高原环境中妊娠期母体缺氧对胎羊心肌组织影响的实验研究

目的 观察高原环境中妊娠期母体绵羊不同程度的缺氧造成胎羊心肌组织及线粒体结构和功能的改变。方法 选取 24 只平原环境生长的妊娠期绵羊，随机分为平原对照组（LAC），轻度低氧暴露组（MHE）和重度低氧暴露组（SHE），应用人工实验舱，通过调整各项参数，精确模拟高原低氧的气候环境，制作不同程度缺氧的妊娠期动物模型。实验结束后，解剖胎羊，对胎羊及其重要内脏器官称重。获取各组胎羊心肌组织进行病理切片，用苏木素-伊红（HE）染色法、扫描电子显微镜及透射电子显微镜技术检测观察胎羊心肌组织和线粒体的病理改变情况。结果 和LAC组相比，MHE组和 SHE 组胎羊体重均明显降低（P<0.05）；和 LAC 组或 MHE 组相比，SHE 组胎羊心脏绝对重量明显降低（P<0.05），而心脏相对重量未见明显差异性改变（P>0.05）。心肌组织样本HE 染色、扫描电子显微镜及透射电子显微镜显示，MHE 组、 SHE 组和 LAC 组相比，胎羊的心肌组织出现了不同程度的损伤，线粒体的数量、大小、形态结构及分布发生不同程度的异常，其中以 SHE 组心肌和线粒体异常和损伤最为显著。结论 高原缺氧环境能对胎儿心肌组织及线粒体造成损伤，同时随着海拔高度的升高，心肌及线粒体的损伤程度逐渐加重，提示在高原缺氧状态下，心肌损伤程度和线粒体数量、大小、形态和分布具有相关性。     

高原环境下妊娠期母体缺氧对子代心脏发育的蛋白组学改变产生的影响

目的 探索高原环境中母体绵羊妊娠期缺氧对胎羊心脏发育的蛋白组学影响。方法 将15只妊娠期绵羊随机分为平原对照组(LAC，n=6)，轻度低氧暴露组(MHE，n=5) 和重度低氧暴露组(SHE，n=5)。应用高原人工实验舱建立不同程度的妊娠期绵羊缺氧模型，建模120天后应用iTRAQ 技术检测评估胎羊心脏不同蛋白的表达情况。结果 本实验共鉴定了16676个肽段和2506个蛋白质，共鉴定出80个差异表达的蛋白，其中41个蛋白表达上调，39个蛋白表达下调。不同分组间检验阈值为缺氧诱导蛋白表达水平的1.3倍以上，P＜0.05，差异有统计学意义。结论 本实验证实母体妊娠期缺氧能够显著影响胚胎心脏发育过程中与缺氧相关蛋白的表达，验证母体妊娠期低氧环境在子代先天性心脏损伤发生中的作用及其可能机制，为临床先天性心脏疾病的一级预防提供了借鉴。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌纤维化中基质金属蛋白酶通路及相关因子的影响

目的观察厄贝沙坦是否对抗糖尿病大鼠心肌纤维化,探讨其对基质金属蛋白酶(MMPs)通路相关因子的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照(Con)组、糖尿病(DM)组、厄贝沙坦+糖尿病组(Ir+DM),每组10只。高糖髙脂饮食12周后,Masson染色观察心肌组织纤维化改变。ELISA测定心肌组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、组织抑制因子2(TIMP-2)含量及基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、MMP-14蛋白表达。结果与Con组比较,DM组FBG增加,心体比增大,心肌胶原纤维粗大,部分胶原沉积,ColⅠ、ColⅢ、TIMP-1、TIMP-2含量升高[(133.80±6.24)vs(262.07±9.84),(33.80±2.34)vs(71.42±2.59),(10.64±1.04)vs(38.05±1.29),(7.79±0.48)vs(23.15±0.82)ng/mg,P0.01],MMP-2、MMP-9蛋白表达降低[(1.60±0.10)vs(0.80±0.05),(0.51±0.03)vs(0.26±0.01)ng/mg,P0.01],MMP-14蛋白表达增加[(1.01±0.06)vs(1.49±0.05),P0.01]。与DM组比较,厄贝沙坦干预改善心肌组织纤维化,ColⅠ、ColⅢ含量减少,TIMP-1、TIMP-2水平降低[(262.07±9.84)vs(167.12±7.88),(71.42±2.59)vs(43.23±2.30),(38.05±1.29)vs(15.66±1.42),(23.15±0.82)vs(11.01±0.90)ng/mg,P0.01],MMP-2、MMP-9蛋白表达增加[(0.80±0.05)vs(1.30±0.05),(0.26±0.01)vs(0.43±0.02),P0.01],MMP-14蛋白表达降低[(1.49±0.05)vs(1.07±0.05),P0.01]。结论糖尿病可诱导心肌纤维化,厄贝沙坦通过调节MMPs信号通路及相关因子减轻纤维化程度。     

