中药苦参水提物对慢性湿疹模型豚鼠炎症反应的影响

目的探讨中药苦参水提物对豚鼠慢性湿疹模型治疗效果。方法豚鼠24只,采用二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNFB)建立皮肤湿疹模型,随机分为3组,分别用生理盐水(模型对照组)、复方醋酸地塞米松软膏(阳性对照组)和苦参水提取物(药物治疗组),对湿疹部位皮肤连续涂抹给药14 d,以左、右耳质量之差来评价皮肤炎症肿胀度;流式细胞术检测外周血辅助性T(T helper,Th)细胞Th17(CD4+IL-17A~+T)的比例;qPCR检测耳片组织中维甲酸相关的孤儿受体γ(retinoic acid-related orphan receptorγ,RORγt)和IL-17AmRNA的相对表达量;Western Blot检测RORγt和IL-17A蛋白的表达;ELISA检测血清中促炎细胞因子白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及抑炎细胞因子IL-10。结果药物治疗组与模型对照组相比豚鼠皮肤肿胀度明显减轻,差异具有统计学意义(P 0.05);与模型对照组相比,药物治疗组不仅降低外周血炎症细胞Th17所占比例,并且能显著降低转录因子RORγt)和IL-17AmRNA相对表达量(P 0.05,P 0.01);同时,RORγt和IL-17A蛋白也均明显下降(P 0.05)。血清中细胞促炎细胞因子IL-6和TNF-α明显降低(P 0.05),而抑炎细胞因子IL-10则显著上升(P 0.05)。结论苦参水提物能够调节Th17细胞的分化从而抑制炎症反应,有效治疗湿疹。     

中药苦参水提取物抑制Th17细胞分化的研究

目的探讨苦参水提取物(Sophora flavescens aqueous extract,SFAE)对Th17细胞分化的影响。方法通过体外分离豚鼠淋巴结获取原代淋巴细胞,采用磁珠分选技术获得初始CD4^+T细胞。采用CCK-8法筛选SFAE对T细胞活力的最佳抑制浓度。通过白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)诱导建立初始CD4^+T细胞向Th17细胞分化的细胞模型,并以SFAE进行干预;采用流式细胞仪检测各组Th17细胞比例,采用qRT-PCR及Western Blot法检测各组细胞中视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-17F(IL-17F)的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,SFAE浓度在0.01 mg·mL^-1时对初始CD4^+T细胞的活力有抑制作用(P<0.01),选择该浓度作为后续实验浓度。与对照组比较,模型组能明显上调CD4^+IL-17A+T细胞的比例(P<0.001),上调RORγt、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,SFAE干预后模型处理组的CD4^+IL-17A+T细胞比例明显下调(P<0.05),STAT3、RORγt、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论SFAE能够抑制Th17细胞分化,降低Th17细胞比例,其作用机制可能是通过抑制转录因子RORγt及STAT3的活性,降低IL-17A、IL-17F的表达。     

解毒化瘀汤对活动期溃疡性结肠炎Th17/Treg细胞及其细胞因子的影响

目的观察解毒化瘀汤对湿热蕴结型活动期溃疡性结肠炎临床疗效及对Th17/Treg细胞及其相关细胞因子的影响。方法选取符合诊断和纳入标准的溃疡性结肠炎患者48例,按照随机数字表法分为对照组和治疗组各24例。其中对照组给予美沙拉嗪肠溶片口服,治疗组在对照组的基础上给予解毒化瘀汤口服。两组疗程均为12周,分别观察两组患者临床疗效,ELISA法检测白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,Real-Time PCR法检测Th17/Treg细胞的核转录因子RORγt/Foxp3m RNA的表达。结果治疗组总有效率为91.67%,明显优于对照组(P0.05);两组治疗后IL-17较治疗前均明显降低(P0.01),两组治疗后IL-10、TGF-β较治疗前均明显升高(P0.01),治疗后治疗组明显优于对照组(P0.01);两组治疗后RORγt m RNA、RORγt/Foxp3比值较治疗前均明显降低(P0.01),两组治疗后Foxp3 m RNA较治疗前均明显升高(P0.01),治疗后治疗组明显优于对照组(P0.05或P0.01)。结论解毒化瘀汤能够明显改善湿热蕴结型活动期溃疡性结肠炎患者临床症状,降低IL-17,增加IL-10、TGF-β水平,调控RORγt、Foxp3 m RNA的表达,促进Th17/Treg细胞平衡,减少复发率,疗效显著。     

