蛇葡萄素对人膀胱癌T_(24)细胞株凋亡的作用研究

目的:研究蛇葡萄素对体外人膀胱癌细胞株T24的凋亡作用。方法:以不同浓度的蛇葡萄素作用于体外培养的人膀胱癌细胞株T24应用MTT的培养检测凋亡率。结果:浓度为80μg/ml、40μg/ml的蛇葡萄素对体外人膀胱癌细胞株T24的凋亡率率明显高于浓度为20μg/ml、10μg/ml的蛇葡萄素。结论:蛇葡萄素可促进体外人膀胱癌细胞株T24凋亡,在一定范围内的浓度达到最大的凋亡率,不会因浓度增加而使凋亡率增加。浓度为80μg/ml、40μg/ml更能有效的促进人膀胱癌细胞株T24的凋亡。     

Her-2阳性胃癌细胞株对曲妥珠单抗药物敏感性的实验研究

目的通过体外实验研究Her-2阳性胃癌细胞株对曲妥珠单抗的药物敏感性。方法采用Western-blot法检测人胃癌细胞系NCI-N87、SGC7901、MKN48以及MKN25等4种胃癌细胞株的Her-2蛋白表达水平;采用MTT法检测曲妥珠单抗对细胞株的抑制率。结果 4种胃癌细胞株均存在Her-2蛋白表达,其中NCI-N87细胞表达水平最高（P=0.000）;曲妥珠单抗浓度分别为10μg/ml、20μg/ml以及40μg/ml时,NCI-N87细胞抑制率最高（均P=0.000）,半数抑制浓度IC50最低;随着曲妥珠单抗浓度的增加,4种胃癌细胞株的细胞抑制率均增加。结论曲妥珠单抗能抑制Her-2阳性胃癌细胞株的生长,这种抑制作用与细胞Her-2蛋白表达水平相关,并且存在剂量依赖性。     

蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用

目的探讨蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞的增殖及细胞周期的影响。方法以浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的蜂毒多肽作用于体外培养的人膀胱癌T24细胞,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）的培养增殖抑制作用,用流式细胞仪检测蜂毒多肽对细胞增殖核抗原（PCNA）表达及对该细胞周期的影响。结果蜂毒多肽能够在体外抑制人膀胱癌T24细胞的增殖活性;抑制PCNA的表达,呈剂量依赖性,各浓度组PCNA量均较对照组降低（P〈0.05或P〈0.01）;干扰细胞周期,各浓度组G0/G1期均低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,S期高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,浓度10.0μg/ml和100.0μg/ml组G2/M期均高于对照组（P〈0.01）。结论蜂毒多肽可抑制膀胱癌T24细胞的增殖,其作用机制可能与PCNA的表达抑制及细胞周期受到干扰有关。     

脂联素重组体对人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A侵袭及转移的影响

目的研究人脂联素重组体（RA）对人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A体外侵袭能力的影响,探讨临床应用RA治疗子宫内膜癌的可行性。方法将HEC-1-A细胞分设对照组和RA加药组,作用一定时间后,分别以MTT法、粘附实验、Transwell小室实验、体外细胞迁移实验检测RA对人子宫内膜癌细胞增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果RA对ECM和FN粘附能力影响的程度不同,对ECM的敏感眭大于FN。RA浓度高于5．0μg／ml时,对HEC-1—A细胞生长具有明显的抑制作用（P〈0.01）,并能明显地降低肿瘤细胞体外侵袭能力（P〈0．01）,侵袭抑制率随RA浓度的升高而增加。RA浓度高于5．0μg/ml时,明显地抑制肿瘤细胞的迁移能力（P〈0．01）。结论脂联素重组体在大于5．0μg／ml时,可抑制人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A的侵袭及转移能力,RA可望成为晚期、无法耐受手术和大剂量放化疗及复发性子宫内膜癌患者的综合治疗方法之一。     