缺氧条件下心肌组织的形态学改变及缺氧诱导因子-1在心脏内的表达

目的观察缺氧条件下心肌组织的形态学改变以及缺氧诱导因子-1(HIF-1α)在心脏内的表达情况。方法将40只SD大鼠随机分为正常对照组、低氧12 h组、低氧24 h组,低氧36 h组。其中低氧12 h、低氧24 h、低氧36 h组制备体内缺氧模型。采用95%氮气+5%氧气,制备缺氧模型,缺氧时间分别为12、24、36 h,每天缺氧时间为2 h,其他时间置于空气中。所有大鼠在实验结束时均实施腹腔注射麻醉,断髓法处死,制备心肌组织石蜡切片,HE染色镜下观察心肌组织的形态学变化。SABC免疫组化法检测各组大鼠心肌细胞HIF-1α的表达情况。结果正常对照组心肌组织切片心肌细胞结构完整,核大呈圆形;低氧组大鼠的心肌细胞结构逐渐变化,心肌细胞明显肿胀,细胞间隙明显增加,核变小而不规则。免疫组化染色切片HIF-1α蛋白阳性物质定位于细胞核和细胞质,呈弥散或颗粒状。与正常对照组心肌组织HIF-1α的蛋白IOD比较,各缺氧组HIF-1α的蛋白IOD明显增加,有统计学意义(P<0.05)。结论低氧可诱导大鼠心肌组织出现破坏。HIF-1α在缺血心肌组织中高表达,可能参加了心肌缺血的代偿机制,有助于改善心肌供血。     

p38MAPK、CARP在间歇低氧大鼠心肌重塑中的作用

目的 通过构建间歇低氧大鼠模型,检测模型大鼠心肌肥厚指数、心肌组织中p38MAPK、心锚重复蛋白(CARP)蛋白表达量的变化,探讨间歇低氧对心肌重塑的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠24只,随机分3组:间歇低氧8周组(IH8)、间歇低氧4周组(IH4)、常氧组(NC)每组8只.测定各组体质量、左心室质量及左室肥厚指数;用免疫组织化学法测定各组心肌组织p38MAPK、CARP蛋白含量,并做HE染色,观察各组心肌组织形态学变化.结果 与NC组大鼠相比,IH4、IH8组大鼠心肌肥厚指数增加,IH8组更为明显(P＜0.05);IH8、IH4组p38MAPK、CARP蛋白表达均较NC组增加,IH8组较IH4组更为明显(P＜0.001);HE染色结果显示IH4、IH8组心肌细胞排列紊乱,IH8组更为明显.结论 间歇低氧与心肌重塑密切相关,p38MAPK通路与CARP的表达上调可能是其发生机制之一.     

胰激肽原酶对自发性高血压大鼠心室重构的影响

目的观察胰激肽原酶对自发性高血压大鼠(SHR)血压和左室肌基质金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其改善心室重构的作用。方法雄性15周龄SHR24只,随机分成SHR组、胰激肽原酶(PK)组、卡托普利(Cap)组,每组8只,另取8只雄性同龄健康Wistar大鼠(WKY)作为正常血压对照组。实验4周后行颈动脉插管测量血压,处死动物,取出心脏行左室重量指数测定,心肌组织经VanG-ieson染色(VG染色)作形态学观察及胶原测定,用免疫组化SP法检测心肌组织切片内MMP-2、TGF-β1的表达。结果SHR组收缩压(SBP)、左心室质量指数(LVMI)、心肌胶原体积比例(CVF)和心肌血管周围胶原与管腔面积的比例(PVCA)及MMP-2、TGF-β1的表达较WKY组明显升高(P<0·05),应用胰激肽原酶后,各指标均显著性下降[SBP(183±12vsSHR:234±23)mmHg,LVMI(2·89±0·15vsSHR:3·06±0·18)mg/g,CVF(0·17±0·03vsSHR:0·26±0·05)%,PVCA(0·57±0·26vsSHR:0·99±0·47)%](P均<0·05),除SBP外,余各指标下降程度均与Cap组无差异。结论胰激肽原酶具有逆转高血压心室重构的作用,其机制可能与抑制心室肌高表达的MMP-2、TGF-β1有关。     