30例慢性再生障碍性贫血患者Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt表达的研究

目的研究Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血中的表达和意义。方法应用流式细胞术(FCM)检测30例CAA患者及10例健康对照外周血Th17细胞表达比例,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-17mRNA、IL-23p19mRNA和RORγtmRNA的表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-23的表达水平。结果 CAA患者Th17细胞、IL-17mRNA、IL-23p19mRNA、RORγtmRNA、IL-17、IL-23的表达均高于健康对照组。结论 Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在CAA中异常表达,提示Th17细胞、IL-17、IL-23和RORγt在CAA发病中有一定作用。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

益肾安宫方治疗复发性流产疗效及对患者外周血T细胞亚群和细胞因子表达水平的影响

目的:探讨益肾安宫方用于复发性流产(RSA)的疗效及其对外周血T细胞亚群比例和细胞因子表达水平的影响。方法:选取89例RSA非孕期患者为研究对象,按照随机数表法分为治疗组、对照组,其中对照组给予黄体酮治疗,治疗组给予黄体酮联合益肾安宫方治疗,两组均持续治疗3周。比较两组治疗后1年的妊娠结局、治疗前后外周血T细胞亚群的比例和细胞因子表达水平。结果:治疗组的妊娠成功率和活产率均明显大于对照组(均P0.05)。治疗前两组Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例相比均无统计学差异(均P0.05)。经治疗,治疗组Th1和Th17细胞比例均明显低于对照组,Th2和Treg细胞比例均明显高于对照组(均P0.05)。治疗前两组IFN-γ、IL-4、IL-17和Treg水平相比均无统计学差异(均P0.05)。治疗后治疗组IFN-γ和IL-17水平均明显低于对照组,IL-4和TGF-β水平均明显高于对照组(均P0.05)。治疗前两组T-bet、GATA-3、STAT-3、FOXP3和RORγt mRNA表达水平相比均无明显差异(均P0.05)。治疗后治疗组T-bet、STAT-3和RORγt mRNA表达水平均明显低于对照组,GATA-3和FOXP3mRNA表达水平均明显高于对照组(均P0.05)。结论:益肾安宫方治疗RSA患者可以有效改善其妊娠结果,调节T细胞亚群分化失衡状态,并有效改善相应的细胞因子水平及转录因子的表达。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

补肾解毒法治疗多发性硬化的临床疗效及对细胞因子的作用

目的:探讨补肾解毒法联合激素治疗多发性硬化(multiple Sclerosis,MS)的临床疗效和对细胞因子的作用。方法:将60例MS患者随机分成治疗组和对照组,治疗组使用补肾解毒法+激素治疗4周,对照组仅使用激素治疗,比较治疗前后两组临床疗效(EDSS评分)、生活自理能力(ADL评分)、同时检测血清中促炎因子IFN-γ、IL-17,抑炎因子IL-6、IL-10。结果:治疗组总有效率为86. 67%,对照组总有效率为76. 67%,比较两组总有效率无显著性差异(P0. 01),说明疗效相当,EDSS评分和生活自理能力评分的方面,治疗组的改善优于对照组(P 0. 05),在细胞因子可见IFN-γ、IL-17降低明显,而抑炎IL-10升高明显(P 0. 05),抑炎因子IL-6在MS初期增高,治疗后有所下降,对应Th1/Th2细胞轴、Th17/Treg细胞轴也呈相应改变。结论:补肾解毒法联合激素治疗对于多发性硬化患者具有良好的临床疗效,值得推广应用,其作用机制可能是通过调节Th1/Th2细胞轴、Th17/Treg细胞轴中的细胞因子发挥作用。     