超声联合紫杉醇对卵巢癌细胞HO-8910PM的体外作用

目的：观察超声（Ultrasound,US）联合紫杉醇（Taxol）对高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的体外抑制作用。方法：筛选1个对细胞抑制率约10％的超声剂量。观察此剂量时超声辐照与药物联合应用（6μg／ml或18μg／m1）对肿瘤细胞的抑制率。结果：紫杉醇浓度为6μg／ml时Taxol、Taxol＋US组细胞抑制率分别为12．4％和11．7％（P〉0．05）,浓度为18μg／ml时抑制率分别为27．8％和42．0％（P〈0．05）结论：超声可增强紫杉醇对卵巢癌细胞的抑制效应,这种协同作用只有当药物浓度高于临界值时才存在。     

甲状旁腺素对人甲状腺髓样癌细胞调控作用的实验研究

目的探讨甲状旁腺素（parathyroid hormone,PTH）和甲状旁腺素受体单抗（Anti-Parathyroid Hormone Receptor1antibody,anti-PTHR1）对人甲状腺髓样癌细胞株（TT细胞株）体外生长及细胞增殖的影响。方法体外培养TT细胞株,药物作用分为PTH组,anti-PTHR1组,各组经药物处理后,先在倒置显微镜下观察细胞的生长状况,MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR法检测PTHmRNA的表达变化情况。结果倒置显微镜下可较明显看到细胞的变化,MTT结果显示,PTH和anti-PTHR1能有效地抑制TT细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系,2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/Lanti-PTHR1能明显提高细胞的生长抑制率（P〈0.05）,RT-PCR结果显示药物作用后PTHRmRNA的表达下调（P〈0.05）。结论 2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/L的anti-PTHR1可抑制TT细胞的增殖。阻止细胞周期进展,明显降低其增殖指数,在诱导凋亡中起重要作用。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用。方法采用不同浓度TNF-α（5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）处理3T3-L1脂肪细胞48h、采用20μg/ml TNF-α处理不同时间（6h、12h、24h、48h）及罗格列酮（10μmol/ml）预处理6h的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mlTNF-α作用48h;以2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的摄取率。结果与对照组比较,5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%（P〈0.01）、43%（P〈0.01）、58%（P〈0.01）;20μg/L TNF-α处理3T3-L1脂肪细胞6h、12h、24h、48h使葡萄糖的摄取率分别减少10%（P〈0.05）、28%（P〈0.01）、40%（P〈0.01）、57%（P〈0.01）,罗格列酮预处理能使20μg/ml TNF-α组脂肪细胞对葡萄糖的摄取率增加37%（P〈0.01）。结论TNF-α以浓度和剂量依赖方式导致脂肪细胞胰岛素抵抗;罗格列酮能明显改善此作用。     

体外细胞培养观察咖啡酸锗对U14瘤细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨咖啡酸锗对U14瘤细胞增殖的抑制作用。方法：通过体外培养U14瘤细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测0.01～10μg/ml终浓度咖啡酸锗对U14瘤细胞生长的抑制程度;台盼兰拒染法计算24h和48h后的细胞数量及细胞死亡率。结果：MTT比色法显示,咖啡酸锗各浓度对U14瘤细胞均有增殖抑制作用,增殖抑制率以1μg/ml时最显著（45.58%）,且呈一定的剂量依赖性。台盼兰染色计数培养24h及48h各用药组肿瘤细胞死亡率均升高,与阴性对照组比较具有明显差异（P〈0.01）。结论：咖啡酸锗对U14瘤细胞的增殖有明显抑制作用。     

杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响,筛选杜仲抗肿瘤的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮,以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度分别加入H1299细胞中,用MTT法检测H1299细胞的增殖情况。结果杜仲总黄酮为25μg、50μg、100μg、200μg/ml剂量组的OD490吸光值均降低,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.05）。结论杜仲总黄酮能直接抑制体外培养的人肺腺癌细胞H1299细胞增殖。     