龈沟液中Shh蛋白、MMP-8与老年慢性牙周炎患者炎症程度的相关性

目的探讨龈沟液中Shh蛋白、基质金属蛋白酶(MMP)-8与老年慢性牙周炎患者炎症程度的相关性。方法回顾性选取90例老年慢性牙周炎患者,根据牙龈指数(GI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)、X线片显示牙槽骨吸收程度(ABL)进行分组,其中轻度组29例,中度组31例,重度组30例,另选取牙周健康志愿者30例作为对照组,比较4组龈沟液中Shh蛋白、MMP-8水平。结果慢性牙周炎患者Shh蛋白、MMP-8表达水平显著高于对照组(P0.05);中度组Shh蛋白、MMP-8表达水平显著高于轻度组,重度组Shh蛋白、MMP-8表达水平显著高于中度组(P0.05);龈沟液中Shh蛋白、MMP-8联合检测反映患者轻度与中度炎症受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.933,显著高于单独Shh蛋白、MMP-8检测下ROC曲线下面积(0.819、0.822,均P0.05);龈沟液中Shh蛋白、MMP-8联合检测反映患者中度与重度炎症ROC曲线下面积为0.913,显著高于单独Shh蛋白、MMP-8检测下ROC曲线下面积(0.805、0.771,均P0.05);轻度组GI、PD、AL、ABL显著低于中度组,中度组显著低于重度组(P0.05);龈沟液中Shh水平与GI、PD、AL、ABL均呈正相关(r=0.421、0.395、0.502、0.518,均P0.01);龈沟液中MMP-8水平与GI、PD、AL、ABL均呈现正相关(r=0.522、0.554、0.317、0.437,均P0.01);龈沟液中Shh、MMP-8水平呈现正相关(r=0.469,P0.01)。结论老年慢性牙周炎患者龈沟液中Shh蛋白、MMP-8呈现高表达,且随着炎症程度的升高呈现增高趋势,二者联合检测可有效反映炎症程度。     

胰激肽原酶对自发性高血压大鼠心室重构的影响

目的 观察胰激肽原酶对自发性高血压大鼠(SHR)血压和左室肌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其改善心室重构的作用.方法 雄性15周龄SHR 24只,随机分成SHR组、胰激肽原酶(PK)组、卡托普利(Cap)组,每组8只,另取8只雄性同龄健康Wistar大鼠(WKY)作为正常血压对照组.实验4周后行颈动脉插管测量血压,处死动物,取出心脏行左室重量指数测定,心肌组织经VanG-ieson染色(VG染色)作形态学观察及胶原测定,用免疫组化SP法检测心肌组织切片内MMP-2、TGF-β1的表达.结果 SHR组收缩压(SBP)、左心室质量指数(LVMI)、心肌胶原体积比例(CVF)和心肌血管周围胶原与管腔面积的比例(PVCA)及MMP-2、TGF-β1的表达较WKY组明显升高(P＜0.05),应用胰激肽原酶后,各指标均显著性下降[SBP(183±12 vs SHR:234±23)mm Hg,LVMI(2.89±0.15 vs SHR:3.06±0.18)mg/g,CVF(0.17±0.03vs SHR:0.26±0.05)%,PVCA(0.57±0.26 vs SHR:0.99±0.47)%](P均＜0.05),除SBP外,余各指标下降程度均与Cap组无差异.结论 胰激肽原酶具有逆转高血压心室重构的作用,其机制可能与抑制心室肌高表达的MMP-2、TGF-β1有关.     

缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞凋亡的影响

目的 观察缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其调控心肌细胞凋亡的机制.方法 构建大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、缺氧/复氧纽(缺氧3h后复氧6h)、缺氧后处理组(缺氧3h后行复氧5min、缺氧5 min,反复3次,再复氧6 h).应用荧光酶标仪测定线粒体活性氧量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Western blot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞线粒体活性氧量较对照组显著升高(P＜0.01).缺氧后处理组心肌细胞线粒体平均荧光强度为30.74±1.88a.u./μg,显著低于缺氧/复氧组(63.17±2.75a.u./μg,P＜0.01),仍高于对照组(14.41±2.15a.u./μg).缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞凋亡率较对照组显著升高(45.86％±3.29％和26.99％±3.35％比5.72％±1.63％,P＜0.01),缺氧后处理组低于缺氧/复氧组(P＜0.01).细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白在缺氧后处理组显著上调,在缺氧/复氧组显著下调;Bax蛋白在缺氧后处理组显著下调,在缺氧/复氧组显著上调.结论 缺氧后处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与线粒体和细胞膜Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关.     