龙胆泻肝汤对变应性接触性皮炎模型小鼠Treg/Th17细胞平衡调节作用的实验研究

目的:观察变应性接触性皮炎Treg/Th17细胞平衡的变化,探讨龙胆泻肝汤治疗变应性接触性皮炎的部分干预机制。方法:将40只小白鼠随机分为4组:空白组、模型组、龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组,每组10只。采用DNCB皮肤涂抹方法制备小鼠背部ACD模型。模型复制成功后,龙胆泻肝汤组、氢化可的松琥珀酸钠组小鼠均按照成人2倍等效剂量灌胃,连续给药21 d,空白组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。实验结束后,取小鼠致敏部位皮肤,对皮肤组织中Foxp3、RORγt、IL-17 mRNA及蛋白的表达水平进行检测。结果:与空白对照组比较,模型对照组、西药组、龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型对照组比较,西药组和龙胆泻肝汤组小鼠皮肤组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);而IL-17、RORγt mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:Treg/Th17细胞失衡可能是变应性接触性皮炎的发病机制之一,而龙胆泻肝汤可能就是通过作用于该靶点,调节Treg/Th17细胞平衡,而实现其对变应性接触性皮炎的治疗作用。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。     

慢加亚急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症时Th17/Treg表达变化的实验研究

目的:观察Treg/Th17细胞失衡及相关细胞因子在慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症(IETM)时的表达变化,进而探讨Treg/Th17细胞对内毒素介导的炎症反应的调控作用。方法:采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,以腹腔注射D-Gal+LPS液(合D-Gal 400mg/kg,LPS 100μg/kg)急性攻击建立肝衰竭IETM大鼠模型。流式细胞术检测不同时间点大鼠外周血中Th17、Treg细胞频数,ELISA法测定不同时间节点大鼠结肠组织IL-10、TNF-α、IL-17A、IL-23、TGF-β水平。结果:与正常组比较,模型组Treg、Th17细胞频数在各时间节点均升高(P 0. 05),Treg、Th17细胞与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);与正常组比较,模型组结肠组织Treg/Th17型细胞因子IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IL-10各时间节点表达均升高(P 0. 05),且各炎症因子与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);正常组大鼠IL-10、TGF-β等抑炎因子水平高于IL-17A、IL-23、TNF-α等促炎因子,模型组Th17比例高于Treg,失衡向Th17方向偏移。结论:肝衰竭IETM发生时Treg/Th17细胞失衡,向Th17方向偏移,相关抑炎、促炎因子均释放增加,加剧IETM程度。     

青黛苦参配伍治疗溃疡性结肠炎大鼠的疗效及潜在机制的探究

目的 从Treg/Th17免疫平衡角度探究青黛、苦参配伍对UC大鼠治疗的作用机制。方法 60只健康雄性SD大鼠，随机均分为正常组、模型组、苦参组、青黛组、苦参+青黛组、西药组。4%DSS溶液饲喂复制UC大鼠模型，干预中正常组和模型组大鼠用生理盐水灌胃，治疗组以对应的药物溶液灌胃，疗程1周。干预结束后检测大鼠结肠黏膜的组织结构和TGF-β、RORγt、STAT3及FOXP-3蛋白的表达水平。结果 各治疗组大鼠的结肠黏膜组织中腺体破坏和炎性细胞的浸润均得到明显改善。药物治疗后结肠组织中RORγt、STAT3蛋白含量明显降低(P <0.01)，同时TGF-β及FOXP-3蛋白含量显著升高(P <0.01))。青黛配伍苦参的治疗组中大鼠结肠黏膜组织修复和炎症改善明显优于其他组别，同时和其他组别相比RORγt、STAT3蛋白的降低趋势和TGF-β、FOXP-3蛋白的升高趋势更加显著(P <0.05)。结论 青黛、苦参配伍可以改善UC大鼠结肠黏膜损伤和炎症反应，其机制可能为通抑制RORγt、STAT3蛋白和促进TGF-β及FOXP-3蛋白的表达来调节Th17/Treg免疫平衡，起...     

祛风消炎汤对类风湿关节炎大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的:探究祛风消炎汤对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究。方法:制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,分为模型组、祛风消炎汤低、中、高剂量组(10、20、40g/kg)及地塞米松组(2mg/kg),每组10只,另取10是正常大鼠作为对照组,共治疗35天。测定各组大鼠治疗前后足关节炎指数(AI)和右后足肿胀度,流式细胞术检测各组大鼠滑膜组织辅助性T细胞17(Th17)和调节性细胞T细胞(Terg)水平,RT-PCR法检测RORγt mRNA和Foxp3mRNA表达水平。结果:治疗后,相比较于模型组,祛风消炎汤能呈剂量依赖性降低CIA大鼠AI评分及足肿胀程度(P0.05)。与模型组比较,祛风消炎汤低、中、高剂量组Treg细胞占比及Foxp3mRNA水平显著增加(P0.05),Th17细胞占比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平显著降低(P0.05)。结论:祛风消炎汤对RA大鼠具有良好的治疗作用,其作用机制可能与通过降低RA大鼠滑膜组织RORγt水平,提升Foxp3水平来调节Th17/Treg平衡有关。     