大黄酸及大黄素对人肾小管上皮细胞增殖及TGF—β1启动子活性的调控作用

目的：观察大黄酸和大黄素对人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖及对人转化生长因子-β1（TGF-β1）基因启动子活性的作用。方法：应用MTT法观察不同浓度大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml）对人肾小管上皮细胞增殖的作用;将人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因组成重组体phTGF2．14,采用脂质体法转染至人肾小管上皮细胞中,分别加入不同浓度的大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml和50μg/ml）进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果：大黄酸和大黄素各浓度组对人肾小管上皮细胞均具有明显的抑制HK-2细胞增殖的作用（P〈0．01）,且呈剂量依从性;大黄酸和大黄素浓度为lμg/ml和10μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性无影响,当增大其浓度为50μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性有抑制作用,其抑制率分别为38．0％和36．0％,与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。结论：大黄酸和大黄素能够抑制人肾小管上皮细胞增殖,当浓度为50μg/ml时对人TGF-β1基因启动子活性具有一定的抑制作用。     

前癃通含药血浆对前列腺间质细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨前癃通胶囊含药血浆对体外培养前列腺间质细胞增殖和凋亡的影响,为中药复方治疗前列腺增生（BPH）提供实验理论依据.方法 按随机原则对入选患者进行实验分组,制备低、中、高剂量前癃通含药血浆,当细胞接近长成单层后进行免疫荧光检测间质细胞鉴定,加含药血浆后培养0、24、48、72 h 再分别进行[3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT 法3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]检测,培养到24 h 进行流式细胞分析法检测（Flow Cytometry,FCM）.结果 MTT 法检测,不同剂量含药血浆作用于前列腺间质细胞以后,24 h时高剂量组与各组比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）;48 h 时各剂量组间比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）;72 h 时高、中剂量组与空白组比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）,高剂量组与各组比较差异均有显著统计学意义（P〈0.01）.流式细胞检测,中剂量组与空白组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）;高剂量组与各组间比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）.结论 中药前癃通含药血浆可抑制体外培养前列腺间质细胞增殖,促进前列腺间质细胞凋亡.     

心乐胶囊对病毒性心肌炎模型小鼠TNF-α、TGF-β1mRNA表达的影响

目的：通过观察心乐胶囊对CVB3致病毒性心肌炎BABL/c小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达影响,探讨心乐胶囊治疗病毒性心肌炎的作用机制和疗效。方法：健康雄性BABL/c小鼠60只,随机数字表法分为6组：空白组、模型组、玉丹荣心丸组及心乐胶囊高、中、低剂量组,每组10只。利用原位杂交技术观察心乐胶囊对CVB3致病毒性心肌炎小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达影响。结果：与空白组比较,模型组小鼠心肌组织TNF-αmRNA表达增高,有显著差异（P〈0.05）,模型组小鼠心肌组织TGF-β1 mRNA表达增高,有显著差异（P〈0.01）;与模型组比较,玉丹荣心丸组、心乐胶囊各剂量组均可降低心肌组织TNF-αmRNA表达,有显著差异（P〈0.01）,玉丹荣心丸组、心乐胶囊各剂量组均可降低心肌组织TGF-β1 mRNA表达,有显著差异（P〈0.05）;与玉丹荣心丸组比较,心乐胶囊各剂量组均可使小鼠心肌组织TNF-α、TGF-β1 mRNA表达降低,有显著差异,其中以心乐胶囊高剂量组最为明显（P〈0.01）。结论：（1）心乐胶囊能够明显地降低病毒性心肌炎小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达。（2）心乐胶囊可以减轻心肌细胞炎症反应,抗心肌纤维化,保护心肌,减轻心肌的损伤。     

大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠血清中乙酰胆碱和一氧化氮及回盲部形态学的影响

目的研究大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠血清中乙酰胆碱（Ach）和一氧化氮（NO）含量及大鼠回盲部形态学变化的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,假手术组,大承气汤高、中、低剂量组（以下简称高、中、低剂量组）,每组10只。除正常组外,假手术组用针线穿透肠系膜而不结扎,其余各组均造成不完全性肠梗阻模型。各组大鼠在手术造模前0．5h及造模后连续给药3d。正常组、假手术组、模型组给予生理盐水,高、中、低剂量组分别给予相应剂量的大承气汤灌胃。运用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清中Ach、NO含量;对大鼠回盲部进行切片、HE染色并观察其形态学变化。结果（1）高、中、低剂量组与模型组大鼠回盲部黏膜损伤评分比较,差异有统计学意义（P〈0．011;高剂量组与中、低剂量组大鼠损伤评分比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）高、中、低剂量组与模型组血清中Ach、NO含量比较,差异有统计学意义（P〈O．01）;高剂量组与中、低剂量组Ach、NO含量比较,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）。结论大承气汤不同剂量对不完全性肠梗阻大鼠肠道可不同程度地减轻黏膜损伤,降低有害物质的产生。     