NOD2通过调控细胞外基质活性及炎性因子水平介导心肌梗死后心室重构

目的探讨细胞内模式识别受体——核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族中NOD2蛋白是否参与心肌梗死(MI)后心室重构及相关机制。方法结扎小鼠冠状动脉左前降支建立MI模型。实时荧光定量PCR检测不同梗死时间假手术组、手术组梗死区、手术组非梗死区NOD2的m RNA表达水平,免疫组化染色和Western blot测定梗死28 d心肌组织NOD2的蛋白表达。采用NOD2-/-基因敲除小鼠建立MI模型,实验分为4组:野生/假手术组(WT/Sham组)、NOD2基因敲除/假手术组(NOD2-/-/Sham组)、野生/MI组(WT/MI组)和NOD2基因敲除/MI(NOD2-/-/MI组)。小动物超声心动图测定心室重构指数并判断心功能,Masson和Tunel染色观察小鼠心梗后心肌纤维化程度及细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)测定梗死心肌组织的促炎细胞因子水平,Western blot和明胶酶谱法检测心肌组织裂解液基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及活性变化,并用免疫组化染色观察MI后炎性细胞浸润和心脏成纤维细胞转分化成心肌成纤维细胞情况。结果与WT/Sham组相比,WT/MI组非梗死区和梗死区NOD2 m RNA表达水平均升高(均为P 0. 05),其中梗死区NOD2的m RNA表达及蛋白表达最高。超声心动图提示,NOD2缺失能减轻MI后心功能障碍和心室重构的程度; Tunel和Masson染色显示,NOD2-/-/MI组的细胞凋亡和心肌纤维化程度均明显降低(均为P 0. 05)。NOD2缺失还能降低MI区炎性因子水平、炎性细胞的浸润及MMP-9的活性(均为P 0. 05)。结论 NOD2通过调控MMP-9蛋白及活性、炎性介质水平和炎性细胞浸润来介导MI后心室重构过程。     

胰岛素抵抗及脂联素缺乏对小鼠心肌重构的影响

目的 :研究胰岛素抵抗(IR)及脂联素(APN)缺乏对小鼠心肌重构的影响。方法 :选择16只野生C57小鼠随机分为对照组和IR组,每组8只;16只APN基因敲除(APNKO)C57小鼠随机分为APNKO组和APNKO+IR组,每组各8只。对照组和APNKO组给予普通饲料,IR组和APNKO+IR组给予高脂饲料诱导产生IR。喂养12周后取血测定总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖和空腹胰岛素水平,取心脏测量心脏重量和左心室重量。取左心室心肌做苏木素伊红(HE)染色和马松(Masson)染色,观察各组心肌结构改变及纤维化的程度;用免疫组化法和蛋白免疫印迹法检测心肌中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和APN表达量的差异。结果 :与对照组比较,IR组、APNKO组和APNKO+IR组中小鼠的总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖和空腹胰岛素、心脏重量和左心室重量均有增加(P0.05);HE染色及Masson染色结果显示:与对照组比较,IR组、APNKO组和APNKO+IR组中小鼠的心肌肥大程度更高;免疫组化及蛋白免疫印迹结果显示:与对照组相比,IR组、APNKO组和APNKO+IR组中小鼠心肌APN表达明显减低,心肌MMP-9表达明显增加(P0.05)。结论 :APN缺乏和IR导致心肌重构,且两者起协同促进作用。     

