼠活性巨噬细胞自噬作用的影响研究

研究表明,艾灸对于机体免疫系统具有双向良性调整作用,既能发挥抗感染作用也能防止炎症过当［1-2］。观察艾灸时主要淋巴细胞的信号转导有助于揭示艾灸作用机制。巨噬细胞对抗感染抗炎免疫类型和强度具有重要意义,其极化状态和吞噬能力是可变的,自噬可能是影响巨噬细胞功能状态的因素之一。自噬是真核细胞内一种广泛的蛋白和细胞器的自我清除过程。研究表明,温和、持续的高温刺激可能激活细胞自噬反应［3］。本研究通过对艾灸后自噬标志物［4］和相关信号通路［5-6］的检测,分析艾灸与自噬之间的关系,揭示艾灸调节细胞免疫的分子基础和途径,为艾灸用于感染与炎症的治疗提供理论依据。     

当归补血汤对阿霉素心肌损伤小鼠的保护作用及对心肌细胞自噬的影响

目的:探究当归补血汤对使用阿霉素小鼠心肌损伤的保护作用及其通过PI3K介导通路对心肌细胞自噬的影响.方法:取40只雄性ICR小鼠随机分为对照组、阿霉素组(ADR组)、阿霉素+巴佛洛霉素A1组(ADR+Baf组)、当归补血汤干预阿霉素+巴佛洛霉素A1组(DBD+Baf组)、当归补血汤干预阿霉素组(DBD组),每组8只,予...     

姜黄素通过激活海马神经元自噬抑制七氟醚诱导的小鼠记忆提取障碍

目的观察姜黄素通过激活海马神经元自噬在七氟醚诱导成年小鼠记忆提取障碍中的作用。方法将120只成年昆明小鼠随机分为对照组(Con组)、七氟醚组(Sev组)及七氟醚+姜黄素组(Cur组),每组40只。Cur组小鼠腹腔注射姜黄素300 mg/(kg·d),连续6 d,Con组和Sev组注射等容积二甲基亚砜和生理盐水混合液,之后Sev组、Cur组吸入3.3%七氟醚2 h,Con组吸入40%O_22 h。三组小鼠于停止吸入后12、24、48、72 h采用Western Blot法检测海马自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ表达,计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果与Con组比较,Sev组吸入七氟醚后12、24 h P62表达上调,LC3-Ⅱ表达下调,吸入七氟醚后12、24、48 h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(P0.05)。与Sev组比较,Cur组吸入七氟醚后12、24 h P62表达下调,LC3-Ⅱ表达上调,吸入七氟醚后12、24、48 h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P0.05)。结论姜黄素可改善七氟醚诱导的成年小鼠记忆提取障碍,其机制可能与激活海马神经元自噬有关。     

降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬的影响

目的 观察降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心功能、心肌重构及蛋白激酶样内质网应激酶-真核翻译启始因子2α-微管相关蛋白1轻链3(PERK-eIF2α-LC3)通路的影响,揭示其治疗糖尿病合并慢性心力衰竭的机制。方法 将100只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组,每组20只。假手术组大鼠普通饲料喂养,腹腔注射柠檬酸缓冲液;其余组大鼠单次腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素+高脂饲料喂养+腹主动脉缩窄方法建立糖尿病合并慢性心力衰竭模型。造模成功后,降糖舒心低剂量组给予浓度为80%的降糖舒心方药液灌胃,降糖舒心高剂量组给予浓度为130%的降糖舒心方药液灌胃,西药组给予含格列喹酮和贝那普利的蒸馏水稀释液灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃2个月,灌胃期间各造模大鼠继续高脂饲料喂养。灌胃结束后,超声检测记录左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、短轴缩短率(FS)和射血分数(EF);取血ELISA检测糖化血红蛋白(HbA1c)、同型半胱氨酸(Hcy)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平;Masson染色观察...     

阿托伐他汀改善冠心病心力衰竭患者心功能的作用

目的：探讨阿托伐他汀对冠心病心力衰竭患者心功能的影响。方法：将2009年1月至2009年12月我院收治的136例冠心病心力衰竭患者,随机分为治疗组与对照组,每组68人,即：给予对照组患者采用常规的治疗如：控制钠盐摄入、镇静、吸氧、强心利尿等临床治疗;给予治疗组患者的治疗在常规临床治疗的基础上加用阿托伐他汀,每次10mg,一天三次,4周为一个疗程。一个疗程结束后,通过测定血清hs—CRP水平以及超声心动图测量左室射血分数来对比两组患者的疗效。结果：两组患者治疗后心功能指标及血清hs—CRP水平均较治疗前明显改善,治疗组患者的左室射血分数较对照组患者有明显升高。结论：阿托伐他汀对冠心病心力衰竭患者可以进一步改善心功能。     

阿托伐他汀改善冠心病心力衰竭患者心功能的作用

目的观察阿托伐他汀对冠心病心力衰竭患者心功能和高敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响。方法将124例冠心病心力衰竭患者(心功能Ⅱ~Ⅲ级)随机分为治疗组和对照组,2组均给予基础治疗,治疗组加服阿托伐他汀10 mg/d,治疗前及治疗后12周时测定血清hs-CRP水平,采用超声心动图测量左室射血分数(LVEF)。结果2组患者治疗后12周时心功能指标及血清hs-CRP水平均较治疗前明显改善,治疗组LVEF升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论冠心病心力衰竭患者在基础治疗中加用阿托伐他汀可以进一步改善心功能,抑制心肌微炎症可能是该药机制之一。