大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠血清中IL-1和IL-6及回盲部形态学的影响

目的探讨大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠白介素-1（IL-1）和白介素-6（IL-6）及回盲部形态学的影响。方法将60只SD大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,假手术组,大承气汤高、中、低剂量组（以下简称高、中、低剂量组）。除空白对照组外,假手术组造成手术创伤,其余大鼠制备成不完全性肠梗阻模型,空白对照组、模型对照组、假手术组给予相同剂量的生理盐水灌胃,高、中、低剂量组分别以1.16、0.58、0.29 g/mL灌胃治疗。（1）运用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清中IL-1、IL-6含量;（2）对大鼠回盲部进行HE染色并观察其形态学变化。结果（1）与模型对照组比较,高、中剂量组血清中IL-1、IL-6含量明显降低（P〈0.01）;（2）高、中、低剂量组与模型对照组大鼠回盲部黏膜损伤评分差异有统计学意义（P〈0.01）,高剂量组与中、低剂量组大鼠损伤评分比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论大承气汤降低不完全性肠梗阻血清IL-1以及IL-6含量,保护不完全性肠梗阻肠道上皮细胞,具有肠屏障保护功能。     

靶向蛋白酪氨酸磷酸酶1B小分子干扰RNA对结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响

目的:探讨沉默蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响。方法:应用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默PTP1B的表达(shRNA-PTP1B),采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别在mRNA和蛋白水平检测抑制效果。CCK-8被用于检测沉默PTP1B表达对肿瘤细胞增殖的影响。在体外实验的基础上建立裸鼠模型,建立稳定表达干扰RNA细胞系,观察干扰RNA稳定表达对人结肠癌裸鼠移植成瘤的影响。结果:shRNA-PTP1B有效沉默LoVo细胞PTP1B mRNA及蛋白的表达,成功筛选shRNA-PTP1B稳定表达细胞株LoVo/shRNA细胞。在体外试验中与对照组比较LoVo/shRNA细胞的增殖能力明显下降。LoVo/shRNA细胞裸鼠移植成瘤体积,明显减小(P均<0.05)。结论:shRNA-PTP1B可以沉默人结肠癌PTP1B基因的表达,显著抑制LoVo细胞的增殖,降低LoVo细胞的成瘤能力。     

前癃通胶囊抑制良性前列腺增生基质细胞TGF-β1表达的体外实验研究

目的研究前癃通胶囊干预下,TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。方法:采用MTT比色法检测前癃通胶囊对体外培养良性前列腺增生前列腺基质细胞增殖的抑制作用;应用逆转录-多酶链反应(RT-PCR)技术,观察前癃通胶囊干预下TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。结果 3种浓度的前癃通胶囊能抑制前列腺基质细胞的增殖,且随着时间的延长抑制作用增强,高浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有明显的抑制作用,与中浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);中浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有抑制作用,与低浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。前列腺基质细胞中的TGF-β1mRNA表达随着前癃通胶囊(药液)浓度的增高呈现下降趋势。TGF-β1mRNA在高浓度组的表达最低,空白组的表达最高。高、中、低浓度组分别与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);高、中浓度组与低浓度组比较TGF-β1mRNA的表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论前癃通胶囊对前列腺基质细胞的增殖有较强的抑制作用,能降低TGF-β1mR-NA在基质细胞中的表达。     