应变/应变率成像结合基质金属蛋白酶-9评价心力衰竭大鼠心肌收缩功能及心室重构

目的 应用应变/应变率成像(S/SRI)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达评价心肌梗死后心力衰竭(心衰)大鼠心肌收缩功能及心室重构.方法 70只雄性SD大鼠随机分为4组:手术4周组及手术8周组,开胸结扎左冠状动脉前降支;假手术组,同样开胸,但不结扎;正常组作为对照.应用S/SRI定量评价心肌局部收缩功能,用Western blot法检测各组实验大鼠心肌MMP-9蛋白表达.结果 (1)除下壁中间段及基底段外,手术4周组各节段收缩期峰值应变、收缩期峰值应变率、收缩末期应变均明显下降(P<0.05),收缩后应变指数升高(P<0.05);手术8周组各指标值较手术4周组变化更明显(P<0.05).(2)手术4周组和手术8周组大鼠心肌MMP-9蛋白的表达明显增加(P<0.05),且手术8周组MMP-9蛋白的表达高于手术4周组(P<0.05).结论 S/SRI技术可定量检测心衰大鼠局部心肌收缩功能,在术后8周内大鼠心肌组织MMP-9蛋白的表达随心衰的进展而增高.     

线粒体氧化应激在心肌缺血性损伤中的作用

目的 探讨线粒体氧化应激在腹腔注射异丙肾上腺素构建的无创性大鼠心肌缺血缺氧模型中的作用.方法 16只SD大鼠随机分为两组:对照组8只,实验组8只.间隔24 h腹腔注射5 mg/kg异丙肾上腺素,对照组则注射等量生理盐水.对照组和实验组于第3次注射后24 h处死.各组大鼠处死前取血清进行心肌酶检测,常规 HE 及8-OhDG和Caspase-3免疫组织化学染色.结果 实验组,对照组的乳酸脱氢酶(LDH)分别为(6 762.70±786.76)U/L、(4 317.60±690.82)U/L,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);实验组,对照组血清磷酸激酸(CK)分别为(58.32±5.76)U/ml、(43.69±4.82)U/ml,两组间差异具有统计学意义(P<0.01).HE染色显示实验组局部心肌组织变性坏死,伴有炎细胞浸润;对照组心肌无异常.实验组免疫组织化学染色可见大量心肌细胞质表达8-OhDG和Caspase-3;对照组无表达.结论 腹腔大剂量注射异丙肾上腺素构建的心肌缺血缺氧损伤模型,其机制在于氧化应激导致的心肌细胞线粒体DNA损伤,并通过Caspase-3路径诱导心肌细胞凋亡.本研究对于心肌缺血缺氧的发病机制提供了新视点,以保护线粒体为切入点,为临床对症治疗提供了新思路.     

心房颤动患者心房组织中微小RNA-21和金属基质蛋白酶-2表达水平改变及意义

目的检测微小RNA（microRNA）-21及其调控的金属基质蛋白酶-2（MMP-2）在心房颤动（房颤）患者心房组织中的表达变化,探讨房颤患者心房结构重构的分子机制。方法26例风湿性心脏瓣膜病接受瓣膜置换术患者分为两组,其中窦性心律组12例,慢性房颤组14例。于术中获取右心耳组织,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测心肌组织中microRNA-21的相对表达量,用免疫印迹法及免疫组织化学染色法检测MMP-2蛋白水平及分布。用Masson染色检测心肌胶原容积。结果房颤组心房肌组织microRNA-21及MMP-2表达水平明显增加[microRNA-21：房颤组（2．23±0．31）与窦性心律组（0．94±0．24）,P〈0．01;MMP-2：房颤组（0．93±0．04）与窦性心律组（0．87±0．05）,P〈0．01]。microRNA-21表达水平与左心房内径呈正相关（r=0．429,P〈0．05）。房颤患者心房组织胶原纤维含量明显增加[房颤组（14．1％±0．01％）与窦性心律组（8．3％±0．01％）,P〈0．01]。MMP-2蛋白表达水平分别与左心房内径呈正相关（r=0．471,P〈0．05）,与心肌胶原容积分数呈正相关（r=0．456;P〈0．05）。结论房颤患者心房组织中microRNA-21表达增高及正向上调MMP-2蛋白水平可能是影响胶原代谢、造成房颤时心房结构重构的分子机制之一,与房颤的发生和维持有关。     