补元汤干预COPD大鼠Th17细胞分化及其相关炎症因子分泌的影响

目的 观察补元汤对COPD模型大鼠T细胞辅助细胞17(Th17)及相关细胞因子之间的影响。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组,模型组,补元汤低、中、高剂量组,氨茶碱组,每组6只。使用烟熏联合气道内滴注脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,造模4周后开始药物干预,连续给药4周。分别于末次烟熏及末次给药后检测大鼠肺功能：TV、PEF、f、RT。HE染色观察大鼠肺组织病理改变;实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织RORγt、IL-17A、IL-21的mRNA及蛋白表达;免疫荧光双标记法检测肺组织RORγt/IL-17A、STAT3/IL-17A及IL-21/IL-17A共定位表达情况,流式细胞术检测肺组织中CD3⁺ CD4⁺ IL17A⁺ Th17细胞占CD4⁺ T细胞比例。结果 与模型组比较,补元汤各剂量组与氨茶碱组大鼠TV、PEF、f、RT指标均明显改善,肺组织病理损伤显著减轻,RORγt、IL-17A、IL-21的mRNA及蛋白含量明显下降,RORγt/IL-17...     

自拟苦参汤外敷联合依巴斯汀治疗湿疹临床分析

目的:探讨自拟苦参汤外敷辅助依巴斯汀治疗湿疹的临床疗效和可能机制。方法:选取慢性湿疹患者110例,以随机数字表分为两组,每组55例;对照组采用依巴斯汀联合复方氟米松软膏外敷疗法,观察组采用依巴斯汀联合自拟苦参汤外敷疗法。对比两组患者的临床疗效及治疗前后的皮损与瘙痒评分;同时,取患者皮损组织,以ELISA试剂盒检测Th1细胞因子IL-2、INF-γ,Th2细胞因子IL-4、IL-10及补体IgE的含量。结果观察组患者的痊愈率和总有效率均高于对照组,且痊愈率具有统计学差异(χ2=4.807,P=0.028)。治疗前,两组患者的EASI与瘙痒评分均无显著差异(t=1.855,0.368;P=0.0.87,0.702);治疗后,观察组EASI与瘙痒评分均显著低于对照组(t=11.847,19.586,P=0.000)。治疗前两组患者皮损组织的IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、IgE水平无显著差异(t=0.196,0.075,0.098,0.160,0.030;P=0.806,0.931,0.922,0.821,0.954);治疗后,观察组IL-2、INF-γ水平显著高于对照组(t=2.685,2.896;P=0.038,0.026),IL-4、IL-10、IgE水平显著低于对照组(t=2.790,2.518,3.356;P=0.031,0.042,0.014)。结论:自拟苦参汤在纠正慢性湿疹患者Th1/Th2细胞功能失调方面具有一定作用,利于控制改善病情、提高治疗效果。     

Th17/Treg平衡在湿热型结肠炎大鼠中的变化及黄芩汤的调节作用

目的:观察湿热型结肠炎大鼠模型中Th17/Treg的平衡变化以及黄芩汤对Th17/Treg的调节作用,从免疫学的角度探讨其治疗湿热型结肠炎的机制。方法:应用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法等复合因素造出大鼠湿热模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法建立湿热+TNBS结肠炎模型;将60只大鼠随机分为空白组、湿热+TNBS结肠炎模型组、黄芩汤组、美沙拉嗪组。对大鼠进行一般临床观察,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析大鼠血清中白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)水平,用Western blot方法检测结肠组织中Treg转录因子FOXP3和Th17转录因子RORγt的表达水平。结果:黄芩汤免煎剂0.12g/100g能够有效的缓解湿热型结肠炎的炎症反应,与对照组比较,湿热+TNBS结肠炎大鼠模型中Th17/Treg表达失衡,Th17类细胞因子IL-17和IL-6和转录因子RORγt表达升高而Treg类细胞因子IL-10和TGF-β和转录因子FOXP3表达降低;与模型组相比,黄芩汤能够降低IL-17、IL-6和RORγt的水平而增强IL-10、TGF-β和FOXP3的表达。结论:Th17/Treg失衡可能与湿热型结肠炎的发生发展密切相关,黄芩汤能够有效的调节Th17/Treg的平衡关系,这可能是其治疗湿热型结肠炎的免疫机制之一。     