靶向血管内皮生长因子受体3基因的小干扰RNA表达载体构建及其生物学效应

目的构建靶向血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（psiRNA-VEGFR-3）,并观察其抑制人结肠癌细胞株LoVo细胞中VEGFR-3基因表达的效果及生物学效应。方法设计并合成1对VEGFR-3编码基因的反向重复序列,定向克隆至载体pSUPER,构建siRNA真核表达载体,利用脂质体2000将构建的psiRNA-VEGFR-3载体转入LoVo细胞中,应用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGFR-3mRNA表达水平的变化,四甲基偶氮唑蓝法观察细胞生长变化、凋亡率及细胞周期的变化。结果成功构建针对VEGFR-3基因的siRNA表达载体。psiRNA-VEGFR-3可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达（P〈0．01）;转染psiRNA-VEGFR-3后能够诱导LoVo细胞发生明显凋亡。结论psiRNA-VEGFR-3载体能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应,通过下调VEGFR-3基因表达可以抑制细胞增殖,诱导LoVo细胞发生明显凋亡。     

共培养体系中TGF-β1沉默大肠癌LoVo细胞对巨噬细胞IL-12和TNF-α分泌的影响

目的研究TGF-β1沉默人大肠癌LoVo细胞对人巨噬细胞系28SC免疫功能的影响。方法将构建的TGF-β1siRNA稳定表达LoVo细胞与人巨噬细胞系28SC共培养,酶联免疫吸附实验检测培养液中IL-12和TNF-α水平,同时设立对照组空载体pSUPER-neo-gfp稳定转染LoVo细胞＋28SC。结果 TGF-β1siRNALoVo＋28SC组IL-12和TNF-α分泌量高于对照组（均P〈0.05）;TGF-β1＋28SC组IL-12和TNF-α分泌量与LoVo＋28SC组之间无明显差异（P〉0.05）。结论大肠癌LoVo细胞分泌的TGF-β1能通过影响IL-12和TNF-α的分泌抑制巨噬细胞的免疫功能,有望通过阻断TGF-β1信号转导改善肿瘤免疫微环境抑制大肠癌的发生发展。     

锰对大鼠肝脏线粒体氧化损伤的作用机制

目的:观察不同剂量的锰对大鼠肝脏线粒体的氧化损伤作用,探讨其相关机制。方法:将24只雄性SD大鼠随机均分为对照组和MnCl₂低、中、高剂量组,分别腹腔注射生理盐水和2、8、32 g/kg MnCl₂溶液,每天1次,连续30 d后取大鼠肝组织测定线粒体PT孔、线粒体膜肿胀度、线粒体膜电位、琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C、羟自由基(OH·)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。结果:各组间肝线粒体PT孔差异均有统计学意义(P<0.01);MnCl₂高剂量组线粒体膜肿胀度小于对照组和MnCl₂低剂量组(P<0.05);MnCl₂高剂量组线粒体膜电位光密度均低于其他3组(P<0.05~P<0.01)。与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂中、高剂量组肝线粒体SDH均下降(P<0.01),且MnCl₂中、高剂量组间差异亦有统计学意义(P<;与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂高剂量组肝线粒体细胞色素C上升(P<0.05)。MnCl₂高剂量组肝线粒体OH·显著高于其他3组(P<0.01);与对照组比较,MnCl₂低、中、高剂量组大鼠肝线粒体GSH-PX显著降低(P<0.05)。结论:锰可导致线粒体氧化损伤,引起大鼠肝线粒体PT孔开放、膜电位下降,SDH、GSH-PX降低,细胞色素C、OH·显著升高,对机体产生毒性作用。     

复方中药紫龙金抑制肾癌ketr-3细胞增殖的血清药理学研究

目的观察复方中药紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞生长增殖的抑制作用。方法运用血清药理学方法,选择不同浓度的含紫龙金大鼠血清与ketr-3细胞共同孵育,于不同时间用生物倒置显微镜观察细胞形态变化,W ST-8比色法检测紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞的增殖抑制率。结果紫龙金含药血清作用ketr-3细胞48 h后,细胞呈现典型的凋亡形态学改变,可见部分细胞变圆,体积变小,有凋亡小体产生;且抑制作用呈现时间和剂量依赖关系,与对照组比较,各浓度含药血清（5%、10%、20%）作用24 h后细胞增殖抑制率无明显差异（P〉0.05）,作用48 h后细胞增殖抑制率分别为4.9%（P〉0.05）、22.6%（P〈0.01）、28.7%（P〈0.01）。结论紫龙金含药血清可有效抑制人肾癌ketr-3细胞体外增殖。