人受体活性修饰蛋白1基因修饰间充质干细胞对兔心肌梗死后心室重构的作用

目的探讨腺病毒介导人受体活性修饰蛋白1(hRAMP1)基因转染间充质干细胞(MSC)移植对心肌梗死后心肌纤维化和心室重构的影响及可能机制。方法建立心肌梗死再灌注兔模型,随机分为hRAMP1组(高表达hRAMP1基因的MSC移植,n=10)、MSC组(无基因修饰的单纯MSC移植,n=10)和对照组(生理盐水注射,n=10)。Western blot检测心肌梗死后1、3、7和28d心肌梗死局部基质金属蛋白酶9(MMP-9)和hRAMP1蛋白表达水平;同时行2,3,5三苯基氯化四氮唑染色检测心肌梗死面积,心肌组织Masson染色评价心肌梗死后胶原沉积和纤维化程度;超声心动图评价28d时左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS)。结果细胞移植后,与对照和MSC组相比,hRAMP1组的LVEF[(57.2±6.3)%比(36.2±2.2)%、(45.3±5.4)%]和FS[(29.2±2.4)%比(13.5±1.4)%、(19.4±2.4)%]均升高(均P<0.05),而LVESD[(7.9±0.8)比(12.7±0.9)、(10.4±0.9)mm]和LVEDD[(12.7±1.2)比(17.3±2.4)、(16.3±1.1)mm]、心肌梗死面积、胶原容积分数均明显降低,胶原沉积减少。免疫印迹结果显示,hRAMP1组MMP-9蛋白表达较对照、MSC组明显增高。结论 hRAMP1移植通过促进梗死区心肌组织MMP-9表达,降低梗死区胶原沉积,抑制心肌纤维化,进而改善心室重构,提高心功能。     

MicroRNA-223及MMP-9在风湿性心瓣膜病合并心房颤动患者中的表达及临床意义

目的 探索miRNA-223与金属基质蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP）在风湿性心瓣膜病（风心病）合并心房颤动（房颤）患者的表达水平及在房颤心肌结构重构的发生机制.方法 风心病接受瓣膜置换术患者31例,其中风心病窦性心律组15例,风心病慢性房颤组16例.收集患者右心房心肌组织,实时荧光定量聚合酶链反应检测心房肌组织和血清miRNA-223的相对表达量.酶联免疫吸附试验及免疫组织化学检测血清及心肌组织MMP-9蛋白的表达及分布水平;苏木素-伊红染色及Masson染色观察心肌组织病理结构及胶原纤维含量变化.结果 与窦性心律组相比,房颤组心房肌组织miRNA-223表达水平升高,差异有统计学意义（0.0603±0.0228 vs.0.0261±0.0035,P＜0.01）;房颤组血清MMP-9表达水平高于窦性心律组,差异有统计学意义[（4.2281±0.9165）ng/mLvs.（2.7613±1.2166）ng/mL,P＜O.05].MMP-9蛋白表达水平与胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）呈正相关（r=0.406,P＜0.05）;MiRNA-223表达水平与MMP-9蛋白表达呈正相关（r=0.901,P＜0.05）.结论 房颤患者心房组织中miRNA-223及MMP-9蛋白表达水平均升高.     

肌腱蛋白X和肌腱蛋白C及转化生长因子β表达与心肌纤维化形成的相关性分析

目的 观察肌腱蛋白(TN)-X、TN-C及转化生长因子β(TGF-β)在心肌纤维化过程中的表达变化及其与纤维化严重程度的相关性。方法 选择雄性SD大鼠48只,随机分为模型组43只和对照组5只。模型组建立心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌组织基本结构,计算胶原容积分数(CVF),采用免疫组织化学法检测心肌中TN-X、TN-C及TGF-β表达。结果 与对照组比较,模型组建模后2、5、8、11、14 d CVF明显升高[(19.13±2.83)%、(21.43±1.45)%、(26.68±2.36)%、(30.69±1.01)%、(30.87±0.73)%vs(2.36±0.29)%,P<0.01]。模型组建模后5、8、11 d CVF呈上升趋势(P<0.05)。免疫组织化学显示,模型组建模后5、8、11、14 d TGF-β和TN-X及2、5、8 d TN-C表达明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。TGF-β、TN-X与CVF呈正相关(r_s=0.701,r_s=0.752,P<0.01);TN-X与...     