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。     

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

目的研究16k D黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响,探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组,另设空白对照组;各治疗组腹腔注射药物14天,对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)和叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞比例(P0.01),提高CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例(P0.01)。Western blot结果显示黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠脾组织中RORγt的表达(P0.01),提高Foxp3的表达(P0.01)。结论黄芪糖蛋白提高Foxp3的表达水平,降低RORγt的表达水平,恢复Th17/Treg细胞之间的平衡,可能是黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的机制之一。     

苦参软膏对小鼠湿疹模型的治疗作用及免疫机制分析

目的观察苦参软膏对小鼠湿疹模型的治疗作用并探讨其免疫机制。方法BALB/cJ小鼠80只,随机分成4组:对照组、模型组、地塞米松组、苦参软膏组,每组20只,雌雄各半。模型组、地塞米松组、苦参软膏组建立湿疹模型,建模成功后地塞米松组、苦参软膏组给予相应药物外敷,对照组、模型组不予以任何处理,持续4周。试验结束后,实时荧光逆转录法及Western blotting法测定的小鼠湿疹皮肤组织Notch1、转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA、蛋白水平;酶联免疫吸附法测定白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组湿疹皮肤组织炎症细胞计数水平、Notch1、TGF-β1 mRNA、蛋白水平、IL-2、IL-6、TNF-α水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、苦参软膏组湿疹皮肤组织炎症细胞计数水平、Notch1、TGF-β1 mRNA、蛋白水平、IL-2、IL-6、TNF-α水平明显下降(P<0.05);地塞米松组、苦参软膏组湿疹皮肤组织炎症细胞计数水平、Notch1、TGF-β1 m RNA、蛋白水平、IL-2、IL-6、TNF-α水平相近(P>0.05)。对照组皮肤结构正常,见复层鳞状上皮,有角化物,真皮层无炎细胞浸润;模型组表皮坏死,见瘢痕组织颗粒层、棘层增厚,真皮层血管充血扩张、水肿伴大量炎细胞浸润;地塞米松组、苦参软膏组仍可见中性粒细胞及嗜酸性细胞浸润,但数量明显较模型组减少,表皮结构清晰趋于正常。结论苦参软膏能抑制小鼠湿疹模型皮肤炎症反应,其机制与苦参软膏抑制Notch1、TGF-β1mRNA、蛋白的表达进而抑制IL-2、IL-6、TNF-α的表达有关。     

复方芩兰口服液调控流感病毒感染致重症肺炎动物模型免疫功能的机制研究

目的:探究复方芩兰口服液通过NF-κB通路对流感病毒感染致重症肺炎(severe pneumonia,SP)动物模型免疫功能的调控机制.方法:将60只小鼠分为对照组、模型组和观察组,其中模型组和观察组制备流感病毒感染的SP模型,在滴入H1N1第二天观察组使用复方芩兰口服液灌胃.HE染色ELISA检测肺组织损伤和炎性因子[白细胞介素1β(interlenkin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interlenkin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)],流式细胞术检测T辅助细胞17(T helper cells 17,Th17)和调节T细胞(regulatory T cells,Treg),qPCR和Western blot检测淋巴细胞中NFκB通路水平.结果:模型组及观察组肺指数、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05),且观察组以上指标水平显著低于模型组(P<0.05).模型组的Th17和Th17/Treg显著高于对照组而Treg显著低于对照组(P<0.05);观察组的Th17和Th17/Treg显著低于模型组而Treg显著高于模型组(P<0.05).与对照组比较,模型组及观察组的RORγt mRNA,NF-κB、RelB mRNA及蛋白水平均高于对照组(P<0.05),FOXP3 mRNA水平低于对照组(P<0.05);且观察组的RORγt、NF-κB、RelB mRNA及蛋白水平显著低于模型组(P<0.05),FOXP3 mRNA水平高于模型组(P<0.05).结论:复方芩兰口服液可以通过抑制NF-κB通路诱导Treg而抑制Th17,从而调节免疫炎性反应,缓解由流感病毒引起的SP.