小鼠急性心肌梗死后不同时间点心肌组织自噬水平的动态演变

目的研究小鼠急性心肌梗死(AMI)后不同时间点心肌组织自噬水平的动态变化。方法选取8~10周龄SPF级C57BL/6J野生型小鼠40只,随机分为假手术组(Sham组)、AMI组(永久结扎左前降支),每组20只,分别于术后7、14、28 d时,用心脏超声检测心脏功能及结构变化,Masson染色观察小鼠梗死周边心肌组织纤维化,Western blot检测自噬蛋白、透射电镜观察自噬小体、免疫组织化学检查凋亡蛋白表达。结果 Masson染色显示,AMI组梗死周边组织间质纤维化随着时间的推移加重;AMI组7、14和28 d时Bax蛋白较Sham组明显上调(0.71±0.08、0.77±0.05和0.86±0.06 vs 0.53±0.08,P<0.05),Bcl-2和自噬微管相关蛋白轻链3蛋白降低(P<0.05),P62蛋白表达增强(P<0.05);透射电镜示,AMI组梗死周边心肌组织内自噬小体数量明显减少。结论小鼠AMI后梗死周边心肌组织自噬水平进行性降低,心室重构进一步恶化,自噬可能在AMI中起保护作用。     

ERK1/2信号通路介导心肌营养素1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨心肌营养素1对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其信号通路。方法用改良的方法培养出生1～3天的乳鼠心肌细胞,分为五组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+心肌营养素1组、缺氧复氧+心肌营养素1+PD98059(ERK阻断剂)组及缺氧复氧+心肌营养素1+DMSO组。缺氧3 h,复氧3 h。MTS法测定心肌细胞存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位,二氯荧光磺双乙酸盐(DCFH-CA)检测细胞活性氧水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞促凋亡基因Bad mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白水平。结果缺氧复氧后心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平较对照组明显增加,分别是19.4%±2.3%比2.2%±0.2%及14.28±1.42比3.54±0.46(P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞线粒体膜电位下降。而心肌营养素1处理后,心肌细胞存活率明显高于缺氧复氧组,心肌细胞凋亡率及细胞内活性氧水平显著减少,心肌细胞线粒体膜电位更高,ERK1/2磷酸化蛋白水平增加,Bad mRNA表达明显下调。心肌营养素1的这种作用能被ERK阻断剂PD9...     

基质金属蛋白酶9通过上调血管紧张素Ⅱ加剧其致心室重构作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否介导基质金属蛋白酶9(MMP-9)的致心室重构作用及其机制,为进一步阐明心室重构发病机制和寻找防治心室重构新靶点提供证据。方法 36只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=12)、MMP-9组(n=12)、MMP-9+奥美沙坦组(n=12),分别给予生理盐水、重组MMP-9生理盐水溶液(2.1ng/g)、重组MMP-9生理盐水溶液(2.1ng/g)各2mL腹腔注射,每周2次;同时,MMP-9+奥美沙坦组加奥美沙坦(3mg/kg)1mL,其余两组各加1mL生理盐水灌胃,1次/d。第28天,每组随机抽取6只大鼠作为4周阶段实验组,各组剩余大鼠作为8周阶段实验组。实验结束时超声心动图检查,测量左心室质量指数(LVMI),心肌组织切片苏木精-伊红染色法(HE)和Van Gieson(VG)染色观察心肌细胞和胶原分布情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、AngⅡ、血管紧张素转换酶(ACE)、MMP-9水平。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测血和心肌组织MMP-9mRNA表达。免疫印迹法(Western blot)测心肌组织MMP-9蛋白表达。结果在实验第4周和第8周,与对照组比,MMP-9组心肌组织MMP-9mRNA和蛋白表达水平升高,血清MMP-9[4周:(80.66±4.73)比(48.54±6.94);8周:(143.30±37.44)比(48.10±7.96)μg/L]、AngⅠ、AngⅡ[4周:(101.82±13.57)比(55.07±7.06);8周:(100.32±11.65)比(66.09±8.50)μg/L]、ACE、LVMI均增高,胶原容积分数(CVF)降低(P0.05)。经奥美沙坦干预后,第4和第8周心肌MMP-9mRNA和蛋白表达水平均较MMP-9组降低,血清MMP-9[4周:(56.76±5.96)比(80.66±4.73),8周:(83.25±16.98)比(143.30±37.44)μg/L]、AngⅡ[(69.31±6.58)比(101.82±13.57),8周:(74.77±18.08)比(100.32±11.65)μg/L],LVMI均比MMP-9组降低;CVF回升(均P0.05),心肌形态学明显改善,8周组比4周组更加明显;而AngⅠ、ACE变化无统计学意义(P0.05)。心脏超声仅在8周的MMP-9组发现左心室舒张末期内径、左心室舒张末期容积较对照组增高(P0.05),经奥美沙坦干预后改善(P0.05)。结论 MMP-9可能通过上调AngⅡ加剧其致心室重构。